成年大鼠腰椎成骨细胞和破骨细胞的体外培养

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成骨细胞与破骨细胞的研究探讨

成骨細胞與破骨細胞的研究探討林文彬林園中醫診所台北市立聯合醫院中興院區摘要成骨細胞是骨形成過程中的重要功能細胞。

70年代中期還認爲破骨細胞與成骨細胞爲共同的祖代來源，但自80年代初開始，認識到破骨細胞來源於單核吞噬細胞系統之外的骨髓生血細胞系統，爲獨立於骨髓幹細胞系統的一個細胞系。

成骨細胞的功能是合成、分泌膠原與糖蛋白，形成骨基質；參與破骨細胞性骨吸收的調控作用；維持骨的代謝平衡。

而破骨細胞是一個高度分化的多核大細胞，其主要功能爲吸收骨，成骨細胞受下列因數調節：轉化生長因數β(TGF-β)、1，25(OH)2D3、胰島素樣生長因數(IGF)、白細胞介素1(IL-I)、雌激素、腫瘤壞死因數α(TNFα)、骨形成蛋白(BMP)，骨吸收的主要調節因數有：降鈣素(CT)、甲狀旁腺激素(PTH)、前列腺素(PGs)、活性維生素D3(1，25(OH)2D3)、細胞因數、腫瘤壞死因數(TNFα、β)、干擾素(IF)、白細胞介素-18(IL-18)、白細胞介素-17(IL-17)。

關鍵詞：成骨細胞破骨細胞前言骨質疏鬆症是骨吸收與骨形成之間的平衡被打破，骨吸收佔優勢而使骨量減少，成骨細胞和破骨細胞是骨組織特有的兩種細胞，在激素及細胞因數等作用下作用於骨，是骨代謝過程中的重要核心細胞。

故對成骨及破骨細胞的研究，對於理解骨質疏鬆的發病及藥物的療效都具有重要意義。

成骨細胞及破骨細胞的來源（一）成骨細胞的來源成骨細胞(Osteoblast OB)是骨形成過程中的重要功能細胞。

成骨細胞的主要功能是分泌骨基質(包括膠原與糖蛋白)及進行合成。

其分泌的膠原95％爲I型膠原蛋白(1)。

此外還有少量的Ⅲ型、IV型及V型膠原，可見於小鼠、雞和人胚的成骨細胞。

成骨細胞還參與破骨細胞性骨吸收的調節，兩者是骨代謝過程中的重要核心細胞。

成骨細胞的起源，經大量研究現己公認：成骨細胞來源於末分化的多潛能幹細胞，這種幹細胞具有分化爲多種細胞類型的特徵，在各種調控因數的作用下，通過複雜的分子機制，間充質多潛能幹細胞可以分化爲成骨細胞、成纖維細胞、脂肪細胞以及肌細胞等。

两种方法培养大鼠破骨细胞的噬骨能力比较

王正东 ☆，男，１９７７年生，辽宁省辽中县人，２骨组织工程学方面的研究。
ｗｚｄ２００８＠１６３．ｃｏｍ
中图分类号：Ｒ３１８文献标识码：Ａ
方法：取２４ｈ内新生Ｗｉｓｔａｒ大鼠四肢长骨，酶消化法分离培养破骨细胞，将破骨细胞培养过程中消化
下来的骨髓单核细胞加入１，２５（ＯＨ）２Ｄ３诱导生成破骨样细胞。苏木精一伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＰ）染色鉴定。用甲苯胺蓝染色共培养骨片比较两组破骨细胞噬骨能力。
大鼠破骨瞧的噤筲能力比较
两种方法培养大鼠破骨细胞的噬骨能力比较☆
ｊ正东’ ，颜南’ ，潘峰，杨芳莉’ ，刘自力 ’ ，蓑海波 ’ ，憾 ’ ，牢军’ ，柏树令
１沈Ｅｌ医学院，辽宁省沈阳市１１００３４２中国医科大学，辽宁省沈阳市１１０００１
寸］阳组织Ｉ程研究
７７誊２０
２０１３— ０５—１４出版
ＷＶＶ￣Ｖ．ＣＲＴＥＲｏｒｇ
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｉｓｓｕｅＥｎｇ￣ｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＭａｙ１４，２０１３Ｖｏ１．７７＇Ｎｏ２０
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５ — ４３４４．２０１３．２０．００１ｌｈ托ｐ＇．／／ｗｗｗｃ＃ｅ￣ｏｒｇ］壬正东．濒潘峰扬芳翱．＿曼ｌｊ白力姜海淀．藏晋搦桐令两种法中国绢织ｌ程研究，２０１３，１７（２ｏ）＇．３６１１－３６１７．

004破骨细胞培养及鉴定

1．主要实验材料 (1)实验动物大鼠、兔、人等。 (2)培养液 M199培养基、RPMI 1640培养基或MEM培养基，配制时须加20％的小牛血清、HEPES 25mmol/L，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子100ng／m1。 (3)淋巴细胞分离液密度为1.077g／m1。
2．培养方法 (1)薄骨片的制备同成熟破骨细胞分离细胞培养法中的薄骨片制备。 (2)骨髓单核细胞分离及培养所有取材、分离细胞及培养过程均须在无菌条件下进行。
／m1)的抗生素溶液的小容器中，每次10-20min。最
后可浸在盛有含抗生素的培养液的容器内，置4℃(短期)或-20℃(较长期)冰箱内保存备用。
(2)破骨细胞的分离和培养所有取材、分离与培养过程须在无菌条件下进行。 ①取出生后3-5d的大鼠，拉颈处死后置于盛有75％酒精的容器中，消毒3-5min后取出放入培养皿中。 ②用手术剪剪开其四肢皮肤、肌肉，取股骨和胫骨等长骨，放入盛缓冲液的培养皿中。除去骨表面的软组织、骨膜以及软骨。
③将除去骨膜等多余组织后的长骨干部分清洗后，置于盛有少量培养液的培养皿中。用手术刀或手术剪纵行剖开骨干。用手术刀轻刮骨的内表面，同时用尖吸管不断吸取培养皿中的培养液，冲洗骨内表面多次，直至骨内表面变白为止。 ④用吸管吸打上述含碎骨片及分离细胞的培养液2－5min，使附着于碎骨片上的破骨细胞分离脱落于培养液中。静置1－2min后，待碎骨片沉降，收集细胞悬液。
⑵单个核细胞分离：采用密度梯度离心法，向采集的血样标本内加入等量的PBS，取6支10ml离心管，分别加入大鼠淋巴细胞分离液各3ml，再小心
缓缓地向各离心管内加入上述含PBS的血样各2.5ml，
然后以2000rpm,水平离心20min，取出后在絮状层

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定

大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定干细胞研究一直是生物医学领域的前沿热点，其中骨髓间充质干细胞（BMSCs）因其具有多向分化潜能和低免疫原性而备受。

在众多研究中，大鼠BMSCs的体外培养和鉴定方法为其在科研和临床领域的应用提供了基础。

本文将就大鼠BMSCs的培养、鉴定方法进行详细介绍，并结合实验数据进行阐述。

BMSCs是一种成体干细胞，具有自我更新和多向分化潜能，可以分化为多种细胞类型，如成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等。

因其来源广泛，免疫原性低，大鼠BMSCs已成为再生医学、免疫调节等领域的重要研究对象。

近年来，随着生物技术的不断发展，BMSCs的培养和鉴定方法也得到了不断优化和改进。

BMSCs的培养需要无菌环境，常用的培养基为DMEM、F12等，添加适量的生长因子和抗生素以维持细胞的生长和存活。

细胞的鉴定主要包括形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实。

其中，表面标志物如CDCD90等可用来区分BMSCs和其他细胞，多向分化潜能的证实包括成骨、成脂和成肌等方向的诱导分化。

本实验采用大鼠BMSCs的常规体外培养方法。

具体步骤如下：采集大鼠骨髓：在无菌环境下，用注射器抽取大鼠股骨和胫骨骨髓，加入肝素抗凝。

细胞分离：将采集的骨髓用密度梯度离心法分离出单个核细胞。

细胞培养：将单个核细胞接种于培养瓶中，用含10%血清、1%抗生素和1%谷氨酰胺的培养基培养。

细胞鉴定：经过约7-10天的培养，细胞达到80%-90%融合时，进行细胞鉴定。

通过形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实，对BMSCs进行鉴定。

通过观察细胞的形态和生长情况，发现培养的BMSCs呈典型的长梭形，且细胞间连接紧密（图1）。

经表面标志物检测，BMSCs表达CD29和CD90等间充质干细胞表面标志物（图2）。

在多向分化潜能的证实中，我们发现BMSCs经成骨、成脂和成肌诱导后，可分别形成矿化结节、脂肪滴和肌纤维（图3）。

这些结果说明所培养的细胞为BMSCs。

白芍总苷对体外培养的成骨细胞和破骨细胞的影响

骨分离培养成骨细胞和破骨细胞。实验分为正常对照组及 T G P50, 5, 0. 5, 0. 05 和 0. 005 g L- 1 组, 采用 M T T 法检测成骨细
胞、破骨细胞活力, 金氏法测定成骨细胞培养上清中碱性磷酸酶( AK P) 含量。结果 T G P50 g L- 1对成骨细胞的存活能力有明
有直接的作用未见报道, 本实验观察了白芍总苷对体外培养的大鼠成骨和破骨细胞的影响。
1 材料与方法 1. 1 动物 1 d、5 d 龄 SD 新生大鼠, 均由南京中医药大学实验动物中心提供, 合格证号: SYXK ( 苏) 2005 0009。 1. 2 药品和试剂 T GP ( 纯度 75% ) 由安徽医科大学临床药理研究所提供, 批号 20070312, 用含 10% FBS 的 M EM 培养液配成 50 g L - 1T GP 溶液, 0. 22
按 1. 5 方法获取的破骨细胞直接接种于 96 孔板中, 每孔 0. 1 mL , 12 h 后换液, 以去除红细胞和未贴壁细胞, 同上分组加药, 同前法测定吸光度 ( A ) 值, 间接反映细胞存活。 1. 7 金氏法测定成骨细胞培养上清中 A K P 含量[ 5] 收集传代的成骨细胞悬液, 于 1 000 r min- 1 离心 10 min, 弃上清, D H ank's 平衡盐溶液洗两遍, 细胞计数后用含 10% FBS 的 MEM 调细胞浓度至 1 106/ mL, 加入 96 孔板, 每孔 0. 1 mL, 另加入终质量浓度为 50, 5, 0. 5, 0. 05 和 0. 005 g L- 1的 T GP; 同时设立空白对照组每孔
显的抑制作用, 但对 AK P 活性影响不明显; T GP5 和 0. 5 g L- 1 对成骨细胞的存活能力有明显增强作用, 使 A K P 活性明显增

阳和汤体外对大鼠成骨细胞及破骨细胞增殖的影响

行培养，别于２、８７分４４、２ｈ收获细胞，用Ｍｒ法测定药物对细胞增殖的影响；采ｒ比色法测定破骨细胞ＴＡＲＰ酶活性。结果阳和汤含药血清中剂量、高剂量组在２、８７能提高成骨细胞的增殖率，空白血清组４４、２ｈ均与
ＷＡＧＹｎｄｎ，１ｈｔ１１ＨｎｈＵｉｒｉｈｎｓｄｉ，ｕａ，ｈｎｓａ４００；ＣＮｕ－ａＴＡＮＳａ，．ｕｃｎｖｓｙｏｉｅｅＭｅｉｎＨｎｎＣａｇｈ，１０７２ＴＭｅａｅｔｆＣｃｅＨｏｉｌＣａｇｈｉ，ｎｎＰｏｉｅＨｕａ，ｈｎｓａ４００ｓｔｈｎｓａＣｔＨｕ，ｒｖｎ，ｎｎＣａｇｈ，１１０ｐａｏｆｙａｃ【ｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｔｄｅｆｎｔｎｏｔｅｍｄｃｎ— ０ｔｉｉｅｕｆａｇｅＤｃｃｉｆｃｏｅＡｓｒｃ】ｊｃｉ：ｏｓｙｔｃｏｆｈｅｉｅｃｎａｎｓｒｍｏｎｈｅｏｔｎｅｆｔｎｔｖｕｈｕｉｉｎｇＹｏｅｈ
ｏｔｏｌｓｎｓｏｌｓｏａｓｓｂａｔａｄｏｔｃａｔｆｒｔ．Ｍｅｈｄ：ＲａｓｗｒｅｔａｇｅＤｅｏｔｎｏｃａｏａｓｔｅｅｅｔｏｓｔｅｅｆｄｗｉＹｎｈｃｃｉｎｅａｄｙｆｒ７ｄｙ，ｈｏｈｒｔ＂ｌｏｓｃｌｃｅｎｅａａｅｂａｎｔｅｍｅｉｉｅｃｎａｎｎｅｍ．ｈｅｅａｉｎｏｓｅｂａｔ，ｓａｓｂｏｄｗａｏｌｔｄａｄｓｐｒｔｄｔｏｔｉｄｃｎ — ｏｔｉｉｇｓｒｅｏｈｕＴｅｇｎｒｔｆｏｔｏｌｓｏ — ｏｓｔｏｅｅｉｅｌｌｅｆＵＭＲ１６ａｄｐｅｕｓｒｃｌｆｓｅｃａｔｅｇｎｓｓｃｌｉｓｏｎ０ｎｒｃｒｏｅｌｏｔｏｌｓＲＡＷ２４７ｗｒａｄｍｌｉｉｅｎｏｌｗｄｓｓｏ６．ｅｅｒｎｏｙｄｖｄｄｉｔｏｏｅｇｏｐ，ｄｌｏｅｇｏｐ，ｉｈｄｓｒｕｎｌｎｅｍｏｔｏｒｕｆｔｅｍｅｉｉｅｃｎａｎｎｅｍｆｒｕｍｉｄｅｄｓｒｕｈｇｏｅｇｏｐａｄｂａｋｓｒｕｃｎｒｌｇｏｐｏｈｄｃｎ－ｏｔｉｉｇｓｒｕｏ

破骨细胞与成骨细胞

破骨细胞(osteoclast，亦称 bone-resorbing cells)是骨组织成分的一种，行使骨吸收（ bone resorption ）的功能。

破骨细胞与成骨细胞（osteoblast ，亦称 bone-forming cells ）在功能上相对应。

二者共同，在骨骼的发育和形成过程中发挥重要作用。

高表达的抗酒石酸酸性磷酸酶（ tartrate resistant acid phosphatase）和组织蛋白酶 K（cathepsin K）是破骨细胞主要标志。

破骨细胞由多核巨细胞 (multinuclear giant cell, MNGC)组成，直径 100μm，含有 2～50个亲近齐集的核，主要分布在骨质表面、骨内血管通道周围。

由多个单核细胞交融而成的，胞浆嗜碱性但随着细胞的老化，渐变为嗜酸性。

作用破骨细胞拥有特其他吸取功能，某些局部炎症病灶吸取中，巨噬细胞也参加骨吸取过程。

在破骨细胞吸取骨基质的有机物和矿质的过程中，造成基质表面不规则，形成近似细胞形状的陷窝，称为 Howship 陷窝。

在陷窝内对着骨质的一面，细胞伸出好多毛样流行，很象上皮细胞表面的纵纹缘和刷毛缘。

电镜下，贴近骨质的一侧有好多不规则的微绒毛，即细胞流行，称为皱褶缘(ruffled border) 。

在皱褶缘区的周缘有一环形的胞质区，含多量微丝，但缺乏其他细胞器，称为亮区 (clear zone) ，此处的细胞膜平展并紧贴在骨质的表面。

亮区忧如一道以胞质组成的围墙，将所包围的地域形成一个微环境。

破骨细胞向局部释放乳酸及柠檬酸等，在酸性条件下，骨内无机矿物质自皱褶缘吞饮，于皱褶缘基质内形成一些吞饮泡或吞噬泡。

于破骨细胞内，无机质被降解，以钙离子的形式排入血流中。

无机质的扔掉使骨基质内的胶原纤维裸露，破骨细胞分泌多种溶酶体酶，特别是组织蛋白酶 K和胶原溶解组织蛋白酶。

破骨细胞走开骨表面后，其皱褶缘消失，细胞内发生变化，进入静止期。

大鼠骨髓间质干细胞的体外分离培养与鉴定

大鼠骨髓间质干细胞的体外分离培养与鉴定Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Vitro Cultivation and AppraisalZHANG Ai-xia 1 ，21.Life science college of Jiaying University ，Meizhou，GuangdongProvince ，514015 China ；2.Center for Stem Cell Biology and Tissue Engineering Sun Yat-Sen University ，Zhongshan ，Guangdong Province ，510080 China [] Objective To establish the rat bone marrow mesenchymal stem cells （BMSC）s separation of training method，and morphological observation ，phenotype and multi-directional differentiation ability of detecting. Methods He whole bone marrow adherent cultivation method in rat BMSCs ，morphological observation under amicroscope ，flow cytometry instrument to detect cell surface markers CD29 ，CD44，CD45，and induced to osteogenesis and into fat rat BMSCs differentiation.Results The cells cultured separation is given priority to with spindle cells ，a swirling growth. CD29 ，CD44 were positive expression and CD45 were negative. Into fat osteogenesis after induction ，oil red O and alizarin redS staining were positive. Conclusion The whole bone marrow adherent cultivation method of separation of cells with the biological characteristics of mesenchymal stem cells ，with multi-directional differentiation potential.BMSC作为多能干细胞的一种，由于其取材方便，具有多向分化潜能，有较弱的免疫抗原性，体内植入反应较弱，正逐渐受到学者们的广泛关注。

两种不同培养方法对破骨细胞ATPase a3基因表达和骨吸收活性的影响

两种不同培养方法对破骨细胞ATPase a3基因表达和骨吸收活性的影响（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：杜文喜肖鲁伟吴承亮厉驹童培建【摘要】［目的］探讨不同方法培养下的大鼠破骨细胞(osteoclast，OC)骨吸收功能的差异，以及骨吸收关键基因ATPase a3的mRNA 表达水平的差异，为体外实验奠定基础。

［方法］机械分离和诱导培养，即从新生24h的大鼠长干骨骨髓腔内壁机械分离成熟OC和1,25(OH)2 D3诱导大鼠骨髓细胞形成破骨样细胞(osteoclast like cell，OLC)，对获得的OC进行形态和骨吸收功能观察，并测定OC 骨吸收关键基因ATPase a3的mRNA表达水平的差异。

［结果］OC 和OLC均为抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase，TRAP)染色阳性的多核巨细胞，与细胞共培养骨片上可形成骨吸收陷窝；诱导法培养出的OLC数目多于机械分离法，但诱导早期陷窝较之小而浅，诱导后期基本接近OC；OC骨吸收关键基因ATPase a3的mRNA，在机械分离8h与诱导培养6天的细胞表达量无显著差异，但都远少于培养8天的表达量。

［结论］诱导法可以培育出大量的OLC，优于机械分离法，但早期骨吸收功能较弱，OC骨吸收功能与其核数相关。

后期的OCL与机械分离OC接近，可以用于各类实验。

【关键词】破骨细胞破骨样细胞骨吸收ATPase a3破骨细胞（osteoclast，OC）是骨吸收的执行细胞，OC骨吸收机制研究对阐明骨组织生理病理机制和代谢性骨病的防治具有十分重要的意义，然而OC为高代谢的分化终末细胞，组织含量极少又非常脆弱，自Chambers首次建立OC体外培养的方法以来，各国学者不断完善，李氏等在国内首次建立了骨髓细胞诱导培养法，建立了破骨样细胞(osteoclast like cell，OLC)培养体系，发现OLC和OC是同一种细胞［12］。

骨组织工程中成骨、破骨细胞三维空间培养的研究进展

进展。
状结构中的结合水可以流动，使凝胶中的细胞能和外界进行物质交换 ¨ Ｊ，由于凝胶网络的承载作用，
细胞在凝胶中的形态为圆形，有利于细胞的联系、信
关键词
骨组织工程；三维空间；细胞分布；中医药
Ｒ２７４．９；Ｒ６８３
钠复合载体中生长分布良好，形成球状细胞团，这样
独特的三维结构更有利于细胞生长。因此，在体外三维培养细胞时越来越多的人选择采用复合型载
体。１．２孔隙结构对细胞分布的影响评价支架材料
１．１ＥＣＭ的种类目前在骨组织工程研究中选用的ＥＣＭ主要有：天然有机高分子材料、天然无机材料、人工合成有机材料、人工合成无机材料以及复
合类材料。
矿化沉积。朱建华等通过研究ＰＡＮ／ＣＳ／ＢＣＰ／ＰＬＧＡ复合支架发现：大孔小孔相连通的孔隙结构
１ＥＣＭ对细胞分布的影响
的重要参数之一是支架材料的孔隙结构。研究表明，充足的血液供应是形成良好骨组织的基础，孔
隙率与孔径大小对其有决定性的影响。Ｌｉｕｅｔａｌ＿５研究发现，随着培养时间延长和孔隙率的增加，各组成骨细胞在支架材料上的空间分布均呈增长的趋势。Ｙｅｏｅｔａｌ提出组织工程支架的孔径尺寸应在２００— ４００ｍ范围内有利于新生骨组织在孔隙内部

右归饮对类固醇激素性股骨头坏死大鼠成骨-破骨体外共育体系中破骨细胞分化的影响

骨一破骨共育体系破骨细胞形成、分化有抑制作用，以高浓度右归饮作用最强。［关键词］有归饮；激素性股骨头坏死；破骨细胞；成骨细胞；共培养
中图分类号：Ｒ６８１文献标志码：Ａ
ＥｆｆｅｃｔｏｆＹｏｕｇｕｉｙｉｎＤｅｃｏｃｔｉｏｎｏｎｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｉｎｏｓｔｅｏｃｌａｓｔａｎｄｏｓｔｅｏｂｌａｓｔＣＯ－ｃｕｌｔｕｒｅｉｎｖｉｔｒｏｏｆｓｔｅｒｏｉｄｉｎｄｕｃｅｄａｖａｓｃｕｌａｒｎｅｃｒｏｓｉｓｏｆｆｅｍｏｒａｌｈｅａｄ
ＺｈｅｊｉａｎｇＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｅｓｎｅＭｅｄｉｃｉｎｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００５３；Ｃｈｉｎａ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］
ＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓＨａｎｇｚｈｏｕＴｈｉｒｄＰｅｏｐｌｅ＇ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１０００９；３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴＣＭＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓ，ＺｈｅｊｉａｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１０００６；４．ＴＣＭＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃｓＲｅｓｅａｒｃｈＵｎｉｔ，

破骨细胞实验方法

破骨细胞实验方法
一、骨组织切片染色
骨组织切片染色是观察破骨细胞活动的重要手段之一。

常用的染色方法有甲苯胺蓝染色、茜素红染色等。

这些染色方法能够显示出骨组织的结构，为后续的观察和计量学分析提供基础。

二、骨吸收陷窝观察
骨吸收陷窝是破骨细胞在骨组织中形成的凹陷，是破骨细胞活动的直接证据。

通过观察骨吸收陷窝的数量、大小和分布情况，可以评估破骨细胞的活动程度和骨组织的代谢状态。

三、骨组织计量学分析
骨组织计量学分析是通过测量骨组织中的各种参数，如骨密度、骨体积分数、骨小梁厚度等，来评估骨组织的结构和质量。

这些参数的变化可以反映破骨细胞活动的程度和骨组织的代谢状态。

四、破骨细胞标记物检测
破骨细胞标记物检测是通过检测骨组织中与破骨细胞相关的标记物，如TRAP、CTSK等，来评估破骨细胞的数量和活性。

这些标记物的表达水平与破骨细胞的活动密切相关，因此可以用来评估药物对破骨细胞的影响。

五、药物干预实验
药物干预实验是通过给予实验动物药物，观察药物对破骨细胞活动的影响。

常用的药物包括激素类药物、生物制剂、中药等。

通过药物干预实验，可以深入了解药物对破骨细胞的作用机制，为临床治疗提供
依据。

六、破骨细胞体外培养
破骨细胞体外培养是在实验室条件下，将破骨细胞从骨组织中分离出来，进行体外培养和观察。

通过破骨细胞体外培养，可以深入研究破骨细胞的生物学特性、生长繁殖规律以及药物对破骨细胞的作用机制。

同时，也为破骨细胞的研究提供了更为直接和有效的手段。

成骨细胞的体外培养与鉴定

成骨细胞的体外培养与鉴定☆
王勇平，廖皴，蒋矗
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王勇平，廖皴，蒋壶．骨细胞的体外培养与鉴定［．国组织工程研究与临床康复，２１，１（３：３ —２４成Ｊ中】０１５３）２１３６６
ＡｂｓｒｃｔｔａＢＡＣＫＧＲＯＵＮＤ：ｅｍｅｈｓｏｓｅｂａｔｕｔｒ『ｖｔａｅｃｒｎｌｉｔｓＴｈｔｏｄｆｏｔｏｌｓｌｅ门ｉｏｈｖｅｔｉｔｉｃｕｒａｉｍａｏｎ．０ＢＪＥＣＴＩＶＥ：ｕＴＯｓｍｍａｒｅｏｓｅｂａｔｓｕｃｉｉｏｃｔｅｍｅｈｄ，ｕｌｒｏｎｉｏｎａｄｉｅｎｉｃｔｎｓｇｓｉｔｏｌｓｏｒｅ，ｎｖｔｕｌｔｏｃｔｅｃｄｔ，ｎｚｒｕｒｕｉｄｔａｉｉｎｉｆｏＭＥＴＨＯＤＳ：ｃＡｏｍｐｔｒｂｅｅｒｖｓｐｒｍｅｄｉｂＭｅｎａｆｎｄａａａｅｅｃｕｅ－ａｓｄｒｔｉａｌｅｗａｅｆｏｒｎＰｕｄａｄＷｎａｇｔｂｓｓｔｓａｒｈｍａｎｓｒｐｓｐｂｉｈｄｏｕｃｉｔｕｌｅｓｂｔｅ００ａｎ０１ｔｈｅｙｗｏｄｓｓｅｂｌｓ．ｅｌｕｌｅｉｅｔｃｔｎ”ｉＥｎｉｈａｄＣｈｎｓｎｕａｅ．ｅｐｐｓｅｗｅｎ２０ｄ２ｗｉｔｅｋｒ ”ｏｔｏａｔｃｌｃｔ，ｄｎｉａｉ０ｈｕｒｉｆｏｎｇｌｎｉｅｅｌｇｇｓＴｈａｅｒｓａｄｓｒｉｇｉｉｏｃｌｅａｎｎｉｃｔｎｏｓｅｂａｔｒｎｌｄｅ．ｅｃｉｎｖｔｕｔｄｉｔｉａｉｆｏｔｏｌｓｓｗｅｅｉｃｕｄＲｅｐｔｉｅｒｓａｃｎｂｎｒｕｒｄｅｆｏｅｉｖｅｅｒｈａｄＭｅｔｎｙｉｒｃｕｅｔａａａｌｓｓｗｅｅｅｘｌｄｄ．ＲＥＳＵＬＴＡＮＤＳＣＯＮＣＬＵＳｌＯＮ：ｉｈｅｅｏｍｅｔｆｅｌｕｔｒｈｎｑｕｓ／ｉｏ．ｓｅｂａｔｒＷｔｔｅｄｖｌｐｈｎｌｃｌｅｔｏｃｕｅｃｉｅｎｖｔｏｔｏｌｓｓｆｒ０ｍｎｍａｏｎａｉＩｂｅ．ｐｉｔｕ．ｏｎｅｒｅｍｂｅｍａｒｗｎｄｎｎｂｎｉｓｅｈｖｅｕｃｓｆｌｕｔｒｄ．ｕｉａｅｓｏｈｔｈｓｔｏｌｓｓｈｖｏｓｒａｏ．ｏｅｌｕａｅｂｅｎｓｃｅｓｕｌｃｌｅＳｔｄｅｓｈｖｈｗｎｔａｅｅｏｓｅｂａｔａｅｏｓｙｕｔｔｐｃｌｈａｔｉｔｓａｄｇｏｄｂｏｏｉａｒｐｔｅ．ｒｅｎｌ，ｈｕｔｒｄｏｓｅｌｔｅｃｍｍｏｘｅｉｎａｄｅｔｙｉａａｒｃｅｒｉｎｏｉｌｇｃｌｏｅｒｓＣｕｒｔｔｅｃｌｅｔｏｂａｓｓａｒｏｃｓｃｐｉｙｕｎｅｐｒｍｅｔｌｍｏｌｎｖｒｉｉｏ

成骨细胞与破骨细胞的共培养体系

成骨细胞与破骨细胞的共培养体系
1 建立成骨细胞与破骨细胞共培养体系
成骨细胞和破骨细胞是骨再生的重要细胞，在成骨和破骨之间存
在矛盾性相互作用，为解决该矛盾性作用，建立成骨细胞与破骨细胞
共培养体系是有必要的。

1.1 获取细胞
获取成骨细胞和破骨细胞是共培养体系的第一步。

一般的获取方
式有从动物原位骨组织采集、从动物移植位骨组织采集以及从动物分
化出的骨细胞培养采集等；此外，还可以利用旁路移植操作获得成骨
和破骨细胞，以及通过多剂量胶原纤维骨再生制备法获取到成骨细胞，以及经过分离纯化的单个样品。

1.2 制备培养基
共培养体系建立的必要组成部分之一是，必须将对成骨细胞和破
骨细胞培养基进行优化；即构建一个基于实验的的多层联合的培养体系。

1.3 实现活细胞共培养
实现活细胞共培养仅用AMP法是不能取得理想效果的，而且很容
易造成细胞成骨破骨细胞凋亡和发生假复合，因此需要考虑利用有特
殊支架结构的凝胶体，或者应用其他生物材料来实现活细胞共培养。

1.4 动物实验
为了在实际应用中证实共培养体系的可行性，需要在动物实验上进行实验验证，有助于进一步用于临床应用，以达到促进骨再生的目的。

建立成骨细胞与破骨细胞的共培养体系具有重要的理论指导意义和临床应用价值，从而实现骨量的增加与骨质的维持，这不仅将有助于改善骨健康，而且有助于促进骨骼可塑性，有助于改善患者的生活质量，也是进一步改善骨病患者的治疗方法。

成骨细胞和破骨细胞染色

成骨细胞和破骨细胞染色在人体这个庞大又精密的“机器”里，骨骼可是个举足轻重的“硬汉”。

它支撑着我们的身体，让我们能站得直、走得稳。

但你知道吗？骨骼并不是一成不变的，它一直在悄悄地“更新换代”。

这其中，成骨细胞和破骨细胞可是功不可没的两个“小能手”。

今天，咱们就来聊聊这俩“小能手”染色那点事儿。

成骨细胞，那可是骨骼建设队的“队长”。

它们就像勤劳的“建筑工人”，一刻不停地忙着制造和分泌骨基质，这些骨基质就像是骨骼的“原材料”，经过一系列复杂的“化学反应”，就变成了坚硬的骨骼。

而成骨细胞本身，就像是被精心打扮了一番，它们体内含有一种叫做碱性磷酸酶的“魔法元素”。

在染色的时候，这种“魔法元素”就像是被点亮了，发出了迷人的蓝色光芒，就像是夜空中最亮的星，让人一眼就能认出它们。

破骨细胞呢，则是骨骼拆迁队的“老大”。

它们就像是骨骼界的“拆迁专家”，专门负责拆除那些老旧、受损的骨骼组织。

别看它们名字里有个“破”字，其实它们的工作可是相当重要的。

如果没有它们，我们的骨骼就会变得僵硬、老化，失去活力。

在染色的时候，破骨细胞就像是穿上了红色的“战袍”，显得特别醒目。

这是因为它们体内含有一种叫做抗酒石酸酸性磷酸酶的“特殊武器”，这种“武器”在染色剂的作用下，呈现出了鲜艳的红色，就像是战场上英勇的战士，让人肃然起敬。

说起成骨细胞和破骨细胞的染色过程，那可真是既神秘又有趣。

想象一下，科学家们把骨骼组织切成薄薄的“肉片”，就像是切羊肉串一样，只不过这次切的是骨骼。

然后，他们把这些“肉片”放在染色剂里“泡澡”。

这些染色剂就像是神奇的“魔法药水”，能让成骨细胞和破骨细胞展现出它们独特的色彩。

经过一段时间的“浸泡”，这些细胞就像是穿上了五彩斑斓的“新衣”，变得格外引人注目。

在显微镜下观察这些被染色的细胞，那简直就像是在看一场精彩的“细胞表演”。

成骨细胞的蓝色光芒和破骨细胞的红色“战袍”交相辉映，就像是在舞台上翩翩起舞的舞者，各自展示着它们的独特魅力。

破骨细胞成骨细胞的相互作用

破骨细胞成骨细胞的相互作用
破骨细胞与成骨细胞是骨骼系统中两种关键的细胞类型，它们
之间的相互作用对于维持骨骼健康和修复骨折至关重要。

破骨细胞
和成骨细胞之间的平衡是骨骼重塑和修复的关键因素。

首先，让我们来了解一下这两种细胞的功能。

破骨细胞是一种
多核巨噬细胞，其主要功能是吞噬和分解骨组织，促进骨质吸收。

而成骨细胞则是负责合成和沉积骨基质，促进骨组织的形成和修复。

破骨细胞和成骨细胞之间的相互作用是一个动态的过程。

当骨
组织需要被重塑或修复时，破骨细胞首先被激活，开始吞噬和分解
老化或受损的骨组织。

这个过程释放出骨基质中的生长因子和细胞
因子，这些信号分子会吸引成骨细胞迁移至受损部位。

成骨细胞随后开始合成和沉积新的骨基质，促进骨组织的再生
和修复。

同时，成骨细胞也会分泌抑制破骨细胞活性的因子，以维
持破骨细胞和成骨细胞之间的平衡，防止过度的骨质吸收。

然而，当这种平衡被打破时，就会导致骨质疏松症或骨折愈合
受阻等问题。

例如，破骨细胞活性过高或成骨细胞功能受损会导致
骨质疏松症，而成骨细胞过度活跃或破骨细胞功能不足则会影响骨折的愈合。

因此，破骨细胞和成骨细胞之间的相互作用对于维持骨骼健康至关重要。

了解和平衡这两种细胞的功能，可以帮助我们更好地预防和治疗骨骼相关疾病，保持骨骼健康。

体外培养破骨细胞功能的定量评定

体外培养破骨细胞功能的定量评定摘要目的建立适用于体外药理学研究的破骨细胞骨吸收功能的定量评定方法。

方法机械分离法获得破骨细胞，接种于象牙簿片底物上，分别于培养1d、3d、5d、7d取出象牙簿片各4张，采用光镜和扫描电镜观察骨吸收陷窝数量的变化；对随机拍摄的陷窝照片进行计算机形态计量分析，测算陷窝的面积和深度。

结果骨吸收陷窝计数光镜法和扫描电镜法具有良好的相关性，r＝0.9998，P＜0.001。

随着培养时间的延长，陷窝数量逐渐增多、面积扩大、深度加深。

结论骨吸收陷窝计数光镜法可以用于体外培养破骨细胞功能的定量评价，结合陷窝面积和深度分析，可以较为全面地评价体外培养破骨细胞的骨吸收功能。

关键词破骨细胞骨吸收陷窝数量面积深度Quantitative Evaluation of The Function of OsteoclastGultured in VitroZhan Hongshenget al Zhejiang college of Traditional Chinese Medicine,Hangzhou(310053)Shi Yinyu,Zhao Yongfang(Shanghai University of TCM)Objective To establish a quantitative evaluation method of absorptive function of osteoclast which is fit for pharmacological studies.Method Get osteoclast by mechanical dispersionmethod,inoculate it on thin ivory slices,take out four slices respectively after culturing for 1d,3d,5d,and 7d,observe the changesof the lacuna amount of bone absorption with light mirror andscanning electric mirror,make a quantitative analysis of computerform to the randomly taken pictures of lacunae,measure the area and depth of the lacunae.Results Light mirror method of bone absorptive lacunae amount had a good correlation with scanning electric mirror method,r＝0.9998，P＜0.001.With increasing the culture time,there are more,larger and deeper lacunae.Conclusions Counting light mirror method of bone absorptive lacunae could be used for quantitative evaluation of the osteoclast function cultured in vitro,combiningwith the analysis of lacunae area and depth,we could more completely evaluate the bone absorptive function of osteoclast cultured in vitro.Key words osteoclast,bone absorptive lacunae,amount,area,depth正常骨重建起始于破骨细胞的激活，破骨细胞性骨吸收伴随生命活动的始末，破骨细胞异常活跃或功能低下，可诱发一系列临床病症，如骨质疏松症、Paget氏病、关节置换术后假体松动、牙周病变或骨硬化症等。

两种方法培养大鼠破骨细胞的噬骨能力比较☆

两种方法培养大鼠破骨细胞的噬骨能力比较☆王正东;颜南;潘峰;杨芳莉;刘自力;姜海波;臧晋;牟军;柏树令【摘要】背景：原代培养的破骨细胞数量少，而诱导培养产生的破骨样细胞数量多，能够满足一些研究骨代谢实验的要求。

但是两种细胞在特异酶及噬骨能力方面是否具有相同的效果，到目前为止，还没有详尽的数据来支持。

目的：比较大鼠原代分离的破骨细胞及诱导形成的破骨样细胞噬骨能力上的差异。

方法：取24 h内新生Wistar大鼠四肢长骨，酶消化法分离培养破骨细胞，将破骨细胞培养过程中消化下来的骨髓单核细胞加入1,25(OH)2 D 3结果与结论：诱导第9天，破骨样细胞数目为破骨细胞数目的11倍，其形态与原代消化获得的细胞形态相同。

抗酒石酸酸性磷酸酶染色呈阳性。

甲苯胺蓝染色显示两组破骨细胞在骨片上培养时产生骨陷凹面积及深度差异无显著性意义。

结果显示破骨样细胞的形态、特异酶及噬骨能力与破骨细胞无差异。

诱导生成破骨样细胞。

苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定。

用甲苯胺蓝染色共培养骨片比较两组破骨细胞噬骨能力。

%BACKGROUND: There are less primary cultured osteoclasts, but a large number of osteoclast-like cells produced by induced culture, which is able to meet the requirements of some experimental studies of bone metabolism. But there are no detailed data to identify whether the osteoclasts and osteoclast-like cells have the similar effect on specific enzymes and bone absorption capacity. OBJECTIVE: To compare the difference of bone absorption ability between the primary cultured osteoclasts and induce cultured osteoclast-like cells from the rats. METHODS: The long bones were obtained from the limbs of 24 hours newborn Wistar rates, and the enzyme digestion was used to isolate andculture osteoclasts; then bone marrow mononuclear cell s separated from the osteoclasts during culture were added with 1,25(OH) 2 D 3 RESULTS AND CONCLUSION: The number of the osteoclast-like cell s was 11 times that of osteoclasts at 9 days after induction. The morphology of osteoclast-like cell s was similar with that of the primary cultured osteoclasts. The osteoclast-like cell s were positive for tartrate-resistant acid phosphatase. Toluidine blue staining results showed there was no significant difference in bone lacuna area and depth produced by the osteoclasts cultured on the bone slices between two groups. These findings show that there are no significant differences in morphology, specific enzymes and bone absorption capacity between osteoclast-like cell s and osteoclasts. to induce to generate the osteoclast-like cell s. The cell s were identified with heamtoxylin-eosin staining and tartrate-resistant acid phosphatase staining. The bone absorption ability of the osteoclasts in two groups was compared with toluidine blue staining.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2013(000)020【总页数】7页(P3611-3617)【关键词】组织构建;骨组织构建;破骨细胞;培养;诱导;鉴定;噬骨;1,25(OH)2D3;破骨样细胞;单核细胞;Wistar大鼠【作者】王正东;颜南;潘峰;杨芳莉;刘自力;姜海波;臧晋;牟军;柏树令【作者单位】沈阳医学院，辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院，辽宁省沈阳市110034;中国医科大学，辽宁省沈阳市 110001;沈阳医学院，辽宁省沈阳市110034;沈阳医学院，辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院，辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院，辽宁省沈阳市 110034;沈阳医学院，辽宁省沈阳市 110034;中国医科大学，辽宁省沈阳市 110001【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言Chamber首次从乳兔四肢骨分离培养出成熟破骨细胞[1]，其他学者又对破骨细胞原代培养进行优化[2]。

rhIGF1对成骨细胞和破骨细胞相互作用的调节作用

rhIGFl对成骨细胞和破骨细胞相互作用的调节作用天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的在成骨细胞(ostelblast, 0B)及破骨细胞(Osteoclast, 0C)的表面均表达有胰岛素样生长因子1 (insulin like growth factor 1,IGF・I)的受体，IGFJ对这两种细胞也都具有激活作用。

IGF・1在调节骨代谢平衡中具有重要作用，被认为是存在于RANKL/OPG系统之上，调节成骨细胞与破骨细胞相互作用的核心分子。

为此，本文拟探讨不同浓度的rhIGF-I对成骨细胞和破骨细胞的直接作用，及对成骨细胞和破骨细胞相互作用的调节。

方法1.利用50ng/ml的RANKL诱导小鼠破骨前体细胞系分化为成熟破骨细胞。

TRAP (抗酒石酸酸性磷酸酶染色)鉴定。

2.以50ng/ml rhIGF-I分别干预成细胞以及分化成熟的破骨细胞汗预时间分别为：6min、20min、60min； Western-blotting 检测rhIGF-lR 活化情况。

3.分别加入0、2、4、6ug/ml的兔抗rhIGF・I IgG中和培养基中的rhIGF-I, 利用Western.blotting进行抗体中和浓度的筛选。

4.重新接种成骨细胞和破骨细胞，用0、10、50. 100ng/ml的rhIGF-1分别干预成骨细胞、破骨细胞，12小时后终止培养并收集培基，之后实验分为三组: A组：rhIGF-1直接干预组。

B组：条件培养基交互培养组：破骨细胞经rhIGF-1 干预后的条件培养基(OC conditioned medium after rhlGF-1 treatment, OCCM)；成骨细胞经rhIGF-1干预后的条件培养基(OB conditioned medium after rhIGF-1 treatment, OBCM).滤过OCCM、OBCM后两细胞培基互换交互培养12h° C 组:rhIGF・l中和后交互培养组：OCCMxOBCM中加入4ug/ml的抗rhIGF-1 IgG, 中和后再用于交互培养12h»(1)ELISA检测各组OB上清液中RANKL、OPG及BGP含量。