实验六 酵母菌死活细胞鉴别
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定_百替生物
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定一、实验目的1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。
芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。
本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。
三、实验器材1.材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。
2.试剂：O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。
3.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。
四、实验步骤1.美蓝浸片观察（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑去少量酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
（2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
注：盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。
（3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
（4）染色约0.5h后再次观察，注意死细胞数量是否增加。
2.水-碘浸片观察在载玻片中央滴一滴碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
实验六酵母菌观察
实验六酵母形态观察、死活细胞鉴别和显微镜直接计数法酵母形态观察、死活细胞鉴别一、实验目的• 1 观察酵母菌的形态和出芽生殖方式• 2 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法二、基本原理•酵母菌是单细胞真核微生物，通常以出芽方式进行无性繁殖，有的进行分裂繁殖；通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖，有性繁殖要在特定培养条件下才能进行。
•染料美蓝氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞分泌的还原酶，能使美蓝由蓝色的氧化型转变为无色的还原型。
借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。
三、实验器材• 1 菌种：酿酒酵母• 2 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片等四、实验步骤美蓝浸片的观察(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。
（染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。
）(2)用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
镜检。
(3)将制片放置约3min后再次镜检并对照，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
滴加染液－涂片－加盖玻片－镜检－3min后再次镜检五、实验报告绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征思考题1、酵母死活细胞鉴别的基本原理是什么？微生物大小测定一、实验目的•学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法二、基本原理•测微尺：包括目镜测微尺和镜台测微尺。
•镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长0.01mm(即10um)。
镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。
•目镜测微尺是放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度。
由于放大倍数不同，目镜测微尺每小格代表的实际长度不一样。
因此，需首先校正目镜测微尺。
三、实验器材• 1 菌种：酿酒酵母• 2 仪器：目镜测微尺、镜台测微尺、显微镜、载玻片、盖玻片等四、实验步骤• 1 装目镜测微尺• 2 校正目镜测微尺•在40×镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。
实验六 酵母菌的形态观察及 血细胞计数板计数
2. 用镊子取一盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将
盖玻片放下使其盖在菌液上。
3. 将制片放置约3min后镜检，先用10X，再用40X观察酵母 的出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
4. 染色约0.5h后再次进行观察，注意死细胞数量是否增加。
（二）血细胞计数板计数
1. 菌悬液的制备
以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。
2.镜检
在加样前，先对计数室进行镜检。
3.加样品
计数板上盖上盖玻片，用自 动进入计数室。
4. 显微镜计数
加样后静止5min，先用10X观察，再用40X进行计数。
Attention： a. 光线的强弱适当； b. 一般样品稀释度要求每小格内约有5~10个菌体； c. 每个计数室选5个中格中的菌体进行计数，位于格线上的 菌体一般只数上方和右边线的； d. 芽体大小达到母细胞的一半时，即作为两个菌体计数； e. 从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。 5. 清洗 使用完毕后，将计数板在水龙头上用水冲洗干净，切勿用 硬物洗刷。
三、器材
1.菌种
酿酒酵母 （Saccharomyces cerevisiae)平板菌落及菌悬液
2.溶液或试剂
吕氏碱性美蓝染液
3.仪器及用具
显微镜 血细胞计数板 无菌毛细滴管 载玻片 盖玻片 双层瓶 擦镜纸
四、操作步骤
（一）酵母菌形态观察
1. 在载玻片中央滴一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液 ，然后按无 菌操作挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。
五、实验报告
结果部分
1.绘图说明所观察到的酵母菌的形态特征。 2.按书上列表记录计数结果。
酵母菌形态观察及死活鉴别
酵母菌形态观察及死活鉴别
一、实验目的
1.认识并观察酵母菌的形态特征，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。
2.学习鉴别死活细胞的实验方法。
二、实验原理
1、酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。
2、本实验是通过美蓝染液浸片和碘液浸片来观察酵母的形态
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞
三、实验器材
酵母悬液、美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液、显微镜、载玻片、盖玻片
四、实训步骤
1、水-碘浸片观察
在载玻片中央滴一滴碘液，取一滴酵母悬液放在碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。
2、美蓝浸片观察
（1）在载玻片中央加一滴美蓝染色液，滴加一滴酵母菌放在染液中，混合均匀，染液不宜过多。
注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。
（2）将制片放置约3min 后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
五、实验报告
绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征
六、注意事项
1、染色液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量的气泡，影响观察。
2、盖片时斜着放不易产生气泡。
1。
酵母菌死活鉴别原理
酵母菌死活鉴别原理嘿，咱今天就来讲讲酵母菌死活鉴别原理。
你说这酵母菌啊，就像一群小小的精灵，在我们看不见的地方忙碌着。
咱先想想啊，活的酵母菌和死的酵母菌那肯定不一样呀！就好像活蹦乱跳的小兔子和已经没了气的小兔子，差别大了去了嘛！那怎么来分辨它们呢？其实啊，有个挺简单的办法，就是利用一种染料。
这染料可神奇了，它能跟活的酵母菌玩个小把戏，却对死的酵母菌不理不睬。
就好像是一个聪明的小伙伴，能分得清谁是好朋友，谁只是个路人甲。
你看啊，当我们把染料加进去的时候，活的酵母菌就会把染料拒之门外，嘿，它可精着呢，不让染料进去捣乱。
而死的酵母菌呢，就没办法啦，染料就会大摇大摆地进去，给它染上颜色。
这不就一下子区分开了嘛！这就好像在一个大派对上，活的酵母菌是那些穿着漂亮衣服尽情跳舞的人，而死的酵母菌就是那些倒在一边没动静的。
我们用这个染料的办法，不就像是有了一双火眼金睛，能清楚地看到谁在活跃，谁已经歇菜了嘛！咱再深入想想，这酵母菌在我们生活里可重要啦！做面包要靠它，酿酒也要靠它。
要是分不清它们是死是活，那做出的面包能好吃吗？酿出的酒能香醇吗？那肯定不行啊！所以学会这个鉴别原理，就像是掌握了一门神奇的魔法，能让我们更好地利用这些小家伙们。
你说这多有意思啊！就这么一个小小的鉴别方法，却有着大大的用处。
它能让我们知道酵母菌们的状态，就像了解我们身边朋友的心情一样。
难道不是很神奇吗？而且啊，这也提醒我们，生活中的很多小细节其实都有着大学问呢！我们可不能小瞧了它们。
总之啊，酵母菌死活鉴别原理就是这么一个实用又有趣的东西，学会了它，你就能更好地和酵母菌这些小精灵打交道啦！原创不易，请尊重原创，谢谢!。
酵母菌形态观察、死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察
酵母菌形态观察、死活细胞的鉴别及子囊孢子的观察姓名：班级：生科二班学号：组别：二同组者：【目的要求】1.了解酵母菌的形态及出芽方式2.学习区分酵母菌的死细胞和活细胞3.掌握酵母菌子囊孢子的观察方法【基本原理】酵母菌繁殖方式：单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大多数采取出芽方式（在PDF酵母合成培养基中）进行无性繁殖，也可以通过结合产生子囊孢子（麦氏培养基中）进行有性繁殖。
美蓝染色原理：由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。
同时，采用美蓝染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。
美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色。
由于新陈代谢，活细胞胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。
死细胞或代谢能力微弱的衰老细胞还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。
子囊孢子：是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。
在酵母菌种，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要指标之一。
酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。
麦氏（Meclary）培养基（葡萄糖-醋酸钠培养基）有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。
孢子染色原理：孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。
因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。
在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。
【实验器材】1.菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。
2.溶液与试剂：0.1%吕氏碱性美蓝染液，5%孔雀绿，番红染液，95%乙醇。
3.培养基：麦氏（Meclary）琼脂斜面培养基。
4.仪器或其他用品：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环等。
【操作步骤】1.两种培养基的配置分别配置100ml麦氏培养基和200ml酵母合成培养基，其成分配比详见附录一。
酵母菌死活细胞鉴别
四、操作步骤
1、滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央，无 滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央 吕氏碱性美蓝热染液于载玻片中央， 菌操作用接种环由酵母菌培养斜面上挑取少许菌体置于染液 混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞） ；（不要过于剧烈 中，混合均匀；（不要过于剧烈，以免破坏细胞） 2、用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢 用镊子取一块盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触， 将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡） ；（不要产生气泡 将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上；（不要产生气泡） 3、将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形 将制片放置3min后 态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞； 态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死活细胞； 4、染色30min后再次观察，注意死活细胞比例是否发生变 染色30min后再次观察 后再次观察， 化； 5、用0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 0.05%吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验 吕氏碱性美蓝染液作为对照同时进行上述实验。 建议做，用等量生理盐水稀释染液即可） （建议做，用等量生理盐水稀释染液即可）
酵母出芽
三、器材
1、菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿； 的培养斜面或平皿； 菌种：酵母菌2d的培养斜面或平皿 2、溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液； 溶液和试剂：吕氏碱性美蓝染液； 3、仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片， 仪器和其他用品：酒精灯，载玻片，盖玻片， 显微镜，接种环，滴管等。 显微镜，接种环，滴管等。
酵母菌细胞的形态观察、 酵母菌细胞的形态观察、 死活细胞的鉴别
一、目的和要求
1、观察酵母菌细胞的形态结构； 观察酵母菌细胞的形态结构； 2、掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色原理和 方法； 方法；
酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定
实验六酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定一、目的要求1. 通过观察了解酵母细胞的形态结构及出芽繁殖。
2. 掌握鉴别酵母细胞死活的染色技术。
二、基本原理酵母菌细胞较大，不必染色即可用显微镜观察其形态。
用美蓝染色液可对酵母细胞进行死活染色鉴别。
美蓝是一种弱氧化剂，氧化态呈蓝色，还原态呈无色。
活的酵母细胞，因新陈代谢的不断进行，具有一定的还原能力，能将进入细胞的美蓝还原，而细胞呈无色；而死细胞已失去还原能力，则被染料染成蓝色。
需要注意的是，一个活酵母菌的还原能力是有限的，必须严格控制染料的浓度和染色时间。
三、材料及器材1. 菌种：酵母菌。
2. 溶液和试剂：0.05%和0.1%吕氏美蓝染色液。
3. 仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，试管，蒸馏水等。
四、方法与步骤1. 在干净载玻片上加一滴吕氏美蓝染色液，以无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在美蓝液中，混合均匀。
2. 取一块盖玻片，先将一边与染液接触，然后慢慢将盖玻片放下，避免产生气泡，将多余染液用吸水纸吸干。
3. 将载玻片置于载物台上，先用低倍镜，然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
4. 染色约0.5h后再进行观察，注意死细胞数量是否增加。
5. 用0.05%吕氏美蓝染色液重复上述操作。
五、实验作业及实验报告1. 绘图说明你所观察到的酵母形态特征。
2. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌?3. 酵母水浸片制作时应注意什么?4. 吕氏美蓝染色液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。
六、实验结束、检查试验仪器破损情况，清理实验室。
实验六酵母菌死活细胞鉴别护理课件
04
结果分析
分析死活细胞鉴别实验结果
实验原理
通过荧光染色法，利用活细胞和死细胞对荧光染料的吸收 能力不同，来区分死活细胞。活细胞能够吸收染料并发出 荧光，而死细胞则不能。
实验结果
实验结果显示，大部分细胞被染成荧光色，表明大部分细 胞为活细胞。同时，部分细胞未被染色，表明这些细胞可 能已经死亡。
结果分析
对未来研究的展望
在未来的研究中，可以进一步探索荧光染色法在其他类型微 生物死活细胞鉴别中的应用效果，以验证该方法的通用性和 可靠性。同时，可以尝试优化荧光染色法的实验条件，提高 鉴别准确性和效率。
此外，可以深入研究荧光染色法的作用机制和影响因素，为 该方法的改进和完善提供理论支持。同时，可以结合其他先 进的生物技术手段，如基因编辑、高通量测序等，开展更深 入的研究，以推动相关领域的发展。
在实验过程中，我们发现酵母菌死活细胞的鉴别受到多种因素的影响， 如染色剂的浓度、染色时间、细胞培养条件等。因此，为了获得更准确
的鉴别结果，需要仔细控制实验条件。
此外，我们还发现荧光染色法对于其他类型的微生物死活细胞的鉴别同 样具有潜在的应用价值。这为进一步拓展荧光染色法的应用范围提供了 可能性。
阐述实验的意义和价值
THANKS
感谢观看
。
荧光染色法
利用荧光染料对酵母细胞进行染 色，通过荧光显微镜观察染色后 的细胞，判断细胞的死活状态。 活细胞能够吸收染料并发出荧光
，而死细胞则不能。
了解酵母菌死活细胞对发酵实验结果的影响
01 发酵产物产量
死细胞无法参与发酵过程，导致发酵产物产量降 低。活细胞则能够正常参与发酵过程，产生相应 的发酵产物。
本实验的意义在于探索一种简便、可靠的酵母菌死活细胞鉴别方法，为微生物学和生物医学研 究提供有力支持。通过鉴别酵母菌死活细胞，有助于更好地了解微生物的生长、繁殖和代谢机 制，为相关领域的研究提供有益的参考。
酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微直接计数法
酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微镜直接计数法I 酵母菌的形态观察及死活鉴别一、目的要求观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
二、基本原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。
繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。
本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的。
用它采对酵母细胞进行染色。
活细胞内由于新陈代谢作用而具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母活细胞染色后无色。
而死细胞或代谢缓慢的老细胞因无还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。
三、器材酿酒酵母（Saccharomyces cerevissiae）；0.1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；显微镜，载玻片，盖玻片等。
四、操作步骤（美蓝浸片观察）(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。
然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。
(2)用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。
盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触；然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。
(3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。
先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。
五、实验报告(1) 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。
II 显微镜直接计数法一、目的要求1．明确显微镜计数的原理。
2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。
二、基本原理利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。
酵母菌形态观察及死活细胞鉴定2
一、目的要求:
1、显微镜下观察细菌个体的形态。
2、学习环境中微生物的检查方法，并加 深对微生物分布广泛性的认识。
二、基本原理:
形态观察主要包括群体的形态和个体的形态观察。
细菌的基本形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近 年还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养 基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。
死活细胞鉴定原理
美蓝是一种无毒性的染料。 美蓝有氧化型和还原型两种状态。 氧化型为蓝色，还原型无色。 酵母活细胞由于体内的新陈代谢作用，细胞内
具有较强的还原能力，能使美蓝由氧化型变为 还原型。 酵母死细胞或者代谢作用微弱的细胞，还原能 力弱，不能使美蓝由氧化型转变为还原型。
实验步骤
在载玻片中央加一滴0.1％美蓝染色液，染色 液过多会溢出，过少会在盖玻片下出现大量气 泡。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色。 细菌在中性、碱性或弱酸性溶液环境中通 常带负电荷，碱性染料（解离时分子的染 色部分带正电荷）如美兰、结晶紫等易与 细菌结合使其着色。
操作方法
1、涂片—枯草芽孢杆菌 2、干燥：室温自然干燥 3、固定：有菌膜的一面向上，通过火焰2－3次，
细 胞质凝固
4、染色：滴加染液(美蓝或者番红或者结晶 紫）染色时间为两分钟
细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质 地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的 细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。
细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个 体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、 鉴别染色、特殊染色。
简单染色法原理:
吸取少量酵母菌液，稀释后滴半滴在载玻片的 美篮染色液中，混合均匀；
03-03-013实训指南-酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数
实训安排
序号
具体实训内容
学时生产指令），发放引导文；
组织几个学习小组；每组各选出一名组长各学习，教师组织引导问题的回答
10分钟
引导教学
分组讨论
2
各学习小组成员根据各自学习，通过讨论等方式，确定酵母死活细胞鉴别及镜检计数的方案。
20分钟
3
根据酵母死活细胞鉴别及镜检计数的方案，教师参与实施；在实践操作过程中要注重与实际相结合，整个过程要模拟实际工厂微生物检测操作。这个过程中师生共同分析、解决问题。
50分钟
4
各组成员对酵母死活细胞鉴定结果及镜检计数结果进行评价；
各班组成员对任务的组织、策划、产物的观测等过程进行自评和互评；
教师就各组成员在不同阶段的个方面的表现情况进行评价；
教师根据操作过程中存在的问题提问，学生通过讨论方式尝试给出解释方法，教师总结归纳解决方法。
10分钟
分组讨论
教师监督
5
撰写、提交实训报告和实训总结
小组总结
实验六 酵母菌死活细胞鉴别
三、器材
1、染液：吕氏碱性美蓝染液 2、菌种：酿酒酵母的斜面培养物 3、仪器和其他用具： 显微镜、载玻片、 盖玻片等
四、操作步骤
1、美蓝浸片的观察： 1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝 染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少 量少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。 染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片 时菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。 2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液 接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌 液上。盖玻片不宜平放着放下，以免产生 气泡影响观察。
实验六 酵母菌细胞 的形态观察、死活细胞 的鉴别
一、目的和要求
1．观察酵母菌的出芽繁殖方式，学习区 分酵母菌死活细胞的实验方法。 2．掌握酵母菌的一般形态特征及其与细 菌的区别。
二、基本原理
1．形态观察：酵母菌是不运动的单细胞真 核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至十 几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性 繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接 合产生子囊孢子。
3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然 后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并 据颜色来区别死活细胞。 4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细 胞数量是否增加。 5）用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。
2、水-碘液浸片的观察 在载玻片中央加一小滴革兰氏染色用碘液， 然后在其上加三滴水，取少量酵母菌苔放 在水-碘液中混匀，盖上盖玻片镜检。
2．死活鉴定：美蓝是一种无毒性的染料， 它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美 蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞 的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原 能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色 的还原型。因此，具有还原能力的酵母活 细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱 的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。
实验五实验六酵母菌形态观察显微计数法
一、目的要求
1.学习自制水浸片法观察酵母菌的方法 2.观察酵母菌形态和出芽生殖方式 3.学习并掌握区分酵母菌死活细胞的染色方法 4.了解血球计数板的构造、计数原理和计数方 法，掌握显微镜下直接计数的技能
二、实验原理
1.酵母菌可以用单纯的水制成水浸片观察， 也可以用染色液制成水浸片观察。 2.美兰是一种无毒性染液，有两种形态 还原型：无色 氧化性：蓝色 活细胞因新陈代谢而有强还原力使美兰从氧 化型变为还原型；死细胞无此能力，而被美 兰染成蓝色。以此可以区分死活细胞。 3.测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用 的有显微直接计数法和平板计数法。
酵母菌个体形态观察酵母菌个体形态观察用美兰浸片法观察啤酒酵母个体形态及死活用美兰浸片法观察啤酒酵母个体形态及死活细胞区别细胞区别10101在载玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液盖上盖玻片勿使产生气泡且不要再移动盖玻2将制好的水浸片放置2分钟后镜检
实验五 实验六
酵母菌的形态观察及死活 细胞鉴定 微生物显微镜直接计数法
用美兰浸片法观察啤酒酵母个体形态及死活 细胞区别
1、在载玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液， 盖上盖玻片，（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻 片） 2、将制好的水浸片放置2分钟后镜检。先用低倍镜 观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽 情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细 胞。 3、染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。 4、染色一小时后，再观察一下死细胞数是否增加。
每毫升菌液中的菌数 = A ——×25（16）×10×1000×B 5
A：5个中方格中的酵母菌数 B：稀释倍数
三、实验材料
1.菌种：啤酒酵母 2.染色液：0.1%吕氏碱性美蓝 3.器材：载玻片，显微镜、血球计数 板、盖玻片 、吸水纸、计数器、滴 管、擦镜纸。
酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微直接计数法
酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微直接计数法酵母菌的形态观察及死活鉴别与显微镜直接计数法I 酵母菌的形态观察及死活鉴别一、目的要求观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
二、基本原理酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。
繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。
本实验通过用美蓝染色制成水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。
美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的。
用它采对酵母细胞进行染色。
活细胞内由于新陈代谢作用而具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母活细胞染色后无色。
而死细胞或代谢缓慢的老细胞因无还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。
因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。
三、器材酿酒酵母（Saccharomyces cerevissiae）；0.1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；显微镜，载玻片，盖玻片等。
四、操作步骤（美蓝浸片观察）(1)在载玻片中央加一滴0.1％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。
然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。
(2)用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。
盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触；然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。
(3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。
先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。
五、实验报告(1) 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。
II 显微镜直接计数法一、目的要求1．明确显微镜计数的原理。
2．学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。
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2、水-碘液浸片的观察
在载玻片中央加一小滴革兰氏染色用碘液， 然后在其上加三滴水，取少量酵母菌苔放 在水-碘液中混匀，盖上盖玻片镜检。
五、实验报告
1、绘图说明所观察的酵母菌的形态特征。
酵母死活细胞的对比
六、思考题
（1）吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的 不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试 分析其原因。 （2）在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特 征区别于一般细菌？
实验六 酵母菌细胞 的形态观察、死活细胞
的鉴别
一、目的和要求
1．观察酵母菌的出芽繁殖方式，学习区 分酵母菌死活细胞的实验方法。
2．掌握酵母菌的一般形态特征及其与细 菌的区别。
二、基本原理
1．形态观察：酵母菌是不运动的单细胞 真核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至 十几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无 性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过 接合产生子囊孢子。
2．死活鉴定：美蓝是一种无毒性的染料， 它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美 蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞 的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原 能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色 的还原型。因此，具有还原能力的酵母活 细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱 的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。
啤酒酵母
酵母出芽
酵母菌出芽繁殖及芽体
三、器材
1、染液：吕氏碱性美蓝染液 2、菌种：酿酒酵母的斜面培养物 3、仪器和其他用具： 显微镜、载玻片、盖
玻片等
四、操作步骤
1、美蓝浸片的观察：
1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝 染色液，然后按无菌操作用接种环挑取少 量少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。 染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片 时菌液会溢出或出现大量气泡而影响观察。
2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液 接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌 液上。盖玻片不宜平放着放下，以免产生 气泡影响观察。
3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜 然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况， 并据颜色来区别死活细胞。
4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细 胞数量是否增加。