Dispase II 分散酶——使用说明
Dispase II说明书
Dispase® II (neutral protease, grade II)1.What this Product DoesContents5 bottles Dispase® II lyophilizate, nonsterile, 5 × 1 gStorage and StabilityThe lyophilizate is stable at +2 to +8°C until the expiration date printed on the label.The reconstituted stock solution is stable at +2 to +8°C for 2 weeks. For longer storage times up to 2 months the stock solution should be stored frozen in aliquots. Repeated freezing and thawing should be avoided.The working solution diluted with PBS is stable at +2 to +8°C for3 days.ApplicationDispase® is used for the preparation of cells from a wide variety of dif-ferent tissues and organs. Dispase® has proven to be a rapid and effective, yet gentle, agent for separating intact epidermis from the dermis, and intact epithelial sheets in culture from the substratum. Dispase® is also used to subculture cells and prevent unwanted clumping of cells cultured in suspension.2.How to Use this Product2.1Before you BeginPreparation of Stock and Working SolutionDissolve the nonsterile lyophilized enzyme in PBS (Ca2+ /Mg2+-free) (10 mg/ml). Dilute further with PBS (Ca2+ /Mg2+-free) to a final con-centration of 0.6 to 2.4 U/ml. Concentrations higher than 2.4 U/ml are not recommended. Filter sterilize through a 0.22 m filter membrane.2.2ProceduresDisaggregation of Tissue Subcultivation of Cells3.Additional Information on this ProductHow this Product WorksProteolytic enzymes such as trypsin, collagenase and pronase are used for dispersing tissues and cells. These enzymes, however, often injure the cells, are unstable during incubation, can be heterogeneous and also a source of mycoplasma contamination. The use of Dispase®overcomes all these difficulties. Dispase® is especially suitable for tis-sue disaggregation and subcultivation (1–7) procedures since it does not damage cell membranes. Since Dispase® is from a bacterial source, it is free of mycoplasma and animal virus contaminations. It is very stable with respect to temperature, pH and interference by serum components. Activity is greatly reduced by dilution, allowing suspen-sion cultures to grow without difficulty. Dispase® has even been added to cell suspension cultures to prevent unwanted cell clumping. Dis-pase® has been used to prepare many types of cells for culture (1,7). Dispase® has proven to be a rapid, effective, but gentle agent for sep-arating intact epidermis from the dermis and intact epithelial sheet in culture from the substratum. In both cases it effects separation by cleaving the basement membrane zone region while preserving the viability of the epithelial cells (2,4-6). Dispase® has been used for the harvest and transfer of normal, diploid cells and cell lines.Suitability of the enzyme for detaching and dissociating a particular cell line, however, should be determined empirically. A general obser-vation is that fibroblast-like cells are detached by Dispase® from the culture substrate as well as dissociated into a mono-disperse cell sus-pension while epithelial-like cells are detached, but not completely dissociated. Dispase® has therefore been used to detach epidermal cells as confluent, intact sheets from the surface of culture dishes without dissociating the cells (2,4-6).From Bacillus polymyxaLyophilizate, nonsterileCat. No. 04 942 078 001 5 × 1 gStore at +2 to +8°CStep Action³Fragment the tissue with a sterile scalpel or scissors.ᕢWash the tissue fragments in sterile PBS.ᕣIncubate the fragments in the Dispase® solution (2.4 U/ml –0.6 U/ml) at 37°C.L Make sure that the tissue fragments are well covered by the solutionᕤStir slowly at 37°C until the tissue is sufficiently dissolved.L When using Dispase® for the first time, determine the total reaction time by counting the cells. A time of onehour is required for hard compact tissue. The cells willnot be adversely affected even after several hours in Dis-pase®.ᕥIf necessary, separate the dispersed cells from residual tis-sue by passing the mixture through a sterile stainless steelgrid, or simply decant the cells after larger fragments havesettled. Fresh Dispase® solution may be added to theremaining tissue fragments if further disaggregation isrequired ᕦSpin the cells down and decant off the enzyme solutionᕧResuspend the pellet in the culture medium and incubate under the normal predetermined conditionsStep Action³Cover the cells with Dispase® solution, prewarmed to 37°C, incubate for 5 min at 37°C.ᕢDecant the solution and incubate for a further 10 min at 37°C.ᕣControl detaching with the microscope, if necessary incu-bate for a further 15 min.ᕤSuspend the cells in culture medium and spin the cells down, wash the cells with culture medium.ᕥResuspend the cells in fresh culture medium.ᕦPlate the cells as usual.Step ActionFor general laboratory use. Not for use indiagnostic procedures. FOR IN VITRO USE ONLY.0407.04962486001➂Roche Diagnostics GmbH Roche Applied Science 68298 Mannheim GermanyContact and SupportTo ask questions, solve problems, suggest enhancements or report new applications, please visit our Online Technical Support Site at:/supportTo call, write, fax, or email us, visit the Roche Applied Science home page, , and select your home country. Country- specific contact information will be displayed. Use the Product Search func-tion to find Pack Inserts and Material Safety Data Sheets.Product description EC 3.4.24.4Specific activityՆ0.8 U/mg (37°C, casein as substrate, pH 7.5).One unit is defined as the amount of enzyme that liberates under assay conditions Folin-positive amino acids and peptides from casein equivalent to 1 mol (181 g) tyrosine per minute at pH 7.5 at 37°C.One unit of Roche Applied Science Dispase ® equals 181 protease units (PU) measured as release of amino acids equivalent to 1 g tyrosine per min and ml at pH 7.5 and 37°C.A practical comparison of RAS units of Dispase ® with those cited in the Japanese literature (where concentrations of 1,000 to 2,000 units Dispase ®/ml are not uncommon) suggests one Roche Applied Sci-ence unit of Dispase ® II, grade II equals approx. 600 Japanese units of Dispase ®.InhibitorsEDTA, EGTA, Hg 2+, other heavy metals (8,9). Dispase ® is not inhibited by serum.ActivatorsCa 2+, Mg 2+, Mn 2+, Fe 2+, Fe 3+, Al 3+. Optimal Ca 2+-concentration is 2mM. The enzyme preparations contain enough Ca 2+ for optimal activity.SpecificityDispase ® is a non-specific protease.pH Optimum 6.0 – 8.5Quality ControlProtease activity of each lot is tested with casein as substrate.References1Epting C.L. et al. (2004) Stem cell antigen-1 is necessary for cell-cycle withdrawal and myoblast differentiation in C2C12 cells. Journal of Cell Science , 117, 6185-6195.2Gao C. Y. et al. (2004) Cdk5 regulates activation and localization of Src during corneal epithelial wound closure. Journal of Cell Science , 117, 4089-4098.3Mena I. et al. (2004) Infection of macrophage primary cultures by persistent and nonpersistent strains of Theiler's virus: role of capsid and noncapsid viral determinants. Journal of Virology , 78, 13356-13361.4Brückener K. E. et al. (2003) Permeabilization in a cerebral endot-helial barrier model by pertussis toxin involves the PKC effector pathway and is abolished by elevated levels of cAMP. Journal of Cell Science , 116, 1837-1846.5McDermott J. R. et al. (2003) Mast cells disrupt epithelial barrier function during enteric nematode infection. Proceedings of the National Academy of Sciences , 100, 7761-7766.6Medler K. F. et al. (2003) Electrophysiological characterization of voltage-gated currents in defined taste cell types of mice. Journal of Neuroscience , 23, 2608.7Khayyamian S et al. (2002) ICOS-ligand, expressed on human endothelial cells, costimulates Th1 and Th2 cytokine secretion by memory CD4+ T cells. Proceedings of the National Academy of Sciences , 99, 6198-6203.8Griffin, P.J. & Fogarty, W. M. (1971 ) Some properties of a protease from Bacillus polymyxa Biochem. J . 125, 109 P9Foganty, W. M. & Griffin, P.J. (1972) Biochemical Society Transac-tions 1, 400-402.4.Supplementary InformationText ConventionsTo make information consistent and understandable, the following text conventions are used in this Instruction Manual:SymbolsSymbols are used in this Instruction Manual to highlight important information:Ordering InformationRoche Applied Science offers a large selection of reagents and sys-tems for life science research. For a complete overview of related products and manuals, please visit and bookmark our home page, TrademarksDispase ® is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd., Tokyo,Japan.Text ConventionUseNumbered instructions labeled ᕡ, ᕢ, etc.Steps in a procedure that must be performed in the order listed.Asterisk *Denotes a product available from RocheApplied Science.Symbol DescriptionLInformation Note:Additional information about the current topic or proce-dure.ProductPack Size Cat. No.Dispase ® I (neutral protease, grade I)10 × approx. 2 mg 04 942 086 001。
PeproGrow
PeproGrow™ hESC培养基—常见问题解答1. PeproGrow™ hESC的配方是什么？PeproGrow TM h ESC培养基是PeproTech与美国罗格斯大学干细胞培训中心合作研发的专有配方，不含血清和酚红，化学成分明确。
每个PeproGrow™ h ESC培养基试剂盒中包含一瓶基础培养基和一管单独的PeproTech重组生长因子冻干粉。
2. 如何储存PeproGrow™ hESC培养基？基础培养基避光2°C-8°C最长保存6个月，生长因子冻干粉组分2°C-8°C可保存6个月，-20°C至-80°C则可保存长达5年。
3. PeproGrow™ hESC培养基应该如何使用？生长因子冻干粉在开盖前需离心，然后根据试剂盒的规格不同用100 µl或500 µl细胞培养级无菌水重悬。
如果两周内能用完，则将全部的已重悬生长因子组分无菌操作加入基础培养基中，通过旋转或吹打充分混匀。
如果两周内用不完，则需无菌操作取所需体积的基础培养基至一个无菌的聚碳酸酯(PC)瓶或锥形底聚丙烯(PP)管中，然后按比例加入已重悬的生长因子组分，并通过旋转充分混匀。
如果整个过程均为无菌操作，配制完成后无需再次过滤除菌。
在瓶子标签上标注配制时间及新的有效期(混合后2周)，避光保存于2°C - 8°C。
细胞换液前，仅取当次所需量的培养基，复温后使用。
4. 从我目前使用的培养基更换为PeproGrow™ hESC培养基时必须进行适应培养吗？在两种均含胰岛素的培养基间切换不必进行适应培养，而当从含胰岛素的培养基更换为不含胰岛素的培养基时则可能需要适应培养。
是否需要适应培养液也与细胞类型有关。
当快速方案(无适应培养)的效果不尽如人意时，额外的适应培养(短期或长期的)可能就有必要了。
如果短期的适应培养不奏效时，可使用长期的适应培养，同时逐步提高新培养基的比例，如按100:0，80:20，60:40，20:80和0:100分步进行。
中性蛋白酶研究-WBC-LS02112中性蛋白酶(分散酶)
中性蛋白酶研究-WBC-LS02112中性蛋白酶（分散酶）中性蛋白酶由枯草芽胞杄菌经液体深层发酵培养并提炼精制而成的固体酶制剂。
可用于各种蛋白质水解处理。
在中性条件下,本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。
【适用范围】可广泛应用于动植物蛋白的水解,制取生产高级调味品和食品营养强化剂的HAP和HP,以及皮革脱毛、软化、羊毛丝绸脱胶等加工。
适用pH范围是6.0-80,最适PH值70,湿度范围是10c60℃最适温度50℃【动植物蛋白水解粉应用】广泛用于生产高级调味品和食品营养强化剂,各种动物来源性抽提物生产功能性骨、肉提取物(骨素)、水产提取物、蛋白胨、肽等及研究开发一些高附加值的功能食品。
温度:50-55,PH6.0-7.0,用量:0.1-0.3%(干物重)【医药工业的应用】含中性蛋白酶的药物,可起到消炎、利胆、止痛、助消化的功效【纺织工业应用】用中性蛋白酶处理过的羊毛,其抗张度比常规方法高,毛线手感柔软,收缩性为0:还可用于蚕的脱胶和蚕丝的精炼。
【皮革工业的应用】参考用量:皮革脱毛150-300ug皮重,皮革软化8-15ug皮重。
利用中性蛋白酶可制成脱毛剂,经鞣制的皮革,脱毛干净,粒而清晰,无明显损伤,毛孔细致光亮。
【饲料工业的应用】加入饲料配方中或直接与混合饲料混合饲喂,可提高蛋白质的利用率和降低饲养成本。
艾美捷中性蛋白酶（Dispase®）是一种非哺乳动物来源的无（AOF）金属中性蛋白酶，通过沃辛顿开发的方法纯化。
其温和的蛋白水解作用使该酶特别适用于原代细胞和二次（亚培养）细胞培养的制备，因为它对细胞膜温和。
这种蛋白酶还用作细胞分离和组织解离应用中的二级酶，通常与胶原蛋白一起使用。
中性蛋白酶（分散酶）（WBC-LS02112）的测定：方法在过氧化物酶偶联系统中，通过测量D-丙氨酸氧化引起的A436的增加来确定反应速度。
一个单位每分钟氧化一微摩尔的D-丙氨酸，为37°C和pH 8.3在规定条件下。
注射用降纤酶
注射用降纤酶注射用降纤酶是一种药品。
本品为白色或类白色冻干块状物或粉末，有引湿性，易溶于水。
临用前，用注射用水或生理盐水适量使之溶解，加入至无菌生理盐水100ml－250ml中，静脉点滴1小时以上。
急性发作期：一次10单位，一日1次，连用3～4日。
非急性发作期：首次10单位，维持量5～10单位，一日或隔日1次，二周为一疗程。
目录概述通用名：注射用降纤酶曾用名：英文名： DEFIBRASE FOR INJECTION拼音名： ZHUSHEYONG JIANXIANMEI药品类别：酶类贮藏：遮光、密封、10℃以下保存。
规格：5单位；10单位包装：5单位×5支；10单位×5支。
西林瓶包装。
有效期：2年适应症（1）急性脑梗死，包括脑血栓、脑栓塞，短暂性脑缺血发作（TIA），以及脑梗死再复发的预防。
（2）心肌梗死，不稳定性心绞痛以及心肌梗死再复发的预防。
（3）四肢血管病，包括股动脉栓塞，血栓闭塞性脉管炎，雷诺氏病。
（4）血液呈高粘状态、高凝状态、血栓前状态。
（5）突发性耳聋。
（6）肺栓塞。
药理毒理蛋白水解酶。
能溶解血栓，抑制血栓形成，改善微循环。
不良反应个别病人用药后可能出现少量淤斑、鼻血或牙龈出血、或有一过性GOT 或GPT轻度上升，停药后自行消失。
临床研究【功效主治】（1）急性脑梗死，包括脑血栓、脑栓塞，短暂性脑缺血发作（TIA），以及脑梗死再复发的预防。
（2）心肌梗死，不稳定性心绞痛以及心肌梗死再复发的预防。
（3）四肢血管病，包括股动脉栓塞，血栓闭塞性脉管炎，雷诺氏病。
（4）血液呈高粘状态、高凝状态、血栓前状态。
（5）突发性耳聋。
（6）肺栓塞。
【药理作用】蛋白水解酶。
能溶解血栓，抑制血栓形成，改善微循环。
【药物相互作用】使用本品应避免与水杨酸类药物（如阿司匹林）合用。
抗凝血药可加强本品作用，引起意外出血；抗纤溶药可抵消本品作用，禁止联用。
【不良反应】个别病人用药后可能出现少量淤斑、鼻血或牙龈出血、或有一过性GOT或GPT轻度上升，停药后自行消失。
系统性红斑狼疮皮损角质形成细胞体外培养及细胞学特性观察
系统性红斑狼疮皮损角质形成细胞体外培养及细胞学特性观察（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：赖宽曾凡钦魏菁郭庆何嘉辉谭国珍李伯有【摘要】【目的】体外培养系统性红斑狼疮(SLE)皮损部位角质形成细胞(KC)，观察其细胞学特性。
【方法】原代培养SLE皮损和正常皮肤的角质形成细胞，倒置显微镜观察细胞的形态特点，免疫荧光法进行角蛋白检测并计算细胞纯度;两步消化法纯化细胞;CCK-8(cell counting Kit-8)评价细胞的增殖情况，绘制生长曲线。
流式细胞仪观察细胞的生长周期和凋亡情况。
【结果】使用K-SFM(serum-free keratinocyte medium)无血清培养基能成功体外培养SLE皮损的角质形成细胞，呈铺路石样。
结合人工纯化，能达到95%的纯度;与正常对照相比，SLE皮损角质形成细胞进入指数生长期较迟(7 d vs. 4 d)，但进入后增长迅速，S期比例为：(40.68 ±1.81)% vs. (34.43 ±1.24)%(P 0.05);凋亡率高：(6.08 ±0.72)% vs. (4.32 ±0.44)%(P 0.05)。
【结论】SLE皮损角质形成细胞培养难度大，细胞的生物学行为存在异常，可能为SLE发病的独立、始发因素，其致病机制值得深入研究和探讨。
【关键词】SLE; 角质形成细胞; CCK-8; 凋亡; 细胞周期Abstract：【Objective】To observe the cytologic characteristics of keratinocytes (KC) from lesion of systemic lupus erythematosus (SLE) patients in vitro. 【Methods】KC from lesions of SLE patients and healthy people (control group) were cultured in vitro and identified by detecting Pan cytokeratin with immunofluorescence. Features of the keratinocytes were analyzed with invert microscope. Two-step digestion when passaging was used to purify cell line. CCK-8 was used to assay growth kinetics of the keratinocytes and come up with a growing curve after continuous analysis for two weeks. Cell circle and apoptosis were observed by flow cytometry. 【Results】KC was cultured in vitro successfully. Concerning passage 2，over 95% of the cells from primary culture were positive for cytokeratin. Comparing with KC from healthy people，KC from SLE lesions needed more time (7 d vs. 4 d) to reach exponential growth phase (EGP)，but grew faster in EGP. Both cell count at S phase and apoptosis rate of KC from SLE lesions elevated，when comparing with that of the control group. 【Conclusion】Keratinocytes from lesions of SLE patients are abnormal cytologically. It might be a vital cause of skin lesion of SLE，and a priming of SLE.皮肤损害具有特征性而常见。
内毒素脂多糖(LPS)对人牙周膜成纤维细胞TNF—α、IL—6
内毒素脂多糖（LPS）对人牙周膜成纤维细胞TNF—α、IL—6 目的研究内毒素脂多糖（LPS）对人牙周膜成纤维细胞TNF-α、IL-6表达的影响。
方法培养HPLFs细胞，将细胞分为LPS 刺激0 mg/L（对照组）、1 mg/L （实验Ⅰ组）、10 mg/L（实验Ⅱ组），应用ELISA法检测IL-6、TNF-α因子的表达情况。
结果LPS 刺激6 h时，HPLFs中TNF-α、IL-6的表达量显示：Ⅰ、Ⅱ组显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。
LPS 刺激12 h时，HPLFs 中TNF-α、IL-6的表达量显示：Ⅰ、Ⅱ组也显著高于对照组，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。
HPLFs细胞中TNF-α、IL-6的表达随LPS刺激浓度呈剂量依赖性；且对照组、及Ⅰ组、Ⅱ组经LPS 刺激12 h的TNF-α、IL-6表达均显著高于刺激6 h，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。
结论内毒素脂多糖（LPS）能够刺激人牙周膜成纤维细胞分泌TNF-α、IL-6炎症因子。
[Abstract] Objective To study the effect of lipopolysaccharide（LPS）on the expression of TNF-α and IL-6 in human periodontal fibroblast cells. Methods HPLFs cells were cultured. The cells were divided into LPS stimulated 0 mg/L （control group），1 mg/L（experimental group Ⅰ）and 10 mg/L（experimental group Ⅱ）. The expression of IL-6 and TNF-α was detected by ELISA method. Results The expression of LPS，TNF-α and IL-6 in HPLFs was significantly higher than that in control group at 6 hours，the expression of group Ⅱand group Ⅰwas significantly higher than that in control group，the difference was statistically significant（P＜0.05）. The expression of I and TNF-in HPLFs was significantly higher than that in control group，the difference was statistically significant in the expression group Ⅱand IL-6 in LPS in 12 hours（P＜0.01）. The expression of TNF-α and IL-6 in HPLFs cells with LPS stimulus concentration in a dose-dependent manner；and the control group，and group Ⅰ，group Ⅱby LPS stimulation the expressions of 12 hours of TNF-α and IL-6 were significantly higher than those in the 6 h of stimulation，the difference was statistically significant（P＜0.01）. Conclusion Lipopolysaccharide（LPS）can stimulate the secretion of TNF-α and IL-6 inflammatory factors in human periodontal fibroblast cells.[Key words] Lipopolysaccharide lipopolysaccharide （LPS）；Human periodontal fibroblast；TNF-α；IL-6革蘭阴性菌的内毒素脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）是一种公认的重要的牙周病致病因子，研究发现，其具有调节细胞的生长、合成代谢，并刺激巨噬细胞、单核细胞、成纤维细胞等分泌IL-6、TNF-α等多种炎症介质的作用[1]。
果啤胶体澄清酶制剂-技术规格表-中文说明书
ENDOZYM ®Pectofruit果啤或果汁脱胶酶制剂技术说明Endozym Pectofruit 产品可直接用于果啤，果汁或预浓缩果汁（糖度12-16°），能够促进果胶降解，从而通过粘度的快速降低，提高果汁澄清效果。
优点：果胶的快速降解：降解时间为1-2小时，取决于用量。
果胶的完全降解，可使以下生产步骤得到优化：a. 使用膨润土、明胶、硅溶胶进行的传统澄清b. 超滤c. 浓度控制：避免可能产生的混浊；产品标准化。
成分和技术特征酶制剂。
从天然黑曲霉菌中提取的微生物。
用量2-5 g/hL.温度：45-50°C。
接触时间：60分钟。
使用说明建议先将其在软化水中稀释至10倍体积，然后再添加到要处理的果啤或果汁中。
添加方法：· 鲜榨果汁：通过压榨机出口的计量添加泵，直接在线添加；· 预浓缩果汁：在注入果汁前添加至储罐。
理想环境：· 最佳pH值：4-5· 最佳温度：45-50°CR e f e r e n c e : E N D O Z Y M _E N D O Z Y M _P E C T O F R U I T _T D S _C N _0290916_C I D E R _C h i n a果啤胶体澄清酶制剂其他信息符合欧盟法规，符合OMS（世界卫生组织WHO）、联合国粮食及农业组织FAO、食品添加剂联合专家委员会JECFA 和美国食品化学法典FCC关于食品级酶制剂的要求。
从天然黑曲霉菌（不含转基因生物，非自身克隆）中提取的微生物。
重金属含量:镉：<0.5毫克/千克汞：<0.5毫克/千克砷：<3毫克/千克铅：<5毫克/千克微生物纯净度：活性中温好氧微生物：<50.000/克肠杆菌：<10/克大肠杆菌：<30/克沙门氏菌：阴性（25克）金黄色葡萄球菌：无（1克）抑菌活性：阴性霉菌毒素：无还原硫酸盐：<30/克储存方法和包装形式存放于低温干燥处，避免阳光直射和高温。
中国药典2020年版体外降解酶
《中国药典》2020年版中，关于体外降解酶的内容主要包括：淀粉酶：用于水解淀粉成葡萄糖，作为测定淀粉水解程度的指标。
纤维素酶：用于催化纤维素分解成葡萄糖，作为测定纤维素水解程度的指标。
胰酶：含有胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶及少量其他酶类，作为测定蛋白质水解程度的指标。
弹性蛋白酶：作为测定弹性蛋白水解程度的指标。
胃蛋白酶：作为测定胃蛋白酶水解程度的主要指标。
胰凝乳蛋白酶：作为测定胰凝乳蛋白酶水解程度的主要指标。
弹性蛋白酶：作为测定弹性蛋白酶水解程度的主要指标。
酸性磷酸酯酶：作为测定酸性磷酸酯酶水解程度的主要指标。
碱性磷酸酯酶：作为测定碱性磷酸酯酶水解程度的主要指标。
羧基肽酶：作为测定羧基肽酶水解程度的主要指标。
双萤火素酶操作流程
双萤火素酶操作流程
双萤火素酶（双酚萤铵酶）是一种能催化荧光素的氧化反应的酶，可以使用以下步骤进行操作：
1. 准备试剂和样品：先准备好所需的双萤火素酶、荧光素底物、缓冲液和待测样品。
2. 酶活测定体系配置：根据实验要求，配置一定浓度的双萤火素酶溶液和荧光素底物的反应体系，并加入适量的缓冲液。
3. 反应条件设置：根据实验要求，设置反应温度和反应时间。
通常双萤火素酶的最适条件为pH8.0、37°C，反应时间为5-10分钟。
4. 混合试剂：将双萤火素酶溶液、荧光素底物和缓冲液按比例混合，充分混合均匀。
5. 反应开始：将混合试剂加入到样品中，充分混合并开始反应。
可以通过观察反应体系的发光强度来检测反应的进程。
6. 反应终止：在设定的反应时间后，通过添加一定用于终止反应的试剂，如酸或碱，将反应停止。
7. 检测和测定：使用荧光测定仪或其他适合的检测设备，测定反应停止后体系中的荧光强度。
可以根据荧光强度的变化来确定样品中双萤火素酶的活性。
8. 数据分析和结果解释：根据测得的荧光强度，结合样品的处理和对照组的结果，进行数据分析和结果解释。
可以通过对不同样品或条件的对比，来评估双萤火素酶的活性。
注意事项：
- 确保实验操作在合适的温度和时间范围内进行，避免酶的活
性损失。
- 在试剂配置和混合过程中，要充分保持试剂的纯洁度和活性。
- 所有操作要注意无菌和严格按照实验的要求进行。
- 操作过程中要注意个人安全，避免吸入、触摸或误食试剂。
DispaseII分散酶——使用说明
DispaseII分散酶——使⽤说明J1621Dispase II 分散酶100mg4℃J1641Dispase II 分散酶1g4℃产品简介：Dispase中⽂名称为中性蛋⽩酶，也称为分散酶，是⼀种⾮特异性的⾦属蛋⽩酶，被⽤来从各种不同组织或器官中消化细胞外基质，释放并制备原代单细胞；或⽤于细胞培养中的细胞收获或接种转移；也被⽤于防⽌悬浮细胞培养时的细胞意外结团。
蛋⽩⽔解酶类，如胰蛋⽩酶、胶原酶和链酶蛋⽩酶都被⽤语来分散组织、分类细胞，但他们常伤害细胞，并且在培养时不稳定，甚⾄可能引⼊⽀原体污染。
Dispase就没有这个问题，不会给细胞膜带来伤害，⽽且因为其来⾃细菌，故不会引⼊⽀原体或任何动物病毒；温度、pH、⾎清成分等的差异对Dispase影响很⼩。
Dispase经稀释后其活性就⼤⼤降低，这也⽅便了后续的培养。
Dispase甚⾄被加⼊细胞培养悬液中⽤于防⽌细胞团结。
该酶具有以下优势：1）⼀种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤⼩，且能维持细胞膜完整性；2）来源于细菌，⽆⽀原体或其他动物病毒污染；3）稳定性强，不受温度、pH及⾎清组分的影响；4）可⽤于多种类型组织和细胞的分离等。
本品⾮⽆菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使⽤时需对其除菌处理，⽤于细胞培养时常⽤⼯作浓度为0.6-2.4Uml。
产品性质⽐活性（Specific Activity）：≥0.8Umg (+37°C casein as substrate pH 7.5)单位定义（Unit Definition）：在温度37℃、pH值为7.5的条件下，每分钟⽔解酪蛋⽩释放出相当于1µM(181µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为⼀个蛋⽩酶活性单位，以U表⽰。
最佳pH（pH Optimum）：6.0-8.5抑制剂（Inhibitors）：EDTA EGTA Hg2+ 其他⾦属离⼦。
分散酶的作用
分散酶的作用
分散酶（Dispersin）是一种水解酶，可以分解淀粉质、蛋白质以及多
糖等大分子复杂物质，同时具有很强的分散作用。
分散酶的作用在不
同领域具有不同的应用，下面就来详细介绍一下分散酶的作用。
一、源自生物领域的应用
1.降解生物膜
生物膜是由细菌、真菌等微生物形成的一层粘性表面层，在医学领域
中造成很大的卫生问题。
分散酶可以分解粘合生物膜的主要成分多糖，导致生物膜的破坏。
因此，分散酶在制药领域中可用于开发治疗细菌
感染药物。
2.食品加工
在食品加工业中，分散酶被广泛应用于糖果、巧克力、饼干等食品的
生产中。
它能够使淀粉质分子被分解成糖类基本单元，从而减少淀粉
质含量，增加食品的可消化性，提高产量和产品质量。
3.饲料添加
在畜牧饲料行业，分散酶也广泛应用，可以将多糖分解为可被动物利
用的单糖，增加动物对饲料的吸收率，降低饲料成本，提高养殖效益。
二、其他应用
1.石油开发
石油井在开采过程中，会出现岩石的胶结，导致石油开采量下降。
分
散酶的水解作用可以破坏胶结物，使石油的流动性增加，提高产量。
2.环境保护
在污水处理过程中，往往需要添加化学物质来降低废水的浊度和颜色。
而分散酶可以有效地分散和溶解难以降解的污染物，提高污水处理效果，减少化学物质的使用。
总之，分散酶的应用涉及到很多领域，具有广泛的市场前景。
随着科
学技术的不断发展，分散酶的研究和应用也将得到更广泛的推广。
KOD酶 使用说明书
用高成功率PCR酶「KOD FX」对发根样品的简便扩增例TOYOBO Co.,LTD 敦贺生物研究所 杉山 明生『KOD FX 』是在拥有各种优良特性的PCR 酶「KOD DNA polymerase 」的基础上开发的高性能PCR 酶。
本酶具有出色的「扩增成功率」、「扩增效率」和「延伸性」，可在各种扩增实验中得到确实有效的PCR 产物。
尤其是其出色的扩增成功率，在以粗样品为模板的PCR 中可得到充分的发挥。
比如，我们已通过实验确认，即便将全血、培养细胞等直接添加到PCR 反应液中，仍可得到良好的扩增。
扩增Mouse tail 、植物样品（叶块、米粒）时，只需将经简单前处理后配制的Lysate 添加到PCR 反应液中，即可获得确实有效的扩增产物。
也就是说，原来需事先从样品中纯化DNA 再进行PCR 实验的传统方法，如果使用『KOD FX 』，则无需进行DNA 纯化，只需简单的前处理即可进行PCR 扩增。
本篇中，作为粗样品和微量样品的实验例代表，我们尝试对发根样品进行简便的PCR 扩增。
由于发根样品可通过非侵袭性得到，因此不仅在法医学领域被应用，也在分子生物学实验中被应用。
但由于发根样品的量很少，因此DNA 含量也很少，而且毛发中的黑色素是抑制PCR 反应的物质，如进行DNA 纯化，则对技术和人力的要求非常高。
在这里，我们通过将『KOD FX 』和碱裂解法组合使用，不从发根样品中纯化DNA ，尝试进行简便的PCR 扩增。
以下为该实验的方法及结果。
（1）通过碱裂解法配制发根Lysate（2）PCR反应反应液组成发根 Lysate 人类循环方 法将人的头发从发根处开始2mm 的地方切断，包含发根的部分作为样品。
用这样的样品5根，按图1所示的碱溶解法配制Lysate 。
请注意，用本方法不能使发根完全溶解（也无需完全溶解）。
另外，溶解液的核酸浓度无法测定。
取（1）配制的Lysate 2μl 直接添加到PCR 反应液中，按如下条件进行反应。
胶原酶ii 分装
胶原酶ii 分装
胶原酶II是一种酶类物质，用于分解胶原蛋白。
对于胶原酶II的分装，具体操作过程可能会因供应商和使用目的而有所不同。
一般情况下，分装步骤如下：
1. 准备工作：确保工作区域干净整洁，操作台面消毒。
准备好所需的工具和材料，如分装容器、标签、移液器等。
2. 分装容器准备：根据需要和量度要求选择合适的容器。
确保容器干净，可以通过消毒或清洗来保证。
3. 分装操作：使用合适容量的移液器，按照分装要求将适量的胶原酶II转移至准备好的容器中。
4. 容器密封和标记：在将胶原酶II放入容器后，确保容器密封良好，可以使用盖子、封口膜或其他密封材料。
随后，在容器上标记相应的信息，如胶原酶II的批次号、保质期、浓度等。
5. 清洁和处理：将使用过的工具和设备进行清洁和消毒，确保无残留物或污染。
对于过期或无法使用的胶原酶II，
根据当地的废弃物处理规定进行处理。
重要注意事项：
- 在分装过程中，应遵循严格的无菌操作，避免污染。
- 根据供应商提供的技术资料和指南，确保按照正确的方法进行分装操作。
- 在完成分装后，确保容器适当密封和标记，以便于检索和使用。
总之，胶原酶II的分装过程需要小心操作，遵循相关的操作规程和供应商的建议。
如果您在分装过程中遇到问题，建议咨询供应商或相关专业人士的意见。
磷酸二酶的作用
磷酸二酶的作用磷酸二酯酶（PDE）在人体中扮演着重要的角色，其主要作用如下：一、水解细胞内信号分子磷酸二酯酶能够水解细胞内的两个重要信号分子：环磷酸腺苷（cAMP）和环磷酸鸟苷（cGMP）。
这两个信号分子在细胞内起着传递信息的重要作用，参与调节多种生理活动。
通过水解这些信号分子，磷酸二酯酶能够终止它们所发挥的生理作用，从而实现对细胞活动的精细调节。
二、调节生理功能1.促进阴茎勃起：磷酸二酯酶通过水解阴茎海绵体内的cGMP，使动脉血流增加，从而改善阴茎勃起功能障碍。
这一作用在治疗男性勃起功能障碍的药物中得到了广泛应用。
2.改善心脏功能：磷酸二酯酶抑制剂能够增加心脏肌肉的收缩力和舒张功能，从而改善心力衰竭患者的症状。
此外，这类药物还能够降低肺动脉压力，有助于治疗肺动脉高压。
3.治疗呼吸系统疾病：磷酸二酯酶抑制剂还能够松弛支气管平滑肌，扩张气管，从而治疗支气管哮喘和慢性阻塞性肺疾病等呼吸系统疾病。
4.其他作用：磷酸二酯酶还参与调节其他多种生理活动，如调节免疫系统、神经系统和内分泌系统等。
三、临床应用磷酸二酯酶抑制剂作为药物在临床上具有广泛的应用。
例如，茶碱类药物（如氨茶碱缓释片、二羟丙茶碱片等）能够松弛呼吸道平滑肌，扩张气管，并抑制多种炎性介质的活性，用于治疗支气管哮喘和慢性阻塞性肺疾病等。
此外，他达拉非片、枸橼酸西地那非片等药物也能够促进胆碱能、肾上腺素的分泌，促进血管扩张，改善男性勃起功能障碍。
四、注意事项尽管磷酸二酯酶抑制剂在临床上具有广泛的应用，但患者在使用这些药物时仍需注意以下几点：1.遵医嘱用药：患者在使用磷酸二酯酶抑制剂时，务必遵循医生的指导，不可自行盲目用药。
2.注意药物副作用：磷酸二酯酶抑制剂可能会引起一些副作用，如头痛、恶心、呕吐等。
在使用这些药物时，患者应密切关注自己的身体反应，如有不适应及时就医。
3.避免与其他药物相互作用：磷酸二酯酶抑制剂可能会与其他药物发生相互作用，导致药效降低或增加副作用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
J1621Dispase II 分散酶100mg4℃
J1641Dispase II 分散酶1g4℃
产品简介：
Dispase中文名称为中性蛋白酶，也称为分散酶，是一种非特异性的金属蛋白酶，被用来从各
种不同组织或器官中消化细胞外基质，释放并制备原代单细胞；或用于细胞培养中的细胞收
获或接种转移；也被用于防止悬浮细胞培养时的细胞意外结团。
蛋白水解酶类，如胰蛋白酶、胶原酶和链酶蛋白酶都被用语来分散组织、分类细胞，但他们常伤害细胞，并且在培养时不
稳定，甚至可能引入支原体污染。
Dispase就没有这个问题，不会给细胞膜带来伤害，而且因
为其来自细菌，故不会引入支原体或任何动物病毒；温度、pH、血清成分等的差异对Dispase影响很小。
Dispase经稀释后其活性就大大降低，这也方便了后续的培养。
Dispase甚
至被加入细胞培养悬液中用于防止细胞团结。
该酶具有以下优势：1）一种快速有效且温和
的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；2）来源于细菌，无支原体或其他
动物病毒污染；3）稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。
本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，
用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4Uml。
产品性质
比活性（Specific Activity）：≥0.8Umg (+37°C casein as substrate pH 7.5)
单位定义（Unit Definition）：在温度37℃、pH值为7.5的条件下，每分钟水解酪蛋白释放
出相当于1µM(181µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为一个蛋白酶活性单位，以U表示。
最佳pH（pH Optimum）：6.0-8.5
抑制剂（Inhibitors）：EDTA EGTA Hg2+ 其他金属离子。
血清不会抑制dispase活性。
激活剂（Activator）：Ca2+，Mg2+，Mn2+，Fe2+，Fe3+，Al3+。
最佳的Ca2+浓度为2mM。
本酶制品已含足量的Ca2+使其处于最佳活性。
母液及工作液配制
1.用Hepe缓冲盐溶液（50mM HepesKOH pH7.4 150mM NaCl）溶解适量本品冻干粉，配制成10mgml的储存液，用0.22µM滤膜过滤除菌。
2.使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工
作浓度为0.6-2.4Uml。
【注】：不推荐使用高于2.4Uml的工作浓度。
使用方法
A.组织的解离
1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块；
2）用无菌PBS清洗组织块；
3）向上述组织块中加入Dispase II溶液（工作浓度为0.6-2.4Uml），并确保组织块全部浸没
于Dispase 溶液中。
4）37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。
【注】：若第一次使用该酶，可通
过细胞计数来确定需要的总孵育时间。
一般对于较难解离组织，1h即可达到分离目的，但更
长时间（如数小时）的孵育也不会明显影响细胞活性。
5）如有需要，可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块。
或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，若是需要，换用新鲜dispase溶液以进一步解离残留组织。
6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液；
7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。
B. 细胞传代
1）利用Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于37℃孵育5min；
2）吸除上述溶液，继续于37℃孵育10min；
3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15min；
4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞；
5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。
运输和保存方法
冰袋运输。
冻干粉4℃保存。
储存液于4℃可稳定保存2周，若长期保存，请分装后于-20℃冻存。
避免反复冻融。
注意事项
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Dispase 是Godo shuseiCoLtd的注册商标。