细胞体外培养时为什么会贴到培养皿壁上
第二节细胞培养方法及应用实例
配比
分包
疫苗产品
①原始种子——基因重组病毒株 当两种有亲缘关系的不同病毒感染同一宿主细
胞时，它们的遗传物质发生交换，结果产生不同于
亲代的可遗传的子代，称为基因重组。
基因重组病毒有“活病毒基因重组”、“灭活
病毒基因重组”及“死活病毒基因重组”。重组病
毒株原始种子属于死活病毒间的重组。
世卫组织提供的6支甲 型H1N1流感原始毒株
⑷包埋法 包埋就是将细胞包裹在有限空间内，制成固定化细胞。包埋后的细胞
不会扩散到周围介质中去，而底物和产物却能自由扩散。 包埋法仅只是将细胞包埋起来，不与载体发生反应，故包埋法细胞的
活性损失较小。包埋法根据其包埋的形式不同，又可将其分为格子型和微 胶囊型两种。
二、植物细胞培养方法
常见的植物组织细胞培养有愈伤组织培养、原生质体培养、花粉培养
一、动物细胞培养方法
根据动物细胞的生长特点，常见的细胞培养方法有贴壁培养、悬浮培 养及固定化培养等三种方法。
1.贴壁培养
所谓贴壁培养是指细胞贴附在 一定的固相表面（如：培养皿、培 养瓶等）进行的培养。 ⑴生长特性
贴壁依赖型细胞在培养时要贴附于培养（瓶）器皿壁上，细胞一经贴 壁就迅速铺展，然后开始有丝分裂，并很快进入对数生长期。一般数天后 就铺满培养表面，并形成致密的细胞单层。
HGPRT 骨髓瘤细胞
使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞 二者合二为一，得到杂种的骨髓 瘤细胞。这种杂种细胞继承两种
融合
(HAT)培养基
亲代细胞的特性，既具有 B淋巴 细胞合成专一抗体的特性，又有
由于挡板的存在，可有效地减小反应器内液面上的 旋涡。
2.贴壁培养反应器——中空纤维反应器
常见的贴壁培养反应器如：中空纤维反 应器、玻璃珠床反应器、陶质矩形通道蜂窝 状反应器等类型。
细胞贴壁原理
细胞贴壁原理细胞贴壁原理是细胞学研究的一个重要理论，它是指细胞在生长和繁殖过程中，会贴附在培养皿或其他表面上，形成一个单层密闭的细胞群体。
这个原理是细胞学家们在长期的实验研究中观察到的现象，并发掘出了它的深层原理和应用。
实验研究表明，细胞贴壁是细胞繁殖和发育的必要条件，同时也会对细胞的生命周期和表型产生一定的影响。
在实验室中，细胞培养通常需要准备好培养皿或培养瓶等表面，然后将细胞移植到这些表面上，使之贴壁生长。
细胞贴壁可以用于研究细胞的生长、分化和死亡等各个方面。
在实验中，研究人员会将不同细胞系的细胞移植到培养皿中，并在不同条件下观察细胞在贴壁的状态。
这些观察可以提供重要的信息，帮助人们理解细胞的生长机制，并研发新型的药物和治疗手段。
细胞贴壁的原理可以从多个方面解释。
一方面，细胞表面的胞外基质会对细胞产生一定的吸附作用，使之贴附在培养表面上。
另一方面，在细胞生长过程中，细胞表面的蛋白质分泌和新陈代谢产生的羟基磷酸胆碱等物质，也能够帮助细胞贴附在培养表面上。
细胞贴壁的实际应用非常广泛。
例如，在细胞工程领域中，细胞贴壁可以用于生产各种生物制品，如抗体、重组蛋白、疫苗等。
另外，细胞贴壁也可以帮助研究者探究细胞与细胞之间相互作用的机制，如细胞的互相识别、信号传递等。
还有一些人使用细胞贴壁技术进行基因编辑研究，以研究细胞基因组变异的机制和细胞生长的调控等问题。
这些应用展示了细胞贴壁在科学研究中的重要性和广泛性。
细胞贴壁原理的发现和应用离不开细胞学家们的不断努力。
他们通过不懈的实验和观察，揭示了细胞繁殖和生长的新规律。
同时，他们也不断探索着新的研究手段，例如三维培养技术、微流控芯片技术等，以进一步拓展细胞繁殖和生长的研究范围，从而为人类的健康和发展做出贡献。
细胞贴壁原理的研究还有许多待解决的问题。
例如，为什么不同类型的细胞在贴壁和分裂的过程中表现出不同的特征？细胞贴壁和不贴壁的状态之间的关系是什么？这些问题需要进一步的实验和研究来解答。
细胞是如何粘附在材料表面的
/cellmigration/migration.htm
细胞在生物材料表面的粘附
生物材料在与生理环境相接触时，首先到达材料表面的是水分子，其次是蛋白质分子， 最后是细胞到达材料表面。血液、组织液以及含有血清的培养基中含有多种水溶性的 粘附蛋白，细胞表面的整联蛋白和生物材料表面的粘附蛋白相互作用，使细胞粘附在 生物材料表面
细胞是如何在基体表面移动（migration）的？ 粘着斑不是静态的，而是不断形成、不断消失的动态复合物，细胞在移动过程中，粘 着斑的组成和形态都在发生变化。细胞的迁移是细胞前端不断形成新粘着斑，和细胞 后端不断解离粘着斑的结果。初始形成的粘着斑（focal complex）约0.25µ㎡，所结合 的蛋白较少。成熟稳定的粘着斑(focal adhesion)结合较多的蛋白。
亲疏水性（Hydrophilicity/Hydrophobicity） 亲水性很强的表面不利于蛋白质的吸附，从而不利于细胞的粘附。 强疏水性的表面:非粘附蛋白(如白蛋白)在材料表面的吸附阻碍了粘附蛋白的吸附;一方面， 吸附在高疏水材料表面的粘附蛋白由于吸附行为不可逆，其分子链的天然构象遭到破坏， 致使蛋白质分子链中与细胞膜表面整合合素相结合的活性位点(RGD)无法完全暴露，也 不利于细胞的粘附;
细胞表面： 细胞膜外层的寡糖外被、 磷脂双份子层细胞膜、 表层溶胶
细胞粘附分子（adhesion molecules） 存在于细胞表面，参与细胞与细胞、细胞与细胞外基质的粘附连接的跨膜糖蛋白 或糖脂
种类：钙粘素（cadherins）、整合素(integrins)、免疫球蛋白超分子家族、 透明质酸粘素、选择素 整合素：特异性粘附分子 异二聚体，16种α亚单位，7种β亚单位 目前有24种整合素 能特异性识别配体分子中的特定氨基酸序列
细胞培养中的常见问题解决方法
细胞培养中的常见问题解决方法细胞培养是生物医学研究和药物开发中不可或缺的重要工具。
然而，细胞培养过程中常常会遇到一些问题，例如污染、细胞凋亡、不适当的生长条件等。
本文将介绍细胞培养中的一些常见问题以及相应的解决方法。
1. 细胞污染细胞污染是细胞培养中最常见的问题之一。
它可能是由细菌、真菌、酵母、病毒等微生物引起的。
污染会导致细胞生长受阻、实验结果的不可靠以及其他严重后果。
为了解决这个问题，可以采取以下几种方法：- 严格按照无菌操作操作培养细胞。
使用无菌操作条件，包括在无菌环境下穿戴手套、使用消毒液清洗操作台面和器具、对培养皿和培养物进行灭菌处理等。
- 经常检查细胞培养物的外观。
细胞培养物应呈现透明、均匀的状态。
如果有任何可疑的异常，请及时进行检查和处理。
- 使用含有抗生素的培养基。
对于某些细胞株来说，添加适量的抗生素可以阻止细菌等污染物的生长。
2. 细胞凋亡细胞凋亡是正常细胞生命周期的一个重要阶段，但在细胞培养过程中，过量的细胞凋亡会导致细胞数量的减少，对实验结果造成不利影响。
以下是一些常见的细胞凋亡问题及其解决方法：- 减少细胞培养的过度处理。
频繁的细胞移植和传代会导致细胞凋亡增加。
适当延长传代周期，避免过多的细胞移植。
- 提供适当的细胞营养来源。
细胞需要足够的营养物质来维持正常的生长。
不合适的培养基组分或者浓度可能会导致细胞凋亡。
确保培养基中的营养物质符合细胞的需求，并根据细胞株的特点进行相应的调整。
- 坚持细胞培养的无菌操作。
如前所述，细菌或其他微生物的污染会导致细胞凋亡的增加。
通过无菌操作避免细胞污染，继而减少细胞凋亡。
3. pH值失调培养基的pH值是细胞培养中一个重要的生长条件。
pH值的不稳定性会影响细胞的代谢和生长。
以下是一些解决pH值失调的建议：- 定期检测和调整培养基的pH值。
使用pH计或试纸进行测定，及时调整pH值，保持在适宜的范围内。
- 确保培养基的配制正确。
细胞培养基的配制过程中，需要严格按照配方中所指定的浓度和比例添加各种成分。
细胞贴壁生长的原因
细胞贴壁生长的原因首先，细胞贴壁生长与细胞附着蛋白有关。
细胞附着蛋白是存在于细胞外基质或细胞外基质类似物上的分子，它们能够调节细胞与基质之间的黏附。
细胞表面的整合素家族蛋白负责介导细胞与基质的黏附，从而促进细胞贴壁生长。
这些蛋白还能激活细胞内信号通路，参与调控细胞力学特性以及形态的变化，从而促进细胞贴壁生长。
其次，细胞贴壁生长与细胞周围的生长因子和细胞外基质成分有关。
生长因子是一类蛋白质，能够调控细胞增殖和分化，以及促进细胞迁移和黏附。
在细胞培养的过程中，培养基中通常会加入适量的生长因子，这些生长因子可以促进细胞在培养皿或培养瓶上贴壁生长。
此外，细胞贴壁生长还受到细胞间连接的影响。
胞间连接包括细胞间贴附蛋白、细胞间紧密结合和细胞间连接素等，这些结构可以维持细胞的状态稳定，促进细胞贴壁生长。
细胞间连接的破坏会导致细胞张力的改变，进而影响细胞贴壁生长。
此外，细胞贴壁生长还受到基质硬度和表面特性的影响。
基质硬度可以影响细胞形态、胞内力学特性以及信号通路激活等，进而影响细胞贴壁生长。
表面特性包括基质表面的疏水性、电荷等，这些特性可以与细胞表面的受体发生相互作用，进而影响细胞贴壁生长。
最后，细胞贴壁生长还受到细胞自身特性的影响。
细胞的形态、增殖速率、表面受体表达水平等因素都会影响细胞贴壁生长。
例如，形态良好、增殖能力强、表面受体表达丰富的细胞极易贴壁生长。
总的来说，细胞贴壁生长是一个复杂的过程，受到多种因素的影响。
通过深入理解细胞与基质之间的相互作用以及调控机制，可以更好地促进细胞贴壁生长，为体外细胞培养实验提供更好的基础。
细胞贴壁原理
细胞贴壁原理细胞贴壁原理是指细胞在培养基表面附着生长的现象和规律。
细胞贴壁原理是细胞培养中一个非常重要的概念，对于细胞的培养、观察、实验等都有着重要的意义。
本文将从细胞贴壁原理的定义、影响因素、意义以及相关应用等方面进行介绍。
首先，细胞贴壁原理的定义是指细胞在培养基表面附着生长的现象。
这种附着生长是细胞与培养基表面之间的物理和化学相互作用的结果。
细胞贴壁的程度与培养基的成分、表面性质、细胞类型等因素密切相关。
其次，影响细胞贴壁的因素有很多，主要包括培养基的成分、pH值、温度、涂层物质、细胞的种类和状态等。
培养基的成分对细胞贴壁有着直接的影响，例如一些培养基中添加的胶原蛋白、明胶等物质可以增加细胞的附着性。
此外，pH值和温度也会对细胞的附着生长产生影响，一般来说，细胞在适宜的pH值和温度下更容易贴壁生长。
涂层物质的选择也是影响细胞贴壁的重要因素，例如将培养皿表面涂覆明胶、胶原蛋白等蛋白质可以增加细胞的附着性。
另外，细胞的种类和状态也会对贴壁产生影响，一般来说，成纤维细胞、上皮细胞等贴壁能力较强的细胞种类，而白血球、淋巴细胞等则贴壁能力较弱。
细胞贴壁原理在细胞培养、细胞实验等方面具有重要的意义。
首先，细胞贴壁是进行细胞培养的前提和基础，只有细胞贴壁生长，才能进行后续的实验和观察。
其次，细胞贴壁的程度也影响着细胞的生长状态和功能表达，因此在细胞实验中需要注意细胞的贴壁状态。
另外，细胞贴壁原理也在细胞移植、组织工程等领域有着重要的应用。
细胞贴壁原理是细胞培养中一个基础而重要的概念，了解和掌握细胞贴壁原理对于细胞培养和实验有着重要的意义。
在实际操作中，我们需要根据具体的细胞类型和实验要求，合理选择培养基的成分、涂层物质等，以促进细胞的贴壁生长。
同时，也需要在细胞实验中注意细胞的贴壁状态，确保实验结果的准确性和可靠性。
综上所述，细胞贴壁原理是细胞培养中一个基础且重要的概念，对于细胞培养和实验有着重要的意义。
细胞贴壁生长实验报告
1. 掌握动物细胞培养的基本技术，特别是细胞贴壁生长的过程。
2. 观察细胞在体外培养中的生长和形态变化。
3. 学习细胞传代培养的方法和注意事项。
二、实验原理细胞贴壁生长是指动物细胞在体外培养过程中，细胞会附着在培养皿或瓶壁上，形成单层细胞层。
这一过程依赖于细胞表面的粘附分子与培养皿表面的相互作用。
细胞贴壁生长是动物细胞培养的基础，也是进行细胞生物学研究、药物筛选和基因治疗等实验的前提。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 小鼠成纤维细胞（或其它动物细胞）- 培养基（DMEM或RPMI-1640）- 10%胎牛血清- 0.25%胰蛋白酶- 灭菌的细胞培养皿- 灭菌的移液器- 灭菌的移液管- 培养箱- 显微镜2. 仪器：- 超净工作台- 离心机- 恒温水浴锅1. 细胞复苏：将冻存的细胞取出，在37℃水浴中快速解冻，然后加入适量的培养基，用移液器吹打均匀，使细胞分散。
2. 制备细胞悬液：将细胞悬液用移液器吹打均匀，确保细胞均匀分布。
3. 接种细胞：将制备好的细胞悬液加入培养皿中，每皿约1×10^5个细胞。
4. 培养：将培养皿放入37℃、5%CO2的培养箱中培养，每隔24小时更换一次培养基。
5. 观察细胞生长：在显微镜下观察细胞的生长和形态变化，记录细胞贴壁、生长和分裂情况。
6. 细胞传代：当细胞长满培养皿底部时，用0.25%胰蛋白酶消化细胞，收集细胞，按照1:10的比例进行传代培养。
五、实验结果1. 细胞在培养皿中迅速贴壁，形成单层细胞层。
2. 细胞呈梭形、多边形或不规则形，细胞之间紧密连接。
3. 细胞不断增殖，形成致密的细胞层。
4. 经过多次传代培养，细胞生长状况良好。
六、实验讨论1. 细胞贴壁生长是动物细胞培养的基础，对于细胞生物学研究、药物筛选和基因治疗等实验具有重要意义。
2. 细胞贴壁生长过程受到多种因素的影响，如细胞种类、培养基成分、温度、CO2浓度等。
3. 在实验过程中，应严格控制实验条件，确保细胞正常生长。
3.1细胞培养是动物细胞工程的基础学思案
2021学年第二学期高二生物学思案学案序号7年段班级高二学生姓名作业日期章节课题3.1细胞培养是动物细胞工程的基础审核人授课日期学习目标1.概述动物细胞培养的过程2.举例说明动物细胞培养的应用价值知识回顾动物细胞工程常用的技术手段包括动物细胞培养、动物细胞__________、动物细胞_________，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
新知学习一、动物体细胞可在体外适宜条件下进行培养1.动物细胞培养概念：从动物体获得相关组织，分散成__________后，在适宜环境下让细胞生长和增殖的过程。
2.原理：________________（有丝分裂）3.条件：（1）培养基：培养动物细胞一般使用___________培养基，也称为培养液。
①成分：水、糖类、氨基酸、无机盐、维生素、____________等。
②种类：A.天然培养基：主要来自于动物_________或动物组织分离提取液，如血清、淋巴液、鸡胚浸出液等，含有丰富的营养物质及各种生长因子等。
B．合成培养基：根据细胞生存所需物质的_________和_________，用人工方法模拟合成的，便于对各种成分进行人工控制和标准化。
（2）环境：_____________、无毒动物细胞培养液中常含有在高温条件下变性失去功能的物质，如血清等，对培养液的这些成分需采用___________除菌；为防止细胞代谢产生的有毒物质危害细胞，应___________培养液。
（3）其他：温度、pH、渗透压和气体条件①适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以37±0.5℃为宜。
②适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为7.2-7.4。
③适宜的渗透压：维持细胞正常的形态和功能。
④通常采用________培养的方式，并将它们置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的__________________中进行培养。
（O2：细胞代谢所必需的；CO2：主要作用是维持培养液的_____________。
血小板贴壁培养-概述说明以及解释
血小板贴壁培养-概述说明以及解释1.引言1.1 概述血小板贴壁培养是一种重要的实验技术，通过将血小板与培养基贴壁培养在细胞培养皿表面，使血小板形成单层薄膜，有利于其功能的研究。
血小板作为血液中的重要细胞成分，其功能异常会导致多种疾病的发生。
因此，血小板贴壁培养在疾病机制研究、药物筛选和治疗效果评估等方面具有重要的应用价值。
本文将对血小板贴壁培养的定义、原理、优势及应用进行详细介绍，以期为读者提供更深入的了解。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下几个方面:1. 简要介绍文章的结构，说明文章将从哪些方面展开讨论，包括引言、正文和结论部分。
2. 引导读者对整篇文章的内容有一个整体的了解，以便他们更好地理解和阅读后续的内容。
3. 提醒读者文章各个部分之间的逻辑关系和衔接，使其更容易跟随文章的思路和论证过程。
4. 强调文章的完整性和逻辑性，让读者对文章的组织和内容有一个清晰的认识。
5. 最后,可以陈述作者的写作目的，即通过不同章节的论述来阐明血小板贴壁培养这一技术的重要性和广泛应用。
1.3 目的：本文旨在介绍血小板贴壁培养这一实验技术的定义、原理、优势和应用，以及在疾病研究中的意义。
通过深入探讨血小板贴壁培养的相关知识，旨在增进读者对于该技术的理解，进一步推动相关领域的研究和应用，促进医学科研的发展。
同时，希望通过本文的介绍，能够引起更多人对于血小板贴壁培养在疾病治疗和研究中的重要性的关注，为未来的相关研究提供有益的参考资料。
2.正文2.1 血小板贴壁培养的定义和原理血小板贴壁培养是一种体外实验技术，通过将血小板与细胞培养皿表面贴壁培养，使其在一定的条件下附着生长，有助于模拟体内环境，促进血小板的活化和功能研究。
血小板贴壁培养的原理主要是利用培养皿表面的亲水性和亲油性相结合的特点吸附血小板，使其在培养皿上形成完整的单层薄膜。
一般来说，先将培养皿表面特定涂覆液体，形成亲水或亲油表面，然后加入抗凝血剂处理后的血液，在倒置培养皿的过程中，液体薄层将血小板留置在表面。
胰酶消化贴壁细胞
2、复温速率
复温速率是指细胞复苏时温度升高的速度。 冷冻保存的细胞复苏时，复温速率不当也会降 低冷冻存活率。一般来说复温速度越快越好， 37℃水浴中，1～2分钟内要完成复温。
3、冷冻保护剂
冷冻保护剂是指可以保护细胞免受冷冻损伤的物 质，常被加到一定的溶液中进行配制，作为冷冻 保护液。
常用的冷冻保护剂 ：ＤＭＳＯ
一般消化时间约为1至3分钟，肉眼观察瓶底由半 透明（细胞单层连接成片）转为点状透明（出现 细小空隙）时，弃去胰酶，并加入适量的有血清 培养液终止消化，吹打分散。
图示：
CHO贴壁细胞
经过48小时培养 成为致密单层
加入0.25%胰酶后 细胞逐渐皱缩变圆， 细胞间隙增大不再致密
细胞明显皱缩变小， 细胞间隙增大不再致密， 部分细胞维持正常形态，
贴壁细胞: 在体外培养条件下，必须贴附于支 持物表面才能生长的细胞。如CHO细胞。
消化：使经过分散的组织或贴壁的培养物相互 或与介质解离，形成单细胞或小的细胞团的操 作。
贴壁细胞的消化
贴壁细胞在培养瓶中长成致密单层后，继续生 长的空间不足，培养基中的营养成份也消耗较 多，同时代谢废物也有较多堆积，需要分瓶培 养，扩增、传代 。
用10~20ml完全生长培养基 .
24小时细胞贴壁后换液.
注意:
1) 冻存可用10%-90%的血清，一般高浓度血清
有助于维护细胞活力 .
2) 细胞在-15度左右胞内形成结晶对细胞损伤 最大，缓慢降温有助于减少损伤，故放入-20 度冰箱中冻存可实现缓慢降温较为方便，保存 时间过久会影响细胞活力
谢谢
贴壁较紧的细胞如Hela，HepG2，CHO等，则 需要以细胞消化液消化后，才能脱落和分散， 扩瓶 。常用的消化液为胰蛋白酶，EDTA等
细胞贴壁的原理
细胞贴壁的原理
细胞贴壁是指细胞在培养基中接触到培养皿表面并附着在上面的过程。
这个过程依赖于细胞表面的特殊结构和细胞与基质之间的相互作用。
细胞贴壁的主要原理是细胞与培养皿表面之间的物理吸附和化学吸附。
物理吸附是指细胞表面的静电吸附和表面张力，可以让细胞在培养皿表面停留一段时间。
化学吸附是指细胞表面与培养皿表面之间的化学键结合，可以更牢固地固定细胞。
此外，细胞与基质之间的黏附分子也起到重要作用。
细胞表面的整合素和选择素等黏附分子可以与培养皿表面的纤维蛋白、胶原蛋白等黏附分子结合，形成更稳定的细胞贴壁结构。
这种黏附分子介导的贴壁可以增加细胞与培养皿之间的接触面积，使细胞更紧密地附着在上面。
细胞贴壁的成功还受到培养条件的影响。
细胞在适宜的培养基、适宜的温度和湿度下生长，可以增加细胞贴壁的成功率。
此外，培养皿表面的涂层和处理也可以提高细胞贴壁的效果。
例如，常用的处理方法包括用凝血素覆盖培养皿表面、对表面进行静电处理或使用特定的蛋白质涂层等。
总之，细胞贴壁是细胞在培养基中附着在培养皿表面的过程，通过物理吸附、化学吸附和黏附分子等机制实现。
培养条件的优化和培养皿表面的处理可以提高细胞贴壁的效果。
细胞贴壁原理
细胞贴壁原理
细胞贴壁原理是指在细胞培养的过程中，细胞在培养皿的底部或侧壁紧密贴附的现象。
通过这种贴壁原理，细胞可以获得足够的接触面积和养分供应，从而维持其正常的生理功能。
细胞贴壁原理的实质是靠细胞表面的黏附分子与培养基或基质表面的黏附分子之间的相互作用来实现的。
黏附分子可以是细胞膜上的蛋白质或糖类，而培养基或基质表面的黏附分子则可以是胶原蛋白、纤维蛋白等。
细胞贴壁原理的关键在于选择适合特定细胞黏附的培养基或基质，以及提供合适的培养条件。
一般来说，细胞需要在适当的温度、湿度和氧气浓度条件下进行培养。
此外，细胞贴壁还受到细胞形态、细胞密度以及培养皿的表面特性等因素的影响。
细胞贴壁原理在细胞培养和组织工程等领域具有重要的应用价值。
通过优化培养条件和培养基的配方，可以促进细胞的贴壁和增殖。
此外，研究人员还可以根据细胞贴壁原理，设计和制造具有特定表面性质的材料，以促进细胞黏附和生长，从而实现组织修复和再生。
动物细胞培养贴壁处理方法
细胞培养表面化学
2013 by DHS
贴壁细胞的生长特性
贴壁依赖型细胞在培养时要贴附于培养（瓶）器皿壁上， 细胞一经贴壁就迅速铺展，然后开始有丝分裂，并很快进 入对数生长期。一般数天后就铺满培养 表面，并形成致密 的细胞单层
贴壁细胞的生长特性
细胞培养贴壁表面处理方法：
1）聚-D-赖氨酸或胶原包被培养表面 2）表面改性：聚苯乙烯表面接枝羟 基（OH），羧基（COOH），氨基 （NH and NH2）官能团
贴壁细胞的生长特性
细胞培养贴壁表面改性方法：
第一代技术：电晕放电：将空气中氧、氮等电离后接枝到 PS表面 优点：便于自动化生产 缺点：亲水性能不够， 受大气环境影响
Corning资料
Corning文献
鼎昊源DHS贴壁细胞生长表面
鼎昊源DHS细胞工厂等贴壁表面采用最新的第三代亲水表 面处理技术：
美国进口高真空环境 射频等离子放电技术 99.9999%纯度进口气体 德国巴斯夫高纯PS原料 最好的贴壁效果：不仅接枝COOH，同时接枝氨基
鼎昊源DHS贴壁细胞生长表面
更高的细胞产率及更好的细胞生长状态
常规处理
DHS表面
谢谢！
欢迎交流： 鼎昊源科技 zhonglm@
贴壁细胞的生长特性
细胞培养贴壁表面改性方法：
第二代技术：辉光放电：将空气中氧、氮并补充特定气体 电离后接枝到PS表面 优点：便于自动化生产 缺点：亲水性有所增加， 受大气环境影响
壁细胞的生长特性
细胞体外培养时为什么会贴到培养皿壁上
细胞体外培养时为什么会贴到培养皿壁上
刘梅芳;徐国恒
【期刊名称】《生物学通报》
【年(卷),期】2007(42)9
【摘要】@@ 北京市第22中学的生物学教师陈珊问:动物细胞培养时为什么会出现贴壁现象?rn答:第1,绝大部分细胞在机体内的环境下是与其他细胞或者细胞外基质结合的,不是孤立存在的.第2,细胞与细胞或者细胞外基质结合的物质基础以及在体外培养中贴壁的物质基础是什么.
【总页数】1页(P54)
【作者】刘梅芳;徐国恒
【作者单位】北京大学医学部生理系,北京,100083;北京大学医学部生理系,北
京,100083
【正文语种】中文
【中图分类】Q1
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3.分娩时阴道壁上段裂伤10例临床分析 [J], 杨海燕
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5.大鼠成骨细胞体外培养、特性鉴定及低氧时VEGF表达的变化 [J], 关键;阚娜;刘凤玲
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细胞贴壁原理
细胞贴壁原理悬浮细胞：细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，这类细胞称为悬浮细胞。
如淋巴细胞。
贴壁细胞：在动物细胞培养过程中，必须有可以贴附的支持物表面，其依靠自身分泌或培养基中的贴附因子才能在该表面生长增殖的离体动物的培养细胞。
兼性贴壁细胞：有些细胞并不严格地依赖支持物，它们既可以贴附于支持物表面生长，但在一定条件下，它们还可以在培养基中呈悬浮状态良好地生长，这类细胞称之为兼性贴壁细胞。
贴壁细胞分为，上皮细胞型，成纤维细胞型，游走细胞型和多型细胞型，在显微镜下观察时，贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形或其它形态，而且晃动培养液时，细胞不动。
悬浮细胞漂在培养液中，呈圆形，晃动培养液时细胞也随着漂动贴壁生长的细胞跟悬浮的细胞都有很多种。
活体体内的细胞当离体置于体外培养时大多数均以贴壁方式生长，主要包括正常细胞和肿瘤细胞，比如成纤维细胞，骨骼组织（骨及软骨），心肌与平滑肌、肝、肺、肾、乳腺皮肤神经胶质细胞，内分泌细胞，黑色素细胞及各种肿瘤细胞等。
少数细胞在体外培养是悬浮生长，包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，尤其是血液白细胞以及淋巴细胞。
体外培养贴壁细胞重要的生长特点有：贴附和伸展以及接触抑制和生长的密度限制。
贴附并伸展，是多数体外培养细胞的基本生长特点。
虽然血细胞如淋巴细胞在活体体内并无聚集的倾向并在体外可于悬浮状态中生长，但是大多数的哺乳动物细胞在体内和体外均附着于一定的底物而生长，在体外时这些底物可以是其他细胞、胶原、玻璃或塑料等。
培养细胞在未贴附于底物之前一般均似球体样；当与底物贴附后，细胞将逐渐伸展而形成一定的形态，呈成纤维细胞样或上皮细胞样等。
细胞附着于底物时并非一种需要能量的过程，一般认为与电荷有关。
据资料记载，37℃时在2min内细胞之间即可形成键，该键可对0.01%胰蛋白酶起作用且仅发生于细胞之间，而细胞与底物之间则无；8 min后才有稳定的键形成。
动物细胞贴壁的原理
动物细胞贴壁的生长机理?
悬赏分：0 |解决时间：2011-3-7 17:50 |提问者：星级少年
最佳答案
你说的是细胞培养的时候吗？
细胞培养过程添加的血清中会含有贴壁因子，细胞就是考这些贴壁因子而贴壁生长的，一般的，细胞都会贴壁生长，但是经过无血清驯化后的细胞，会从贴壁生长转到悬浮生长，目前在生物工程制药领域，趋势是使用无血清的悬浮培养为主。
细胞不贴壁一样可以生长。
如果把贴壁的细胞洗下来最常用的办法就是加入胰酶消化，37℃环境下放置3～5min便可，但是残留培养瓶内的胰酶对细胞有毒性作用，所以都会添加低浓度的血清以中和胰酶的。
用超声的办法也可以把细胞分离下来，但是要注意超声的频率不能太大，而且细胞很娇嫩，超声会导致细胞的破裂。
这是由细胞的性质特点决定的
有些细胞是必须要附着在支持物上才可以生长的，比如肝细胞，胃上皮细胞等等而有些细胞可以悬浮生长，比如骨髓细胞白，血病细胞等等
这些细胞的生长都是需要添加血清的，而不是有些人说的，加入血清后会贴壁。
贴壁生长和接触抑制
贴壁生长：是指细胞贴附在一定的固相表面进行的生长。
并不是所有的细胞是贴壁生长的，贴壁生长是某些细胞的一种特性，贴壁依赖型细胞在培养时要贴附于培养（瓶）器皿壁上，细胞一经贴壁就迅速铺展，然后开始有丝分裂，并很快进入对数生长期。
一般数天后就铺满培养表面，并形成致密的细胞单层。
贴壁生长的细胞要经过游离期、吸附期、繁殖期和退化期。
贴壁生长的细胞可以用蛋白酶等洗脱下来。
与贴壁生长相对的是悬浮培养。
原因：细胞分泌细胞外基质，这种细胞外基质黏附在支持物瓶壁上，然后细胞通过表面表达的黏附因子，与这些细胞外基质结合，所以细胞贴壁生长和这些物质有关，不能产生这些物质的细胞就不能贴壁生长，当然和瓶的表面结构也有关。
接触抑制：是指细胞在培养瓶中贴壁生长，长到相互接触时停止繁殖的现象。
原因：细胞增殖到一定程度，也就是互相挨在一起的时候，糖蛋白识别了这种信息，就会使细胞停止继续繁殖。
所以瓶壁上生长的细胞是单层的。
如果没有了接触抑制的特性，也就会成为肿瘤细胞了。
悬浮细胞 贴壁细胞概念
悬浮细胞：细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，这类细胞称为悬浮细胞。
如淋巴细胞。
贴壁细胞：在动物细胞培养过程中，必须有可以贴附的支持物表面，其依靠自身分泌或培养基中的贴附因子才能在该表面生长增殖的离体动物的培养细胞。
兼性贴壁细胞：有些细胞并不严格地依赖支持物，它们既可以贴附于支持物表面生长，但在一定条件下，它们还可以在培养基中呈悬浮状态良好地生长，这类细胞称之为兼性贴壁细胞。
贴壁细胞分为两种，上皮细胞型和成纤维细胞型，，在显微镜下观察时，贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形，而且晃动培养液时，细胞不动。
悬浮细胞漂在培养液中，呈圆形，晃动培养液时细胞也随着漂动贴壁细胞要加血清，不贴壁的可以不加血清。
不贴壁的一般用各种摇瓶和反应器培养，贴壁的一般用方瓶或孔板培养，使用微载体时也可以用反应器培养。
贴壁生长的细胞跟悬浮的细胞都有很多种。
活体体内的细胞当离体置于体外培养时大多数均以贴壁方式生长，主要包括正常细胞和肿瘤细胞，比如成纤维细胞，骨骼组织（骨及软骨），心肌与平滑肌、肝、肺、肾、乳腺皮肤神经胶质细胞，内分泌细胞，黑色素细胞及各种肿瘤细胞等。
少数细胞在体外培养是悬浮生长，包括一些取自血、脾或骨髓的培养细胞，尤其是血液白细胞以及癌肿细胞淋巴细胞分离液买来就应该是无菌的。
红细胞裂解液要过滤除菌。
分离脾细胞时好像有两种方法.1.裂解红细胞2.直接用淋巴细胞分离液.淋巴细胞分离液得到的是脾脏内的淋巴细胞(以B淋巴细胞为主).用红细胞裂解液是去除细胞悬液中的红细胞,保留了淋巴细胞(以B淋巴细胞为主)及脾脏实质细胞(主要是脾细胞).所以两者是有区别的,做混合淋巴细胞反应以前者为好,检测刺激后的细胞因子以后者较适宜.。
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生物学通报２００７年第４２卷第９期细胞体外培养时为什么会贴到培养皿壁上
刘梅芳徐国恒‘（北京大学医学都生理系北京１０００８３）
北京市第２２中学的生物学教师陈珊问：动物细胞培养时为什么会出现贴壁现象？
答：第１。
绝大部分细胞在机体内的环境下是与其他细胞或者细胞外基质结合的，不是孤立存在的。
第２，细胞与细胞或者细胞外基质结合的物质基础以及在体外培养中贴壁的物质基础是什么。
在体内，大部分细胞不是孤立存在的（血液中的细胞除外）。
一般一种细胞具有一种特定的功能．不同种细胞有机组合在一起就构成能够完成较为完整的一项功能的器官。
细胞之问，细胞与细胞外基质之间结合在一起，这使得每一部分组织或者器官具有一定的外形及特定的功能。
血液在体内是起运输作用的，不停地流动，要通过只有几个“ｍ的毛细血管，所以血液中的细胞是单个存在的。
否则就会发生血管阻塞。
但是它们受到刺激．其表面与黏附有关的蛋白会被激活然后与其他细胞或细胞外基质结合．如血小板接触到破损内皮下的胶原被激活而黏附在局部，从而发挥止血的功能；如巨噬细胞可以将衰老的红细胞、血液中凋亡的中性粒细胞结合并将其吞噬，这些都应该是属于细胞之间的结合。
另外有些研究表明细胞必须与其他的细胞发生联系才能够生存．如果没有其他细胞或者细胞外基质与之结合．此细胞就会发生凋亡，称为失巢凋亡。
细胞在体外培养的条件下的贴壁，首先并不是所有的细胞在体外培养的情况下都会贴壁，但大部分来自实体组织器官的细胞都会贴壁。
贴壁的过程可能是这样的。
细胞首先分泌细胞外基质，这种细胞外基质黏附在支持物的表面（培养瓶，培养皿的底面），然后细胞通过其表面表达的黏附因子与这些细胞外基质结合。
所以细胞贴壁与否与细胞本身分泌细胞外基质的能力以及细胞本身表达的黏附分子的数量有关，也与培养皿壁的表面结构有关。
细胞贴壁的过程使形态发生很大变化．细胞变形运动是细胞内骨架本身和细胞外基质共同作用的结果。
细胞为什么要贴壁，可以想象一下．密度大于培养基的细胞（绝大部分细胞）会沉在底面上，那么细胞要生存必定改善这个环境。
分泌细胞外基质，然后很自然就贴附在底面上了，而悬浮细胞．如淋巴细胞由于重力原因沉在培养瓶的底面，但是并不贴附，这可能与细胞表面的黏附分子少，以及分泌的细胞外基质过少有关．有人研究用细胞外基质处理培养器皿的底面．即增加细胞外基质，可以使悬浮的淋巴细胞贴壁。
另外悬浮生长的细胞系ＴＨＰ一１受到某些药物刺激之后也可以贴壁．这可能与细胞本身分泌的细胞外基质以及细胞表面的黏附分子表达增多有关。
密度小于水的细胞，如脂肪细胞，漂浮在液面上。
所以不可能贴在底面上．但是如果将培养液加满，那么细胞能够与培养瓶上面的壁接触同样可以贴壁。
因此可以说，细胞贴壁是适应环境的一种反应。
（Ｅ—ＩＩｌａｉｌ：ｘｕｇ＠ｂｊｗＬＩ．ｅｄｕ．ｃｎ）
（ＢＨ）
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细胞体外培养时为什么会贴到培养皿壁上
作者：刘梅芳， 徐国恒， Liu Meifang， Xu Guoheng
作者单位：北京大学医学部生理系,北京,100083
刊名：
生物学通报
英文刊名：BULLETIN OF BIOLOGY
年，卷(期)：2007，42(9)
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