PDA培养基的配制及试管斜面制作
PDA培养基
培养基的配制一、PDA培养基的配制其配方如下:土豆200g,葡萄糖20g,琼脂15~20g,水1000mL,pH值自然。
(1)称量和熬煮药品实际用量计算后,按培养基配方逐一称取去皮土豆。
土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。
滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
(4)加棉塞培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。
(5)包扎加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
二、棉塞的制作正确的棉塞是形状、大小,松紧应与试管口(或三角烧瓶)完全适合。
过紧则妨碍空气流通,操作不便;过松时,空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中,达不到灭菌的目的。
棉塞过小往往易掉进试管内,因此棉塞质量的优劣对实训的结果有很大的影响。
正确的棉塞头较大,加塞时,应使棉塞长度的1/3留在试管口外,2/3在试管口内(见实训图6-4)。
棉塞制作方法见图6-5。
三、斜面与平板培养基的制作斜面与平面培养基是常用的琼脂固体培养基。
将熬制好的琼脂培养基趁热装入试管灭菌后摆鞋面,凝固后即成斜面培养基。
斜面培养基常用于菌种培养、菌种保藏等工作。
PDA培养基的配制方法
PDA培养基的配制方法一、目的要求1.学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2.学习并掌握棉塞的制作方法。
二、培养基的配制原理培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中,微生物种类繁多,营养类型多样,加上实训和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,但不论是何种培养基,均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。
不同微生物对pH值要求不一样,所以配制培养基时,还应根据不同微生物对pH值的要求,将培养基调到合适的pH值范围。
三、实训材料和用具琼脂,可溶性淀粉,葡萄糖,10﹪NaOH,10﹪HCl,1mol/L NaOH,lmol/L HCl,KNO3,NaCl,K2HPO4·3H20,MgSO4·7H20,FeSO4·7H2O;试管,三角瓶,烧杯,量筒,玻璃棒,天平,牛角匙,PH试纸,棉花,牛皮纸,记号笔,纱布,四、操作方法与步骤(一) 培养基的配制PDA培养基的配制其配方如下:土豆200g,葡萄糖20g,琼脂15~20g,水1000mL,pH值自然。
(1)称量和熬煮药品实际用量计算后,按培养基配方逐一称取去皮土豆。
土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。
滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
pda培养基
PDA培养基简介PDA(Potato Dextrose Agar)培养基是一种常用于真菌及酵母的培养基。
它是由马铃薯提取物和葡萄糖混合制成的。
PDA培养基具有高透明度、无色无味、好制备、便于观察真菌和酵母生长等特点,在微生物实验室中被广泛应用。
材料制备PDA培养基所需的材料如下:•马铃薯 200克•葡萄糖 20克•蒸馏水 1000毫升•培养皿或试管步骤以下是制备PDA培养基的步骤:1.清洁材料:使用75%乙醇或其他消毒剂彻底清洁培养皿或试管,确保无细菌污染。
2.准备马铃薯提取物:将马铃薯削皮并切成小块。
将切好的马铃薯放入锅中,加入足够的蒸馏水,然后煮沸20-30分钟,直到马铃薯变软。
3.提取马铃薯汁液:使用纱布或滤纸将煮熟的马铃薯过滤,以去除固体残余物。
收集过滤得到的液体,这就是所需的马铃薯提取物。
4.加入葡萄糖:将葡萄糖加入马铃薯提取物中,搅拌均匀,直到完全溶解。
5.加入琼脂:将1000毫升蒸馏水倒入锅中,加热至沸腾。
然后,将琼脂逐渐加入,并持续搅拌,直到琼脂完全溶解。
6.混合培养基:将马铃薯提取物和葡萄糖溶液倒入含有溶解琼脂的锅中,搅拌均匀,确保混合到一致。
7.倒入培养皿或试管:将培养基均匀地倒入清洁的培养皿或试管中,注意避免产生气泡。
8.等待凝固:将培养皿或试管放置在平坦的表面上,等待培养基凝固。
9.高温蒸汽灭菌:将培养皿或试管用锡箔纸密封,并放入高温蒸汽灭菌器中,进行高温灭菌。
温度和时间根据需要进行设置。
注意事项•在制备PDA培养基过程中,要遵守无菌操作的原则,以确保培养基的纯度和无菌性。
面罩、手套、试验台面和实验室工具等都需要进行严格消毒和清洁。
•倒入培养皿或试管时,要小心避免气泡的产生。
气泡会影响培养基的均匀性和透明度。
•在使用培养基前,需要进行高温蒸汽灭菌以杀灭其中的细菌和真菌孢子。
高温和时间应根据实验的需要进行设置。
结论PDA培养基是一种简单易制备的培养基,常用于真菌和酵母的培养。
PDA LB培养基
PDA培养基马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基是分离菌物和细菌的常用培养基,其做法是称取200g马铃薯,洗净去皮切成小块,加水1000ml煮沸半个小时或高压蒸煮20分钟,纱布过滤,再加10-20g葡萄糖和17-20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),15磅蒸气(121℃)灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
PDA培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。
小技巧:1、做PDA培养基用土豆应去皮,避免带入杂质,产生泡沫,影响通气。
PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称,即Potato Dextrose Agar (Medium),依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
一种常用的培养基,宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
分装于试管按物理性状划分:固体培养基按培养基成分划分:半合成培养基配方马铃薯200克葡萄糖20克琼脂15~20克自来水1000毫升自然PH配制步骤其做法是先洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块,加水煮烂(煮沸20~30分钟,能被玻璃棒戳破即可),用四层纱布过滤,再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂,继续加热搅拌混匀,稍冷却后再补足水分至1000毫升,分装试管或者锥形瓶,加塞、包扎,(121℃)灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面或者摇匀,冷却后贮存备用。
其他事项1.培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使用。
2.PDA培养基一般不需要调pH。
对于要调节pH的培养基,一般用pH 试纸测定其pH。
如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。
调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。
4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量为0.1g/L培养基,主要是为了抑制细菌的生长,减少干扰性LB培养基LB一般被解释为Luria-Bertani培养基,其发明人为贝尔塔尼(Giuseppe Bertani),这个名字来源於英语的lysogeny broth,即溶菌肉汤。
培养基配方及配制方法
培养基配方1 斜面菌种保存培养基1.1PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)称取200g马铃薯,洗净去皮切碎,加水1000ml煮沸0.5h,纱布过滤,滤液补足1000ml,再加15g葡萄糖和15-20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
1.2麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备:干麦芽首先进行粉碎(不能太粗,也不必太细。
太粗影响糖化效率,过细影响过滤速度),按麦芽重量的3~4倍加水,搅拌均匀后,37℃左右浸泡1小时,然后缓缓加温至55~63℃(在升温过程中应不断搅拌使温度均匀),保温4~6小时(用0.02摩尔/升碘液测定为黄色至无色时),糖化结束。
在糖化过程中,应每小时搅拌一次。
取过滤后的清液,加1.8%琼脂,分装试管,每试管约5-10ml (视试管大小而定),121℃灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
2 基菌落总数检测2.1平板计数琼脂培养基将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中,煮沸溶解后,调pH,然后在121℃下灭菌15min,取出,稍微冷却后,带热倒入培养皿中。
3志贺氏菌检测3.1 GN增菌液成分:胰蛋白胨:20g,葡萄糖:1g,甘露醇:2g,柠檬酸钠:5g,去氧胆酸钠0.5g,磷酸二氢钾4g,磷酸氢二钾1.5g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml。
pH7.0制法:将上述物品加入蒸馏水中,加热溶解煮沸,调pH为7.0,分装,在115℃高压灭菌15min。
3.2 HE琼脂成分:胨:12g,牛肉膏3g,乳糖12g,蔗糖12g,水杨素2g,胆碱20g,氯化钠5g,琼脂18~20g,蒸馏水1000ml0,0.4%溴麝香草酚蓝溶液16ml,Andrade指示剂20ml.,甲液20ml,乙液20ml。
pH7.5 制法:将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液,将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解,加入甲液乙液到基础液中,调pH,再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷却至50~55℃,倾注浇平板。
实验一 PDA培养基配制
实 验 一
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基配制
1. PDA配方
马铃薯 200g 、葡萄糖( dextrose ) 或蔗糖20g、琼脂20g、H2O 1000mL、 pH 6.5。
2. 配制方法
马铃薯(去皮、去芽眼)→切成片(玉米大小) →称取200 g+1000 mL H2O→煮沸15 min →双层纱 布过滤→取滤液并补足1000 mL+琼脂→熔化+其它 营养物质→调节pH(用HCl或NaOH)→分装试管→
茶树菇 Agrocybe aegerita
担 子 菌 纲 食 用 菌
鸡腿菇
杏鲍菇:Pleurotu seryngii
别名:刺芹侧耳、雪茸。 杏鲍菇是一种营养十分丰富、味道鲜嫩的新 型品种,菌肉肥厚,质地脆嫩,具有杏仁香味。
杏鲍菇:Pleurotu seryngii
红菇:Russula lepida
香菇
担子菌纲食用菌
银耳(白木耳)
担子菌纲食用菌
黄 金 针 菇 白金针菇
担子菌纲食用菌
灵 芝
灵 芝
担子菌纲食用菌Biblioteka 猴头菇担子菌纲食用菌
黑木耳
担子菌纲食用菌
草菇(麻菇, 杆菇)
担子菌纲食用菌
竹 荪
担子菌纲食用菌
灰树花
是一种珍稀食药用菌, 口感脆嫩,味似鸡丝。
牛肝菌
茶树菇 Agrocybe aegerita
pdapda200gdextrose20g20g1000mlph65配制方法马铃薯去皮去芽眼切成片玉米大小称取200g1000mlo煮沸1520min双层纱布过滤取滤液并补足1000ml琼脂熔化其它营养物质调节ph用hcl或naoh分装试管塞上棉塞捆扎灭菌高压蒸气灭菌1530min制成斜面检查灭菌效果即2830培养23d1每人制5支试管斜面
(完整版)PDA培养基的配方及配制方法
PDA培养基的配方及配制方法PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称,即Potato Dextrose Agar (Medium),分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
它属于固体培养基、半合成培养基.PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势,一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛.PDA培养基的配方土豆 200g葡萄糖 20g琼脂 15~20g水 1000mLpH值自然PDA培养基的配制(1)称量和熬煮按培养基配方逐一称取去皮土豆。
土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20—30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。
滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝.(4)加棉塞培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。
(5)包扎加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
PDA培养基的配制及试管斜面制作
PDA培养基的配制及试管斜面制作PDA(Potato Dextrose Agar)是一种常用的培养基,用于微生物的培养和鉴定。
下面将详细介绍PDA培养基的配制方法以及试管斜面的制作步骤。
一、PDA培养基的配制方法:-马铃薯提取物:200g-葡萄糖:20g-琼脂:15g- 蒸馏水:1000ml1.将马铃薯削皮并切成小块,然后放入锅中加入足够的蒸馏水,煮沸30分钟,使马铃薯溶解。
2. 用纱布或过滤纸过滤烧开的马铃薯,收集滤液,将滤液浓缩至1000ml。
3.将浓缩后的马铃薯提取物与葡萄糖混合,搅拌均匀。
4.将琼脂加入马铃薯提取物和葡萄糖混合物中,加入足够的蒸馏水。
5.在烧杯中加热混合物,使琼脂完全溶解。
6.用自动调节器调节pH值为7.0-7.27.将混合物分装至试管或琼脂培养皿中。
8.将试管或琼脂培养皿密封并高压灭菌,高压灭菌时间为121°C,15-20分钟。
二、试管斜面的制作步骤:1.配制好的PDA培养基倒入装有试管的架子中,大约倒满1/3左右。
2.将试管架放入预热至沸腾状态的水浴中。
3.等待试管内的培养基开始沸腾,并保持沸腾状态2-3分钟。
4.将试管架从水浴中取出,让试管内的培养基冷却至接近凝固的状态。
5.倾斜试管架,使试管内的培养基斜倒在试管壁上,形成斜面。
6.等待培养基凝固完全。
7.使用无菌的环针或棉签,在斜面上划线隔离待培养的微生物。
8.将试管密封,高压灭菌。
PDA培养基配制和试管斜面制作之后,可以用于各种微生物的培养和鉴定。
在使用PDA培养基时,要注意严格无菌操作,避免外界的污染。
在制作试管斜面时,也要确保试管和培养基的完全无菌,以保证培养的准确性和可靠性。
实验一斜面培养基制作
2.制作方法 (1)制滤液: 马铃薯刮去粗皮,去芽眼,切成碎块,称量后放锅中,加水
1200~1300ml,将其煮沸20min。用双层纱布过滤,取1000ml滤液。
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(2)化琼脂: 将滤液加热至将沸腾时加入琼脂,不断搅拌,注意控制火力不要 使培养基溢出或烧焦。待琼脂完全融化后加入剩余原料,并使其溶解(用热水补 足水量).
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A.正确; B.不正确
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(5) 包扎: 管口堵入棉塞后7或9支试管扎一捆,棉塞 部分用牛皮纸包扎。在包装纸上标明培养基名称,制备 组别和姓名、日期等。
(6)、灭菌 (7)、摆斜面 (8)、存放冰箱(4-6C) 六、作业 1、简述高压灭菌锅的使用。 2、何谓灭菌?简述热力灭菌的类型和原理。 3.何时加入琼脂?融化时注意什么问题?分装的技术要
(3分装 :通过漏斗装置,趁热将培养基分装于试管 中,装量约占试管高度的1/4(分装三角瓶,其
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装量以不超过其容积的一半为宜)。注意管口或瓶口不要沾染培养基。 (4)制棉塞 棉花以白色长绒脱脂棉为宜。根据试管口大小取棉,将其卷成棉塞,
最好 外包一层纱布。将棉塞塞入试管口。棉塞塞入试管2/3。制做棉塞要求外 表光滑,外包的纱不能折、松紧适宜等。
求有哪些? 4. 棉塞的作用有哪些和技术要求?菌种培养时管口堵胶 塞或软木塞行吗?为什么?
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PDA培养基的配制方法和注意事项
PDA培养基的配制方法和注意事项PDA(Potato Dextrose Agar)是一种常用的真菌培养基,适用于培养和生长多种真菌菌株。
下面将介绍PDA培养基的配制方法以及注意事项。
配制方法:1. 准备所需材料:马铃薯(200g)、葡萄糖(20g)、琼脂(15g)、蒸馏水(1000ml)。
2.将马铃薯洗净,并切成块状。
3.将切好的马铃薯放入一个大锅中,加入足够的蒸馏水,使其完全浸泡。
4.使用中小火煮沸约30分钟,直到马铃薯变得软烂。
5.用纱布过滤掉马铃薯块,收集到的液体称为马铃薯提取液。
6.将马铃薯提取液加热到煮沸,并添加葡萄糖,搅拌使其充分溶解。
7.加入琼脂,搅拌溶解。
8.继续加热并保持搅拌,直到琼脂完全溶解。
9.关火冷却到40-45°C,搅拌均匀。
10.倒入培养皿或试管中,使其充分凝固。
11.将培养基容器包装好,使用锡箔纸和胶带封口,避免杂菌污染。
12.PDA培养基可以根据需要分装成适当大小的琼脂平板或斜面管,以供后续使用。
注意事项:1.所有试剂和仪器应尽可能消毒和无菌处理,以确保制备的PDA培养基无菌。
2.马铃薯切成块状是为了加速煮沸的过程,但切的过小可能导致提取液中的杂质过多,影响培养基质量。
3.煮沸的时间不宜过短,马铃薯需要彻底煮熟才能提取足够的营养物质。
4.搅拌是为了使葡萄糖和琼脂均匀溶解,并避免极度热区出现。
5.琼脂的溶解需要一定的时间和温度,不可急于冷却和使用。
6.冷却到40-45°C是为了防止高温对培养基中微生物的损害,也是为了避免由于过度冷却导致琼脂凝固太快。
7.封装培养基容器是为了防止杂菌和空气中的孢子进入培养基,避免细菌和真菌污染。
8.在分装培养基前,应将工作台面和器皿用酒精消毒,防止培养基受到外界污染。
9.PDA培养基在20-25°C的常温下可保存2-4周,或在4°C冰箱中保存2-3个月。
保存时不可直接暴露在光线下,避免褪色和干燥。
PDA培养基的配制方法
PDA培养基的配制方法PDA(Potato Dextrose Agar)是一种常用的培养基,广泛用于真菌和霉菌的培养及鉴定。
以下是用于制备PDA培养基的配制方法。
1.准备所需材料和设备-马铃薯:5个中等大小的马铃薯-葡萄糖:20克-洁净水:1升- 环境灭菌器(autoclave)-秤和容器-酸性pH试纸-移液管-培养皿或试管-实验室纸2.前期准备-将马铃薯洗净并削去外皮。
然后切成薄片,约0.5-1厘米的厚度。
-将锅中的水煮沸,将准备好的马铃薯片放入沸水中煮10分钟。
煮熟的马铃薯要输送到室温。
-将煮熟的马铃薯捣碎,以去除固体残渣。
3.配制PDA培养基-在一个用适量的水洗净和灭菌的容器中称取适量的煮熟马铃薯制得的马铃薯糊。
-摄取10%的葡萄糖。
-将容器放在烧杯中,并在烧杯中添加适量的洁净水,直到容器中的总容积为1升。
-使用酸性pH试纸检查pH值,并将其调整至5.6-5.8的范围内,通过加入少量的1MHCl或1MNaOH。
-用实验室纸过滤培养基,以去除留在溶液中的固体残渣碎片。
-用环境灭菌器将培养基装在培养皿或试管中。
对于培养皿,约20-25毫升的培养基足够;对于试管,约为10毫升。
4.灭菌-将装有培养基的容器放入环境灭菌器中。
-设置灭菌温度为121°C,灭菌时间为15分钟。
-等待完全冷却后,取出培养基容器。
5.储存-将已灭菌和冷却的培养基存放在冰箱中,以避免细菌和真菌的污染。
-培养基通常可以储存在2-4°C的冰箱中,可保持约1-2个月。
注意事项:-在配制PDA培养基的过程中,需要严格遵守无菌技术和操作规范,以避免污染。
-培养基pH值的准确控制对于真菌和霉菌的生长至关重要。
-灭菌温度和时间需要根据实验室设备的不同进行调整,以确保完全灭菌。
-培养基的储存条件是保证其质量和无菌性的关键,需要避免高温、阳光暴露以及其他潜在的污染源。
总结:配制PDA培养基需要用到马铃薯、葡萄糖和水,通过煮马铃薯、制取马铃薯糊、加入葡萄糖并调整pH值,最后经过灭菌和储存,制得一种适用于真菌和霉菌培养的PDA培养基。
PDA培养基的配制方法和注意事项
PDA培养基的配制方法和注意事项PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称,即Potato Dextrose Agar (Medium),分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
它属于固体培养基、半合成培养基。
PDA培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势,一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。
PDA培养基的配制(1)称量和熬煮按培养基配方逐一称取去皮土豆。
土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。
滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
(4)加棉塞培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。
(5)包扎加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
PDA培养基配制注意事项1.培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使用。
2.PDA培养基一般不需要调pH。
对于要调节pH的培养基,一般用pH试纸测定其pH。
如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol/LNaOH 或lmol/LHCL溶液进行调节。
调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
pda培养基配方
PDA培养基配方及配制方法PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称。
宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
下面就详细介绍了pda培养基的配方及配制方法及步骤。
1.PDA培养基的配方:马铃薯200克葡萄糖20克琼脂20克蛋白胨5克磷酸二氢钾3克硫酸镁1.5克水1000ml PH自然。
2.PDA培养基的制作工艺流程:设计培养基配方→材料煮汁→补水→琼脂溶解→再次补水→药品溶解→调PH值→分装→灭菌→摆斜面3.PDA培养基的制作步骤a 材料煮汁:1000ml水置于锅中,待烧开后加入200克去皮、切片的马铃薯煮20到30分钟,至薯片软而不烂,用八层纱布过滤,取滤液。
b 琼脂溶解和补水:将马铃薯滤液重新加入到锅中,补水至1000ml,继续加热沸腾而后加入琼脂,继续文火煮沸至琼脂完全溶解,再次补水至1000ml。
c 药品溶解:在琼脂溶解后加入葡萄糖20克,磷酸二氢钾3克,硫酸镁1.5克,蛋白胨5克。
4 分装:a.试管培养基的分装分装所用的容器事先一定要清洗干燥,新购的试管内一般都残留烧碱,应先用稀硫酸在烧杯中煮沸,然后用清水洗干净,口朝下晾干后备用。
不能现洗现用,以免因管壁附有水膜导致培养基在试管口滑动。
分装试管时尽量避免培养液黏附试管口,以免培养基粘附棉塞,增加污染几率。
试管装量:制斜面培养基一般为试管高度的1/4—1/3。
b.平板培养基的分装将配制好的培养基倒入三角瓶,(三角瓶也一定要清洗干净),体积不要超过三角瓶的1/3(否则加热时液体沸腾易把棉塞冲开)5 加棉塞:棉塞要用普通棉花制作,不能用脱脂棉。
棉塞的大小,松紧要适度,过松达不到滤菌的目的,过紧妨碍空气流通,松紧度以于抓棉塞整个试管提起为宜。
标准的棉塞应是塞头略大,不易变形,一般塞入试管口2—3厘米。
占塞总长的2/3—1/3裸露在试管口外,比管口略大。
三角瓶棉塞同样松紧适中,一般塞入三角瓶3~4cm.6 装锅灭菌:将塞好棉塞的试管或三角瓶装进置物桶内,桶未装满用空试管填满以免试管倾倒,即可放入手提式高压灭菌锅中,盖好报纸,防止灭菌时棉塞被冷凝水淋湿,扭紧锅盖,排净锅内冷空气,待温度升至122—124℃之间开始计时30min,灭菌结束。
PDA培养基的配制方法
PDA培养基的配制方法一、目的要求1.学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2.学习并掌握棉塞的制作方法。
二、培养基的配制原理培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中,微生物种类繁多,营养类型多样,加上实训和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,但不论是何种培养基,均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。
不同微生物对pH值要求不一样,所以配制培养基时,还应根据不同微生物对pH值的要求,将培养基调到合适的pH值范围。
三、实训材料和用具琼脂,可溶性淀粉,葡萄糖, 10﹪NaOH,10﹪HCl,1mol/L NaOH,lmol/L HCl,KNO3,NaCl,K2HPO4·3H20,MgSO4·7H20,FeSO4·7H2O;试管,三角瓶,烧杯,量筒,玻璃棒,天平,牛角匙,PH试纸,棉花,牛皮纸,记号笔,纱布,四、操作方法与步骤(一) 培养基的配制PDA培养基的配制其配方如下:土豆200g,葡萄糖20g,琼脂15~20g,水1000mL,pH值自然。
(1)称量和熬煮药品实际用量计算后,按培养基配方逐一称取去皮土豆。
土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。
滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
PDA LB培养基
PDA培养基马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基是分离菌物和细菌的常用培养基,其做法是称取200g马铃薯,洗净去皮切成小块,加水1000ml煮沸半个小时或高压蒸煮20分钟,纱布过滤,再加10-20g葡萄糖和17-20g琼脂,充分溶解后趁热纱布过滤,分装试管,每试管约5-10ml(视试管大小而定),15磅蒸气(121℃)灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面,冷却后贮存备用。
PDA培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。
小技巧:1、做PDA培养基用土豆应去皮,避免带入杂质,产生泡沫,影响通气。
PDA培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称,即Potato Dextrose Agar (Medium),依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
一种常用的培养基,宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
分装于试管按物理性状划分:固体培养基按培养基成分划分:半合成培养基配方马铃薯200克葡萄糖20克琼脂15~20克自来水1000毫升自然PH配制步骤其做法是先洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块,加水煮烂(煮沸20~30分钟,能被玻璃棒戳破即可),用四层纱布过滤,再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂,继续加热搅拌混匀,稍冷却后再补足水分至1000毫升,分装试管或者锥形瓶,加塞、包扎,(121℃)灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面或者摇匀,冷却后贮存备用。
其他事项1.培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使用。
2.PDA培养基一般不需要调pH。
对于要调节pH的培养基,一般用pH 试纸测定其pH。
如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。
调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基,用于菌类的震荡培养。
4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素,加入量为0.1g/L培养基,主要是为了抑制细菌的生长,减少干扰性LB培养基LB一般被解释为Luria-Bertani培养基,其发明人为贝尔塔尼(Giuseppe Bertani),这个名字来源於英语的lysogeny broth,即溶菌肉汤。
pda培养基
pda培养基
PDA(Potato Dextrose Agar)是一种常用的培养基,以马铃薯和葡萄糖为主要成分。
它适用于真菌和霉菌的培养和鉴定。
PDA培养基的配方如下:
- 马铃薯提取物:200 g/L
- 葡萄糖:20 g/L
- 洋葱提取液:1 g/L
- 干酪膜素:0.1 g/L
- 硫酸镁:0.5 g/L
- 琼脂:15 g/L
- 蒸馏水:1000 mL
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制备PDA培养基的步骤如下:
1. 将马铃薯洗净去皮,切成小块。
2. 将马铃薯块放入大容器中,加入适量的蒸馏水,煮沸1
小时,然后离心取得汁液。
3. 将马铃薯汁液过滤。
过滤液为马铃薯提取物。
4. 在一烧瓶中加入马铃薯提取物和葡萄糖,搅拌溶解。
5. 在另一烧瓶中加入洋葱提取液和硫酸镁,搅拌溶解。
6. 将两个烧瓶中的溶液混合在一起,调整pH值为5.6-6.2。
7. 在溶液中加入干酪膜素和琼脂,搅拌溶解。
8. 将培养基加热至沸腾,然后倒入培养瓶中。
9. 灭菌培养瓶,通常以121°C高压蒸汽灭菌20-30分钟。
PDA培养基可以用于分离和培养真菌,如酵母菌、霉菌和
子囊菌等。
它提供了合适的营养物质和适宜的条件,促进
真菌的生长和繁殖。
2。
PDA培育基的配制方式
PDA培育基的配制方式一、目的要求1.学习并把握配制培育基的一样方式和步骤。
2.学习并把握棉塞的制作方式。
二、培育基的配制原理培育基是人工配制的各类营养物质供微生物生长繁衍的基质,用以培育、分离、鉴定、保留各类微生物或积存代谢产物。
在自然界中,微生物种类繁多,营养类型多样,加上实训和研究的目的不同,因此培育基的种类很多,但不论是何种培育基,均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。
不同微生物对pH值要求不一样,因此配制培育基时,还应依照不同微生物对pH值的要求,将培育基调到适合的pH值范围。
三、实训材料和用具琼脂,可溶性淀粉,葡萄糖,10﹪NaOH,10﹪HCl,1mol/L NaOH,lmol/L HCl,KNO3,NaCl,K2HPO4·3H20,MgSO4·7H20,FeSO4·7H2O;试管,三角瓶,烧杯,量筒,玻璃棒,天平,牛角匙,PH试纸,棉花,牛皮纸,记号笔,纱布,四、操作方式与步骤(一) 培育基的配制PDA培育基的配制其配方如下:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂15~20g,水1000mL,pH值自然。
(1)称量和熬煮药品实际用量计算后,按培育基配方一一称取去皮马铃薯。
马铃薯切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。
滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提早弄碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求,将配制的培育基分装入试管或500ml三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以避免使培育基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量:固体培育基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培育基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
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1.实验材料
1.1试剂材料
土豆,葡萄糖,琼脂,试管,试管架,天平,注射用硫酸链霉素,注射用青霉素钠,三角瓶,灭菌锅,电磁炉,超净工作台,烧杯,1mL移液器,培养皿
1.2PDA培养基配方
土豆(去皮)200g
葡萄糖20g
xx15-20g
蒸馏水1000mL
pH 自然
2.实验方法与步骤
2.1称量和熬煮
将土豆去皮,按自己所需的量(例如配制1L)称取土豆,将土豆切成小块放入锅内,加入适量的蒸馏水,在电磁炉上加热至沸腾,30min后用4层纱布在大量杯上过滤,弃掉滤渣,滤液用蒸馏水补足1L。
2.2溶解
用天平称取20g葡萄糖加入滤液中,用玻璃棒搅拌,使其完全溶解。
2.3分装
称取8-10g琼脂,加入所用三角瓶中,然后将滤液分装到三角瓶中,每瓶500mL,用玻璃棒将琼脂搅匀。
2.4xx
培养基分装完毕后,在三角瓶口上塞上棉塞,以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性。
2.5包扎
加塞后,在棉塞外用两层报纸包裹,其外用橡皮筋包扎好,标记。
2.6灭菌
将配制完成的培养基,包好的平板及其他所需用品一起放入灭菌锅灭菌(见灭菌锅使用方法)。
3.试管斜面制作方法与步骤
3.1前两步同
2.1,
2.1步骤
3.2加热溶解
量取500mL滤液到1000mL的烧杯中,再加入8-10g的琼脂,用玻璃棒搅匀,放入微波炉缓慢加热溶解,加热其间注意不要让培养基溢出烧杯,不时用玻璃棒搅拌。
3.3分装
等琼脂溶解后,将培养基分装到事先准备好的试管中。
分装量约占试管高度的,管口尽量不要沾染培养基。
3.4加塞
培养基分装完毕后,在试管口上塞上棉塞或橡胶塞,以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性。
3.5包扎
加塞后,试管7-9支捆用橡皮筋捆好,在塞外用两层报纸包裹,其外用橡皮筋包扎好,标记。
3.6灭菌
将包好的试管和其他所需灭菌物品一同放入灭菌锅灭菌。
3.7摆斜面
灭菌完成后,将试管拿出,在超净工作台下摆成斜面,根据自己需要选择合适的倾斜度。