体外培养成骨细胞的研究进展
骨髓基质干细胞成骨的研究进展
高， 且细胞 Ａ Ｐ表达也大大增强［ 。 Ｌ ４ 考虑其原因为机体内部 ］
的氧分压明显低于外界（４ ｍ ｇ ， １０ Ｈ ）特别是骨髓内氧分压 ｍ 只为 ３～５ ｍ ｇ 大约相当于外界的 １３因此 Ｂ Ｃ 长 Ｏ ０ Ｈ ， ｍ ／， ＭＳ ｓ 期暴露于高氧分压的状态， 必将导致细胞过度氧化， 功能下
呈梭形，４ 之内没有形成明显钙化结节。 ＭＳ ｓ １ｄ Ｂ Ｃ 经诱导培 养后的形态主要为多角形， 其贴壁率有所下降， 且在 ｌｂ１ ０ ２ ｄ之内形成明显钙化结节。传代细胞和诱导细胞两者的生长 曲线无统计学差异， 倍增时间为 ３． ～３． ， ３６ ４６ｈ 生长高峰均
相对纯化的基质干细胞。赵子义等 研究发现， 利用免疫磁 珠 标记神经生长因子受体 （ｅｖ ｇｏ ｔ ｆ ｔｒ ｅｅｔｒ ｎｒｅ ｒ ｈ ａ ｏ ｒｃ ｏ ， ｗ ｃ ｐ Ｎ Ｆ 抗体分离、 Ｇ Ｒ） 纯化而获得 Ｎ Ｆ — Ｃ 比同样培养条 Ｇ Ｒ ＭＳ ｓ 件下贴壁法纯化 Ｂ Ｃ 其扩增倍数高出 ２ 个数量级， ＭＳ ｓ ～３ 并
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Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＰ ａ ｔ ａ ｔ ｏ ａ ｄ ｃ １ １ ， ． Ａｕ ． ０ ７ ｏ ｒ ａ ｒ ｃ ｉ ｌＯｒ ｈ ｐ ｅ ｉｓ Ｖｏ ． ３ Ｎｏ ８， ｇ ２ ０ ｏ ｃ
文 章 编 号 ：Ｏ８ ５ ７ （０ ７ Ｏ —０ ７ — ０ １Ｏ— ５２２０）８ ４２ ３
扩增速度还是扩增倍数上都明显高于高密度接种， 而极低密
度接种（．～１／ｍ ） Ｏ５ ２ｃ 更有利于细胞的增殖。杨柳等人［在 ３ 实验中也发现种植密度较高时， 严重影响 Ｂ Ｃ 的贴壁生 ＭＳ ｓ 长， 考虑为含有的红细胞、 白细胞比重大于 Ｂ Ｃ 而首先沉 ＭＳ ｓ
积于瓶底， 且细胞代谢废物增多所至。 Ｂ Ｃ 成骨活性随着供体年龄增长呈下降趋势， ＭＳ ｓ 年龄
新生大鼠成骨细胞体外培养经验总结
新生大鼠成骨细胞体外培养经验总结摘要] 目的：体外培养成骨细胞技术不仅仅在研究其生物学特征及功能方面有重要作用, 而且在研究代谢性骨疾病和重建骨组织方面异常重要。
高效便捷的体外培养方法，是开展体外实验研究的基础。
方法：采用0.25%胰蛋白酶和Ⅱ型胶原蛋白酶联合的二次酶消化法对新生SD大鼠成骨细胞进行原代提取、培养、传代。
通过观察成骨细胞的形态、碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红矿化结节染色法鉴定，确定其细胞活性及增殖情况。
结果：原代成骨细胞多呈混杂细胞，经过3次传代可获取较纯细胞。
成骨细胞呈三角形、梭形、多边形，胞体向外伸展，胞浆丰富，胞核呈卵圆形见，碱性磷酸酶和钙结节染色阳性。
结论：通过体外培养成骨细胞，可获取符合体外细胞生物学对细胞的要求。
为成骨细胞生物学特征及功能、代谢性骨疾病和重建骨组织方面等研究提供基础。
关键词：成骨细胞、细胞培养、碱性磷酸酶（ALP）染色、茜素红矿化结节染色法 Summary of the experience of osteoblasts culture in vitro in neonatal rats Wangzhen1, Yin Hong2▲, Qiang Weiqing2▲,Yao Nianwei2,Liu Yi Xin1,Xu Lei1, He Qiang 1(1.Nanjin g University of Chinese Medicine；2.Nanjing Hospital of TraditionalChinese Medicine Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine) [Abstract] Objective: In vitro culture of osteoblasts plays an important role not only in the studyof biological characteristics and functions, but also in the study of metabolic bone diseases and reconstruction of bone tissue. Efficient and convenient in vitro culture method is the basis of in vitro experimental research.Methods: Primary extraction, culture and subculture of osteoblasts from neonatal SD rats were carried out by secondary enzyme digestion with 0.25% trypsin and type II collagenase. By observing the morphology of osteoblasts, alkaline phosphatase (ALP) staining and alizarin red mineralized nodule staining, the cell activity and proliferation were determined.Results: Most of the primary osteoblasts were hybrid cells, and the more pure cells could be obtained after 3 passages. Osteoblasts were triangular, fusiform and polygonal in shape. The body of osteoblasts extended outwards. The cytoplasm of osteoblasts was abundant. The nucleus of osteoblasts was oval. Alkaline phosphatase and calcium nodule were positive.Conclusion: Osteoblasts cultured in vitro can meet the requirements of cell biology in vitro. It provides the basis for the study of osteoblast biological characteristics and functions, metabolic bone diseases and reconstruction of bone tissue. Key words: osteoblasts, cell culture, ALP staining, alizarin red mineralized nodule staining 成骨细胞是重塑单位的骨形成细胞，对于骨骼的生长和维持至关重要[1]。
成牙骨质细胞的研究进展
成牙骨质细胞的研究进展随着现代医学技术的不断发展，人类对于人体各器官的认知也日益提高。
在口腔领域中，成牙骨质细胞起着重要的作用，这是一类被广泛研究的细胞类型。
本文将介绍成牙骨质细胞的研究进展。
一、成牙骨质细胞的定义、分类及特点成牙骨质细胞是一种存在于口腔中的细胞，直接参与到人体的循环和代谢中。
成牙骨质细胞被广泛应用于齿周组织再生、骨缺损修复等临床治疗中。
成牙骨质细胞可以被分为牙骨质细胞和成骨细胞，其中牙骨质细胞主要存在于成牙的牙本质和牙周膜中，成骨细胞则主要分布在人体中的骨骼系统中。
成牙骨质细胞具有很高的增殖和分化潜能，在体外培养中可以通过合适的生长环境，使细胞增殖完全，同时也可以转变成其他骨骼系统中的细胞类型。
此外，成牙骨质细胞还可以分泌一系列的细胞因子和细胞外基质成分，对周围组织的再生和修复起到积极的促进作用。
二、成牙骨质细胞在牙髓组织的重要作用在牙髓组织修复和再生中，成牙骨质细胞的作用十分重要。
牙髓组织是成牙中最重要的一部分，它由一系列的血管、神经、间充质细胞、干细胞以及成牙骨质细胞等组成。
在牙髓组织发生损伤或受到其他影响时，成牙骨质细胞可以通过分化和增殖，再生出需要的组织。
研究表明，成牙骨质细胞可以通过促进骨形成、增强细胞和基质组分的分泌等作用来改善损伤的牙髓组织。
同时，成牙骨质细胞还可以分泌一系列的生物活性物质，包括生长因子、细胞因子、胶原蛋白、磷酸钙等成分，以促进受损牙髓组织的再生和修复。
三、成牙骨质细胞在口腔领域中的应用随着对成牙骨质细胞的认识和探索，人类开始将其应用于口腔领域的治疗中。
目前，成牙骨质细胞的应用领域主要包括齿周组织再生和骨缺损修复两个方面。
齿周组织再生是指再生缺损齿周膜、纤维连接组织和骨组织等剑齿周组织。
通过培养和使用成牙骨质细胞，可以促进其分化为牙骨质细胞、成骨细胞或是各类辅助细胞，从而实现齿周膜和骨组织的再生和重建。
骨缺损是一种常见的口腔问题，包括牙周炎、牙龈炎和齿周囊炎等。
人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达
人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达目的：系统研究人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）体外成骨诱导分化过程中成骨相关基因的表达变化。
方法：应用密度梯度离心法分离hBMSCs，取第2代细胞通过流式检测及多向诱导分化方法进行干细胞鉴定；应用RT-PCR法对hBMSCs在体外成骨诱导不同时间点的成骨相关基因表达进行检测。
结果：第2代hBMSCs表达间充质干细胞表面标志CD44、CD90，具有成脂和成骨分化潜能。
成骨相关基因在诱导早期部分表达，中期均有表达，基因表达大部分在14天达高峰，与矿化相关的基因表达在21天达高峰。
结论：hBMSCs体外成骨诱导过程中成骨相关基因呈动态表达，其表达时序与成骨细胞生理发育基本相似。
Abstracts:ObjectiveTo investigate the osteogenic related genes expression during in vitro osteogenic differentiation of human bone mesenchymal stem cells (hBMSCs).MethodshBMSCs were isolated by density gradient centrifugation. Surface markers and cell cycle were analyzed by flow cytometry. The multiple differentiation potential of hBMSCs were identified using in vitro osteogenic and adipogenic induction. The osteogenic related genes expression of hBMSCs at different induction time point were evaluated by semiquantitative RT-PCR analysis.ResultsThe hBMSCs were derived from bone marrow and expressed CD44 and CD90, markers of mesenchymal stem cell. The second passage of hBMSCs showed adipogenic and osteogenic differentiation potential. During the osteogenic induction process,hBMSCs expressed part of osteogenic related genes in early stage, and all of them in middle stage.The peak expression of most of genes were on the 14th day, and the mineralization associated genes on the 21st day. ConclusionsThe osteogenic related gene expression of hBMSCs shows a dynamic progress during in vitro osteogenic induction, which is consistent with in vivo development of osteoblast.Key words:hBMSCs;in vitro differentiation;osteogenic genes;expression pattern骨缺损的修补和重建是修复重建外科临床面临的常见问题。
骨髓间充质干细胞膜片的体外构建及成骨分化实验研究
骨髓间充质干细胞膜片的体外构建及成骨分化实验研究目的：探索骨髓间充质干细胞膜片的体外构建简便方法，并评估其成骨分化潜能。
方法：将兔骨髓间充质干细胞高密度接种，在成骨诱导条件下连续培养形成细胞膜片。
通过组织学、碱性磷酸酶活性定量检测、透射电镜和扫描电镜等方法，检测细胞膜片的特性。
结果：高密度连续培养及成骨诱导后形成骨髓间充质干细胞膜片。
HE染色证实膜片是一种由多层细胞和细胞外基质组成的聚集体；茜素红染色呈阳性；碱性磷酸酶定量分析含量较高；扫描电镜及透射电镜检查均见基质中大量的矿化结节聚集。
结论：通过体外简单的连续培养和成骨诱导后，可形成具有良好成骨能力的骨髓间充质干细胞膜片。
标签：间充质干细胞；细胞膜片；成骨分化组织工程技术的出现和兴起标志着再造时代的来临，传统的基于细胞的骨组织工程，是利用大量的种子细胞种植在支架材料上，通过活性因子等诱导细胞分化成骨[1]。
但研究发现该方法存在一些缺点，如细胞利用率低、附着效率差；细胞在支架材料上分布不均；常用的蛋白酶消化收集细胞的方法，会改变细胞的表型和生化成分。
并且，培养过程中细胞分泌的细胞外基质及形成的细胞间连接蛋白也常被破坏[2]。
目前这些问题一直未能圆满解决，已成为限制骨组织工程技术应用于临床的瓶颈。
1993年日本学者Okano等[3]首先报道将聚N-异丙基丙烯酰胺应用到细胞培养上，创新性地发明了细胞膜片技术。
应用特殊的外源性温敏聚合物材料提取完整的细胞聚集体，用于组织工程构建。
该技术借助细胞间的连接以片状形式脱附，保留了基质中细胞与细胞间连接、细胞表面蛋白等，细胞生物学行为和功能得以维持[4]。
在本实验中，笔者探讨体外构建骨髓间充质细胞膜片的培养方法并予以改进，试图进一步缩短膜片培养时间，同时增加膜片厚度，以利于构建组织工程骨。
1 材料1.1 实验动物：3月龄成年新西兰大白兔，体重2.5～3.0kg，由乌鲁木齐总医院实验动物中心提供。
1.2 实验仪器设备：倒置相差显微镜及照相系统（Olympas，日本）；酶联免疫检测仪（BIO-RAD680，美国）；JEM-2000EX透射电镜（JEOM Ltd，日本）；S-3400N 扫描电镜（Hitachi，日本）；X-射线能谱分析仪（Oxford，Link ISIS，英国）。
小鼠成骨细胞体外分离培养及鉴定
随着细 胞培 养技术 的发展 ，采用 体 外 培养 成 骨 细胞 评 价人工 骨 替 代材 料 的生 物 活 性 、 物 相 容性 生 及骨 诱 导 性 等 ， 已成 为 重 要 的研 究 手 段 。成 骨 １ 细胞 的体 外 培 养 可 以 排 除 体 内多 种 因 素 的相 互 影
（． １石河子大学医学院新疆地方与民族高发病重点实验室 ； ２ 石 河子 大学 医学 院组织胚 胎 学教 研室 ， ． 新疆 石 河子 ，３０ ２ ８ ２０ ）
【 摘要 】 的 ： 目 目 针对 前体外培养成骨细胞方法各异 ， 建立一种 简易 的原代培养成骨细胞 的方法 ， 并研究其生物学特
２０ ０ ８年 ｌ 月 ２
农
垦
医
学
Ｄｅ ２ ０８ ｃ． ０
第３ ０卷
・
第６ 期
Ｊｕ ａ ｆ ｎ ｋ ｎ Ｍｅ ｉｉｅ ｏ ｒ ｌ ｇ ｅ ｄｃｎ ｎ ｏ Ｎｏ
Ｖ０ ． ０ Ｎｏ． １３ ６
论著 ・
小 鼠成 骨 细 胞 体 外 分 离 培 养 及 鉴 定
符毓 豪 王 菊２ 周 宗瑶２
～
２ ｉ， 洗 ， 干 ； 甘 油 明胶 封 片 ， 检 ； 所 染 ｍｎ 水 待 ⑤ 镜 ⑥
结 果 为红色 即 为 阳性 ， 之为 阴性 。 反
骨带骨膜 ， 经无菌 Ｐ Ｓ缓 冲液洗 涤 ２ Ｂ ３次 ， 在含 １％ ５
１４ ３ 钙 化 结节 染 色 （ 素红 法 ） 细 胞 接种 方 法 ．． 茜 同上 ， 培养 １ｄ后 ， 下 可 见 黑 色 不 透 明 区 域 ， 时 ０ 镜 此 进行 染 色 ， ７ ％ 乙醇 固定 １ｍｎ０ ２ 用 ５ ０ ｉ， ． ％茜 素 红 染 色 ３ｍｎ蒸馏 水 冲洗 ， 油 明胶 封 片 。 ０ ｉ， 甘
成骨细胞的研究与应用
成骨细胞的研究与应用成骨细胞是一种在骨头中起关键作用的细胞。
这些细胞具有许多独特的特点，例如它们能够合成骨基质和分泌骨形成生长因子。
研究人员一直在探究成骨细胞的机制和应用，以帮助改善骨质疏松症等疾病的治疗。
一、成骨细胞的生理功能成骨细胞是一种细胞，主要分布在骨组织中。
成骨细胞的主要作用是促进骨形成。
它们能够合成骨基质和骨纤维蛋白等物质，以及分泌骨形成生长因子和促进骨细胞增殖的化学物质。
此外，它们还参与骨质重塑以及破骨细胞和成骨细胞之间的平衡。
二、成骨细胞与骨质疏松症骨质疏松症是一种常见的骨代谢疾病，其特征是骨质量低下、骨密度降低、骨质组织的微结构异常、骨折等。
成骨细胞在骨质疏松症的治疗中具有重要作用。
研究发现，针对成骨细胞的药物可以帮助提高骨密度和抑制骨质疏松症的发展。
此外，研究还表明，成骨细胞的数量和功能的下降是骨质疏松症发生的一个重要原因。
三、成骨细胞与骨折愈合成骨细胞在骨折愈合中起关键作用。
在骨受到损伤后，成骨细胞会通过旁分泌的骨形成因子和生长因子等分泌物质来引导骨生长和修复。
研究人员还在探索利用成骨细胞在骨科手术、骨折愈合和骨移植等方面的应用。
四、成骨细胞在组织工程方面的应用成骨细胞在组织工程方面也具有广阔的应用前景。
组织工程是一种将生物学、医学和工程学方法相结合，利用体外培养细胞和人工材料等技术来重建人体组织的方法。
利用成骨细胞，研究人员可以在体外进行组织工程构建，制造出具有骨质结构和功能的三维复合结构，该技术可以应用于骨再生和骨移植等方面。
总之，成骨细胞在骨组织中具有非常重要的作用，其机制与功能的研究和应用可以帮助我们更好地理解骨生长和疾病的发生发展。
未来，我们相信，随着对成骨细胞的深入研究，我们会创造出更多的医学应用和发展前景。
人骨髓基质干细胞体外诱导为成骨细胞的实验研究
ａｓ ｙ Ｒｅ ｕ ｔ ： ｉｒ ｓ ｐ ， Ｐ ｓａ ｎｎ ， ｎ Ｋｏ ｓ ｔｉ ｉ ｇ ａ ｄ ＡＬＰ ａ ｓ ｙ ａｌ ｈ ｗ ｈ ｔ ｔ ｅ ｃ ｌ ｕｔ ｒｄ ｗｉ ｎ ｉ ｏ ａ ｃ ｌ ｒ ｓ ａ ． ｓ ｌ Ｍ ｃ ｏ ｃ ｙ ＡＬ ｔｉ ｉ ｇ Ｖｏ — ￣ａ ｓａ ｎｎ ｎ ｓ ｏ ｓａ ｌ ｓ ｏ ｔ ａ ｈ ｅｌ ｃ ｌ ｅ ｔ ｃ ｄｔ ｎ ｌ ｕｔ ｅ ｓ ｕ ｈｏ ｉ ｕ ｍｅ ｉｍ ａ ｅ ｔ ｅｃ ａ ａ ｔ ｒ ｔ ｓａ ｄ ｔ ｅａ ｔ ｉ ｆｔ ｅｏ ｔｏ ｌ ｔ ． ｎ ｌ ｓ ｎ： Ｂ Ｓ ｓｃ ｎ ｂ ｄ ｃ ｄ ｔ ｉ ｅ ｅ ｔ ｔ ｔ ｔ ｏ ｌ ｓ ｄ ｕ ｈ ｖ ｈ ｈ ｒ ｃｅ ｉ ｉ ｎ ｈ ｃ ｉ ｔ ｏ ｈ ｅ ｂａ ｓ Ｃｏ ｃｕ ｉ ｈ Ｍ Ｃ ａ ｅｉ ｕ ｅ ｄ ｆ ｒ ｎ ｉ ｅｉ ｏ ｏ ｅ ｂ￣ｔ ｓｃ ｖｙ ｓ ｓ ｏ ｎ ｏ ｆ ａ ｎ ｓ
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植块法成骨细胞体外培养方法改良论文
植块法成骨细胞体外培养方法的改良【摘要】目的：对成骨细胞体外培养改良植块法的可行性进行观察。
方法：应用改进的植块接种培养技术进行成骨细胞的分离培养，通过细胞形态学、碱性磷酸酶（alp）细胞化学染色、骨钙素（bgp）免疫细胞化学染色、钙化结节的形成四方面对成骨细胞进行鉴定。
结果：(1)原代及传代细胞均贴壁生长，呈三角形、多角形、梭形等不规则形态，条件培养基中形成钙化结节，碱性磷酸酶细胞化学染色及骨钙素免疫细胞化学染色呈阳性。
结论：改进的植块接种培养法可获得成骨细胞，缩短成骨细胞的培养周期。
【关键词】成骨细胞 ;体外培养 ;方法 ;改良【中图分类号】r329 【文献标识码】a【文章编号】1044-5511（2011）11-0453-02近20年来随着细胞生物学及生物材料学技术的发展而出现了一门新的边缘学科——骨组织工程学。
骨组织工程学研究的方向主要在：种子细胞及载体材料两方面。
种子细胞主要来源是骨外膜成骨细胞［1］、松质骨组织中的成骨细胞［2］、软骨细胞［3］及骨髓基质细胞［4］。
传统的成骨细胞体外培养方法需多次传代，具有耗时、易污染的缺点，我们对体外培养方法进行了改良，现总结如下：一、材料与方法1实验动物：健康新西兰大白兔（赣南医学院实验动物中心提供，体重1.5-2kg）2、主要试剂及仪器：胎牛血清（华美生物工程公司）dmem（gibco）胰蛋白酶（gibco）edta（gibco）青霉素g钠盐（华美生物工程公司）链霉素（华美生物工程公司）骨钙素抗体（解放军总医院放免研究所）sabc试剂盒（博士德公司）倒置显微镜（olympus）低温冰箱（indesit）二氧化碳细胞培养箱（forma scientific）3、兔成骨细胞的植块接种原代培养及传代：组织块的来源是新西兰大白兔的肋骨，无菌操作下采取骨组织块，在无菌室内进行植块前的处理：去除肋骨四周的软组织（包括骨膜及软骨）及将肋骨剪成1mm×1mm×1mm大小的骨组织块，用中性d-hanks液反复冲洗组织块，直至液体清亮为止。
大鼠骨髓基质干细胞体外培养及定向诱导分化为成骨细胞的实验研究
广
西
医
科
大
学
学
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Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＧＵＡＮＧＸＩＭ ＥＤＩ ＣＡＬ ＵＮＩ ＶＥＲＳ ＴＹ Ｉ
Hale Waihona Puke ２ ０ ｒ ０ ７ Ａｐ ； ４（ ） ２ ２
１
・２９ ５ ・
大 鼠骨髓 基质 干细胞 体 外 培 养及 定 向诱 导分 化 为成 骨细 胞 的 实验研 究
１ ２ ５ 成 骨 细 胞 鉴 定 ： 碱 性 磷 酸 酶 （ Ｌ ） 色 ： 代 培 养 ．． ① Ａ Ｐ染 传
细 胞 长 满 后 ，． ５ ０ ２ ％胰 酶 消 化 制 成 浓 度 为 １ ０／ 的细 胞 ×１ ｍｌ
甘油 磷 酸 钠 、 碱性 磷 酸 酶 检 测 试 剂 盒 等 。 １１ ３ 培 养 液 配 置 ： 基 础 培 养 液 ： ．． ① ＤＭＥ 培 养 液 （ ｌ Ｍ 含 ５
由广 西 医科 大 学 实 验 动 物 中心 提 供 。 １１ ２ 主要 试剂 ： ．． ＤＭＥ 培 养 液 （ Ｉ Ｃ 、 牛 血 清 （ Ｂ Ｍ Ｇ Ｂ Ｏ）胎 ＧＩ—
Ｃ 、ｅｃ ｌ分 离 液 （ ＨＡＲ Ａ Ｉ 、 塞 米 松 、 生 素 Ｃ、一 Ｏ）ｐ ｒｏ１ Ｐ Ｍ Ｃ Ａ） 地 维 Ｂ
目前 种 子 细 胞 的来 源 有 骨 、 膜 、 髓 及 骨 外 组 织 口 ， 多 研 骨 骨 ］许 究发 现 骨 髓 来 源 的 种 子 细 胞 最 具 优 势 。 骨 髓 基 质 干 细 胞 （ ｏ ｅｍａｒｗ ｓｒｍａ ｃｌ ， ＭＳ ｓ 是 来 源 于 骨 髓 基 质 的 一 Ｂ ｎ ｒｏ ｔ ｏ ｌ ｅ ｓＢ ｃ ） ｌ 种 间充 质 细 胞 ， 有 多 向分 化 潜 能 ， 一 定 的 诱 导 下 可 向 成 具 在 骨细 胞 分 化 。本 实 验 通 过 研 究 大 鼠 骨 髓 基 质 干 细 胞 体 外 培 养 的生 长 特 点 和诱 导 条 件 下 的成 骨 能 力 ， 下 一 步 构 建 组 织 为
骨髓来源成骨细胞体外成骨表达的研究
５２ ９
河北 医药 ２０ 年 ５月 第 ３ ０８ ０卷 第 ５ 期
Ｈ ｂｉ ｅｉ ｌ ｏｒａ， ａ ０８Ｖ ｌ ０ Ｎ ． ｅｅ Ｍ ｄ ａ Ｊｕ ｌ Ｍ ｙ２０ ， ｏ ３ ， ｏ５ ｃ ｎ
的泪膜亦受影响 ， 从而产生基于免疫的炎症反应 ， 并损 害泪腺及 待于进一步实验研究。本研究局部雄激素治疗选择 的时机 为干 其神经的正常功能。如果雄 激素水平低于支持正常 泪液 分泌和 眼造模后 １ 个月 ， 治疗 时机 的选择对治 疗效 果是否存在 差异 和
及 眼表 面 的 炎 症 可 导 致 泪 腺 及 眼 表 上 皮 细 胞 凋 亡 、 液 中 水 样 步 研 究 。 泪 液 及 枯 液 的 分 泌 减 少 。 雄 激 素 水平 的 异常 可能 是 导 致 此 炎 症 发 生 的重 要 因 素 。Fra bibliotek 参 考 文 献
１ Ｋ ｅ ｚｒ ＫＬ， ｎ ｒｎｅ Ｄａ ａＭＲ， ｉ ｎ ＭＤ， ｔａ ．Ｅ ｅ ｔ ｆ ｄ ｏ ｅ ｅ ｃｅ ｃ ｎｔｅ Ｕｌ ｍａ ｅ１ ｆ ｃ ａ ｒ ｇ ｎ ｄ ｆ ｉｎ ｙｏ ｈ ｏｎ ｉ
细 胞 的 萎 缩 和 淋 巴 细 胞 的浸 润 进 一 步 加 重 炎 症 过 程 ， 成 恶 性 形
５ Ｓｄ ｉａ ｔ ｌ ｎ ＤＡ． ｅ ｄ ｒａ ｄ ｓ ｘｓｅｏ ｄ ｉｔ ｅ ｅ ｓｏ ｒ ｙ ｙ ｄ ｏ ．Ｏ ｈ ａ — ｖ Ｇ ｎ ｅ ｔｒ ｉ ｎｌ ｎ ｅ ｎ ｄ ｙ ｅ ｅ ｓｎ ｒｍｅ ｐ ｔｌ ｎ ｅ ｕ ｈ
任 立 中 高宏 阳 赵 峰 王伟
探 索在体 外诱 导兔骨髓基质干 细胞 （ｏｅｍ ｌ ｗ ｓ ｍ ｃＵ， Ｍ Ｃ ） ｂｎ ａ ｏ ｔ ｅｓＢ Ｓ ｓ 向成骨细胞分化及 Ｔ ｅ
体外培养成骨细胞的研究进展
医 药方 面的研 究进 展 作 一 综 述 。
【 键 词 】 成 骨 细胞 ； 细 胞 培 养技 术 ； 移植 ； 中药 关
・
５ ２・ ６
中 国骨 伤 ２ １ ０ ０年 ７月 第 ２ 卷 第 ７期 Ｃ ｉａＪＯ ｔｏ ３ ｈｎ ｒ ｐ＆ Ｔａ ｍ Ｊ １ ０１ Ｖｏ． Ｎｏ７ ｈ ｒｕ ａ ｕ． ０， １ ２ ２３， ．
，
・
综 述 ・
体外培养宁 赵
（ 京 大 学 医学 院 临 床 学 院 南京 军 区南 京 总 医 院 骨科 ， 苏 南京 南 江 ２００ ） １０ ２
ｃ ｎ ｔ ｃ ｉｎ ｏ ｓ ｕ ｎ ｉ ｅ ｒ ｄｂ ｎ ｂ ｌｎ ｅ ｅｂ ｄ ｅ ａ ｒ ｏ ｅｄ ｆ ｃｓ Ｉ ｉ ａ ｔ ｌ ｔｅ ｓ ｕ ｃ ｆ ｓｅ ｂａ ｔ ｏ ｓｒ ｔ ｆ ｉｓ ｅ ｅ ｇｎ ｅ ｅ ｏ ｅ， ｅ ｉ ａ ｔｄ ｉ ｔ ｏ ｙｔ ｒ ｐ ｉ ｎ ｅ ｅ ｔ． ｎ ｔ ｓ ｒ ｃｅ， ｏ ｒ ｅｏ ｔｏ ｌｓ ， ｕ ｏ ｔ ｍｐ ｎｈ ｏ ｂ ｈ ｉ ｈ ｏ ｒ ｇ ｌｔ ｒ ｃ ｏ ， ｏ ｏ ｉ ｒ ｆ ａ ｄ Ｃ ｉ ｅ ｅｍｅ ｉｉ ｅｒ ｓ ａ ｃ ｒ ｇｅ ｓ ｅ ｅｒ ｖ ｅ ｄ ｅ ｕａ ｏｙ ｆ ｔｒ ｃ ｍｐ ｓ ｅｇ ａ ｎ ｈ ｎ ｓ ｄｃ ｎ ｅ ｒｈ ｐ ｏ ｒ ｓ ｒ ｅ ｉｗｅ ． ａ ｔ ｔ ｅ ｗ Ｋｅ ｒ ｓ Ｏｓｅ ｂａ ｔ ； Ｃ ｌ ｃ ｌ ｒ ｅ ｈ ｉ ｕ ； Ｔ ａ ｓ ｌｎ ａ ｉｎ； Ｃ ｉ ｅ ｅｈ ｒ ａ ｄ ｕ ｓ ｙｗｏ ｄ ｔ ｏ ｌｓｓ ｅｌ ｕ ｔ ｅｔｃ ｎ ｑ ｅ ｕ ｒ ｎ ｐ ａ ｔｔ ｈ ｎ ｓ ｅ ｂ ｌ ｒ ｇ ｏ
间充质干细胞体外诱导生成软骨细胞的研究进展
限制 了细 胞 间信 号 传 递 。阻 碍 细 胞 因子 对 软 骨 细 胞 的调 节 作 用 ，影 响 软 骨 细 胞
既然骨髓 、 肪组织 、 带血 、 脂 脐 滑膜 、 的进 一 步 分 化 及 成 熟 。单 层 培 养 最 主 要
应 用 。间 充 质 干细 胞 （ ｓｎ ｈ ｍａ ｓ ｍ Ｍｅｅ ｃ ｙ ｌ ｔ 骨 骼 肌 、骨 膜 等 组 织 都 可 分 离 出间 充 质 的弊 端 ， 随着 传 代 次数 的增 多 ， 骨 细 ｅ 即 软 ｃｌ ） ｅ ｓ 由于 具 有 良好 的 多 向分 化 潜 能 、 ｌ 来 干 细 胞 。那 么 不 同 来 源 的 ＭＳ ｓ是 否 具 胞 会 出现 去 分 化 和 老 化 现 象 ，上 述 情 况 Ｃ 源 方便 等优 势 ，近年 来 日益 成 为 人 们 关 有 相 同的 分 化 能 力 ？ Ｓ ｋ ｇ ｃ ｉ 用 人 ａ ａ ｕ ｈ￣
发现 它还 可 以 向脂 肪 、 袭 性 软骨 缺损 通 常 由创 伤 及 关 节 了更 为 深 入 研 究 ，
寿 分 炎 等 原 因 引起 ， 一 种 常 见 的 骨 科疾 病 ， 肌 肉等 其 他 各 种 间 充 质 组 织 分 化 。也 正 充 质 细 胞 不 论 是 在 数 量 、 命 、 化 能 是 都 由于 软 骨组 织 无 血 管 、 经 和 淋 巴 管 ， 因如 此 ．人 们 将 这 些 成 纤 维 细 胞 集 落 形 力 等 方 面 ， 表 现 出 与 供 者 年 龄 呈 负 相 神 同 时 软 骨 细胞 代 谢 率 低 ．加 之 在 基 质 纤 维 成 单 位 定 义 为 问 充 质 干 细 胞 。后 来 的 研 关 的趋 势 ＿ 。 近年 来 ． 究 人 员 还 从 头 ４ ｌ 研 网中 的 增 生 和迁 移 受 限 。故 当软 骨 组 织 究 进 一 步 证 明 ．间 充 质 干 细 胞 是 一 种 来 皮 ＿、 水 ［ 、 周 膜 、 ６羊 ］ ７牙 １ 鼠类 前 列 腺 组 织 ９ １ Ｓ ｓ遗 并 受 到 破 坏后 ， 自行 修 复 能 力 非 常有 限 ， 源 于 中胚 层 的 具 有 高 度 增 殖 能 力 及 多 向 ［ 中 成 功 获 得 Ｍ Ｃ ， 憾 的是 ， 没 有 其 往 往 会 造成 不可 逆 转 的功 能 障 碍 ．从 而 分 化 潜 能 的 成 体 干 细 胞 ，不 仅 能 够 分 化 对 这 些 不 同 组 织 源 性 ＭＳ ｓ的软 骨 细 胞 Ｃ
成骨细胞的体外培养与鉴定
成骨细胞的体外培养与鉴定☆
王 勇平 ，廖 皴 ，蒋 矗
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王 勇平 ， 廖 皴 ，蒋 壶 ． 骨 细 胞 的 体 外 培 养 与 鉴 定 ［ ． 国 组 织 工 程 研 究 与 临 床 康 复 ，２ １ ， １ （３： ３ —２ ４ 成 Ｊ中 】 ０ １ ５３ ） ２ １ ３ ６ ６
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体外培养成骨细胞的研究进展
体外培养成骨细胞的研究进展
徐杨俊;赵建宁
【期刊名称】《中国骨伤》
【年(卷),期】2010(023)007
【摘要】随着体外细胞培养技术的发展,人们已经从许多动物的颅骨、骨髓基质、骨膜及骨外组织中成功培养出了具有典型成骨细胞特性的细胞,研究表明培养出的成骨细胞具有良好的生物学特性,在不同环境下可以形成骨组织,联合支架的应用,构建组织工程骨,将其植入体内修复骨缺损.现就成骨细胞的来源、分化调控因子、复合移植及中医药方面的研究进展作一综述.
【总页数】4页(P562-565)
【作者】徐杨俊;赵建宁
【作者单位】南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院骨科,江苏,南
京,210002;南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院骨科,江苏,南京,210002【正文语种】中文
【相关文献】
1.补肾方剂对成骨细胞体外培养干预的研究进展 [J], 贾英民;武密山;李恩
2.成骨细胞体外培养模型的研究进展 [J], 孙中洋;李东韬;赵学武;张舒
3.电离辐射对体外培养成骨细胞影响的研究进展 [J], 李玉梅;赵铱民
4.淫羊藿对体外培养成骨细胞影响的研究进展 [J], 孙海涛;丁仁
5.成骨细胞体外培养研究进展 [J], 徐展望;许波;李军
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体外诱导MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化模型的建立
体外诱导MC3T3-E1细胞向成骨细胞分化模型的建立1.包头医学院第一附属医院神经外科内蒙古包头 014030；2.包头医学院内蒙古包头 014030【摘要】目的观察MC3T3-E1细胞在体外诱导条件下成骨分化的特征及碱性磷酸酶（ALP）的表达情况。
方法将MC3T3-E1细胞于六孔板中培养，将含诱导剂（β-GP和抗坏血酸）的MEM-α培养基作为实验组，不含诱导剂的MEM-α培养基作为对照组，两组于第14天、21天是分别行茜素红染色，光学显微镜下观察细胞矿化情况；每隔两天换液一次并收集上清液进行碱性磷酸酶（AIP）活性检测。
结果培养第14天时两组均无矿化结节形成，第21天时实验组细胞出现明显矿化结节，对照组仍不明显；两组碱性磷酸酶（ALP）活性都于15天前呈上升趋势，其后呈下降趋势，实验组细胞活性明显高于对照组（p＜0.05）。
结论实验组细胞培养过程中矿化程度和碱性磷酸酶（ALP）活性都明显高于对照组细胞。
【中图分类号】R329.2【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）09-234-02骨组织的生理过程包括骨的形成和骨的吸收，其中成骨细胞参与骨细胞形成、分泌和矿化等一系列过程[1]。
MC3T3-E1细胞系来源于小鼠锁骨细胞，是作为体外研究成骨细胞模型的常用细胞[2]。
本实验通过利用含诱导剂（β-GP和抗坏血酸）的培养基和无诱导剂培养基分别培养 MC3T3-E1细胞，观察两组细胞在不同时间的矿化和细胞活性情况。
1材料和方法1.1材料和仪器MC3T3-E1细胞（协和医科大学，中国），MEM-α培养基（gibco，美国），胎牛血清（四季青，中国），青链霉素（gibco，美国）二氧化碳培养箱（Thermo，美国），β-甘油磷酸钠和抗坏血酸（华迈科，中国），茜素红染色液（leagene，中国），碱性磷酸酶试剂盒（碧云天，中国）。
1.2细胞培养将MC3T3-E1细胞接种于含MEM-α培养基（10%胎牛血清，1%青链霉素）的培养瓶内，放置于二氧化碳培养箱（37℃，5%CO2，潮湿）培养，每三天更换一次培养液，待细胞铺满瓶底的80%以上时，可用胰蛋白酶消化，进行传代、冻存或用于后续实验。
成牙骨质细胞培养方法的研究进展
成牙骨质细胞培养方法的研究进展杨力;蔡萍【摘要】由成牙骨质细胞(CB)形成的牙骨质在正畸治疗过程中有着重要的作用,但迄今为止,人们对于牙骨质和形成牙骨质的CB知之甚少.从CB着手建立体外培养的CB系,是进行该细胞研究的关键.下面就牙骨质瘤来源的CB、CD1小鼠来源的CB和牙周膜细胞、人牙骨质来源的CB、人牙骨质薄层刮取物来源的CB、大鼠第一磨牙来源的CB、人牙周膜来源的CB、牛牙骨质来源的CB、人CB细胞系克隆株来源的CB和马后牙来源的CB在体外的分离培养研究进展作一综述.【期刊名称】《国际口腔医学杂志》【年(卷),期】2010(037)001【总页数】3页(P68-70)【关键词】成牙骨质细胞;正畸治疗;生物学特性;细胞培养【作者】杨力;蔡萍【作者单位】武汉大学口腔医院正畸科,湖北,武汉,430079;武汉大学口腔医院正畸科,湖北,武汉,430079【正文语种】中文【中图分类】Q813.1+1牙骨质在牙周组织的发生、发育和再生中起着非常重要的作用，与正畸治疗亦密切相关[1-2]。
研究成牙骨质细胞（cementoblast，CB）能够帮助人们认识牙骨质及其生物学特性。
目前，世界上仅有少数实验室成功地建立了牙骨质来源细胞的体外培养体系并以此作了系列研究[3-6]。
Arzate等[7]培养的来源于人牙骨质瘤的CB，为多角形，其碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AKP）活性为阳性。
鉴别方法：牙骨质附着蛋白（cemetum attachment protein，CAP）抗体染色阳性，特异性抗体免疫组化和蛋白质印迹染色显示，这些细胞表达骨涎蛋白（bone sialoprotein，BSP）以及Ⅰ、Ⅴ型胶原，体外有矿化物形成。
体外培养的人牙骨质瘤来源的CB可以合成和分泌牙骨质蛋白，如相对分子质量为5.6×104的蛋白质、CAP、牙骨质衍生生长因子（cementum derived growth factor，CDGF）、血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor，PDGF）和成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor，FGF）。
比较不同来源人成骨细胞的体外培养模式及其生物学特性
比较不同来源人成骨细胞的体外培养模式及其生物学特性郭宗科;章庆国;李静;张娇【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2006(010)013【摘要】目的:建立不同来源人成骨细胞的体外培养模式,比较颅骨、骨膜、骨髓来源的成骨细胞的生物学特性.方法:实验于2002-9/2004-3在东南大学修复重建外科研究所完成.①从人4个月龄胚胎骨膜、颅骨及骨髓组织中分离培养出骨膜来源的成骨细胞,颅骨来源的成骨细胞和骨髓基质干细胞并对骨髓基质干细胞进行成骨诱导培养.②体外动态观察细胞的生长情况和形态学变化,用第2～4代细胞进行细胞鉴定和生物学特性的比较.③通过相差显微镜,Giemsa染色及透射电镜观察比较细胞的形态和超微结构,通过生长曲线,比较细胞的增殖能力.经碱性磷酸酶染色和钙结节染色比较细胞的成骨活性,并经X射线能量散射分析鉴定钙结节的元素成分.结果:培养的颅骨、骨膜来源的成骨细胞和在诱导培养下的骨髓基质干细胞具有成骨细胞的形态、生长及功能特点.骨膜、颅骨来源的成骨细胞以功能态为主,骨髓基质干细胞以增殖态为主.①体外增殖结果:3种细胞的增殖能力依次为:骨髓基质干细胞、颅骨来源成骨细胞、骨膜来源的成骨细胞.②形态学观察:第3代后3种细胞在形态上无明显的差别,在超微结构上骨膜来源的成骨细胞和颅骨来源的成骨细胞为高分化细胞,骨髓基质干细胞为低分化细胞.③成骨功能表达:骨膜来源成骨细胞第15天,颅骨来源成骨细胞第17天光镜下可见褐色的钙化结节形成,骨髓基质干细胞在诱导液条件下培养24 d时可见褐色结节;矿化结节X射线能量散射分析,其Ga/P元素含量比值,骨膜来源成骨细胞为2.16±0.17,颅骨来源成骨细胞为2.39±0.21,骨髓基质干细胞为2.57±0.15;骨膜来源成骨细胞的碱性磷酸酶染色阳性率为95.2%,颅骨来源成骨细胞为89.6%,骨髓基质干细胞(诱导后)为69.0%.骨髓基质干细胞(未诱导)碱性磷酸酶染色阴性.3种不同来源的人成骨细胞成骨能力依次为:骨膜来源的成骨细胞、颅骨来源成骨细胞、骨髓基质干细胞.结论:采用改良的酶消化法,培养骨、骨膜来源的成骨细胞,通过加以改进的密度梯度离心法,培养骨髓基质干细胞,可得到均一性好,活性强的3种不同来源的人成骨细胞.【总页数】3页(P50-52)【作者】郭宗科;章庆国;李静;张娇【作者单位】东南大学附属中大医院整形外科,东南大学修复重建外科研究所,江苏省,南京市,210009;东南大学附属中大医院整形外科,东南大学修复重建外科研究所,江苏省,南京市,210009;东南大学附属中大医院整形外科,东南大学修复重建外科研究所,江苏省,南京市,210009;东南大学附属中大医院整形外科,东南大学修复重建外科研究所,江苏省,南京市,210009【正文语种】中文【中图分类】R318【相关文献】1.人骨髓和脐带来源间充质干细胞体外分离培养及生物学特性比较 [J], 刘慧文2.幼年成骨细胞体外培养传代衰老与70岁以上老年人成骨细胞的生物学特性比较[J], 于明香;王洪复;金慰芳;顾淑珠3.人脐带血和骨髓来源间充质干细胞的体外分离、培养、分化及生物学特性比较[J], 于海微;李佩玲;庄如锦;李会明4.靶向抗骨肿瘤偶联物甲氨蝶呤-偕二磷酸对体外培养的人成骨细胞生物学特性的影响 [J], 杨效宁;裴福兴;曾建成;张晖;宋炎成;吴勇5.不同年龄人群来源长双歧杆菌体外生物学特性研究 [J], 闫爽;杨波;赵建新;张灏;陈卫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
成纤维细胞的生物学特性及其成骨作用的研究进展(一)
成纤维细胞的生物学特性及其成骨作用的研究进展(一)骨缺损(尤其是大型骨缺损)的治疗，由局部伤情复杂和缺乏理想的修复材料，一直是困扰临床医生和基础医学工作者的一大难题，而寻找一种尽可能达到或接近自体骨移植效果的理想的骨替代材料更是无数学者热切探索、孜孜以求的目标。
近年来日趋活跃的骨组织工程(bonetissueengineering)技术为这一课题的研究带来了新的亮点和希望。
目前动物实验已能从骨膜、骨髓等定向性骨祖细胞(determinedosteogenicprecursorcells,DOPC)密集处分离培养出成骨细胞，经体外扩增并与载体结合，回植体内骨缺损处取得骨缺损修复的成功〔1〕。
与此同时，基于对患者易接受性、可操作性和更简单易行性等方面的考虑，研究者又开始把目光投向诱导性骨祖细胞(inducibleosteogenicprecursorcells,IOPC)。
其中，在体内分布广泛、数量巨大、部位表浅、取材方便、培养传代易行、分裂增殖迅速的成纤维细胞首先成为了研究的焦点。
由于目前许多相关研究尚处于实验阶段，为此，本文着重就成纤维细胞的生物学特性及其成骨作用等作一综述。
1成纤维细胞的来源及其生物学特性成纤维细胞(fibroblast)是结缔组织中最常见的细胞，由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymalcell)分化而来。
在结缔组织中，成纤维细胞还以其成熟状态—纤维细胞(fibrocyte)的形式存在，二者在一定条件下可以互相转变。
不同类型的结缔组织含成纤维细胞的数量不同。
通常，疏松结缔组织中成纤维细胞的数量比同样体积的致密结缔组织中所含成纤维细胞的数量要少，故分离培养成纤维细胞多以真皮等致密结缔组织为取材部位〔2，3〕。
成纤维细胞形态多样，常见的有梭形、大多角形和扁平星形等，其形态尚可依细胞的功能变化及其附着处的物理性状不同而发生改变。
成纤维细胞胞体较大，胞质弱嗜碱性，胞核较大呈椭圆形，染色质疏松着色浅，核仁明显。
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等汜１将骨膜细胞接种到ＨＡ支架上进行培养，观测到ＨＡ上细
胞具有良好的活性，表达骨特定因子，如骨钙素和骨桥蛋白，
三维ＨＡ对骨膜间充质细胞的生长行为起着积极作用。从研
究中可知，骨膜源性细胞（ＰＤＣ）具有很强的增殖能力和分化 成骨潜能｛３１０
间充质干细胞（ＭＳＣｓ）是一种多潜能成体干细胞，主要存
其转变为既有较强增殖能力．又有较强成骨能力的标准细胞。
Ｏｓｔｅｆｉｘ（ＯＳＸ）ＯＳＸ是由Ｎａｋａｓｈｉｍａ等【１０１发现的成骨
非常复杂。ＣＧＲＰ影响成骨细胞内Ｃ矿浓度的作用机制尚需
要进一步研究。
２．５ ＩＧＦ＿ｌ
细胞特异性转录因子，只在发育的骨组织中特异性表达，是成 骨细胞分化和骨形成过程中所必需的转录因子。有研究表明 在ＯＳＸ基因剔除小鼠胚胎中，Ｉ型胶原ＲＮＡ水平在间充质 细胞密集的成骨部位，软骨膜及软骨中的表达均明显低于野
性调控者“５】。
骨组织生物相容性，适于作为骨内种植材料应用。朱元等∞’在 研究生物陶瓷对体外培养大鼠成骨细胞的影响时发现生物活 性陶瓷在体外与大鼠成骨细胞的复合培养中，对成骨细胞的 生长、增殖、生物活性等方面具有积极的影响。 目前成骨细胞的体外复合移植的研究主要集中在支架材 料的改性、细胞种植方法的改进和引进应力应变作用模拟细 胞在体内所处的微环境。进一步的研究需解决在保持材料骨 诱导、骨引导作用的同时提高其机械强度，促进新骨的形成和 支架降解的平衡、良好的增殖能力和成骨能力达到平衡、人工 骨的血管化等。
进异位成骨能力。 ２．３碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）ｂＦＧＦ是骨形成和 成骨细胞活动的一个重要调控因子，越来越多的研究证实
①无机盐类，ａ．钙磷陶瓷人工骨包括磷酸＝三钙（ＴＣＰ）和ＨＡ两 种主要材料－ｂ．煅石膏即干燥硫酸钙。②多聚体类．包括乳酸
（ＰＬＡ）和聚乙二醇酸（ＰＧＡ）。（彭天然聚合物类，主要有纤维蛋 白凝块（ＦＣ）或纤维蛋白牯合剂、胶原、不溶性非胶原蛋白等。
生型小鼠，同时，作为成骨细胞分化的早期指标中的ＢＳＰ在
既往研究表明，成骨细胞受机械刺激后表现为
增殖、胞外基质蛋白形成增加、骨架莺组、早期基因表达及一 些细胞因子表达变化，如ＩＧＦ－１、ＴＧＦ－Ｂ，其中ＩＧＦ—ｌｍＲＮＡ在 成骨细胞中的表达已成为骨形成与改建研究中的热点之一。
野生型小鼠骨组织内均高表达，而在ＯＳＸ（－／－）小鼠体内则未 检测到，另外两种成骨细胞标志性蛋白骨黏连蛋白和骨桥蛋
白也低于野生型小鼠，由此町见ＯＳＸ的缺失使成骨细胞的分
ＩＧＦ．１是一种多肽，可由成骨细胞分泌，并以自分泌和旁分泌 的方式促进细胞增殖分化和胶原合成。 除了以上几种调控因子外，参与骨形成调控过程的生长
因子还有骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）、转化生长因子（ＴＧＦ－Ｂ）、血 小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）、肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、结缔组织
ａ
ｔｙｐｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｆｒｏｍ
ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ ｈａｖｅ ｇｏｏｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｃａｎ ｃｒｅａｔｅ ｂｏｎｅ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ，ｃａｎ ａｐｐｌｙ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｓｓｕｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ
２成骨细胞的分化调控因子的研究进展 成骨细胞的分化是骨发生、骨形成的前提。成骨干细胞经
通讯作者：赵建宁Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｏｊｉａｒｍｉｎｇ．０２０７＠１６３．ｃ砌
万方数据
中国骨伤２０１０年７月第２３卷第７期Ｃｈｉｎａ ＪＯｒｔｈｏｐ＆Ｔｒａｕｍａ，Ｊｕｌ．２０１０．Ｖ０１．２３，Ｎｏ．７
・５６３・
过一步或几步分化为前成骨细胞，再继续分化为有功能的成 骨细胞。成骨细胞在分化过程中受到Ｏｓｔｅｆｉｘ、Ｃｂｆａ
ＣＧＲＰ、ＩＧＦ－ｌ等多种因子的调控。
２．１ １、ｂＦＧＦ、
胞内的Ｃａ榷度，进而改变成骨细胞的活性，但这一作用随着
细胞外环境的变化而变化，有时甚至可能完全相反。细胞内
Ｃ矿水平受到多种细胞因子和其他离子浓度的影响，其过程
复合物的黏附性增加。Ｌｅｅ等“８Ｊ发现壳聚糖生物材料可控释
放生长因子ＰＤＧＦ－ＢＢ增强骨形成．骨诱导性和骨传导力明显
不同成熟阶段的颅骨祖细胞来研究其对ｂＦＧＦ的反应，结果 显示ｂＦＧＦ可刺激大多数成熟骨细胞的增殖，ｂＦＧＦ可促进成
骨细胞内一些特异性生长因子蛋白如血管内皮细胞生长因子
增高。张春宝等“９１将成骨细胞种植于Ｔｉ－７５合金表面，细胞在
羟基磷灰石（ＨＡ）结晶。骨膜是骨骼膜性成骨的细胞来源，若 将体外培养的骨膜细胞移植入体内，在理论上能形成骨组织，
修复骨缺损，很多学者对此展开了研究并取得成功。Ｔｕｒｈａｎｉ
在不同来源成骨细胞的研究中，增殖能力以骨髓基质干
细胞最好，钙化能力以骨膜成骨细胞和松质骨成骨细胞最好， 而胶原合成，骨钙素表达以及碱性磷酸酶活性以骨膜成骨细 胞最好。组织工程化人工骨所需要的种子细胞应具备强的增 殖能力和良好的成骨功能，可见３种来源细胞都不能达到骨 组织工程的理想要求，解决组织工程种子细胞的途径是建立 标准成骨细胞系，通过基因工程技术对成骨细胞进行改造，使
ｊｏｉｎｔ
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ｂｏｎｅ，ｂｅ ｉｍｐｌａｎｔｅｄ
ｉｎ ｔｌＩｅ ｂｏｄｙ ｔｏ ｒｅｐａｉｒ ｂｏｎｅ ｄｅｆｅｃｔｓ．Ｉｎ ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ，ｔｈｅ
ｓｏｕｒｃｅ
ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ，ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｇｒａｆｔ ａｎｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｗｅｒｅ ｒｅｖｉｅｗｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ；Ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ；Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ；Ｃｈｉｎｅｓｅ ｈｅｒｂａｌ ｄｒｕｇｓ Ｚｈｏｎｇｇｕｏ Ｇｕｓｈａｎｇ／Ｃｈｉｎａ Ｊ Ｏｒｔｈｏｐ＆Ｔｒａｕｍａ，２０１０，２３（７）：５６２－５６５ ＷＷＷ．ｚｇｇｓｚｚ．ｃｏｒｎ
ｌ成骨细胞的来源
在于骨髓，还存在于胚胎时期间充质来源的骨外组织，如脂肪
干细胞、血管内皮细胞、胚胎干细胞等。骨髓ＭＳＣｓ在体外适
当的培养条件下，具有向成骨细胞方向分化潜能。Ｇｒｏｎｔｈｏｓ等［４］
把人骨ＭＳＣｓ分离体外扩增后与ＨＡ／磷酸三钙载体复合，再 植入裸鼠背部皮下，发现载体周围有骨髓和新骨组织形成，而 且通过原位杂交显示新骨组织中的骨细胞是人来源。Ｃｏｗａｎ 等【５一和Ｗａｎ等【６３研究发现小鼠脂肪来源基质细胞诱导分化的 成骨细胞体内移植成功的修复了颅盖骨缺损。近年来对脐血
构型和生物支撑作用、成骨效果能与自体骨媲美的新型骨替 代材料，植人体内修复大的骨缺损，近年来发展很快。
目前研究的复合载体根据支架材料的特性可分为几类：
作用。原泉等”２ ３通过观察Ｃｂｆａｌ基因转染的人骨髓基质干细 胞（ｈＢＭＳＣｓ）复合生物衍生骨支架异位成骨的效果发现 Ｃｂｆａｌ基因转染骨ＭＳＣｓ．能够诱导其向成骨细胞分化、上调 骨形态发生蛋白基因表达并提高移植细胞的生存率，明显促
细胞。此外Ｗａｎ等渴。报道外周血来源间充质细胞能够向成骨
成骨细胞增殖．代谢及钙化的能力发现，来自兔盖骨的成骨细
胞具有较高的增殖能力，但碱性磷酸酶的生成较低，而且兔盖 骨来源的成骨细胞在体外培养中可以形成有序的钙化结节和
细胞分化，并参与骨损伤修复。Ｈｅｎｎｉｎｇ等旧１研究羊水来源间
充质细胞向成骨细胞诱导分化，研究结果显示其增殖、分化能 力比成人组织来源的ＭＳＣｓ更强，作为组织工程种子细胞也 更为理想。
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ｈ贴壁率达到８４．３８％，细胞ＡＬＰ活性和蛋白质合成量在
培养第７天后出现明显增大趋势，表明Ｔ ｉ－７５合金具有良好
（ＶＥＧＦ）、转化生长因子一Ｂｌ（ＴＧＦ一６１）和骨形态发生蛋白・２ （ＢＭＰ．２）等的表达，并通过后者发挥其促进成骨与血管形成 的效应。有研究证实ｂＦＧＦ可促进成骨细胞表达ＴＧＦ．Ｂ１，并 通过后者上调ＶＥＧＦ的合成和分泌，从而促进血管形成“…。 ｂＦＧＦ还可促进ＢＭＰ－２的表达，阻断ｂＦＧＦ的信号转导通路可 导致ＢＭＰ一２基因表达急尉下降。有学者证实外源性ＦＧＦ／ ＦＧＦＲ信号转导是颅骨成骨细胞的ＢＭＰ－２基因表达的上游正
Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｇ ｓｔｕｄｙ ｉｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ ＡＢＳＴＲＡＣＴ ＸＵ Ｙａｎｇ—ｊｕｎ，ＺＨＡ０ Ｊｉａｎ－ｎｉｎｇ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆ
Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃｓ，ｔｈｅ
ｏｆＮａｎｊｉｎｇＭｉｌｉｔａｒｙＡｒｅａ，ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎ９２１０００２，ＪｊｆⅡ，ｌ伊Ｈ，Ｃｈｉｎａ
生长因子（ＣＴＧＦ）等，这些因子相互作用，相互影响，共同调节 成骨细胞的分化。
３成骨细胞复合移植的研究进展
随着分子生物学和生物材料学的发展，以组织工程技术
方法培养出既具有成骨细胞的成骨活性，又具有一定的空间
的特异性转录因子，Ｃｂ缸ｌ基因是骨形成的关键基因，调控成
骨细胞发育、分化和骨的形成，对骨的形成及发育起着重要的
ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｓｋｕｌｌ，ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ，ｐｅｒｉｏｓｔｅｕｍ ａｎｄ ｂｏｎｅ ｔｉｓｓｕｅｓ；ｓｔｕｄｉｅｓ ｈａｖｅ ｈ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ，ｐｅｏｐｌｅ ｈａｖｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｏｆ
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中国骨伤２０１０年７月第２３卷第７期
Ｃｈｉｎａ Ｊ
Ｏｒｔｈｏｐ＆Ｔｒａｕｍａ，Ｊｕｌ．２０１０，Ｖ０１．２３．Ｎｏ．７
・综述・ 体外培养成骨细胞的研究进展
徐杨俊，赵建宁
（南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院骨科，江苏南京２１０００２） 【摘要】 随着体外细胞培养技术的发展，人们已经从许多动物的颅骨、骨髓基质、骨膜及骨外组织中成功培养出