新城疫油苗和冻干苗疫苗的生产工艺流程

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疫苗生产流程(ppt文档)

疫苗生产流程(ppt文档)

疫苗生产项目简介
一. 生产过程举例1:
发酵
纯化Ⅰ
纯化Ⅱ
灭活吸附
疫苗生产项目简介
二、生产过程举例2:
发酵 收集/灭活
加工
配制和灌装
安全/抑制有效病原体
安全/尤其产生不稳定病毒
去除杂质及所需产物特性相近 的外来物质
在辅助剂帮助下完成对大疫苗颗粒 的灭菌过滤滤
疫苗生产项目简介
• 无论一种疫苗在试验阶段是多么有效,但
点位布置:
理瓶1#;
B
灌装头2#
压塞3#;
冻干机4~5#;
0.5μ+5μ二通道, 28.3L/min,激光在线粒子计数.
采样头的安装方式
空调自控原理图
1.房间温度控制 2.房间湿度控制 3.房间压差监测 4.系统风量控制 5.高效压差报警 6.灭菌器\分装烘
洗线运行状态
FFU控制(群控方式)
连接方式:1台FFU控制器,分路网线连接现场FFU。 工作站在值班室实现控制每组FFU的启/停,无级调速,显示FFU的 运行状态及故障报警
疫苗车间自控组成
• 洁净空调自控系统 • 冷冻站自控系统 • 纯水自控系统 • 注射用水自控系统 • 在线粒子检测系统 • FFU控制系统 • 门禁监控系统 • 系统集成
自控框架图
自控网络结构
• INTERNET互联网 • 企业管理网(局域网LAN) • 工业控制网(单环工业以太网) • 现场总线(双DP,RS485 总线等型式)
如果其最终产品悬液不能稳定地储存和运 输,那么它的商业价值就会受限,面对这 一问题,人们开发了各种剂型,但目前常 用的,也是最有效的方法还是冻干,制药 企业可以将其运用到那些昂贵的、不稳定 的疫苗生物制品的生产中。

新城疫油苗和冻干苗疫苗的生产工艺流程

新城疫油苗和冻干苗疫苗的生产工艺流程

新城疫冻干疫苗生产工艺流程1 生产用毒种制备1.1 毒种繁殖将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml。

选接种后72~120小时死亡、且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容器内。

将检验无菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的鸡胚液混合,定量分装于安瓿中,冷冻保存。

注明收获日期,毒种代数等。

1.2 毒种鉴定1.2.1 病毒含量按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释,取10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个,每胚0.1ml,置36~37℃继续孵育,48小时以前死亡的鸡胚弃去不计,在48~120小时死亡的鸡胚随时取出,收获鸡胚液,同一稀释度的胚液等量混合,按稀释度分别测定红细胞凝集价,至120小时,取出所有活胚,逐个收获鸡胚液,分别测定红细胞凝集价,凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感染,计算EID50,每0.1ml病毒含量应≥108EID50。

1.2.2 纯净应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染,分别按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外源病毒检验标准操作规程》进行。

1.3 毒种保存在-15℃以下保存,应不超过1年。

1.4 毒种继代应不超过3代。

2 制苗材料选择选择发育良好的9~11日龄SPF鸡胚作为制苗材料。

3 制苗用毒液的制备3.1接种取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿囊腔内接种0.1ml,接种后密封针孔,置36~37℃继续孵育,不必翻蛋。

3.2 孵育和观察鸡胚接种后,每日照蛋一次,将在60小时前死亡的鸡胚弃去。

60小时后,每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却。

3.3 收获将冷却4~24小时的鸡胚取出,用碘酊消毒气室部位,然后以无菌手术剥除气室部卵壳,剪开尿囊膜,吸鸡胚液,每若干个鸡胚的胚液混合为一组。

兽用疫苗工艺流程

兽用疫苗工艺流程

兽用疫苗工艺流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。

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实验二 鸡新城疫弱毒疫苗的制备

实验二 鸡新城疫弱毒疫苗的制备

实验二鸡新城疫弱毒疫苗的制备新城疫又称亚洲鸡瘟,是由新城疫病毒引起的鸡的一种高度接触性传染病,其主要特征为呼吸困难、腹泻、神经紊乱及黏膜和浆膜出血,一年四季均可发生,为我国养鸡业的头号疾病。

预防和治疗所用的新城疫疫苗种类很多,大致包括灭活疫苗和弱毒疫苗两类。

下面以新城疫弱毒疫苗为例讲述其制备过程。

一、目的与要求1.掌握鸡新城疫弱毒疫苗的制备方法。

2.熟悉鸡新城疫弱毒疫苗制备的操作过程。

二、材料与试剂材料:种蛋、鸡胚孵化箱、冰箱、无菌操作台、手术镊子、注射器、蜡烛、酒精灯、酒精棉和碘酊等。

试剂:灭菌PBS液/生理盐水;青、链霉素溶液。

三、制备前准备1、种毒的选择:种毒属于弱毒力毒株,包括HB1株、F株、LaSota 株、LaSota-Clone30和N79株。

必须符合:①种毒对鸡胚的毒力。

以10倍稀释的种毒0.1ml尿囊腔接种10日龄鸡胚,鸡胚应于接种后24-120h内死亡70%以上,胎儿有明显病变,血凝价在1:640以上,胎儿有明显病变,血凝价在1:640以上。

②种毒对1月龄雏鸡滴鼻免疫的最小免疫量应不大于10-3/1滴。

③种毒对10日龄鸡胚半数感染量(EID50)应不大于10-7/0.1ml。

④种毒对初生雏鸡不致病。

2、种毒的稀释:用灭菌PBS液或0.85%生理盐水10-4~10-6稀释种毒,稀释时最好加入适当双抗溶液,并在4℃作用约4小时。

3、鸡胚的选择:最好选用SPF胚、其次选用非免疫胚,再次选用普通胚。

四、操作过程1、将购买的种蛋放于37℃温箱中孵育,加入适量水调节湿度。

2、孵育至9~11日龄时,将鸡胚置于黑暗的环境下,在照蛋器下,可观察到明显的胚体运动、丰富的血管和气室,用铅笔划出接种部位和气室部位。

划线时要尽量避开胚头和血管(尤其是大血管)。

3、将划好的鸡胚置于经紫外线消毒过的超净台中,先用碘酊消毒,再用酒精棉脱碘;4、用手术镊子在标记部位打孔,打孔时要在接种部位和气室各打一孔。

5、用灭菌注射器吸取0.1ml~0.2ml稀释病毒液,经接种孔注入鸡胚尿囊腔中;6、用石蜡先将接种孔封口后,在将气室孔封口;7、做好标记(时间,名称),置37℃温箱中继续孵育,增殖病毒。

新城疫油苗和冻干苗疫苗的 生产工艺流程

新城疫油苗和冻干苗疫苗的    生产工艺流程
配苗 无菌检验
加塞 压盖 物理性状 安全检验 无菌检验 外源病毒检验 效力检验 *后孵化及照蛋
*冷ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ蛋
铝盖 分装瓶
纯化水粗洗 注射水洗 照蛋时间 培养温湿度 冷蛋时间 冷蛋温度
*隧道烘箱灭菌
清洗 *灭菌
新城疫灭活疫苗生产工艺流程 1 生产用毒种制备 1.1 毒种繁殖 将毒种用灭活生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿 囊腔内接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml。选接种后72~120小时之间死 亡且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容 器内。将检验无菌,且对1%鸡红细胞凝集价在1:640(微量法1: 512)以上的鸡胚液混合,定量分装于安瓿瓶中,冷冻保存。注明收获 日期、毒种代次等。 1.2 毒种鉴定 1.2.1 病毒含量 按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释,取 10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个,每胚 0.1ml,置36~37℃继续孵育,48小时以前死亡的鸡胚弃去不计,在 48~120小时死亡的鸡胚随时取出,收获鸡胚液,同一稀释度 的胚液等量混合,按稀释度分别测定红细胞凝集价,至120小时,取出 所有活胚,逐个收获 鸡胚液,分别测定红细胞凝集价,凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感 染,计算EID50,每0.1ml病毒含量应≥108EID50。 1.3 毒种保存 在-15℃以下保存,应不超过6个月。 1.4 毒种继代 应不超过3代。 2 制苗材料选择 选择发育良好9~10日龄的易感鸡胚作为制苗材料。
新城疫冻干疫苗生产工艺流程 1 生产用毒种制备 1.1 毒种繁殖 将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿囊腔 内接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml。选接种后72~120小时死亡、且病痕 明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容器内。将检验无 菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的鸡胚液混合,定量分 装于安瓿中,冷冻保存。注明收获日期,毒种代数等。 1.2 毒种鉴定 1.2.1 病毒含量 按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释,取 10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个,每胚 0.1ml,置36~37℃继续孵育,48小时以前死亡的鸡胚弃去不计,在 48~120小时死亡的鸡胚随时取出,收获鸡胚液,同一稀释度 的胚液等量混合,按稀释度分别测定红细胞凝集价,至120小时,取出 所有活胚,逐个收获 鸡胚液,分别测定红细胞凝集价,凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感 染,计算EID50,每0.1ml病毒含量应≥108EID50。 1.2.2 纯净 应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染,分别按《无菌检 验或纯粹检验标准操作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外 源病毒检验标准操作规程》进行。 1.3 毒种保存 在-15℃以下保存,应不超过1年。 1.4 毒种继代 应不超过3代。 2 制苗材料选择 选择发育良好的9~11日龄SPF鸡胚作为制苗材料。 3 制苗用毒液的制备 3.1接种 取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿 囊腔内接种0.1ml,接种后密封针孔,置36~37℃继续孵育,不必翻蛋。 3.2 孵育和观察 鸡胚接种后,每日照蛋一次,将在60小时前死亡的鸡胚 弃去。60小时后,每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120 小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却。

疫苗制造基本程序

疫苗制造基本程序
培养细胞和增殖病毒用的营养液又称培养液,通常分为细胞培养用的 生长液和病毒增殖用的维持液,两者不同的之处通常只是生长液内含有 5%-10%的血清;维持液血清浓度为2%-5%。 不同细胞所需的营养成分和生长条件不尽相同。 目前常用的细胞培养方法为静止培养和转瓶培养,至于微载体培养和 25 悬浮培养在我国尚处于试验之中。
制造疫苗用的细胞大体为原代细胞和传代细胞两类,根据 病毒种类、疫苗性质与工艺流程选择不同的细胞。 选择的依据包括:病毒的适应性高、毒价高、细胞来源方 便、制备简单、生命力强。 如猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞疫苗采用犊牛睾丸原代细胞; 脊髓灰质炎活疫苗选择vero细胞;狂犬病弱毒细胞适应疫苗 采取BHK21细胞增殖病毒等。
动物或胚胎
毒 株
培育 鉴定 种 毒 扩增 鉴定 种 子 原 料 配制 保护剂
组 织
剪碎 消化 细胞悬液 生长细胞 培养 收获 灭活
原 料 配制
——
细胞培养液
传代细胞 原 料 配制 灭菌 佐剂
原 苗
配 苗
灭活病毒
配 苗
(混匀、乳化)
分装、冻干 检验 活疫苗
分装
检验 灭活疫苗
28
29
三、病毒性动物组织疫苗制造
减毒 弱毒菌种
原 料 配制 灭菌 佐剂
灭活菌液
灭活
菌苗原液
配苗 分装、冻干
配制 灭菌 保护剂
配苗、乳化
分装 检验
灭活疫苗
检验
活疫苗
16
项目三
病毒疫苗制造
病毒性禽胚培养疫苗制造
病毒性细胞培养疫苗制造
病毒性动物组织疫苗制造
17
一、病毒性禽胚培养疫苗制造
鸡胚选择
种毒与毒种继代 接毒与收获 配苗

疫苗生产流程

疫苗生产流程

疫苗生产项目简介
3、设计中要把节约和合理利用能源放在重要 位置加以考虑。积极采用节能措施, 位置加以考虑。积极采用节能措施,尽量选用 节能工艺和设备,充分利用地下资源, 节能工艺和设备,充分利用地下资源,搞好水 的循环利 用。 设计中要精打细算, 4、 设计中要精打细算,把有限的资金用在关 键设备上,使资金使用更加合理化。 键设备上,使资金使用更加合理化。 5、严格按照国家环保法和有关文件精神搞好 “三废”治理和职业安全卫生设计工作。 三废”治理和职业安全卫生设计工作。
疫苗生产项目简介 生产过程举例1 一. 生产过程举例1:
发酵
纯化Ⅰ
纯化Ⅱ
灭活吸附
疫苗生产项目简介 二、生产过程举例2: 生产过程举例2
发 酵
安全/抑制有效病原体
收集/灭活
安全/尤其产生不稳定病毒

加 工
去除杂质及所需产物特性相近 的外来物质 在辅助剂帮助下完成对大疫苗颗粒 的灭菌过滤滤
配制和灌装
疫苗生产项目简介
(病毒生产制备的方法: 病毒生产制备的方法:
• 1、动物接种,如狂犬病毒、脑炎虫媒病毒采用 动物接种,如狂犬病毒、 兔脑内接种后收取脑组织制成悬液。 鼠、兔脑内接种后收取脑组织制成悬液。 • 2、鸡胚、鸭胚接种:如流感病毒、副流感病毒 鸡胚、鸭胚接种:如流感病毒、
(NDV-F)、仙台病毒等,目前尚无敏感细胞, NDV- )、仙台病毒等,目前尚无敏感细胞, 仙台病毒等 常采用9 10日胚龄的尿囊腔接种 37℃孵育 日胚龄的尿囊腔接种, 孵育72 常采用9~10日胚龄的尿囊腔接种,37℃孵育72 小时收获尿液,用鸡红血球测定血凝效价。 小时收获尿液,用鸡红血球测定血凝效价。Q热 日龄鸭胚进行卵黄囊接种收获卵黄囊, 用7日龄鸭胚进行卵黄囊接种收获卵黄囊,马脑 炎病毒常采用10日龄鸡胚体接种, 10日龄鸡胚体接种 炎病毒常采用10日龄鸡胚体接种,收获全胚体液 等。

疫苗生产工艺详细流程

疫苗生产工艺详细流程

疫苗生产工艺详细流程
1疫苗生产过程
疫苗是为了预防传染病而制造的,是非常重要的预防措施。

为了保证疫苗的安全性,需要按照一系列精确的工艺流程进行生产。

1.1疫苗原料准备
疫苗的原料有多种,包括病原体或其衍生物,生物培养基,抗原制剂,抗凝血剂,抗生素,稀释剂等。

这些原料必须非常干净、有效和纯净,以确保疫苗的有效性和安全性。

1.2疫苗灭活
疫苗原料需要经过灭活处理,以安全地使原料中的病原体具有免疫力而不引起病症。

灭活技术有多种,其中最常用的是热、化学和光照等方法,以确保安全性。

1.3疫苗混合
混合是使用冷激活灭菌的疫苗原料,按照一定的稀释比例,通过高速混合来使成分完全混合。

混合时,需要考虑保存期和抗原强度,以确保安全性和有效性。

1.4疫苗灌注
灌注是将混合疫苗原料注入制药容器,采用自动装置进行灌注装置,以确保每个容器的注射量精确无误。

容器一般是钢皮瓶或塑料瓶等,同时需要适当控制温度,以确保灌注过程的顺畅性。

1.5疫苗封装
封装时,需要将注射液容器封入硬性瓶盖,然后将它们安全地封装在一起,以确保病原体不会轻易外泄,影响安全性。

同时,还要给容器着色、打孔,等操作,以方便后续使用。

1.6疫苗测试
疫苗生产过程完成后,需要进行测试,以评估疫苗的有效性和安全性。

一般的测试方法包括生物活性检测、灭活程度检测和安全性检测等,以确保疫苗满足有效性和安全性要求。

以上就是疫苗生产工艺,它是比较复杂的,关心安全性和有效性,需要精密的生产操作,严格控制程序,以确保疫苗能够准确地预防各种传染病。

疫苗的生产工艺

疫苗的生产工艺

疫苗的生产工艺疫苗的生产工艺是指制造疫苗的过程和步骤。

疫苗生产的主要目的是为了预防和控制传染病的流行,保护人类和动物的健康。

一般来说,疫苗的生产工艺可以分为以下几个步骤:首先,疫苗的研发和筛选。

疫苗的研制是一个复杂和持续的过程。

一般情况下,研发疫苗需要经历预研、基础研究、实验室评估、临床试验等多个阶段。

在研发过程中,科学家会选择核心抗原,并使用特定技术或生产工艺进行晶体化、培养和增殖。

第二步,制备疫苗的原材料。

原材料的制备是疫苗生产的关键环节之一。

它包括质量可控的生物材料、培养基和其他辅助材料。

这些材料需要通过严格的筛选和检验来确保其质量和安全性。

第三步,疫苗的制备和培养。

在这个阶段,科学家会利用原材料,通过特定的方法和技术制备疫苗。

这包括病毒培养、分离和纯化等过程。

在制备过程中,科学家需要控制各个环节的条件和参数,以确保疫苗的质量和稳定性。

第四步,疫苗的灭活和灭毒。

一些疫苗需要进行灭活和灭毒处理,以保证疫苗中的病原体不再具有传染性。

这可以通过物理或化学方法来实现,如热处理、辐射灭活、化学灭活等。

第五步,疫苗的配方和调剂。

在这个阶段,科学家会根据具体的疫苗类型和需求,进行疫苗的配方和调剂。

这包括添加适量的辅料、辅助剂和稳定剂等,以提高疫苗的免疫效果和稳定性。

第六步,疫苗的包装和贮存。

在疫苗制备完成后,科学家会将疫苗进行包装,并进行严格的检验和质量控制。

包装通常采用瓶装或注射剂,以方便存储和使用。

最后,疫苗的贮存和运输。

贮存和运输是疫苗生产的最后一个环节。

疫苗需要在特定的温度和条件下存放和运输,以确保其质量和有效性。

这通常需要冷链运输或其他特殊的贮存设备。

总结起来,疫苗的生产工艺包括研发和筛选、原材料制备、制备和培养、灭活和灭毒、配方和调剂、包装和贮存、以及贮存和运输等多个步骤。

每个步骤都需要科学家严格控制和操作,以保证疫苗的质量和安全性。

鸡新城疫PPT

鸡新城疫PPT

冷冻干燥有以下优点:
1.冷冻干燥在低温下进行,因此对于许多热敏性的物质特别适用, 如蛋白质、微生物之类不会发生变性或失去生物活力,因此在 医药上得到广泛地应用。 2.在低温下干燥时,物质中的一些挥发性成分损失很小,适合一 些化学产品、药品和食品干燥。 3.在冷冻干燥过程中,微生物的生长和酶的作用无法进行,因此 能保持原来的性状。 4.由于在冻结的状态下进行干燥,因此体积几乎不变,保持了原 来的结构,不会发生浓缩现象。 5.干燥后的物质疏松多孔,呈海绵状,加水后溶解迅速而完全, 几乎立即恢复原来的性状。 6.由于干燥在真空下进行,氧气极少,因此一些易氧化的物质得 到了保护。 7干燥能排除95%-99%以上的水份,使干燥后产品能长期保存而不 致变质。 8.冷冻干燥目前在医药工业,食品工业,科研和其他部门得到广 泛的应用。
鸡新城疫低毒力 活疫苗(lasota)生 产岗位操作规则
贺永佳
鸡新城疫低毒力活疫苗(lasota)生产岗位 操作规则
一、目的:确保鸡新城疫低毒力活疫苗 (lasota)的质量。 二、适用范围:适用于鸡新城疫低毒力或疫 苗(lasota)生产的全过程。 三、责任者:生产运行部各岗位

正文
一、鸡胚孵化。 二、生产用毒种制备。 三、半成品的制作。 四、疫苗的制备。 五、疫苗的分装。 六、疫苗的冻干。 七、轧盖、贴签。
疫苗配制
(二):操作规则 1、 取出半成品和冻干稳定剂 将融化了的半成品及经无菌检验合格的冻干稳定剂 取出,放到100级工作台上。 2、 配苗 将检验合格的半成品混合于同一灭菌容器中,按比 例加入检验合格的冻干稳定剂,进行无菌检验,同 时加适量抗维生素充分摇匀后,供分装用。
疫苗配制
(三):清场和记录

鸡新城疫灭活疫苗的制备

鸡新城疫灭活疫苗的制备

鸡新城疫灭活疫苗的制备制备油佐剂灭活苗1 材料1.1毒种:鸡新城疫病毒弱毒La sota株。

1.2实验动物:9-10日龄鸡胚若干。

1.3主要试剂:碘酊,1%硫柳汞溶液,7号白油,司盘-80,硬脂酸铝,吐温-80,甲醛等。

主要仪器:孵化箱、1ml注射器、蛋架、打孔器、蜡烛、胶体。

2.实验步骤2.1种毒繁殖:将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释,尿囊内接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1mol.选种后72-120小时之间死亡且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液,装于灭菌器内定量分装于安领瓶,冷冻保存。

2.2接种前准备;种毒稀释,照蛋,打孔。

2.3接种;取生产用毒种,用灭火理盐水适当稀释(10-4或10-5),每胚尿囊内接种0.1ml.接种。

后密封针孔,置36-37继续孵育。

2.4孵育和观察;鸡胚接种后,每日照室1次,将24小时内死亡的鸡胚弃去,此后,每天照蛋2次,死亡的鸡胚随时取出,4摄氏度保存,冷却24小时。

2.5收获:将冷却的鸡胚取出,用碘酐消毒气室部位,然后以无菌手术剥除气室部卵壳,捐去卵壳膜。

剪破绒毛尿至膜及羊膜(谨防卵黄破裂)。

吸取胚液。

对每个鸡胚在吸取胚液前均应注意检查、凡胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者,弃去不用。

吸取胚液放于同一灭菌的容器内。

(凝集试验和无菌试验)2.6 灭活:可以过滤,再加甲醛溶液,甲醛溶液的最终浓度为0.1%。

然后在37℃灭活16小时,期间振摇3~4次,在4℃保存,应不超过1个月。

(无菌检验和灭活检验)2.7 制苗2.7.1 油相制备:将7号白油与司盘- 80 ( Span - 80)按94 ∶6比例混合再加总量2%的硬脂酸铝溶液混匀后,121 ℃高压灭菌15 min即为油相。

2.7.2 水相制备:将灭活胚液(抗原液)和吐温- 80 ( Tween - 80)以96 ∶4的比例混合,充分搅拌,使吐温-80完全溶解为止,作为水相。

2.7.2 水相制备:将灭活胚液(抗原液)和吐温- 80 ( Tween - 80)以96 ∶4的比例混合,充分搅拌,使吐温-80完全溶解为止,作为水相。

疫苗生产流程

疫苗生产流程
4、可调式地轨+PVC地面;
44
75
疫苗生产项目简介
5、双层玻璃观察窗;
疫苗生产项目简介
6、暗架龙骨吊顶;
C
A
A
B
B
暗架天花板节点图
疫苗生产项目简介
各种型材三维图:
疫苗生产项目简介
整体效果:
疫苗生产项目简介
由以上图片显示,双圆弧天轨、圆弧转角、 单圆弧收边、可调式地轨+PVC地面、双层玻璃观 察窗、暗架龙骨系统从根本上保证了生物医药厂 房围护结构的平整性能和密封性能,从而最大程 度上保证了生物医药厂房的安全性。
疫苗生产流程
2021年8月23日星期一
疫苗生产项目简介
疫苗,是指为了预防、控制传染病的发生 、流行,用于人体预防接种的疫苗类预防 性生物制品。其原理是将病原微生物(如 细菌、立克次氏体、病毒等)及其代谢产 物,经过人工减毒、灭活或利用基因工程 等方法制成的用于预防传染病的自动免疫 制剂。
疫苗生产项目简介
疫苗株 死∕活
灭活 活

灭活 死
制备细胞 培养方法
猴肾细胞 转瓶培养
VERO细 胞
人二倍 体细胞
人二倍体细胞
微载体培养 微载体培养
多层滋养增殖器
豚鼠胚成 纤维细胞
转瓶培养
疫苗生产项目简介
(病毒生产制备的方法:
• 1、动物接种,如狂犬病毒、脑炎虫媒病毒采 用鼠、、鸡胚、鸭胚接种:如流感病毒、副流感病 毒(NDV-F)、仙台病毒等,目前尚无敏感 细胞,常采用9~10日胚龄的尿囊腔接种, 37℃孵育72小时收获尿液,用鸡红血球测定血 凝效价。Q热用7日龄鸭胚进行卵黄囊接种收 获卵黄囊,马脑炎病毒常采用10日龄鸡胚体接 种,收获全胚体液等。
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新城疫冻干疫苗生产工艺流程 1 生产用毒种制备1.1 毒种繁殖 将毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),尿囊腔内接种10日龄SPF 鸡胚,每胚0.1ml 。

选接种后72~120小时死亡、且病痕明显的鸡胚,分别收获鸡胚液(尿囊液及羊水),装于灭菌容器内。

将检验无菌、且对1%鸡红细胞凝集价≥1:640(微量法1:512)的鸡胚液混合,定量分装于安瓿中,冷冻保存。

注明收获日期,毒种代数等。

1.2 毒种鉴定1.2.1 病毒含量 按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释,取10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF 鸡胚5个,每胚0.1ml ,置36~37℃继续孵育,48小时以前死亡的鸡胚弃去不计,在48~120小时死亡的鸡胚随时取出,收获鸡胚液,同一稀释度的胚液等量混合,按稀释度分别测定红细胞凝集价,至120小时,取出所有活胚,逐个收获鸡胚液,分别测定红细胞凝集价,凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感染,计算EID 50,每0.1ml 病毒含量应≥108EID 50。

1.2.2 纯净 应无细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染,分别按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》、《支原体检验标准操作规程》、《外源病毒检验标准操作规程》进行。

1.3 毒种保存 在-15℃以下保存,应不超过1年。

1.4 毒种继代 应不超过3代。

2 制苗材料选择 选择发育良好的9~11日龄SPF 鸡胚作为制苗材料。

3 制苗用毒液的制备3.1接种取生产用毒种用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿囊腔内接种0.1ml,接种后密封针孔,置36~37℃继续孵育,不必翻蛋。

3.2 孵育和观察鸡胚接种后,每日照蛋一次,将在60小时前死亡的鸡胚弃去。

60小时后,每4~8小时照蛋一次,死亡的鸡胚随时取出,直至96或120小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却。

3.3 收获将冷却4~24小时的鸡胚取出,用碘酊消毒气室部位,然后以无菌手术剥除气室部卵壳,剪开尿囊膜,吸鸡胚液,每若干个鸡胚的胚液混合为一组。

收获后的胚液置于灭菌瓶中,作好标识,留样后,结冻保存。

在收获胚液的同时, 应逐个检查鸡胚, 如胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者弃去不用。

4 半成品检验4.1 无菌检验经处理过的胚液,每组分别取样,按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》进行无菌检验,应无细菌生长。

4.2 病毒含量测定按含毒鸡胚液量用灭菌生理盐水作为10倍系列稀释,取10-7、10-8、10-9 3个稀释度各尿囊腔内接种10日SPF鸡胚5个,每胚0.1ml,置36~37℃继续孵育,48小时以前死亡的鸡胚弃去不计,在48~120小时死亡的鸡胚随时取出,收获鸡胚液,同一稀释度的胚液等量混合,按稀释度分别测定红细胞凝集价,至120小时,取出所有活胚,逐个收获鸡胚液,分别测定红细胞凝集价,凝集价≥1:160 (微量法1:128)者判为感染,计算EID50,每0.1 ml病毒含量>107EID50者可用于配制疫苗。

5 配苗及分装将检验合格的若干组鸡胚液滤过,混合于同一容器内,按规定羽份,加一定比例的蔗糖脱脂奶粉作稳定剂,使其最终蔗糖含量为2.5%,脱脂奶粉含量为5%,同时。

分装后迅速加入适宜的抗生素,充分摇匀,定量分装,每羽份病毒含量应≥106EID50进行冷冻真空干燥。

6 成品检验6.1 物理性状6.1.1 外观检查疫苗瓶上的标签,打印出的羽份或头份、生产批号、有效日期清晰可见、位置适当。

瓶上的铝盖稳固不松动。

6.1.2 眼观检查将疫苗拿到与眼平行位置观察呈微黄色,海绵状疏松团块,然后再轻微振动,疫苗松动并与瓶壁分离,判为合格。

6.1.3 溶解性检查用稀释液注射到疫苗瓶内,经轻微振动,疫苗应迅速完全溶解,无粘块或粘团出现,判为溶解性良好。

6.2 无菌检验按《无菌检验或纯粹检验标准操作规程》进行,如有菌生长,应进行杂菌计数,并作病原性鉴定(按《杂菌计数和病原性鉴定操作细则》进行)和禽沙门氏菌检验每羽份非病原菌数应不超过1个(按《禽沙门氏菌检验法》进行)。

6.3 支原体检验按《支原体检验法》进行,应无支原体生长。

6.4 鉴别检验6.4.1 选择发育良好的10日龄SPF鸡胚10只,划出尿囊腔接种部位。

6.4.2 将疫苗用无菌生理盐水稀释至105.0EID/0.1mL,与等量抗鸡新城疫病毒特50异性血清混合,室温中和1小时后,尿囊腔接种,每胚0.1mL。

6.4.3 将接种后鸡胚用石蜡封孔后,置37℃继续孵育,观察120小时,在24~120小时内应不引起特异死亡,且至少存活8只,鸡胚液作红细胞凝集试验,应为阴性。

6.5 外源病毒检验按《外源病毒检验法》进行。

6.6 安全检验下列方法任择其一。

6.6.1 用鸡胚检验将疫苗用无菌生理盐水稀释,尿囊腔内接种10日龄鸡胚10只,每胚0.1ml(含10个使用剂量),接种后24~72小时,鸡胚死亡率应不超过20%为合格。

如死亡率超过20%,可用20个鸡胚重检1次,重检结果死亡率仍超过20%,该批疫苗判为不合格。

6.6.2 用鸡检验用2~7日龄SPF雏鸡20只,合成两组,第1组10只,每只滴鼻接种0.05mL(10个使用剂量);第2组10只,不接种作为对照,两组在相同条件下分别饲养管理,观察10日,应无不良反应。

如有非特异性死亡,免疫组与对照组均不超过1只。

6.7 效力检验下列方法任择其一。

6.7.1 用鸡胚检验6.7.1.1 鸡胚选择选择发育良好的10日龄SPF鸡胚15个,划出尿囊腔接种部位,作出批组及滴度标记,每一滴度接种5个。

6.7.1.2 疫苗稀释将疫苗按瓶签注明羽份,用灭菌生理盐水稀释至1羽份/0.1mL,再作10倍系列稀释至10-7。

6.7.1.3 接种分别取10-7、10-6、10-5三个稀释度尿囊腔内接种鸡胚各5个,每胚0.1mL,用石蜡封孔。

6.7.1.4 孵育置37℃继续孵育至120小时,每天上、下午各照检1次,48小时以前死亡的鸡胚弃去不计,在48~120小时死亡的鸡胚,随时取出放在2~8℃冰箱中,至120小时取出全部活胚放在2~8℃℃冰箱中24小时。

6.7.1.5 凝集价(HA)测定与计算鸡胚半数感染量(EID50)将冷却鸡胚取出,将同一稀释度的死亡鸡胚液等量混合,分别测定红细胞凝集价;将活胚逐个收获鸡胚液,分别测定红细胞凝集价,HA≥160(微量法128)者判为感染,计算半数感染量,每羽份≥106.5EID50(国家标准每羽份≥106.0EID50),判为合格。

6.7.2 用鸡检验6.7.2.1 鸡的选择选取30-60日龄健康易感鸡(血凝集抑制价应≤4)10只。

6.7.2.2 疫苗稀释将疫苗按瓶签注明羽份,用灭菌生理盐水稀释成每0.05mL 含1/100使用剂量。

6.7.2.3 免疫及攻毒每只鸡滴鼻接种0.05mL,10~14日后,连同条件相同的对,观察10-14日,对照鸡全照鸡3只,各肌肉注射鸡新城疫北京株强毒104.0ELD50部发病死亡,免疫鸡至少保护9只为合格。

6.8 剩余水分测定按《剩余水分测定方法》进行,应符合规定。

6.9 真空度测定按《真空度测定方法》进行,应符合规定。

-7、,算EID 50,每0.1ml 病毒含量应≥108EID 50。

1.3 毒种保存 在-15℃以下保存,应不超过6个月。

1.4 毒种继代 应不超过3代。

2 制苗材料选择 选择发育良好9~10日龄的易感鸡胚作为制苗材料。

3 制苗用毒液的制备3.1 接种 取生产用毒种,用灭菌生理盐水作适当稀释(如10-4或10-5),每胚尿囊内接种0.1ml ,接种后密封针孔,置36~ 37℃继续孵育,不必翻蛋。

3.2 孵育和观察 鸡胚接种后,每日照蛋1次,将60小时前死亡的鸡胚弃去。

此后,每4~6小时照蛋1次,死亡的鸡胚随时取出,直至96小时,不论死亡与否,全部取出,气室向上直立,置于2~8℃冷却4~24小时。

3.3 收获3.3.1 鸡胚液的收获 将冷却的鸡胚取出,用碘酊消毒气室部位,然后以无菌手术破除气室部卵壳,揭去卵壳膜,剪破绒毛尿囊膜及羊膜(谨防卵黄破裂),吸取胚液。

对每个鸡胚在吸取胚液前均应注意检查,凡胎儿腐败、胚液混浊及有任何污染可疑者,弃去不用。

死胚和活胚分别收获,每若干个鸡胚分为一组,吸取胚液放于同一灭菌的容器内,每组抽样测定血凝价,血凝价低于1:160(微量法1:128)者应弃去。

同时作无菌检查,应无细菌生长。

收获的胚液灭活前在2~8℃左右保存,应不超过5日。

3.3.2 鸡胚胎儿收获及浸出液的制备 在收获及胚液的同时,取病变胎儿,去头、脚,用生理盐水洗2~3次,磨碎,制成(1:5)~(1:10)乳剂,加适宜的抗生素适量,然后离心或以4层纱布一层铜纱网滤过,置自然沉淀1~2日,然后取样作无菌检查。

以上清夜作为配制双相油乳剂疫苗用。

4 灭活将上述无菌胚液以4层纱布及一层细铜纱网滤过,混合于一个大玻璃瓶内,吸出数毫升样品备测毒价。

其余胚液和鸡胚浸出液分别计量加入10%甲醛溶液,随加随摇,使其能充分混合,甲醛溶液的最终浓度为0.1%。

加甲醛溶液后最好倾倒另一瓶中,以避免瓶口附近黏附的病毒未能接触灭活剂。

然后在37℃灭活16小时(以瓶内温度达到37℃开始计时)。

期间振摇3~4次。

在2~8℃保存,应不超过1个月。

5 半成品检验5.1 无菌检验取灭活的胚液及鸡胚浸出液分别按附录448进行,应无菌生长。

5.2 灭活检验取10日龄无新城疫病毒抗体的鸡胚6个,每个接种灭活胚液0.23ml,每日照蛋2次,观察5日,鸡胚非特异死亡不应超过1个。

对所有胚液分别测定血凝价,应不出现血凝,认为灭活完全。

如有可疑,应将可疑胚液进行重检,重检不合格者报废。

鸡胚浸出液也按照上述方法检查。

5.3 毒价测定将灭活前取出的胚液进行10倍系列稀释,取10-7、10-8、10-93个稀释度分别接种9~10日龄无鸡新城疫病毒抗体的鸡胚5个,每胚尿囊内0.1ml,每日照蛋2次,观察5日,无论死胚、活胚均应测定血凝价,血凝价〉1:80(微量法1:64)以上者,判为感染,计算EID50,每0.1ml病毒含量≥108EID50,方可用于制苗。

6 单相油乳剂灭活疫苗制备6.1 油相制备取注射用白油94份,加司本-80 6份,混合后,加硬脂酸铝2份,随加随搅拌至透明为止,高压灭菌备用。

6.2 水相制备取吐温-80 4份装入带玻璃珠的瓶中灭菌,冷却后加灭活胚液96份,充分振瑶使吐温-80完全溶解为止。

6.3 乳化取油相3份放于乳化罐内,开动电机慢速转动搅拌,同时徐徐加入水相1份,加完后再以10000r/min搅拌2~5分钟,在终止搅拌前加入1%硫柳汞溶液,使其最终浓度为0.01%。

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