人核因子κB(NF-κB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
nf-κb蛋白结构
nf-κb蛋白结构NF-κB蛋白结构NF-κB（核因子κB）是一种转录因子家族，广泛参与调控多种生物学过程，包括免疫反应、细胞增殖和细胞凋亡。
它在炎症反应、免疫应答、肿瘤发生等病理生理过程中发挥重要作用。
NF-κB蛋白是由多个亚基组成，其中p50和p65是最常见的两个亚基。
NF-κB蛋白结构的核心是二聚体，由两个亚基组成。
每个亚基都包含一个DNA结合区域和一个激活区域。
DNA结合区域通常含有一个Rel结构域，能够与特定的DNA序列结合，从而调控下游基因的转录。
激活区域则包含转录激活域（TAD），能够与其他转录因子、共激活蛋白和转录复合物相互作用，进一步调控基因表达。
NF-κB蛋白的DNA结合区域是其结构的关键组成部分。
这个区域通常由大约300个氨基酸残基组成，包含一个高度保守的Rel结构域。
Rel结构域是一个结构稳定的结构域，由大约110个氨基酸残基组成。
它包含一个N-末端结构域和一个C-末端结构域，两个结构域之间通过一段柔性连接区连接。
N-末端结构域包含一个DNA结合螺旋，能够与DNA结合并识别特定的DNA序列。
C-末端结构域则含有许多氨基酸残基，通过与其他蛋白相互作用来调控基因转录。
NF-κB蛋白的激活区域是其功能的重要组成部分。
激活区域通常由大约200个氨基酸残基组成，包含一个或多个转录激活域（TAD）。
转录激活域能够与共激活蛋白和转录复合物相互作用，进一步调控基因表达。
在没有激活的情况下，转录激活域通常被遮盖在其他结构域中，阻止其与其他蛋白的相互作用。
在受到信号刺激后，转录激活域会从其他结构域中释放出来，与其他蛋白相互作用，从而调控基因转录。
NF-κB蛋白的结构具有很高的灵活性和可塑性。
这使得NF-κB蛋白能够适应不同的信号刺激和生物学环境，从而调控不同的基因表达。
NF-κB蛋白的结构在不同的亚型和不同的细胞类型中可能存在差异，这可能导致其在不同生物过程中的不同功能。
总结起来，NF-κB蛋白是一种转录因子家族，通过与DNA结合并与其他蛋白相互作用调控基因转录。
氧化应激相关kegg通路
氧化应激相关kegg通路
氧化应激是一种细胞或组织在受到各种有害刺激时，如活性氧（ROS）和活性氮（RNS）的产生超过其抗氧化防御能力的状态。
这种状态会导致细胞中的大分子（如DNA、蛋白质和脂质）受到损伤，从而引发一系列的生物化学反应。
在生物信息学和系统生物学领域，KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路是一种常用的分析工具，可以帮助我们理解氧化应激相关的生物过程。
以下是与氧化应激相关的一些KEGG通路：
p53信号通路：p53是一种重要的肿瘤抑制基因，其通路涉及细胞周期控制、DNA 修复、细胞凋亡等多种生物学过程。
在氧化应激状态下，p53通路可能会被激活，以应对DNA损伤和其他有害影响。
MAPK信号通路：MAPK（丝裂原活化蛋白激酶）通路是一种重要的细胞信号转导通路，参与调节多种细胞功能，包括细胞增殖、分化、凋亡和应激反应等。
在氧化应激状态下，MAPK通路可能会被激活，参与调节细胞的应激反应。
NF-κB信号通路：NF-κB（核因子κB）是一种重要的转录因子，参与调节多种炎症和免疫相关基因的表达。
在氧化应激状态下，NF-κB通路可能会被激活，引发炎症反应和细胞凋亡等生物学过程。
抗氧化系统：包括谷胱甘肽代谢、超氧化物歧化酶（SOD）等抗氧化酶的通路。
这
些通路通过清除ROS和RNS等有害物质，维护细胞的氧化还原平衡。
需要注意的是，这些通路并不是孤立的，它们之间可能存在复杂的交互和调控关系。
因此，在研究氧化应激相关的生物学过程时，需要综合考虑这些通路之间的相互作用和影响。
nfkb信号通路基因
nfkb信号通路基因NFKB信号通路基因NFKB（核因子κB）信号通路是一种重要的细胞信号传导通路，参与调控免疫、炎症、细胞增殖和凋亡等生物学过程。
NFKB信号通路基因是该通路的核心组成部分，起着关键的调控作用。
NFKB信号通路基因是指参与NFKB信号通路的基因，包括NFKB家族的基因、信号传导分子和调控因子等。
这些基因在NFKB信号通路中通过相互作用和调控，参与信号转导的传递和调节。
NFKB信号通路基因的表达异常与多种疾病的发生和发展密切相关，如肿瘤、炎症性疾病和自身免疫性疾病等。
NFKB家族是NFKB信号通路的核心成员，包括NFKB1（p50）、NFKB2（p52）、REL（c-Rel）、REL A（p65）和REL B。
这些家族成员通过形成二聚体或三聚体结合到DNA上，调控下游基因的转录。
NFKB家族在免疫和炎症反应中发挥重要的调节作用，参与T细胞发育、B 细胞激活、细胞因子产生和炎症反应等过程。
除了NFKB家族，NFKB信号通路还包括一系列的信号传导分子和调控因子。
其中，IKK复合物（IKKα、IKKβ和IKKγ）是NFKB信号通路的重要调控因子，通过磷酸化NFKB的抑制因子IκB，使其受到降解，从而释放出NFKB分子。
释放的活化NFKB分子可进入细胞核，结合到特定的DNA序列上，启动下游基因的转录。
NFKB信号通路中还存在一些负调控因子，如IκBα、IκBβ和IκBε等。
这些负调控因子通过结合NFKB家族成员，抑制其活性，从而限制NFKB信号的传导。
这些负调控因子的异常表达和功能缺陷与多种疾病的发生和发展密切相关。
NFKB信号通路基因在免疫和炎症反应中起着重要的调控作用。
当机体受到外界刺激时，NFKB信号通路基因的表达会发生变化，进而导致信号通路的激活或抑制。
这种变化可以调节炎症因子的产生和细胞因子的释放，从而影响机体的免疫和炎症反应。
近年来的研究表明，NFKB信号通路基因在肿瘤的发生和发展中也起着重要的调控作用。
核因子-κB的作用及在心血管疾病治疗中的研究进展
核因子-κB的作用及在心血管疾病治疗中的研究进展（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】核因子-κB （NF-κB）是一种参与了多种心血管疾病的病理生理过程且具有基因转录多项调控作用的转录因子。
NF—κB存在于心肌细胞、血管平滑肌细胞及内皮细胞中，参与多种心血管疾病的发生、发展。
适当地抑制NF-κB的活化对于心血管疾病的治疗具有积极的作用。
NF-κB已经引起心血管领域的广泛关注，各学者正进一步研究其在心血管疾病发生、发展不同阶段的活化特征及程度，如何更安全、更有效地进行适度干预将成为今后研究的主要方向。
【关键词】核因子-κB；心血管疾病；基因转录;调控因子核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)是1986年由美国麻省理工学院癌症研究中心的Bltimore和麻省Whitehead生物医学研究所的Rwiansen发现的。
他们在成熟B细胞和浆细胞中发现的这种蛋白能与免疫球蛋白K轻链内含增强子的特异性序列结合。
该序列由10个核苷酸组成(5’-GGGACTTTCC-3’)，命名为κB。
1996年Baeuerie等[1]的研究显示，NF—κB能与调控免疫应答、炎症反应、细胞分化和生长、细胞黏附和细胞凋亡所必需的许多细胞因子、黏附因子等基因启动子或增强子部位的κB位点发生特异性结合。
它启动和调节这些基因的转录，在机体的免疫应答、炎症反应和细胞的生长发育等方面发挥重要作用。
现检索相关文献对核因子-κB的作用以及在心血管疾病治疗中的研究进展作一综述。
1 核因子-κB的组成结构及生物学特性NF-κB是由NF-κB／Rel蛋白家族的两个亚基组成的二聚体蛋白质，几乎存在于所有细胞中。
Siebenlist等[2]的研究表明，核因子-κB家族包括NF一κB1（p50）、NF一κB2(p52)、RelA(p65)、RelB 和c-Rel，其共同特点是拥有由300个氨基酸组成的高度保守的Rel 同源结构域。
免疫组化 磷酸化和非磷酸化的nfkb免疫组化
免疫组化磷酸化和非磷酸化的nfkb免疫组化免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种常用的实验技术，用于检测组织样本中特定蛋白质的存在与定位。
该技术通过使用特异性抗体与目标蛋白质结合并进行可视化，从而在组织切片中显示出目标蛋白质的位置和表达水平。
NFκB（核因子κB）是一种重要的转录因子，参与多种生物学过程，包括免疫调节、炎症反应、细胞增殖和细胞凋亡等。
在免疫组化实验中，可以使用特异性的NFκB抗体来检测组织中NFκB的存在和定位。
磷酸化和非磷酸化是指NFκB蛋白质分子上的磷酸化修饰状态。
磷酸化是通过将磷酸基团添加到蛋白质特定位点来调节蛋白质活性和功能的一种常见的修饰方式。
在磷酸化状态下，NFκB可能会发生结构变化、与其他蛋白质相互作用或转录启动子结合等。
在进行NFκB的磷酸化和非磷酸化的免疫组化实验时，可以使用特定的抗体来检测目标蛋白质是否发生磷酸化修饰，以及其在组织中的定位。
通过可视化染色技术，可以在组织切片中显示出NFκB蛋白质的表达和磷酸化状态。
这种技术可以提供关于NFκB在特定条件下的活性状态和调节机制的信息。
它对于研究与NFκB相关的疾病、炎症反应以及免疫系统的功能和调控均具有重要意义。
安罗替尼通过NF-κB_信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响
安罗替尼通过NF -κB 信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响柳新1，谢云鹏2，张圣林1，李青山1，董怡11 承德医学院附属医院肿瘤科，河北承德067000；2 承德医学院附属医院神经外科摘要：目的 探讨安罗替尼通过核因子κB （NF -κB ）信号通路对人脑胶质瘤细胞（T98G 细胞）增殖、凋亡的影响。
方法 体外培养T98G 细胞，并将其随机分为对照组、5 µmol /L 安罗替尼组、10 µmol /L 安罗替尼组、20 µmol /L 安罗替尼组、阳性药物组、抑制剂组。
对照组不予干预，5 µmol /L 安罗替尼组、10 µmol /L 安罗替尼组、20 µmol /L 安罗替尼组分别以5、10、20 µmol /L 安罗替尼进行干预，阳性药物组以50 mg /L 的5-氟尿嘧啶进行干预，抑制剂组加入10 µmol /L 安罗替尼+5 µmol /L NF -κB 通路抑制剂BAY 11-7082进行干预。
用CCK -8法检测细胞活力，用5-乙炔基-2´脱氧尿嘧啶核苷法测算细胞增殖率，用Hoechst33258染色法测算细胞凋亡率，用Western blotting 法检测细胞增殖、凋亡相关蛋白与NF -κB 信号通路相关蛋白［细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase -3）、NF -κB p65、磷酸化NF -κB p65（NF -κB p65）］表达。
结果 与对照组比较，5 µmol /L 安罗替尼组细胞活力差异无统计学意义（P >0.05），10、20 µmol /L 安罗替尼组、阳性药物组的细胞活力低（P 均<0.05）。
与对照组比较，各安罗替尼组、阳性药物组细胞增殖率、Cyclin D1、p -NF -κB p65蛋白表达低，而细胞凋亡率、Caspase -3蛋白表达高（P 均<0.05）；与阳性药物组比较，10 µmol /L 安罗替尼组细胞增殖率、Cyclin D1、p -NF -κB p65蛋白表达高（P 均<0.05），而细胞凋亡率、Caspase -3蛋白表达低（P 均<0.05），20 µmol /L 安罗替尼组与阳性药物组比较各指标差异无统计学意义（P 均>0.05）；与10 µmol /L 安罗替尼组比较，抑制剂组各指标变化更明显（P 均<0.05）。
七叶皂苷钠调控SIRT1
七叶皂苷钠调控SIRT 1/NF-κB 信号通路对帕金森病大鼠的神经保护作用Δ周慧敏＊，陈静，欧诒丹，王御林，钟纯正 #（儋州市人民医院神经内科，海南 儋州 571700）中图分类号 R 965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2024）06-0689-06DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2024.06.09摘要 目的 探究七叶皂苷钠通过调控沉默信息调节因子1（SIRT 1）/核因子κB （NF-κB ）信号通路发挥对帕金森病大鼠的神经保护作用。
方法 采用6-羟基多巴胺注射法构建帕金森病大鼠模型，将建模成功的48只大鼠随机分为模型组、七叶皂苷钠低剂量组（1.8 mg/kg ）、七叶皂苷钠高剂量组（3.6 mg/kg ）、七叶皂苷钠+EX 527组（七叶皂苷钠3.6 mg/kg+SIRT 1抑制剂EX 527 5 mg/kg ），每组12只；另取12只健康大鼠作为假手术组。
各药物组大鼠腹腔注射相应药液，每天1次，持续21 d 。
末次给药结束24 h 后，检测大鼠运动及认知功能，观察其黑质区和海马组织CA 1区神经元形态，检测其黑质纹状体中多巴胺（DA ）含量和黑质区酪氨酸羟化酶（TH ）、α突触核蛋白（α-Syn ）表达水平，检测其血清中促炎因子[白细胞介素6（IL-6）、IL-18]、抗炎因子（IL-10）水平及黑质纹状体中SIRT 1、磷酸化NF-κB p 65（p-NF-κB p 65）、NF-κB p 65蛋白表达水平。
结果 与假手术组比较，模型组大鼠黑质区和海马组织CA 1区神经元损伤严重；其旋转圈数、逃避潜伏期、黑质区α-Syn 蛋白表达水平、血清中促炎因子水平、黑质纹状体中p-NF-κB p 65与NF-κB p 65蛋白的相对表达量之比均显著升高或延长（P ＜0.05），目标象限停留时间、黑质纹状体中DA 含量及黑质区TH 蛋白表达水平、血清中抗炎因子水平、黑质纹状体中SIRT 1蛋白表达水平均显著缩短或降低（P ＜0.05）。
nf-kb入核免疫荧光检测实验记录
nf-kb入核免疫荧光检测实验记录NF-κB (核因子-κB) 是一种重要的转录因子家族，参与调控免疫系统、炎症反应、细胞凋亡等生物学过程。
NF-κB的活性可以通过免疫荧光检测方法来研究，下面是一份关于nf-kb入核免疫荧光检测实验记录的参考内容。
一、实验目的：本实验旨在研究细胞中NF-κB的入核情况，了解细胞对外界刺激的响应机制。
二、材料与方法：1. 细胞培养：选取人类肺癌细胞株A549作为实验对象。
细胞培养于DMEM培养基中，含10%胎牛血清并添加1%青霉素/链霉素，37℃，5% CO2下培养至80%的接触抑制度。
2. 荧光抗体：购买荧光标记的NF-κB抗体（例如Alexa Fluor 488标记的NF-κB抗体）。
3. 实验组设置：- 阴性对照组：未刺激的细胞作为阴性对照。
- 阳性对照组：使用某一强刺激剂（例如TNF-α）处理的细胞作为阳性对照。
- 实验组：将感兴趣的刺激剂处理在细胞上。
三、实验步骤：1. 细胞处理：- 细胞解离：使用1x trypsin-EDTA将细胞从培养瓶中溶解，制备单细胞悬浮液。
- 细胞计数：使用细胞计数板对细胞数目进行计数，并调整至相同浓度。
- 细胞培养：将细胞分配至不同的培养皿中，每个培养皿10^6个细胞，培养24小时，以附着于培养皿表面。
2. 干细胞因子处理：- 阳性对照组：向培养皿中加入TNF-α，终浓度为10 ng/mL，处理细胞30分钟。
- 实验组：根据需要的刺激剂处理细胞样本，处理时间根据文献中报道的最佳时间确定。
- 阴性对照组不添加任何刺激剂。
- 处理结束后将培养皿离心收集细胞。
3. 固定与渗透：- 用PBS缓冲液洗涤细胞，并使用4% paraformaldehyde固定细胞，室温孵育15分钟。
- 再次用PBS缓冲液洗涤细胞，重复三次- 用1% Triton X-100渗透细胞膜，室温孵育10分钟。
4. 抗体染色：- 去除 Triton X-100，用PBS洗涤细胞三次。
Elabscience 人抑制素B(INHB)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书
2022年修订第一版（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断!）产品货号：E-EL-H0313c产品规格：96T/48T/24T/96T*5Elabscience 人抑制素B(INHB)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书Human INHB(Inhibin B) ELISA Kit使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话技术部电话************电子邮箱（销售）********************电子邮箱（技术）**************************网址：具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
Copyright ©2021-2022 Elabscience Biotechnology Co.,Ltd. All Rights Reserved目录用途 (3)基本性能 (3)检测原理 (3)试剂盒组成及保存 (4)试验所需自备物品 (5)样品收集方法 (5)注意事项 (6)■ 试剂盒注意事项 (6)■ 样品注意事项 (6)样本稀释方案 (6)检测前准备工作 (7)操作步骤 (8)结果判断 (10)技术资源 (10)典型数据 (10)性能 (11)■ 精密度 (11)■ 回收率 (11)■ 线性 (11)声明 (12)Intended use (13)Character (13)Test principle (13)Kit components & Storage (14)Other supplies required (15)Sample collection (15)Note (16)■ Note for kit (16)■ Note for sample (16)Dilution Method (17)Reagent preparation (17)Assay procedure (18)Calculation of results (20)Technical resources (20)Typical data (20)Performance (21)■ Precision (21)■ Recovery (21)■ Linearity (21)Declaration (22)用途该试剂盒用于体外定量检测人 血清、血浆或其他相关生物液体中INHB浓度。
亲核素βKPNβELISA试剂盒说明书
亲核素β(KPNβ)ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：体液亲核素β(KPNβ)ELISA试剂盒试验原理：BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。
人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
亲核素β(KPNβ)ELISA试剂盒自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
亲核素β(KPNβ)ELISA试剂盒操作注意事项1．试剂应按标签储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
亲核素β(KPNβ)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
核因子κB受体活化因子配基ELISA试剂盒
核因子κB受体活化因子配基ELISA试剂盒核因子κB受体活化因子配基ELISA试剂盒供应商：上海乔羽生物有限公司上海乔羽有限公司，有elisa试剂盒，抗体，培养基核因子κB受体活化因子配基ELISA试剂盒ELISA技术原理：以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来.1. 抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
2. 结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
3. 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
4. 受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。
5. 此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
6. 加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml 水平)，并且重复性好。
核因子κB受体活化因子配基ELISA试剂盒Liquid type specimen:Including serum, plasma, urine, pleural effusion and ascites, cerebrospinal fluid, cell culture supernatant, etc.. Serum:Room temperature blood natural coagulation 10-20 minutes after the centrifuge about 20 minutes (2000-3000 turn / min). Carefully collect the supernatant. In the process of preservation, if there is precipitation, should be re - centrifugal.Plasma):According to the requirements of the specimens of choice of EDTA, sodium citrate or heparin as an anticoagulant, 10-20 minutes after mixing, centrifuged for 20 minutes or so (2000-3000 r.p.m.). Carefully collect the supernatant. In the process of preservation, if there is precipitation, should be re - centrifugal.Urine:Collecting with sterile tubes. Centrifugal 20 minutes or so (2000-3000 turn / min). Carefully collect the supernatant. In the process of preservation, if there is precipitation, should be re - centrifugal. Pleural effusion, cerebrospinal fluid with reference to this practice.Cell culture supernatant:To collect the ingredients for the detection of secretory components. Centrifugal 20 minutes or so (2000-3000 turn / min). Carefully collect the supernatant. Detection of cell components, with PBS (PH7.2-7.4) diluted cell suspension, the cell concentration reached 1 million /ml or so. Through repeated freezing and thawing, in order to make the cell damage and release of intracellular components. Centrifugal 20 minutes or so (2000-3000 turn / min). Carefully collect the supernatant. In the process of preservation, if there is precipitation, should be re - centrifugal.Tissue specimen:After cutting the specimen, weigh the weight. Add a certain amount of PH7.4, PBS. Rapid freezing with liquid nitrogen. The specimens were melted and still maintained at 2-8. Add a certain amount of PBS (PH7.4), with a hand or a homogenate of the specimen homogenate full. Centrifugal 20 minutes or so (2000-3000 turn / min). Carefully collect the supernatant. Be detected after a repackaging, remaining frozen spare.核因子κB受体活化因子配基ELISA试剂盒，猪促生长激素释放激素(GHRH)ELISA试剂盒，促生长激素释放激素elisakit，猪elisa试剂盒，GHRHelisakit上海乔羽生物供应！核因子κB受体活化因子配基ELISA试剂盒试剂盒性能1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。
nf-kb信号通路中免疫组化染色结果
NF-κB信号通路在免疫系统中扮演着至关重要的角色，它参与调控免疫和炎症反应、细胞增殖和存活等生物学过程。
免疫组化染色结果通常用来评估NF-κB信号通路的活性和相关蛋白的表达情况，为研究人员提供了重要的信息。
让我们简要了解一下NF-κB信号通路的基本概念。
NF-κB (核因子κB)是一类转录因子，它可以穿过细胞膜并进入细胞核，调节多个基因的转录，参与调控免炎症、免疫应答、细胞凋亡等多种生物学过程。
在静止状态下，NF-κB以其与IκB蛋白的结合而保持不活跃，当受到刺激后，如炎症因子、细胞因子等的刺激，IκB蛋白会被磷酸化并降解，使得NF-κB得以活化并进入细胞核，开启特定基因的转录。
在免疫组化染色结果中，研究人员通常会选择一些与NF-κB信号通路相关的蛋白作为标记物，如p65、IκBα、p50等，通过染色和显微镜观察来评估NF-κB信号通路的活性及这些蛋白的定位和表达情况。
通过观察细胞核中p65的定位及表达水平，可以直接反映出NF-κB信号通路的活性；而IκBα的表达变化则可以反映出NF-κB的活化状态。
对于NF-κB信号通路中免疫组化染色结果的评估，我们可以从深度和广度两个方面来进行全面探讨。
首先从深度上来看，我们可以深入解析NF-κB信号通路的活性和相关蛋白的表达情况，从分子水平和细胞水平进行全面评估。
这包括了对标记物的选择、染色条件的优化、显微镜观察和图像分析、以及结果的解读和定量分析。
通过深度评估，我们可以更加全面地了解NF-κB信号通路的活性状况，为后续研究提供重要的实验数据和依据。
而从广度上来看，我们可以探讨NF-κB信号通路在不同细胞类型和疾病模型中的表达情况和活性变化。
不同的细胞类型可能对特定刺激呈现不同的NF-κB活化响应，而在不同的疾病模型中，NF-κB信号通路的活性也可能呈现出多样化的变化。
通过广度评估，我们可以更好地了解NF-κB信号通路的生物学意义和潜在作用机制。
总结回顾一下，NF-κB信号通路在免疫组化染色结果中的评估对于研究免炎症、免疫应答、细胞增殖和存活等生物学过程具有重要意义。
人核因子κB(NF-κB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
人核因子κB(NF-κB)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12107h检测范围：0.32ng/mL -20ng/mL最低检测限：0.08ng/mL特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的NF-κB，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中NF-κB 含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗NF-κB抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗NF-κB抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的NF-κB呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
酶联免疫分析(分析(ELISA)
人核因子核因子κκB 亚基p65亲和肽(NFқb-p65)酶联免疫酶联免疫分析分析分析（（ELISA ）试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中核因子κB 亚基p65亲和肽(NF қb-p65)的含量。
实验原理实验原理：：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人核因子κB 亚基p65亲和肽(NF қb-p65)水平。
用纯化的人核因子κB 亚基p65亲和肽(NF қb-p65)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入核因子κB 亚基p65亲和肽(NF қb-p65)，再与HRP 标记的核因子κB 亚基p65亲和肽(NF қb-p65)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的核因子κB 亚基p65亲和肽(NFқb-p65)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人核因子κB 亚基p65亲和肽(NF қb-p65)浓度。
试剂盒组成试剂盒组成：试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 说明书 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：2250ng/L 0.5ml ×1瓶 0.5ml ×1瓶 2-8℃保存 标准品稀释液 1.5ml ×1瓶 1.5ml ×1瓶 2-8℃保存 酶标试剂 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 样品稀释液 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 显色剂A 液 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 显色剂B 液 3 ml ×1瓶 6 ml ×1瓶 2-8℃保存 终止液 3ml ×1瓶6ml ×1瓶 2-8℃保存 浓缩洗涤液（20ml ×20倍）×1瓶（20ml ×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
nf-κb概念
nf-κb概念NFκB（核因子-κB）是一种转录因子家族，它在哺乳动物中起着重要的调节免疫、炎症和细胞生存等多种生物过程的作用。
它的命名源自于它最早被发现与细胞核内DNA结合的能力和其作用于κB顺式作为转录启动子的TATA盒之前位置。
NFκB家族成员包括NFκB p50（也称为NFκB1），NFκB p52（也称为NFκB2），RelA（也称为p65），RelB和c-Rel等。
它们的结构上具有保守的N端DNA结合区域（RHD）和不同的C端调控区域。
NFκB蛋白的活性状况主要由IκB（核转录因子κB抑制子）蛋白的介导调控，其中IκBα和IκBβ是两种主要的IκB族蛋白。
NFκB在正常细胞中处于不活跃状态，由IκB蛋白系列与其结合形成复合物，阻止其进入细胞核并与DNA结合。
当细胞受到刺激，如细胞内外的炎症信号、病毒感染、氧化损伤等，IκB蛋白会被特定酶如IκB激酶（IKK）磷酸化和降解，使其失去对NFκB的抑制作用，从而使NFκB能够进入细胞核与DNA结合，启动下游基因的转录。
激活的NFκB可调控各种重要的基因，包括炎症因子（如细胞因子TNF-α、IL-1β，趋化因子CXCL8等）、免疫相关基因（如IFNγ、IL-2等）以及凋亡抑制基因（如Bcl-2、Bcl-xL等）。
因此，NFκB在免疫和炎症反应中起着重要作用。
它能够激活抗原呈递细胞、调控T细胞的增殖和分化、促进免疫反应等，从而对机体的免疫系统起到调节作用。
然而，NFκB活化也与炎症、肿瘤发生和发展密切相关。
在某些疾病的发生和发展过程中，NFκB可被非正常激活，导致炎症反应的持续性，促进肿瘤细胞增殖和侵袭，并抑制细胞凋亡。
因此，NFκB被认为是许多炎症性疾病和肿瘤的治疗靶点。
目前，研究人员通过多种方法来探索调控NFκB活性的机制。
例如，通过研究I κB蛋白的后翻译修饰（如磷酸化、泛素化等）和降解途径，以及IKK蛋白的磷酸化调控机制，可以深入了解NFκB的激活过程和调控机制。
nf-kb入核免疫荧光检测实验记录
nf-kb入核免疫荧光检测实验记录NF-κB (核因子 kappa B) 是一种转录因子，广泛参与细胞核内的转录调控。
为了研究NF-κB的活性及其在细胞中的调控机制，科研人员通常使用免疫荧光检测技术。
下面是一份关于NF-κB入核免疫荧光检测实验的记录及相关参考内容。
实验目的：了解NF-κB的活性及其在细胞中的定位和调控机制。
实验步骤：1. 细胞培养：在培养皿中培养细胞系（如人类肺癌细胞系A549），培养条件为37°C、5% CO2的细胞培养箱中，使用适当的培养基（如DMEM）和10% FBS。
2. 细胞刺激：将细胞培养至80%的浓度后，加入适当的刺激剂，如TNF-α或IL-1β，在特定的时间点进行刺激（如1小时，6小时或24小时）。
3. 固定细胞：使用4% paraformaldehyde固定细胞，通常在室温下固定15-20分钟。
4. 渗透化：将PBS含0.1% Triton X-100加入固定的细胞中，室温下渗透化10分钟。
5. 阻断非特异性结合：使用5%牛血清白蛋白（BSA）或3%牛血清和0.3% Triton X-100的PBS溶液阻断非特异性结合，室温下孵育1小时。
6. 免疫染色：使用特异性抗体（如抗-NF-κB）孵育细胞，通常在4°C下孵育过夜。
7. 清洗：使用PBS洗涤细胞，通常洗涤三次，每次约5分钟。
8. 二抗染色：使用荧光标记的二级抗体（如荧光标记的抗兔IgG）孵育细胞，通常在室温下孵育1小时。
9. 清洗：使用PBS洗涤细胞，通常洗涤三次，每次约5分钟。
10. 染色：使用荧光染料，如DAPI，将细胞核染色，通常在室温下孵育10分钟。
11. 显微镜观察：将试片置于显微镜波长合适的镜头下观察，并拍摄荧光图像。
结果与讨论：本实验通过NF-κB的免疫荧光检测技术检测到了细胞中的NF-κB的定位和活性。
NF-κB主要存在于细胞浆中，并在细胞外刺激后转移到细胞核中，因此在未受刺激时，细胞核中应该没有或很少有NF-κB的荧光信号。
nf-κb概念
NF-κB简介NF-κB（核因子激活的B细胞的κ-轻链增强）是一种蛋白质复合物，其控制转录的DNA，细胞因子产生和细胞存活。
NF-κB几乎存在于所有动物细胞类型中，并参与细胞对刺激的反应，如应激，细胞因子，自由基，重金属，紫外线照射，氧化LDL和细菌或病毒抗原。
NF-κB在调节对感染的免疫应答中起关键作用。
NF-κB的不正确调节与癌症，炎症和自身免疫疾病，感染性休克，病毒感染和免疫发育不当有关。
NF-κB也与突触可塑性和记忆过程有关。
NF-κB由RanjanSen（NIH）在诺贝尔奖获得者DavidBaltimore的实验室中通过其与B细胞中免疫球蛋白轻链增强子中的11碱基对序列的相互作用而发现。
核因子-kB（NF-kB），是细胞内重要的核转录因子。
RelA/c-Rel二聚体，能与靶基因启动子其他序列结合。
NF-κB为转录因子蛋白家族，包括5个亚单位：Rel (cRel)、p65 (RelA, NF-κB3)、RelB和p50(NF-κB1)、p52(NF-κB2)。
p65 、cRel和RelB分含有N端Rel同源区(Rel homology domain, RHD)和C端的反式激活结构域（transactivation domain, TD），在RHD的C末端有一个核定位区域(nuclear-localization sequence, NLS)，负责与DNA结合、二聚体化和核易位，而TD则与转录活化相关。
p50和p52只有RHD 而缺乏TD，因此，p50和p52同源二聚体并不能激活基因转录，而是作为一种抑制分子存在，它们在细胞内通常各自以其前体p105和p100的形式存在。
最常见的NF-κB二聚体是p65与p50组成的异二聚体。
以上内容仅供参考，如需关于nf-κb的更多信息，建议查阅生物学专业书籍或文献，也可咨询生物学专业人士获取解答。
核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书
核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书elisa酶联免疫试剂盒上海樊克生物科技有限公司专业供应ELISA试剂盒；人ELISA试剂盒；大鼠ELISA试剂盒；小鼠ELISA试剂盒；兔ELISA试剂盒；猪ELISA试剂盒；牛ELISA试剂盒；山羊ELISA试剂盒；鸡ELISA试剂盒；核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。
尽可能的不要使用溶血或高血脂血。
如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。
人白细胞抗原ELISA 检测试剂盒不要在37℃或更高的温度加热解冻。
应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。
稀释前将标准品振荡混匀。
2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
elisa酶联免疫试剂盒安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
Handling Precautions1 reagents should label storage instructions, return to room temperature before use. The standard should be discarded after thinning, can not be saved.No 2 in the experiment of the plate should be immediately put back the bag, sealed to prevent spoilage.3 no other reagents should be packaged or covered. Do not mix different batches of reagents. Shelf life before use.4 using disposable suction head to avoid cross contamination, absorb the stop solution and the substrate A, B liquid, avoid using pipette with metal parts.Plastic container configuration using a clean washing liquid 5. All samples of ingredients and mix well before use in the kit.6 washing microtiter plates should be fully taken will not dry, absorbent paper directly into the water hole in the standard enzyme reaction.The 7 substrates of A should be volatile, avoid long time to open the lid. The B substrate is sensitive to light, avoid long time exposure to light. Avoid hand contact, toxic. After completion of the experiment should be immediately read od.8 add reagents should be consistent in order to ensure that all reaction plate hole incubation time.9 in accordance with the amount of liquid and the sequence of instructions indicated time, the operation of the incubation.核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书Operation steps1 before use, all reagents fully mixed. Do not allow liquid to produce a large number of bubbles, so as to avoid adding a large number of bubbles, resulting in the addition of the error.2 according to the number of samples to be measured and the number of standard products to determine the number of required. Each standard and blank hole is recommended to do the hole. Each sample can be made according to its own quantity, and can be used as a hole in the hole.3 to join the dilution of the standard 50ul in the reaction hole, to add the sample to be measured in the reaction hole 50ul. The biotin labeled antibody was immediately added to the 50ul. Cover the membrane plate, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius incubation 1 hours.4 left hole liquid, each hole filled with washing liquid, oscillating 30 seconds off the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 3 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.5 each hole to join 80ul affinity chain enzyme -HRP, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius incubation 30 minutes.6 left hole liquid, each hole filled with washing liquid, oscillating 30 seconds off the washing liquid, pat dry with absorbent paper. Repeat this operation 3 times. If the washing machine with washing, washing times increased once.7 each hole to join the substrate A, B each 50ul, gently oscillating mixing, 37 degrees Celsius incubation 10 minutes. Avoid light.8 remove the enzyme labeled plate, quickly join the 50ul terminator, add the end of the liquid should be measured immediately after the results.9 OD value at the wavelength of 450nm was measured by hole.limitThe result of the above 6 standard is nonlinear, and the result can not be obtained accurately according to the standard curve.核因子-κB亚基p65亲和肽ELISA试剂盒说明书试剂盒性能1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。
ikkβ分子量
ikkβ分子量分子量，也被称为分子质量，是指一个分子中所有原子质量的总和。
分子量是化学物质的一个关键性质，它在化学实验、化学计算和化学研究中起到非常重要的作用。
本文将介绍ikkβ（IκB激酶β）的分子量，该分子在生物医学研究中具有重要的意义。
ikkβ是一种激酶，是IκB-α的一个亚单位。
IκB-α是一个通过与核因子κB（NF-κB）结合来抑制NF-κB活性的蛋白质。
NF-κB是一个转录因子，可以调控许多基因的表达，包括与免疫反应、发炎反应和细胞增殖等生物过程密切相关的基因。
ikkbβ是NF-κB信号通路中的一个关键组分，它负责磷酸化IκB-α，从而使其被降解，释放出NF-κB并激活其下游的生物效应。
ikkβ分子量大约为82 kDa。
要理解ikkβ的分子量意义，首先需要了解分子量的计算方法。
分子量的计算可以通过各个原子质量的总和来实现。
对于蛋白质这类复杂的大分子，需要根据氨基酸残基的组成和数量进行计算。
ikkβ是由735个氨基酸残基组成的蛋白质，每个氨基酸的相对分子量不同，所以分子量会有所变化。
除了分子量，ikkβ还有其他一些重要的性质和功能。
研究表明，ikkβ在免疫反应、炎症反应和肿瘤发生发展等生理与病理过程中起着重要的调控作用。
因此，ikkβ成为研究这些领域的重要靶点。
此外，研究人员还对ikkβ的结构、功能和调控机制进行了广泛的研究。
这些研究揭示了ikkβ在信号转导中的关键位置和作用方式，有助于我们更好地理解细胞信号传递的机制。
总结来说，ikkβ是一种分子量约为82 kDa的蛋白质，是NF-κB信号通路中的关键组分，具有重要的生物功能和调控作用。
对于理解生物医学研究中的信号传导机制和相关疾病的发生发展具有重要的意义。
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人核因子κB(NF-κB)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
产品编号：CSB-E12107h
检测范围：0.32ng/mL -20ng/mL
最低检测限：0.08ng/mL
特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的NF-κB，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月
预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中NF-κB 含量。
说明
1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗NF-κB抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗NF-κB抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的NF-κB呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10.终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
需要而未提供的试剂和器材
1.标准规格酶标仪
2.高速离心机
3.电热恒温培养箱
4.干净的试管和Eppendof管
5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器
6. 蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存
1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即
可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心
15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本
放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。
只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。
稀释的过程中，应做好详细的记录。
最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为20ng/mL，做系列倍比稀释后，分别稀释20ng/mL，10ng/mL，5ng/mL，2.5ng/mL，1.25ng/mL，0.63ng/mL，0.32ng/mL，样品稀释液直接作为标准浓度0ng/mL，临用前15分钟内配制。
如配制10ng/mL标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）20ng/mL的上述标准品加入含0.5ml 样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则：
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。
每次检测都应该做标准曲线。
如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。
空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加
标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。
每孔加生物素标记抗体工作液100μl（取1μl生物素标记
抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩
干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液）100μl，37℃，
60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩
干。
6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4
孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
终止液的加入顺序应尽量
与底物液的加入顺序相同。
为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。
在加终止液后15分钟以内
进行检测。
注：
1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2N
H2SO4。
测量时先用此孔调OD值至零。
3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。
标准品、生物素标记抗体工作液、辣根
过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。
请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。
根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3.一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。
6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7.底物请避光保存。
8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。