沉 淀 反 应

• 平时及作业分：按每次实验的出勤、纪律、值 日情况，以及作业本完成情况打分（注：作业 本可以购买、复印或自行抄写，学期末理论考 试结束后由学习委员统一收齐交任课老师评阅 打分）。
沉淀反应
温州医学院微免教研室
沉淀反应
Ag
+
Ab
温度、pH 抗原抗体 浓度、电解质 复合物
可溶性抗原 （如血清、毒素等）
乙
诊
正极
Ag Ab
Ag Ab
【实验结果】
将玻片对着强光源观察，生理盐水孔与诊 断血清间无沉淀线，阳性血清孔与诊断血清之 间有白色沉淀线，若待检血清孔与诊断血清孔 之间有沉淀线出现，则表示AFP阳性，否则为 阴性。
甲诊 NS 诊 乙诊
甲诊 阳诊 乙诊
电渗：指在电场中液体对于一个固定固体的相对
移动称为电渗。液体移动的方向取决于固体带的 是正电荷或负电荷。
阳 甲诊乙 甲阴乙
阳 甲诊乙 甲阴乙
负
正
极
甲诊
甲诊
极
NS 诊
阳诊
乙诊
乙诊
Ag Ab Ag Ab
1、甲和乙中何者为阳性？如何判断？
实验目的： 待测的标本甲或乙中是否含有AFP
一、双向免疫琼脂扩散
材料： 1％盐水琼脂， 诊断血清（AFP Ab）, 阳性血清（含AFP Ag）， 生理盐水（NS）， 待检血清甲、乙。 载玻片，打孔器，湿盒，微量加样器，吸头。
一、双向免疫琼脂扩散
实验方法：
1、融化1％盐水琼脂； 2、制备半固体琼脂凝胶板：4 ~ 4.5ml/片 3、打孔：梅花孔 4、加样（每孔约10μl）； 5、标记，放湿盒，37℃温箱24h后观察结果。
【实验方法】
1．制板
2．打孔：双排孔
3Fra Baidu bibliotek加样
4．电泳 将加好样品的琼脂板置电泳槽 上，抗原侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端。 搭 好 桥 后 ， 接 通 电 源 ， 控 制 电 压 6 ～ 10 V/cm板长，电泳约30～60 min。
5．关闭电源，取出琼脂板，观察结果。
负极
甲
诊
NS 诊
乙
诊
甲
诊
阳
诊
分类
沉 淀 反 应
环状沉淀反应 琼脂扩散试验
对流免疫电泳
电
双向扩散 ＋ 泳
技
单向扩散
术
絮状反应
火箭免疫电泳
一、双向免疫琼脂扩散
实验原理：可溶性抗原与相应抗体在半固体 琼脂内进行扩散，当两者比例合适时， 就出现白色沉淀线（阳性反应）。
沉淀线的形态、清晰度及位置反映抗原或抗 体的特异性和浓度等。利用已知抗原或抗体 检测未知抗体或抗原。
医学微生物学与免疫学 实验室规则
• 白大衣；勿在实验室饮食 • 实验中意外事故处理 • 实验结束后洗手 • 值日生打扫 • 实验报告（题目、目的、原理、材料、方
法、结果、讨论）
实验成绩组成
• 操作考核分：按实验结束后进行的实验考核情 况打分。
• 实验报告分：按实验报告的完成情况打分，为 所有报告的平均分。
这样就使抗原和抗体定向对流，在两孔间相遇 时发生反应，并在比例合适处形成肉眼可见的白色 沉淀线。
对流免疫电泳实验原理
电渗力
电泳力
【实验材料】 1．电泳缓冲液：pH 8.6巴比妥缓冲液。 2．抗体：诊断血清（AFP抗体）。 3．抗原：阳性血清、待检血清甲乙。 4．1％盐水琼脂。 5．电泳仪、电泳槽、载玻片、打孔器、移 液器、移液头。
阳
甲
乙
诊
甲
乙
阴
Ab
Ag
实验结果分析
1
1
Anti-1
一、双向免疫琼脂扩散
结果判读：
阳性血清与诊断血清间形成沉淀线
生理盐水与诊断血清（抗体）之间无沉淀线
待检血清、阳性血清与诊断血清间形成沉淀线且融 合，说明待检血清和阳性血清抗原相同。
阳
甲
乙
诊
甲阴乙
二、对流免疫电泳
【实验原理】
蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷，在电泳 时从负极向正极移动。抗体属球蛋白，在碱性缓冲 液只带微弱的负电荷，而且相对分子质量较大，电 泳力较小，在琼脂电渗力作用下反而由正极向负极 移动。