先天性甲状腺功能减低症汉族儿童的促甲状腺素受体基因失活突变

【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｈｙｐｏｔｈ，’ｏｉｄｉｓｍ； Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｔｈｙ邛ｍ’ｐｉ“； Ｍｕｔａｔｉｏｎ
先天性甲状腺功能减低症（ｅｏｎｇｅｎｉｔａｌ ｈｙｐｏｔｈｙｒｏｉｄｉｓｍ，ｃＨ）是一种可导致严重智能发育落 后和体格发育障碍的遗传代谢性疾病，其发病率在 世界各地在１：１５００—１：４０００之间…。目前大部分 ｃＨ的发病机制尚不清楚，少数与某些基因突变有 关。自１９９５年ｓｕｎｔｈｏｍｔｌｌｅｐｖａｒａｋｕｉ等”。报道首例 促甲状腺素受体（ｔｈｙｍｔ”ｐｉｎ ｒｅｃ。ｐｔｏｒ，ＴｓＨＲ）基因失 活突变以来，该基因失活突变引起ｃＨ的家系报道 越来越多，多为双位点复合杂合子突变，亦有单位点 的纯合子突变及杂合子突变。ＴｓＨＲ突变位点不 同，临床表现不尽一致，突变基因型与临床表型存在 异质性”１。我院自１９９９年开展全省新生儿疾病筛 查以来，已累积筛查新生儿１７９万余例，发现ｃＨ患 儿１４００余例。为探讨浙江地区汉族儿童ｃＨ是否 与ＴＳＨＲ突变有关，我们于２００５年５月一２００６年４ 月采用ＰｃＲ基因扩增、纯化及ＤＮＡ测序技术，对７９ 例ｃＨ患儿的髓ＨＲ基因编码区进行突变研究，现 报道如下。
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对象和方法
一、研究对象 １．病例组：７９例研究对象均为浙江省新生儿疾 病筛查中心筛查并确诊的ｃＨ患儿，且甲状腺自身 免疫抗体ＴＲＡｂ、ＴＧＡｂ、ＴＰＯＡｂ均为阴性。其中亚 临床甲状腺功能减低症（简称甲减）１４例，年龄１— ５．５岁，男８例，女６例，经甲状腺Ｂ超明确甲状腺 位置及大小均正常；甲减６５例，年龄１．５—６岁，男 ２７例，女３８例，经甲状腺Ｂ超明确甲状腺位置及大 小正常３５例、甲状腺发育不良３０例。纳人标准：采 用化学发光免疫分析法，检测血清中ＴｓＨ、Ｔ。、Ｔ，水 平，应用美国ＤＰｃ公司（德普）化学发光分析仪与配 套试剂盒。正常值：促甲状腺素（佟Ｈ）０．３４—５．５ ｍＩＵ／Ｌ．Ｔ。５４—１７４ ｎｍｏＬ／Ｌ。Ｔ，１．２—３．４ ｎｍｏＬ／Ｌ。亚 临床甲减：ＴｓＨ＞２０ ｍＩｕ／Ｌ，Ｔ３、Ｔ。正常；甲减：曙Ｈ＞ ５０ ｍＩＵ／Ｌ，Ｔ。Ｔ４低于正常值或Ｔ。正常、Ｔ４低于正 常值。 ２．对照组：１００例，均为在本院住院患儿，并符 合下列条件：（１）无甲状腺疾病及其他内分泌疾病 家族史；（２）无自身免疫性疾病家族史；（３）经新生
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【关键词】 甲状腺功能减退症；受体，促甲状腺素；突变
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论著．
先天性甲状腺功能减低症汉族儿童的 促甲状腺素受体基因失活突变
袁哲锋罗燕斐吴亦栋沈征赵正言
【摘要】 目的探讨汉族儿童促甲状腺素受体（ＴｓＨＲ）基因失活突变与先天性甲状腺功能减低 症（ｃＨ）的相关性。方法（１）选择７９例ｃＨ汉族儿童（亚临床甲减１４例，年龄１—５．５岁，男８例， 女６例；甲减６５例，年龄１．５～６岁，男２７例，女３８例）为研究对象；１００名正常儿童（男４０例，女６０ 例，年龄１—８岁）作为对照组。（２）采用ＰｃＲ和ＤＮＡ测序技术检测码ＨＲ基因失括突变。结果 （１）７９例ｃＨ患儿中有１例发生复台杂台子突变，其突变位点为（Ｐ硝２Ｔｈｒ／Ｖ舶８９Ｇｌｙ）。１例发生杂 合子突变，其突变位点为（Ｇｌｙ２４５ｓｅｒ）。３０例患儿在第１０外显子２１８ｌ位核昔酸处发生ｃ—ｃ转换 （ＧＡｃ—ＧＡＧ），使７２７位密码子天冬氨酸被谷氨酸代替（灿ｐ７２７Ｇｌｕ）＝４７例患儿在第７外显于５６ｌ 位核苷酸处发生Ｔ—ｃ转换（ＡＡＴ—ＡＡｃ），相应的１８７位氨基酸（Ａｓｎ）不发生改变。（２）３３例正常对照 儿童在第１０外显子２１８ｔ位核苷酸处发生ｃ—Ｇ转换；５０例正常对照儿童在第７外显子５６１位核苷酸 处发生Ｔ—ｃ转换（ＡＡＴ—ＡＡｃ）。结论 浙江汉族ｃＨ患儿鸭ＨＲ慕因有３个杂合子突变位点： （Ｐｒ晒２Ｔｈｒ）、（Ｇｌｙ２４５ｓｅｒ）、（ｖ舶８９Ｇｌｙ），第１０外显子２１８１位核苷酸处（ｃＡｃ一＋ＧＡＧ）及第７外显子 ５６ｌ位核苷酸处（ＡＡｌＩＡＡｃ）存在聪ＨＲ基因多态性。
５４
２５４
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基金项目：浙汀省重点科技项目（０２１１０７５９７） 作者单位：３１０００３杭州，浙江大学医学院附属儿童医院内科（哀哲锋），康复科（罗燕斐），中心实验室（吴亦栋 沈征）．儿童保健科（赵正言） 通信作者：赵正言（ＥｍａＩ】：ｚｈ鲫２ｙ＠ｑｕ．ｅｄｕ．ｃｎ）
万方数据
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表１ ＴｓＨＲ基因外显子引物序列、退火温度及产物大小
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Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｉｔ ｍｙ ｅａｕｓｅ ｃｏ“ｇｅｎｉｔａｌ ｈｙｐｏｔｈｙｌｏｉｄｉ自ｍ（ＣＨ）．Ｄ印ｅｎｄｌ“ｇ ｏｎ ｔｈｅ ｄ。ｇｒｅｅ ０ｆ ｉｍｐａｉｍｅｎｔ ０ｆ ＴＳＨＲ
ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｐａｈｅⅡｔｓ ｃａ“ｐｒｅｓｅｎｔ ｗｈｈ ｓｕｂｃｌｉｎｉｃａｌ ｈｙｐｏｔｈｙｒｏｉ ｄｉ８ｍ ａｔ ｏｎｅ ｅｘｎ℃ｍｅ ｏｆ ｔｈｅ ｓｐｅｃｔｒｕｍ，ｏｒ Ｂｅｖｅｒｅ
万方数据
儿疾病筛查，已排除ｃＨ。病例组及对照组的年龄、 性别相匹配。
二、方法 １．ＴｓＨＲ基因外显子扩增：（１）基因组ＤＮＡ提 取：经监护人知情同意，采患儿及父母外周静脉血各 ２ ｍｌ（ＥＤ７ｒＡ抗凝），分离白细胞并提取基因组ＤＮＡ。 （２）引物设计：第１～９外显子引物设计参考文献 ［４］并适当修改、第ｌｏ外显予引物重新设计，由上 海生工生物工程技术服务有限公司合成（表１）。