纤溶酶产生菌的诱变育种及其发酵条件的研究

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高产纤溶酶突变株的筛选及发酵条件的优化

高产纤溶酶突变株的筛选及发酵条件的优化
单金津;李靖圆;谢和
【期刊名称】《贵州农业科学》
【年(卷),期】2013(041)006
【摘要】为给纤溶酶的开发应用提供理论依据,以解淀粉芽孢杆菌GZJSI-12为出
发菌株,对高产纤溶酶突变株进行了筛选,并优化了发酵条件.结果表明:经紫外线和2.5％硫酸二乙酯复合诱变获得稳定突变株GZJSI-12-1,菌株产酶活力达1
593.591IU/mL,是出发菌的2.22倍.最佳发酵条件为pH(灭菌前)9.5、接种量6％、装液量30mL/250mL.活力回收率为6.30％,纯化倍数为7.90,比活为
6383.06IU/mg.
【总页数】5页(P110-114)
【作者】单金津;李靖圆;谢和
【作者单位】贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学生命科学学院,贵
州贵阳550025;贵州大学生命科学学院,贵州贵阳550025
【正文语种】中文
【中图分类】S154.34
【相关文献】
1.高产纤溶酶霉菌固体发酵工艺条件的优化 [J], 闵伟红;李佳;王影;张锦玉;李玉
2.角质酶产生菌Thermobifida fusca WSH03-11诱变及高产突变株发酵条件优化[J], 张守亮;陈坚;华兆哲;堵国成
3.纤溶酶高产菌株筛选及其液体发酵条件研究 [J], 周伏忠;贾蕴莉;陈国参;谢宝恩;王红云
4.高产纤维素酶突变株的筛选及其产酶条件优化 [J], 邹宗胜;王婧雅;赵运英;毛银;邓禹
5.枯草芽孢杆菌产生在β－葡聚糖酶的研究：高产突变株CW－06的选育及其发酵条件的优化 [J], 黄为一;吴江;陈代杰
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发酵液中纤溶酶盐析法分离纯化的研究

填料价格相对较高，常污染色谱填料及减少分离的载量，难以彻底再
生，严重影响色谱填料分离度和使用寿命。因此，酶在精提纯之前，必须
先除去伴有的色素物质。本研究在纤溶酶产生菌发酵条件的优化基础
上［２］，对酶液的纯化方面进行了细致的研究，得以纯化。研究结果在其它
微生物发酵酶液的纯化方面具有一定的借鉴意义。
1. 材料与方法
７４．３５
（下转第６４页）
作者简介：韩涛（１９７２－），男，研究生，从事微生物发酵及生物制药方面研究；李宝库，通讯作者。
— ６３ —
科技信息
高校理科研究
“平面四杆机构急回特性”CAI 课件及其应用研究
宜兴技师学院蒋碧亚
［摘要］本文介绍了机械基础ＣＡＩ课件“平面四杆机构急回特性”的研制目的，结构特点和独特的动画构思，以及该课件在教学实践中的应用和教学效果。［关键词］平面四杆机构急回特性计算机辅助教学课件
脑血栓、肺血栓、急性心肌梗死等疾病严重危害人类健康，研发高
效、廉价、不良反应小的溶栓药物已成为医药界关注的热点［１］。纤溶酶是
一种催化纤维蛋白水解酶，并导致血管内凝块溶解的蛋白水解，为了阐
明它的性质、结构与功能，必须获得酶的纯品。
微生物发酵法生产的纤溶酶具有很好的溶栓效果，但发酵液中存
在的一些杂质物质给酶的分离纯化增加了难度，液相色谱精提纯方法，
１．３．１发酵液处理由于纤溶酶对热、ｐＨ较为敏感，故应在低温、自４０％，５０％，６０％、６５％、７０％，７５％，室温静置过夜，过滤，取续滤液分别测
然ｐＨ条件下进行离心。即发酵液经４℃、５０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ处理。定酶活力，得盐析曲线结果如图２。

海洋源纤溶酶高产菌株的诱变育种及液体培养基优化

ｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．ＡｆｔｅｒｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓｂｙＣｏｒａｄｉａｔｉｏｎ，ａｍｕｔａｎｔｓｒａｔｉｎＦ８一Ｃｗｉｈｔｇｏｏｄｇｅｎｅｔｉｃｓｔａｂｉｌｉｙｔｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ，ａｎｄｈｅｔｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｙｔ
３．ＣｏＨｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｓｉｒｙｔ，Ｎａｔｍｉｎｇ５３０００４，Ｃｈｎａｉ）
２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｙｏｒｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｉｔｏｎｆｏｒＭｉｃｒｏｂｉａｌｎｄＰａｌａｎｔＧｅｎｅｉｔｃＥｎｇｉｎｅｅｉｒｎｇ，ＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｓｉｒｙ，ｔＮａｎｎｉｎｇ５３０００４，Ｃｈｉｎａ；
Ｍｕｔａｔｉｏｎｂｒｅｅｄｉｎｇｏｆｓｔｒａｉｎｓｗｉｔｈｈｉｇｈｉｆｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃａｃｉｔｖｉｔｙｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｍａｒｉｎｅａｎｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｉｔｓ１ｉｑｕｉｄｆｅｒｍｅｎａｔｔｉｏｎｍｅｄｉｕｍ

纤维素酶高产菌株诱变选育及固体发酵研究

纤维素酶高产菌株诱变选育及固体发酵研究
何海燕;张健;覃拥灵
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2012(033)010
【摘要】对灰白青霉HML0233进行紫外诱变,从中出筛选出比出发菌株FPA酶活提高了66.6％的突变菌株HBQ14,酶活提高到1.46× 10-7 kat/mL,经过发酵条件初步优化研究,以NH4NO3为氮源,40 ℃,pH5.5培养4d,FPA酶活达到2.35× 10-7 kat/mL,灰白青霉HBQ14遗传性状稳定.
【总页数】4页(P149-152)
【作者】何海燕;张健;覃拥灵
【作者单位】河池学院化学与生命科学系,广西宜州546300;广西卫生职业技术学院,广西南宁530021;河池学院化学与生命科学系,广西宜州546300
【正文语种】中文
【相关文献】
1.β-葡萄糖苷酶高产菌株的诱变选育及固体发酵条件的研究 [J], 杨建海;任大明
2.N＋注入诱变选育纤维素酶高产菌株及发酵产酶营养因子优化研究 [J], 张宁;蒋剑春;杨静;卫民;赵剑;童娅娟
3.匍枝根霉纤维素酶高产菌株的诱变选育及发酵优化 [J], 郑贤金;汤斌
4.匍枝根霉纤维素酶高产菌株的诱变选育及发酵优化 [J], 郑贤金; 汤斌
5.纤维素酶高产菌株的诱变选育及产酶条件研究 [J], 董志扬;祝令香;于巍;林敏;平淑珍
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细菌纤维素高产菌株的诱变选育和发酵条件研究

细菌纤维素高产菌株的诱变选育和发酵条件研究汤卫华，李飞，贾原媛，贾士儒（天津科技大学工业微生物教育部重点实验室，天津300457）摘要：为了选育高产细菌纤维素的木葡糖酸醋杆菌（（Gluconacetobacter oboediens）突变菌株，通过硫酸二乙酯和氯化锂复合诱变，得到一株产细菌纤维素能力最高的突变菌株GO2，其细菌纤维素产量为9.91 g/L，比出发菌株提高36.5%。

同时确定突变菌株GO2的静置培养条件为发酵时间为6 d，接种量为8%(v/v)，面积/体积比为1.58~2.08 cm-1。

关键词：细菌纤维素；木葡糖酸醋杆菌；化学诱变；发酵条件中图分类号：Q93；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2009)09-1016-04Screening and Fermentation Conditions of Strains from Gluconacetobacter oboediens for High-yield Bacterial Cellulose ProductionTANG Wei-hua, LI Fei, JIA Yuan-yuan, JIA Shi-ru（Key Laboratory of Industrial Microbiology, Ministry of Education, Tianjin University of Science and Technology,Tianjin 300457, P. R. China.）Abstract: The bacterial cellulose (BC)-producing strain (Gluconacetobacter oboediens) was mutagenized with diethyl sulphate (DES) and lithium chloride (LiCl), and the mutants of strain GO, namely GO2, was obtained. The BC production by GO2 (9.91 g/L) was about 1.365-fold higher than that of the original strain. The optimum fermentation conditions were determined as follows: fermentation time of 6 days, inoculation volume of 8%(v/v) and area/volume ratio of 1.58-2.08 cm-1.Key words: Bacterial cellulose; Gluconacetobacter oboediens; chemical mutagenesis; fermentation conditions细菌纤维素因其具有高结晶度、高化学纯度、高抗张强度、高弹性模量、高持水性等独特的性质，在食品、医药、造纸行业均有巨大的应用潜力[1]，但由于细菌纤维素产率低，而造成生产成本高，使其仅用于高附加值产品。

纤维素酶产生菌黑曲霉的选育及其产酶条件的研究

Breeding of Aspergillus Niger and Study of Its Conditions for Producing Cellulase
SU Xiang-ping，GONG Da-chun ，ZENG Jing and YIN Jia-hong
(College of Chemistry and Life Science, Three Gorges University, Yichang, Hubei 443002, China) Abstract: The breeding of high-cellulase-yield strains was operated and the fermentation conditions of the selected strains were studied. As.niger strain S1 was used as mutan strain for ultraviolet irradiation and the cellulase-producing conditions of the mutant strain were optimized through single-factor test and orthogonal test. Finally a high-cellulase-yield strain As. niger S12 was obtained and its optimum cellulase-producing conditions were summed up as follows: pH value was 6.0, culture temperature was at 28 ℃ and 96 h culture time, the use level of stalk meal and wheat bran and 1 % (NH4)2SO4 were 2.5 g, 2.5 g and 10 mL respectively. Under the above conditions, its enzyme activities toward filter paper (FPA), CMCase and β-glucosidase reached 3.79 IU/mL, 19.06 IU/g and 47.33 IU/mL respectively (increased by 1.20, 1.70 and 1.13 times, respectively). Key words: Aspergillus niger; cellulase; mutation breeding

纤溶酶产生菌中华根霉12~#的诱变选育

纤溶酶产生菌中华根霉12~#的诱变选育
李树文;刘晓兰;杜连祥;路福平;咸洪泉
【期刊名称】《工业微生物》
【年(卷),期】2010(040)001
【摘要】以产纤溶酶菌中华根霉12~#为出发菌株,以SDS为抗性因子,紫外线为诱变剂,通过液体发酵的方式筛选高产菌株.共得到48株SDS抗性突变株,命名为LH-系列.经过筛选,得到了1株遗传稳定、酶活力提高了120%左右的高产菌株LH-45,以及2株具有潜在高产能力的突变株LH-15和LH-28.
【总页数】5页(P50-54)
【作者】李树文;刘晓兰;杜连祥;路福平;咸洪泉
【作者单位】青岛农业大学生命科学学院,青岛,266109;齐齐哈尔大学生命科学与工程学院,齐齐哈尔,161006;天津科技大学,天津,300222;天津科技大学,天
津,300222;青岛农业大学生命科学学院,青岛,266109
【正文语种】中文
【相关文献】
1.产纤溶酶菌株根霉12#的诱变育种及固态发酵培养基的优化 [J], 刘晓兰;杜连祥;路福平;凌洪博
2.固体豆粕为氮源根霉12#产纤溶酶液体发酵条件的优化 [J], 李树文;刘晓兰;杜连祥;咸洪泉
3.根霉12#发酵生产纤溶酶的分离纯化 [J], 郭利美;王腾飞;国天庆;李春磊;胡敏
4.根霉12#发酵产生纤溶酶的酶学性质 [J], 杜连祥;刘晓兰;路福平;肖静;郑喜群
5.根霉12~#发酵产纤溶酶及分离纯化的探索 [J], 国天庆;贺强之;季斌;彭维盈因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

平菇深层培养产纤溶酶的条件研究

Ａｂｔｃ：Ｔｉｐｐｒｆｃｓｓｏｐｉｚｔｎｏｕｍｅｇｄｆｒｎａｉｎｃｎｉｏｆｔｅｆｒｎｌｔｎｙｌｒｄｃｄｆｍｓａｔｒｈｓａｅｏｕｅｎｏｔｍｉｉｆｓｂｒｅｅｍｅｔｔｏｄｔｎｏｈｂｉｏｙｉｅｚｎｅｐｏｕｅｒａｏｏｉｉｃｏ
关键词：平菇；深层培养；纤溶酶中图分类号：￥４．６６１文献标志码：Ａ
ｄｉ１．６／ｓｎ１７ — ６６Ｃ．１．２０ｏ：０３９ｊｓ．１９４（）０００．７９ｉ６２０
ＡｎＩｖｓｉａｉｎｏｕｍｅｇｄＦｒｎａｉｎＣｏｄｔｏｆａＦｉｒｎｌｔｚｍｅｎｅｔｇｔｏｎＳｂｒｅｅｍｅｔｔｏｎｉｎｏｂｉｏｙｉＥｎｙｉｃＰｒｄｃｄｆｏＰｅｒｔｓＯｓｒａｕｓｏｕｅｒｍｌｕｏｕｔｅｔ
２５ ℃ ．ｔｏａｉｎｓｅｆ１０ｒｒｉａｄｅｍｅｔｔｉｆ６ｄ．Ｕｎｄｅｕｈｃｎｄｔｎｓｔｈｅｒｔｔｏｐｅｄｏ／ｎｎａｆｒｎａｉｔｍｅｏ５ａｏｎｒｓｃｏｉｉ．ｈｅｐＨｃｉｉｂｉｌｔｃｏａｔｖｔｆｒｎｏｙｉｙｉ
・
பைடு நூலகம்
３１・
第２期（第２０期）总０２０年２月０１
农产品加工・新版创
ＩｎｖｔｎａｉｏｆＦｒＰｏｕｔｏｅｓｎｎｏａｉｌＥｄｔｎｏａｍｒｄｃｓＰｒｃｓｉｇｏｉ

纤溶酶产生菌原生质体形成与再生条件的探索

摘要：本文研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解ｐ、温度、Ｈ渗透压稳定剂及青霉素对枯草芽孢杆菌Ｄ．原生质体形成和再Ｃ１２生的影响。确定了Ｄ．原生质体最佳的形成和再生条件是以改良Ｈ高渗溶液作稳渗系统，在ｐ．Ｃ１２ＭＨ７、酶浓度为０ｍ／ｌ活力５．ｇ（２ｍ
ＡｂｔａｔＴｅｅｅｔｆｉｅｅｔａｔｒ，ｕｈａｇ，ｙｏｙｏａｅｅｚｍａｃｔ，ｈＨａｕ，ｅｅａｕｅｏｍｏｃｓｂｌｅ，ｎｓｒｃ：ｈｆｃｓｆｒｎｃｏｓｓｃｓｅｌｓｚｍｅｓｇ，ｎｙｔｍｅｔｅｏｄｆａｄｉｉｐｖｌｅｔｍｐｒｔｒ，ｓｔｔｉｚｒａｄｉａｉｐｎｃｌｏｒｔｐａｔｏｍａｏｄｒｇｎｒｔｎｏＢａｉｕｔｌＤＣ一２ｗｅｅｓｄｅ．ｅｍｏｔｓｉｂｅｈｐｒｎｃｂｆｅ，ｕｔｒｍｅｅｉｉｍ，ｎｐｏｏｌｒｔｎａｅｅａｉｆｃｌｓｓｉｓｌｓｆｉｎｅｏｌｌ１ｒｔｉｄＴｓｕｔｌｙｅｔｉｕｒｃｌｅｔ，ｕｈａｏｕｉ
ｗｈｃｈｔｆｒｔｐａｔｏｍａｏｎｄｒｇｅａｏｉｈｔｅｒｅｏｐｏｏｌｆｒｔｎａｅｒｔｎｗｅ９．％．ｆ．ｍｏ／ａｓｉｅｎｉｅｒ５８ＩＯ６ｌＬＮａＷａｕｅｓｅｒｇｅａｉｎｈｐｒｎｃｂｆｒｔｅｒｔｏＣ１ｓｓｄａｔｅｒｔｈｅｎｏｙｅｔｉｕｅ，ａｅｆｏｈｐｏｏｌｔｏａｏｎｄｒｇｅａｉｎＷａ２、％．ｒｔｐａｆｒｔｎａｅｅｒｔｓｍｉｎｏｓ１６

微生物发酵生产纤溶酶及其酶学性质的研究进展

＊收稿日期：０２—０２０８１
２０年第３０２期
根据筛选的纤溶酶产生菌的形态特征、养特培
征、生理生化特征进行菌种鉴定。
１．３酶活测定方法
关键词：纤溶酶；酵；活测定；学性质发酶酶
中图分类号：ＴＱ９０１２．文献标识码：Ａ
ＰｒｇｅｓｏｒｅａｔｏｄＣｈａａｔｒｚｉｎｏｒｓｎＦｅｍｎｔｉｎａｎｒｃｅｉａｔｏ
维普资讯
，）食．
品与崖磅
ＳｉｌｕａｎＦｏｏｄｃ１ｎｎｄＦｒｍｅｌｔｔｔｌｌｎｏｌ
文章编号：６１８２２０）３０７—０１７ —６９（０２０ —０３２
ＡｂｔａｔＴｈｅｍｅｔｔｎａｄａｔｖｔｅｅｔｎａｄｃａａｔｒｚｔｎｏｒｂｉｄｔｎｙｒｎｒｄｃｄｉｔｓｓｒｃ：ｅｆｒｎａｉｎｃ：ｉｙｄｔｃｉｎｈｒｃｅｉａｉｆｆｉｒｎｙｉｅｚｍｅｗｅｅｉｔｏｕｅｎｔｉｏ，ｏｏｃ￣
培养基灭菌一冷却一接人菌种一发酵液一离心
一
收集上清液
溶活性物质的芽孢杆菌、霉菌、孢菌、霉菌。曲镰根
本文就微生物来源的纤溶酶发酵生产、学性质作酶
一
１２２产酶条件选择和优化．．进行碳源、源、氮无机盐等最适培养基配方的确定以及研究ｐ温度、床转速、种量对产酶的Ｈ、摇接影响。韩润林等（００年）２０以恒通气速率为参照对

产纤维素酶菌株的诱变选育及其产酶条件的研究的开题报告

产纤维素酶菌株的诱变选育及其产酶条件的研究的开题报告一、选题的背景和意义纤维素酶是一种能够分解纤维素的酶类，在生物质转化和生物能源开发等方面具有重要的应用价值。

为了提高纤维素酶的产量和活性，在菌株的筛选和培育过程中，经常需要进行诱变和选育。

因此，选取适合产纤维素酶的菌株进行诱变选育，并优化其产酶条件，对于提升纤维素资源的利用价值和推广生物质转化技术具有重要的意义。

二、选题的研究内容和目标本项目旨在通过对已有的纤维素酶菌株进行化学和物理诱变，筛选出高产酶的菌株，并进一步研究其最适产酶条件，包括培养基种类、培养温度、pH值、添加物质等，以提高该菌株的产酶效率。

三、研究方法和流程1. 选取适合产纤维素酶的菌株，并进行化学和物理诱变。

2. 筛选高产酶的菌株，利用UV–Vis分光光度计测定菌株的纤维素酶活性。

3. 最优化产纤维素酶的条件，包括培养基种类、培养温度、pH值、添加物质等，以提高该菌株的产酶效率。

4. 总结实验结果，分析选育纤维素酶菌株和优化菌株产酶条件的可行性。

四、预期成果1. 筛选出高产酶的纤维素酶菌株。

2. 确定该纤维素酶菌株的最优产酶条件。

3. 提供产纤维素酶的菌株和产酶条件的优化方法，为生物能源技术的发展提供参考。

五、研究难点和解决方案1. 针对化学和物理诱变的不确定性，需要进行多次诱变筛选，并通过活性检测和基因检测等方式评估其效果。

2. 在优化产酶条件方面，需要耗费大量时间和物质进行试验比对，需要合理规划实验设计，同时避免浪费和重复。

六、研究的预期意义本研究的成功将为开发和利用纤维素资源提供更加高效的技术支持，为生物能源领域的发展做出贡献。

同时，该研究也为纤维素酶在环境修复、饲料添加、生物降解等领域的应用提供了新思路和支持。

产纤溶酶米曲霉的筛选及诱变育种

对目前溶栓剂存在的不足，图从几种酿造用的大试
纤溶酶安全无毒副作用，工业化等优点［，易２因此］自从１８９７年日本学者从纳豆中发现纳豆激酶以
ｈｕｓｏｒ．
Ｋｅｒｓｉｒｎｌｔｃｅｚｍｅｙｗｏｄ：ｆｉｏｙｉｎｙ；ＡｓｅｉｌｓＯｒｚｅ；ｓｒｅｉｇｍｕａｅｅｉｂｐｒｌｕｙａｃｅｎｎｔｇｎｓｓ
血栓病是严重危害人类健康的常见病、发多病，死亡威胁最大的疾病之一，且血栓病的发是而
ＡｂｔａｔＡｐｒｌｕｙａｔａｎＳ６ｗａｓｌｔｄｗｉｈｄｆｅｅｔｓｒｅｉｇｍｅｈｄｎｈｓｒｃ：ＡｓｅｉｌｓＯｒｚｅｓｒｉ，Ａ－ｓｉｏａｅｔｉｒｎｃｅｎｎｔｏｓａｄｔｅｆ
来，在研究人员寻找新的溶栓剂时，生物来源纤微溶酶一直是国内外学者研究的热点，现在已经有到
病率呈逐年增加的趋势。溶栓疗法是治疗血栓病的一种有效疗法，但是目前临床使用的溶栓剂存在特异性差，用时间短，作用大，格昂贵等缺作副价点［，１因此寻找高效溶栓剂是国内外医学界重点攻］
ｗｈｃｓ．２ｉｓｉｈｒｈｎｈｔｆＡ－．Ｃｍｐｒｎｗｉｈｈｓａｔｇｔａｎ，ｔｅｉｈｗａ１５ｔｍｅｈｇｅｔａｔａｏＳ６ｏａｉｇｔｔｅｔｒｉｓｒｉｎｈａｐａａｃｉｆｔｘｍｕｆｂｉｏｙｉｎｙｅｐｏｕｔｏｆｔｅｍｕａｔｗａｅａｅ０ｐｅｒｎｅｔｍｅｏｈｅｍａｉｍｉｒｎｌｔｃｅｚｍｒｄｃｉｎｏｈｔｎｓｄｌｙｄ１

高产纤维素酶生产菌的筛选及诱变育种

14
1.1.3 试剂 1mg/mL 葡萄糖标准液: 葡萄糖置于 110℃烘箱
中烘 2h 至恒重，称取 0.1g 烘好的葡萄糖，溶解并定容至 100mL。
0.01M 乙酸-乙酸钠缓冲溶液 (pH4.8):A 液：冰醋酸 6mL，蒸馏水定容至 1000mL，配制成 0.1M 醋酸溶液；B 液：称取 8.2g 醋酸钠，蒸馏水定容至 1000mL，配制成 0.1M 醋酸钠溶液；以 A：B=4：6 的比例混合，低温冷藏备用。
5g 固体曲湿料加 50mL 去离子水，30℃ 浸提 6min，纱布过滤，3000r/min 15min，上清液即为用于测定的固体曲酶液。 1.2.4.2 DNS 法测定波长的确定
取 0.5mL 葡萄糖标准液及 0.5mL 蒸馏水分别置于 25mL 试管中，再各加 2mL DNS 试剂，沸水浴加热 5min，流水冷却，蒸馏水定容至 25mL。将 DNS 试剂-水(空白)、葡萄糖显色液-DNS 试剂(空白)分别在波长 400nm～600nm 范围内进行扫描。 1.2.4.3 葡萄糖标准曲线的绘制
第 46 卷（总第 155 期）
Food and Fermentation Technology
第 46 卷（第 1 期） Vol.46，No.1
高产纤维素酶生产菌的筛选及诱变育种
方尚玲，杨丹丹，钱志伟，李小强，陈茂彬*
（发酵工程省部共建教育部重点实验室，湖北工业大学生物工程学院，湖北武汉 430068）
取 8 支洗净烘干的 25mL 比色管，编号后按表 1 加入标准葡萄糖溶液和蒸馏水，配制成一系列不同浓度的葡萄糖溶液。充分摇匀后，向各试管中加入 2mLDNS 溶液,沸水浴 5min，取出冷却后用蒸馏水定容至 25mL，充分混匀。在选定波长下，以 1 号试管溶液作为空白对照，测定其它各管溶液的 OD 值并记录结果。以葡萄糖含量（mg）为横坐标，以对应的 OD 值为纵坐标，绘制出葡萄糖标准曲线。 1.2.4.4 内切纤维素酶活[8](Cx，CMC 酶活)

纤溶酶生产菌株的筛选、诱变及发酵工艺的研究的开题报告

纤溶酶生产菌株的筛选、诱变及发酵工艺的研究的开题报告题目：纤溶酶生产菌株的筛选、诱变及发酵工艺的研究一、研究背景和意义：纤维蛋白溶解酶（Fibrinolytic enzyme，简称纤溶酶）是一种能够溶解纤维蛋白、促进纤维蛋白溶解产物清除的酶类。

具有抗凝、抗炎、抗菌、消肿解毒等多种生物学活性，对心血管病等疾病的治疗具有重要意义。

因此，纤溶酶的研究和开发一直受到广泛关注。

目前，纤溶酶的生产主要依靠微生物发酵技术，而纤溶酶生产菌株的筛选和诱变则是提高纤溶酶产量和活性的重要途径。

同时，在生产过程中优化发酵工艺也是提高纤溶酶产量和活性的关键，因此对纤溶酶生产菌株的筛选、诱变及发酵工艺的研究具有重要意义。

二、研究内容和方法：本研究将以呈现高纤溶酶产能的菌株为基础，对其进行诱变，试图获得更高的纤溶酶产量和活性。

同时，将对不同变异菌株进行筛选，优选出纤溶酶产量和活性较高的菌株，并探索其发酵工艺进行优化。

具体的研究过程将包括以下方面：1. 纤溶酶生产菌株的筛选：根据文献报道，寻找已知纳种中纤溶酶活性较高的菌株作为研究对象，或从样品中分离获得纤溶酶生产菌株进行初步筛选。

2. 诱变：采用物理法和化学法对纤溶酶生产菌株进行诱变，通过比较不同变异菌株的纤溶酶产量和活性来优选变异菌株。

3. 发酵条件优化：对优选的纤溶酶生产菌株进行发酵条件的优化，包括菌种预处理、发酵温度、pH值、培养基配方等。

4. 纤溶酶产量和活性的测定：采用UV吸收光度法测定纤溶酶产量，同时采用凝块酶法和定量法测定纤溶酶活性。

三、预期结果和意义：本研究预期可以有效地筛选和诱变出纤溶酶产量和活性较高的菌株，并且可以优化其发酵工艺，进一步提高纤溶酶的产量和活性。

同时，对纤溶酶的生产技术和应用也将有所贡献。

诱变育种提高纤维素酶产生菌的产酶效率的研究

毕业论文题目：诱变育种提高纤维素酶产生菌的产酶效率的研究学院：专业：生物工程学生姓名：学号：指导教师：职称：副教授题目类型: ☐理论研究☑实验研究☐工程设计☐工程技术研究☐软件开发2016年5 月30 日本研究主要是以课题组前期筛选出来的产酶能力较高的霉菌21-29为出发菌株，对其进行硫酸二乙酯和紫外的复合诱变选出正突变菌株。

首先对进行硫酸二乙酯诱变选出正突变菌株；然后以选出的正突变菌株为出发菌株，对其进行紫外诱变选出正突变菌株；最后再对选出的正突变菌株进行固体发酵。

通过单因素实验优化菌株产纤维素酶的发酵条件，分别考察了发酵时间、接种量、C：N和种龄对纤维素酶酶活力的影响，得出最佳的发酵条件；用优化的发酵条件来对选出的菌株进行传代培养来确定其遗传稳定性，确定菌株是否能应用于生产。

结果表明：通过硫酸二乙酯诱变选出的正突变菌株DES-1，液体发酵酶活达到0.2273 U/ml，比未诱变的出发菌株21-29提高了11.4%。

通过紫外诱变选出的正突变菌株UV-1，酶活达到0.2231U/ml，比未诱变的出发菌株DES-1提高了27.4%。

该菌株最佳固体发酵条件如下：发酵时间为5天，接种量为15%，C：N为4:1，种龄为72h，pH为5.0。

酶活分别为2.2426U/g，2.5201U/g，3.0803U/g，2.8037U/g，2.8037U/g 。

对UV-1 传代培养后菌株的酶活相差不大，故其具有较高的遗传稳定性。

关键词：纤维素酶；固体发酵；紫外诱变；硫酸二乙酯诱变This study is based on our previous screening out high enzyme production capacity of 21-29 mold as the original strain, the positive mutant strains being elected by ultraviolet and diethyl sulfate complex mutagenesis.First, It is subject to being elected by diethyl sulfate mutagenesis a positive mutant strain. Then the positive mutant was selected as the starting strain,and the positive mutation was selected by UV mutagenesis.Finally,the positive mutant strain was selected to carry out the solid fermentation.The fermentation conditions of cellulase production by single factor experiment were investigated. The effects of fermentation time, inoculum amount, C:N and age on the cellulase activity were investigated, and the optimum conditions were obtained.Then the optimal fermentation conditions were used to determine the genetic stability of the selected strains and determine whether the strains could be used in production. The results showed that the positive mutant strain DES-1 was induced by diethyl sulfate mutagenesis, and the Liquid fermentation enzyme activity reached 0.2273U/ml, which was increased by 11.4%. than that of the original strain 21-29.Selected by UV mutagenesis of the positive mutant strain UV-1, the enzyme activity reached 0.2231U/ml, which was improved by 27.4%. compared with the non mutagenic starting strain DES-1.The strain optimum Solid fermentation conditions were as follows: fermentation time was 5 days, inoculum was 15%, C: N was 4: 1, seed age was 72h, pH was 5.0. Enzyme was 2.2426U / g, 2.5201U / g, 3.0803U / g, 2.8037U / g, 2.8037U / g.The enzyme activity of the strain UV-1 after subculture was not Has not changed much, so it had high genetic stability.Key words: cellulase; solid fermentation; UV mutagenesis; diethyl sulfate mutagenesis目录1 研究背景 (1)1.1引言 (1)1.2 纤维素酶的研究与应用 (1)1.2.1纤维素酶的组成和降解机理 (1)1.2.2 纤维素酶的应用 (1)1.3纤维素酶产生菌筛选法 (2)1.4纤维素酶产生菌的诱变育种 (2)1.5酶活的测定方法 (3)1.6发酵方式 (3)1.7 本文主要研究的意义和内容 (3)2 材料与方法 (4)2.1 材料 (4)2.1.1菌株 (4)2.1.2培养基 (4)2.1.3溶液配方 (4)2.1.4实验主要试剂 (5)2.1.5实验主要仪器 (5)2.2 实验方法 (5)2.2.1葡萄糖标准曲线的绘制 (5)2.2.2滤纸酶活测量法 (6)2.2.3 硫酸二乙酯（DES）诱变 (6)2.2.4 紫外诱变 (7)2.2.5筛选方法 (7)2.2.6发酵方式 (7)2.2.7发酵条件的优化 (8)2.2.8遗传稳定性试验 (9)2.2.9发酵曲线的制作 (9)3结果与分析 (9)3.1葡萄糖标准曲线 (9)3.2硫酸二乙酯（DES）诱变 (9)3.2.1 DES终浓度的确定 (10)3.2.2 DES诱变时间的确定 (10)3.3紫外诱变 (11)3.4 突变菌的发酵 (12)3.5发酵条件的优化 (12)3.5.1发酵时间对产酶的影响 (13)3.5.2初始pH对产酶的影响 (14)3.5.3种龄对产酶的影响 (14)3.5.4接种量对产酶的影响 (15)3.5.5 C:N对产酶的影响 (16)3.6遗传稳定性 (16)3.7发酵曲线 (17)4 结果与讨论 (17)参考文献 (19)谢辞...................................................................... 错误！未定义书签。

纤维素酶产酶菌株的选育与固态发酵

万方数据万方数据万方数据万方数据万方数据万方数据纤维素酶产酶菌株的选育与固态发酵作者：陈涛，徐燕， CHEN Tao， XU Yan作者单位：江苏省宿迁市产品质量监督检验所,江苏宿迁,223800刊名：食品研究与开发英文刊名：Food Research and Development年，卷(期)：2011,32(11)被引用次数：1次参考文献(8条)1.Muniswaran P K A;Charyulu N C L N Solid substrate fermentation of coconut coir pith for cellulase production 1994(05)2.李顺鹏;沈标菇渣中纤维素酶活及其在沼气发酵中的作用 1991(02)3.赵小立;李永泉;贺筱蓉高产复合酶菌株HD-1选育的研究 1995(04)4.明景熙啤酒工业中可再生性资源的开发[期刊论文]-中国酿造 2000(04)5.Esterbauer H;Steiner W;Labudova I Production of Trichoderma cellulasein laboratory and pilot scale 1991(01)6.李永泉;翁醒华;贺筱蓉微波诱变结合化学诱变选育酸性蛋白酶高产菌 1999(02)7.袁琳采用氯化锂和紫外线复合诱变方法筛选四环素高产菌株[期刊论文]-宁夏医学杂志 2000(06)8.王重庆;李云兰;李德昌高级生物化学实验教程 2001引证文献(1条)1.梅炼.张爱萍.徐晓立.谢君绿色木霉的选育及固态发酵产纤维素酶的研究[期刊论文]-可再生能源 2013(11)本文链接：/Periodical_spyjykf201111035.aspx。

一种诱变复合霉菌发酵制备纤溶酶的方法[发明专利]

专利名称：一种诱变复合霉菌发酵制备纤溶酶的方法
专利类型：发明专利
发明人：吴非,孙楚,赵城彬,周媛媛,姚子鹏,李秋,刘瑶,董兴叶,刘金阳,盛慧
申请号：CN201410249253.2
申请日：20140529
公开号：CN104004741A
公开日：
20140827
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种诱变复合霉菌发酵制备纤溶酶的方法属于生物发酵技术领域，该方法包括以下步骤：(1)将黄豆与红豆混合后进行超微粉碎，超微粉碎后与水混合得混合液；(2)将黑曲霉与米曲霉复配混合形成复合霉菌，将复合霉菌活化后进行N离子注入诱变，将N离子注入后的复合霉菌进行磁场二次诱变，将二次诱变的复合霉菌接种于已灭菌的混合液中进行发酵，发酵后离心分离取上清液；(3)将上清液透析后进行超滤处理，超滤后进行真空浓缩、冷冻干燥即得纤溶酶；本方法采用离子注入诱变技术结合磁场诱变技术应用于复合霉菌的诱变育种，将诱变后的复合霉菌进行发酵制备纤溶酶，该方法生产周期短，制备的纤溶酶活性高，可应用于高溶栓活性发酵食品的研发。

申请人：东北农业大学
地址：150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区木材街59号
国籍：CN
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纤维素酶产生菌的诱变与筛选

纤维素酶产生菌的诱变与筛选王美珠;曹月坤;陈文艺;姚秀清;李妍妍【摘要】[目的]为提高纤维素酶产生菌的酶活力.[方法]以抚顺近郊堆积腐烂秸秆的土壤为分离源,利用CMC刚果红平板培养基筛选出纤维素水解圈与菌落直径比值(Hc值)较大的菌株Y-07.以Y-07为出发菌株,在最适诱变剂量条件下,对其进行紫外线诱变和亚硝酸诱变.[结果]经过3轮复筛,紫外线诱变后的U10菌株为试验中获得的高产纤维素酶菌株,其酶活最高达到2.499 IU/ml,其活性是Y-07的3.41倍.[结论]该方法为进一步提高纤维素酶产生菌的酶活力奠定了基础.%[Objective] The research aimed to improve enzyme activity of cellulase production strain. [Method] A strain named Y-07 was isolated from rotten straw soil nearby the suburb of Fushun with culture medium containing the carboxymethylcellulose sodium and Congo Red in accordance with its larger size of ratio of hydrolysis ring to colony diameter. With the strain of Y-07 as starting Strain, the strain of Y-07 was mutagenized by ultraviolet radiation and nitrous acid mutagenesis under the most appropriate amount of mutation. [Result] After three rounds of secondary screening, the strain of U10 was achieved with the biggest cellulase activity 2. 5 IU/ml which was 3.4 times of Y-07 strain. [ Conclusion] The method provided the basis for further improvements of enzyme activity of cellulase production strain.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(040)034【总页数】3页(P16510-16512)【关键词】纤维素酶;紫外诱变;亚硝酸诱变;酶活【作者】王美珠;曹月坤;陈文艺;姚秀清;李妍妍【作者单位】辽宁石油化工大学环境与生物工程学院,辽宁抚顺 113001;辽宁石油化工大学环境与生物工程学院,辽宁抚顺 113001;辽宁石油化工大学石油化工学院,辽宁抚顺 113001;辽宁石油化工大学环境与生物工程学院,辽宁抚顺 113001;辽宁石油化工大学环境与生物工程学院,辽宁抚顺 113001【正文语种】中文【中图分类】S188随着世界人口总数的不断增加以及各国工业化程度的提高，人们对能源的需求量急剧增加。

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文章编号:0490 6756(2000)0z 0175 04纤溶酶产生菌的诱变育种及其发酵条件的研究彭勇,杨晓娟 ,胡承,王忠彦,胡永松(四川大学生命科学学院,成都610064)摘要:对纤溶酶产生菌B.L.PY 进行了紫外线与亚硝基胍复合诱变,选育到突变株B.L.PYU M ,其纤溶酶产量较出发菌株提高了27.2%.通过正交分析法进一步优化了该突变株的发酵条件为(%):食用蔗糖3,玉米粉1.1,酵母膏0.2,M gSO 4 7H 2O 0.09,CaCl 20.02,K 2H PO 40.1,pH7.2,通气量为1 0.5~1 1,转速为450r/min,37 下发酵4d,其纤溶酶产量为1140U /mL ,较出发菌株提高40.7%.关键词:地衣芽孢杆菌;纤溶酶;诱变;发酵条件中图分类号:Q319.33;T Q920.6!!!!!!文献标识码:A血栓栓塞性疾病是当前危害人类健康,导致死亡率最高的原因之一.目前,溶栓疗法治疗这类疾病得到了广泛的运用.但现行临床运用的溶栓剂主要是尿激酶和链激酶,而且都有其局限性.因此,世界各国都致力于开发研制高效、无毒副作用的溶栓剂.1987年,日本学者Sumi 从Natto 中发现了一种新型的溶栓剂∀∀∀纳豆激酶[1],并进行了分离纯化[2]及其药效[3]的一系列研究.我国[4]和韩国[5]也从枯草芽孢杆菌中分离出枯激酶(Bacillokinase)等血栓溶解酶,但纤溶酶的产量均不高.我们已成功地分离到一株血纤维蛋白溶解酶产生菌,初步鉴定为地衣芽孢杆菌.为了进一步提高其酶产量,进行了该菌株的诱变育种及其发酵条件的研究.1!材料与方法1.1!材料1.1.1!菌株!地衣芽孢杆菌B.L.PY :由本试验室从屠宰场等地分离.1.1.2!培养基!种子培养基、初筛培养基和复筛培养基分别见文[6],文[7]和文[4]1.2!方法1.2.1!纤溶活性的测定!参照Deogny [8]方法,以尿激酶(标准品)作纤溶活性标准曲线.1.2.2!紫外线与亚硝基胍复合诱变[9]!先作出诱变剂对菌株的致死曲线选择诱变剂量,再进行诱变育种.1.2.3!发酵条件的优化!首先进行单因素实验,确定因素、水平,然后采用正交分析法[10]优化培养基组成,从而确定发酵培养基.1.2.4!放大试验!斜面活化菌株后,接一环到10mL 种子培养基中,37 下200r/min 摇瓶培养1d,以5%接种量转至二级种子培养基,最后接种入装有发酵培养基的发酵罐中,通气量为收稿日期:2000 07 26*现中科院成都生物所工作2000年10月第37卷增刊!四川大学学报(自然科学版)Journal of Sichuan U niversit y (N atural Science Edit ion)!Oct.2000Vol.37Sup1 0.5~1 1,转速为450r/min,37 下发酵至适当时间.2!结果2.1!紫外线诱变结果紫外线对B.L.PY 菌株的致死曲线如图1所示,确定诱变剂量(即:15W 紫外灯、30cm 距离、照射时间为60s)诱变处理B.L.PY 菌悬液,经中间培养后平板初筛,摇瓶复筛,获得突变株B.L.PYU,其纤溶酶活性达到960U/mL,较出发菌株提高了18.5%.2.2!亚硝基胍诱变结果亚硝基胍对B.L.PYU 菌株的致死曲线如图2所示,确定诱变剂量(即亚销基胍浓度为0.5mg /mL,37 下处理15min)处理样品,经中间培养后平板初筛,摇瓶复筛,获得突变株B.L.PYUM ,其酶活达1030U/mL,较出发菌株提高了27.2%.!!图1!紫外线对B.L.PY 菌株的致死曲线!!!图2!M NN G 对B.L.P YU 菌株的致死曲线2.3!菌株B.L.PYUM 传代稳定性研究将B.L.PYUM 菌株在斜面培养基上传接5次,每次接种发酵测定酶活,结果表明该菌株具有较好的传代稳定性.2.4!培养基组成对菌株B.L.PYU M 纤溶酶产量的影响2.4.1!碳源对纤溶酶产量的影响!在复筛培养基中分别加入不同的碳源,结果如图3所示.不同碳源对纤溶酶的产量影响很大.以木糖、半乳糖为碳源时,发酵液中纤溶酶产量最高;以蔗糖、葡萄糖等为碳源时,次之.虽然采用木糖作碳源时,发酵液中酶产量比蔗糖高一些,但考虑发酵工业中生产成本等因素,所以采用蔗糖为碳源.图3!不同碳源培养液中纤溶酶产量2.4.2!氮源对纤溶酶产量的影响!采用3%蔗糖为碳源,在复筛培养基中分别加入0.7%不同氮源,结果如图4所示.不同的氮源对纤溶酶产量有明显的影响.发酵培养基中采用玉米粉作氮源.2.4.3!正交试验!我们选用正交表L 18(61#36)进行正交试验,通过极差分析和趋势图分析(附表),得到发酵培养基组成为(%):食用蔗糖3,玉米粉1.1,酵母膏0.2,MgSO 4 7H 2O 176四川大学学报(自然科学版)!!!!!!!!!!第37卷0.09,CaCl 20.02,K 2HPO 40.1.图4!不同氮源培养液中纤溶酶产量附表!因素位级表因素(%)蔗糖(%)玉米粉(%)酵母膏(%)M gSO 4 7H 2O (%)CaCl 2(%)K 2HPO 4(%)N aH 2PO 4(%)位级1CP10.30.100.0300.100位级2CP30.70.150.060.020.250.1位级3CP5 1.10.200.090.040.400.2位级4食用1位级5食用3位级6食用52.5!发酵工艺对菌株B.L.PYUM 纤溶酶产量的影响2.5.1!培养基起始pH 值对纤溶酶产量的影响!结果如图5所示,从中可知:培养基初始pH 值在6.5~8.0时,纤溶酶产量最高;但初始pH 值低于5.5或高于8.5时,纤溶酶产量骤减.所以发酵培养基中,初始pH 值时选在7.0~7.5之间.图5!培养基起始pH 值对纤溶酶产量的影响2.5.2!接种量对纤溶酶产量的影响!结果如图6所示,不同的接种量对纤溶酶产量有较大的影响.所以,在发酵过程中,采用5%的接种量为宜.图6!接种量对纤溶酶产量的影响!!!!!!图7!培养温度对纤溶酶产量的影响2.5.3!培养温度对纤溶酶产量的影响!结果如图7所示,B.L.PYUM 菌株在37 下进行发酵时,纤溶酶产量最高.177增刊!!!!!彭勇等:纤溶酶产生菌的诱变育种及其发酵条件的研究178四川大学学报(自然科学版)!!!!!!!!!!第37卷2.6!放大实验菌株B.L.PYU M经放大实验后,其纤溶活力为1140U/mL,较出发菌株提高了40.7%. 3!讨论!!虽然基因工程广泛运用于高效表达菌株的构建,但是,传统的诱变育种也不失为一种提高酶产量的方法之一.在诱变育种中,出发菌株最好采用单倍体,这样可以避免表型延迟.而地衣芽孢杆菌等芽孢杆菌大多有两个核.因此,我们采用芽孢杆菌的芽孢短时间培养萌发.这样,既避免表现延迟,得到不稳定的菌株,又对诱变剂具有较强的敏感性.菌悬液的浓度要适中,我们采用107~108细胞/mL.当紫外线处理时,用生理盐水制备菌悬液,而且只吸4mL倾入直径为9cm的平皿中,避免水吸收紫外光;当亚硝基胍处理时,用pH6.0磷酸缓冲液制备菌悬液.因为pH值对诱变结果有较大的影响.我们选育的地衣芽孢杆菌B.L.PYUM纤溶酶产尿激酶达1140U/m L,比文[4]报道的酶活高.因此,对该菌进行深入细致的研究,如该酶的酶学性质研究、药理学研究及基因的克隆与表达等,有可能开发为一种新的溶栓药物.参考文献:[1]!Sumi H,et al.Experientia,1987,43(10):1110~1111.[2]!Fujita M,et al.Biochem Biophys Res Commun,1993,197(3):1340~1347.[3]!Sumi H,et al.Acta Haematol,1990,84(3):139~143.[4]!李荣萍,等.生物技术,1996,6(3):21~23.[5]!K im W,et al.A ppl Environ M icrobiol,1996,62(7):2482~1488.[6]!范秀容.微生物学实验(第二版)[M].北京:高等教育出版社,1992.260.[7]!Kondo I,et al.I nfect.Immun,1977,18:266~272.[8]!Deogny L,et al.Clinica.Chimica.Acta,1975,160:85~89.[9]!诸葛健,等.工业微生物实验技术手册[M].北京:中国轻工业出版社,1998.383~395.[10]!中国现场统计研究会.正交法和三次设计[M].北京:科学出版社,1985.20~25.STUDY ON MUTATION AND FERMENTATION CONDITIONOF A FIBRINOLY TIC ENZYME PRODUCING STRAINPENG Yong,YAN G X iao j uan,H U Cheng,WAN G Zhong yan,H U Yong song (College of Life Science,Sichuan U niversity,Chengdu610064,China)!!Abstract:A fibrinoly tic enzyme producing strain B.L.PY w as treated with both ultraviolet rays and MNNG(N methyl N∃ nitro N nitrosoguanidine),and a mutant strain B.L.PYUM w ith high yield of plasm in and stability w as obtained,whose enzyme activity increased by27.2%over strain B.L.PY.Fermentation conditions for enzyme production have been established:Compositi ton of the medium(%)is edible sucrose3,corn flour1.1,yeast ex tract0.2,,MgSO4 7H2O 0.09,CaCl20.02,K2H PO40.1,pH7.2.After fermentation in1.5liter of fermentor at37w ith an aeration rate of1 0.5~1 1for4days,the average fibrinolytic activity w as about1140U/mL culture broth,increased by40.7%over the m utant.Key words:bacillus lichenif or mis;fibrinolytic enzyme;mutation;fermentation condition。