细菌截留验证之工艺风险评估
细菌截留验证指导程序
细菌截留验证程序和方案形成应使用标准方法确证膜过滤器的微生物截留能力。
然而，对于某种产品来说，仅证明缺陷假单胞菌在水溶液中被截留，而不是在特定产品中，不足以验证此产品的除菌过滤工艺。
为了确定正确的挑战测试方法，应将测试微生物直接接种在承载流体（产品或替代品）中以证明其生存性。
微生物应以与挑战实验中使用的同等方式培养，以保留其生物形态特征和生理特征。
用于生存性研究的测试暴露时间应该等于或超过实际工艺过滤时间。
当测试微生物在产品中的生存性已经完成测试，就应该形成挑战方法和方案了。
细菌挑战实验的条件应模拟实际生产工艺。
既然细菌挑战实验通常都在实验室里进行，那么方法的规模也应相应调整。
通量应调整到每单位面积的流速，表示为基于滤芯表面积的形式(ml/min)/cm2。
如果过滤过程按压差控制，则挑战实验压差至少等同于最大工艺压差。
如果制订方案过程中遇到关于测试方法可接受性的问题，则建议联系相关管理机构以获取指导。
图1列出了在为特定过滤器和产品/工艺组合选择合适的验证策略时需要考虑的关键步骤。
（1）非杀菌性的工艺和流体直接在产品中接种测试微生物是测试除菌级过滤器微生物截留能力的首选方法。
当产品和工艺流体被证明在产品和工艺条件下没有杀菌效力的时候，这样是可行的。
在这些工艺中，应使用足够浓度的挑战微生物在产品中接种，而且要在实际工艺条件下，包括时间、压差、流速和其它关键变量（例如温度），应尽量减少稀释，以避免不必要的产品改变。
（2）抑菌的/杀菌的/非分散的挑战流体在杀菌性的产品中进行细菌截留测试，使得与验证相关的一些问题更难回答，例如：产品对过滤器有什么影响，产品对其中的生物菌落有什么影响。
在杀菌性产品中或是在不利于微生物活性的条件（例如，温度上升）下进行的细菌截留测试不一定能得到正确的结果。
为了评估产品/工艺对过滤器的潜在影响，可以使用产品和实际的工艺条件，包括流速、压差、温度和时间，对过滤器进行预处理。
这种预处理可在一个闭路系统中将产品循环通过测试过滤器或者单路通过测试过滤器，接着对滤芯进行细菌挑战。
PDA TR26 除菌过滤验证(中文2008)
液体的除菌过滤PDA第26份技术报告（2008年修订本）制药科学与技术的PDA期刊增刊2008年第62卷，第S-5号1.0引言除菌过滤是从液体流中去除微生物*而对产品质量没有负面影响的过程。
（1-4）这份技术报告的目的是提供系统的方法，用于选择和验证液体除菌过滤应用的最适当过滤器。
PDA的第26份原始技术报告发表于1998年，标题为液体的除菌过滤，其中描述了一代制药科学家和工程师对除菌过滤的使用和验证。
由于过滤技术的加强以及制药行业近期产生了其他的法规要求，因而对原始报告进行了修改。
修订本涉及到了法规文件、标准以及科学出版物，其中包含更多的细节和支持性数据。
在20世纪60年代膜过滤器进入市场，当时认为0.45µm级别的膜为“除菌级”过滤器且成功应用于注射剂的除菌过滤。
使用serratia marcescens作为标准菌对这些过滤器进行确认，确认用于水质量测试的膜。
然而在1960年发布的论文中，美国FDA的Frances Bowman博士发现0.45µm的“除菌过滤的”培养基可受到一种生物的污染，在每平方厘米104-106以上的挑战水平下少量的这种生物可反复穿透0.45µm级别的膜。
（5）ASTM F838也由此产生，这是一种标准测试法，用于评估除菌级别的膜过滤器。
（6）在第6.4部分中对挑战生物进行了讨论。
1.1目的/ 适用范围工作组的主要目标是开发一份有关除菌过滤的科学的技术报告。
报告不会对区域的法规要求进行过多的描述，但是提供了最新的科学建议以供业内人士及制定除菌过滤政策的人员使用。
这份报告是一份指南性文件，其目的不是确立强制的除菌过滤标准。
报告中提出的概念与一些工艺有关，在这些工艺中除菌过滤器的性能是不可缺少的，而且这些概念不能通用于所有过滤工艺（例如，早期过滤或常规生物负载）。
这些概念包括但不限于细胞培养基、缓冲液、无菌工艺中的中间体暂存区、集中和最终无菌灌装。
[除菌过滤器验证]除菌过滤器的风险管理与验证
![[除菌过滤器验证]除菌过滤器的风险管理与验证](https://img.taocdn.com/s3/m/951822c17e192279168884868762caaedd33ba4d.png)
[除菌过滤器验证]除菌过滤器的风险管理与验证篇一: 除菌过滤器的风险管理与验证作者：刘晓伟有限公司，上海201206）收稿日期：2012-03-09作者简单介绍：叶璇，女，工程师，主要从事药物研发工作。
Tel：186****9320E-mail：******************摘要通过分析目前新版GMP 对液体除菌过滤的相关规定，将液体除菌过滤器和除菌过滤工艺的验证分别进行详细的陈述和说明。
旨在通过介绍，使大家更进1步了解有关验证的各项内容和目的。
关键词新版GMP；液体除菌过滤器；除菌过滤工艺验证新版GMP 与1998 版GMP 相比，对于液体除菌过滤器和除菌过滤工艺的规定更加严格和具体。
新版GMP 附录 1 第四十一条指出“过滤器应当尽可能不脱落纤维。
严禁使用含石棉的过滤器。
过滤器不得因与产品发生反应、释放物质或吸附作用而对产品质量造成不利影响。
”第六十二条“可采用湿热、干热、离子辐射、环氧乙烷或过滤除菌的方式进行灭菌。
每1种灭菌方式都有其特定的使用范围，灭菌工艺必须与注册批准的要求相一致，且应当经过验证。
”第六十三条“任何灭菌工艺在投入使用前，必须采用物理检测手段和生物指示剂，验证其对产品或物品的适用性及所有部位达到了灭菌效果。
”第七十五条“过滤除菌工艺应当经过验证，验证中应当确定过滤一定量药液所需时间及过滤器二侧的压力。
任何明显偏离正常时间或压力的情况应当有记录并进行调查，调查结果应当归入批记录。
”第七十五条“同一规格和型号的除菌过滤器使用时限应当经过验证，一般不得超过1个工作日。
”为保证整个生产工艺可控，生产的连续稳定性和生产批次重复性好，工艺验证不仅成为众多制药企业关注的内容，同时也是GMP 等法规实施中的重要部分。
FDA 无菌工艺指南中提到，与过滤器完整性相关的性能测试应包括：模拟生产条件，在最苛刻生产环境下进行微生物挑战试验。
美国GMP 21 CFR Parts210&211 中也指出，必须建立和跟进相应的证明性文件，这些文件中包括所有的除菌工艺的验证文件。
除菌过滤器微生物截留的试验分析
除菌过滤器微生物截留的试验分析录入时间:2011-9-22 9:20:27 来源：中国论文下载中心【摘要】目的：探讨非最终灭菌注射剂生产过程中除菌过滤器对微生物的截留效果，确认过滤除菌工艺的有效性与安全性。
方法：采用孔径为0.22 μm除菌级聚醚砜滤芯，以直径在0.3～0.4 μm的缺陷假单胞菌为生物指示剂，将菌液用滤芯过滤，计算被过滤液体过滤前的微生物数量与过滤后的微生物数量比的常用对数值(LRV)。
结果：菌液过滤前后微生物数量比的常用对数值LRV大于7。
结论：滤芯每平方厘米有效过滤面积符合中国药典2005年版2部附录ⅩⅦ灭菌法的规定，确认除菌过滤工艺在注射剂生产过程中的有效性与安全性。
【关键词】除菌过滤器；缺陷假单胞菌；微生物截留；无菌保证程度除菌过滤器在药品生产中主要用于无菌药品的除菌过滤，除菌过滤是药品生产过程中非常重要的一种除菌方式，特别是对非最终灭菌的注射剂而言，除菌过滤是消除药液中微生物的唯一方法。
通过对除菌过滤器滤芯材质的选择、灭菌方法、完整性测试以及细菌的截留试验，确认除菌的效果，提高除菌过滤在注射剂生产过程中无菌保证程度重要性的认识。
1 材料与方法1.1 试验材料(1)滤芯：滤膜材质为聚醚砜，10英寸226卡式，孔径：0.22 μm，级别：除菌级，滤膜面积：3 600 cm2。
来源：颇尔过滤器(北京)有限公司。
(2)全自动过滤器完整性测试仪：上海先维过滤设备厂，型号：212A。
(3)甘露醇：广西南宁化学制药有限公司，批号：0809110，配置20 kg 浓度为0.5%的水溶液。
(4)微生物指示剂：缺陷假单孢菌(ATCC19146直径0.3～0.4 μm)，北京鑫四环消毒技术开发中心。
(5)菌液浓度：每平方厘米应达到107个菌的挑战水平。
(6)培养基：硫乙醇酸盐流体培养基：北京三药科技开发公司，批号:081111；营养琼脂：广东环凯微生物科技有限公司，批号:200902081；营养肉汤：广东环凯微生物科技有限公司，批号:200901071。
除菌过滤质量风险评估课件知识定稿版
除菌过滤质量风险评估
课件知识
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目录
1.前言
2. 风险评估目的
3. 风险评估范围
4. 风险评估小组
5.评估流程
6.风险等级评估方法（FMEA）说明
7.过滤除菌的相关措施
8.支持性文件
9.风险评估实施
10.风险评估结论
1.前言
除菌过滤质量风险分析
10.风险评估结论
经质量风险评估小组成员共同对以上所列4个项目进行风险评估后，可确认目前我公司采取的过滤除菌工艺适用于公司日常生产操作，可以确定我公司冻干粉针剂生产车间制剂生产过程中使用过滤除菌方式是可靠的。
同时应注意以下几点：
1、在日常工作中要加强对员工的培训与管理，树立严格按照操作规程操作的意识与行为，以保证无菌与无菌状态的维护。
2、在除菌过滤验证工作中，应做好除菌过滤验证中过滤除菌的有效性及可行性确认工作，尤其对于新增产品、批量改变产品、设备变更等重要情况要做好质量风险评估以确定验证内容的范围及深度。
此后应每年进行质量风险再评估，以确定在新的情况下生产车间过滤除菌的可靠性，重点放在检查防止污染和交叉污染、防止混淆与差错的措施并评估其适用性和有效性上。
评价人：日期：
批准人：日期：。
灭菌工艺系统风险评估
实例二灭菌岗位风险评估报告报告编码：G23-R005 版本号：01一、概述药业股份有限公司玻瓶输液车间C 线建成于2001年6月，年生产能力1.5亿瓶，以下为C 线大容量注射液生产工艺简要流程图：作为无菌制剂，产品的无菌性是其非常重要的质量特性。
在最终灭菌的大容量注射液生产流程中，灭菌是将药液内可能污染的微生物完全杀灭的过程，灭菌工序的质量控制直接关系着药液内污染微生物的杀灭效果，关系着药品质量安全，更关系着药品使用者的健康和生命安全。
由于产品是否无菌，不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的GMP 管理和良好的无菌保证体系。
灭菌工序，作为产品无菌保证的一个关键环节，其严格的GMP 管理及风险控制至关重要。
为进一步提高C 线灭菌工序的管理水平，发现并尽可能消除一些潜在的风险对产品无菌保证值造成的威胁，根据公司《风险管理》（编码：C09-0024）文件中的有关规定，质量部特组织相关技术人员开展了对C 线灭菌工序的风险分析。
本次C 线灭菌工序风险分析工作由2011年6月1日开始，至6月25日结束，参与部门包括生产部、设动部、质量部。
现将风险分析工作总结如下。
二、成立风险管理小组 。
序号姓名所在部门或岗位职务或职称组内职务组内职责1 负责协调、决策，为风险管理小组提供必要的资源 2负责全面协调和推进风险分析进程粒 料密封盖原 料注 塑配制焊盖包装灯检灭菌灌装制袋（瓶）3 组员 负责组织数据、信息收集；负责召集小组会议等4 组员5 组员6 组员7 组员8 组员9 组员 10 / 负责评估报告的审核 11 / 负责评估报告的审核 12/负责评估报告的批准 风险管理小组在6月1日召开了首次会议，确定了本次C 线灭菌工序风险分析的活动流程及日程安排。
三、风险分析活动流程及日程安排 1、活动流程图：现状调查风险识别风险分析风险评价风险控制总结报告风险可接受否是①、 现状调查：收集C 线灭菌工序的相关信息，包括灭菌设备、设备布局、灭菌柜验证情况、岗位人员配置情况、主要产品、产品特性、灭菌工艺、关键工艺控制点及控制参数等。
除菌过滤验证—细菌截留试验课件
对行业的深远影响
提高产品质量
除菌过滤技术的广泛应用将有助于提高各行各业的产品质量和安 全性，增强消费者信心。
促进产业升级
除菌过滤技术的发展将推动相关产业的升级和转型，加速行业的技 术进步和创新。
保障人类健康
通过除菌过滤技术的不断革新和应用拓展，将为人类健康提供更加 可靠的保障，降低疾病传播的风险。
论谴责。
经验教训与改进建议
经验教训
除菌过滤验证是确保产品无菌的重要手段，企业必须充分认识到细菌截留试验的重要性，严格按照相关标准和规 范进行操作，确保试验结果的准确性和可靠性。
改进建议
企业应加强除菌过滤验证的细菌截留试验的培训和指导，提高操作人员的技能水平；同时，应不断优化试验方案 和改进设备，提高除菌效率和质量，确保产品的安全性和有效性。
根据试验数据，计算过滤器对细 菌的截留效率。
03
实际操作与结果分析
操作步骤
准备试验材料
准备试验所需的除菌过滤器、细菌培 养基、无菌水、试验管等。
02
试验设置
将除菌过滤器安装在试验管上，用无 菌水冲洗过滤器，然后加入一定量的 细菌培养基。
01
03
过滤操作
开启过滤器，使细菌培养基通过过滤 器进行过滤，收集过滤后的液体。
结果分析
分析试验数据，找出影响除菌效果 的因素，为改进过滤器提供依据。
误差分析
01
02
03
04
操作误差
在试验过程中，可能由于操作 不规范或仪器使用不当造成误
差。
环境因素误差
试验环境中的温度、湿度等变 化可能对试验结果产生影响。
测量误差
在测量液体体积、温度等参数 时，可能由于测量工具或方法
PDA技术报告NO.26(2008版)(中文)
液体的除菌过滤PDA第26份技术报告（2008年修订本）制药科学与技术的PDA期刊增刊2008年第62卷，第S-5号1.0引言除菌过滤是从液体流中去除微生物*而对产品质量没有负面影响的过程。
（1-4）这份技术报告的目的是提供系统的方法，用于选择和验证液体除菌过滤应用的最适当过滤器。
PDA的第26份原始技术报告发表于1998年，标题为液体的除菌过滤，其中描述了一代制药科学家和工程师对除菌过滤的使用和验证。
由于过滤技术的加强以及制药行业近期产生了其他的法规要求，因而对原始报告进行了修改。
修订本涉及到了法规文件、标准以及科学出版物，其中包含更多的细节和支持性数据。
在20世纪60年代膜过滤器进入市场，当时认为0.45µm级别的膜为“除菌级”且过滤器成功应用于注射剂的除菌过滤。
使用serratia marcescens作为标准菌对这些过滤器进行确认，确认用于水质量测试的膜。
然而在1960年发布的论文中，美国FDA的Frances Bowman博士发现0.45µm的“除菌过滤的”培养基可受到一种生物的污染，在每平方厘米104-106以上的挑战水平下少量的这种生物可反复穿透0.45µm级别的膜。
（5）ASTM F838也由此产生，这是一种标准测试法，用于评估除菌级别的膜过滤器。
（6）在第6.4部分中对挑战生物进行了讨论。
1.1目的/ 适用范围工作组的主要目标是开发一份有关除菌过滤的科学的技术报告。
报告不会对区域的法规要求进行过多的描述，但是提供了最新的科学建议以供业内人士及制定除菌过滤政策的人员使用。
这份报告是一份指南性文件，其目的不是确立强制的除菌过滤标准。
报告中提出的概念与一些工艺有关，在这些工艺中除菌过滤器的性能是不可缺少的，而且这些概念不能通用于所有过滤工艺（例如，早期过滤或常规生物负载）。
这些概念包括但不限于细胞培养基、缓冲液、无菌工艺中的中间体暂存区、集中和最终无菌灌装。
除菌过滤验证—细菌截留试验
抑菌/杀菌/非分散溶液
由于直接接种法是理想的 由于测试微生物活性的一些问题，一个成功的 测试计划可能需要改变
挑战液体 挑战条件 或两者兼有
可能需要预处理过滤器 文件给出了定义毒性水平的指南
2. 直接法
B. Diminuta / 挑战微生物
化验滤出液 中的微生物
药品
可存活的 微生物?
除菌级性能的基本解释
除菌过滤是在对产品没有不良影响的前提下从流动的 液体中去除微生物的过程。 ASTMF 838-05 是一种标准的内置TM，可以用于比 较所有灭菌级的膜。 证明能去除一种标准试验细菌(Brevundimonas diminuta) 最低浓度为107 cfu/cm2 这是一个很好的开始，但是还要考虑其他因素
Section 6.2
细菌截留验证需要考虑的方面
应该在产品细菌挑战后调查测试微生物是否在 过滤器的下游重现。 如果调查确认测试微生物穿过了过滤器，并且 过滤器达到了完整性测试要求
那么应重新考虑该过滤器是否适合于这样的过程条 件。
Section 6.2
细菌截留验证需要考虑的方面
成分相同、只有浓度不同的系列产品可以通过 挑战极限浓度和接受中间一组浓度来验证。 如果某个单个产品被认为是最差情况代表，则 应伴有依据和数据。
47 mm 盘
Section 6.16
膜
滤筒
盘测试的原因: 确保过滤装置完整性
过滤器最初的和过程中的完整性通过以下手段 得以充分保证…
证明过滤器与过程相匹配的充分研究 过滤器生产商质量系统审查 经验证的完整性测试
除菌过滤验证—细菌截留试验
Bowman et al., J. Pharm. Sci., 56: 222 (1967) 0.45 μm 过滤器截留数量 >104-106 cfu/cm2 检查过大的孔 “除菌级”的定义
聚集
单分散性的细胞最适用于挑战 用光学显微镜甄选菌株 使用超声波/振动使其散开 通过光学显微镜和存活计数予以确定 使用 0.45 μm过滤器作为过滤器挑战测试中的
去除过滤器的毒杀活动维持全部过程条件验证此步骤确保细菌活性18修改产品过程的两个例子杀菌产品预处理8小时修改过的产品8小时预处理截留测试预处理4小时实际的产品4小时冲洗19细菌截留研究的一般图示接种后产品储存罐无菌储存罐测试过滤器装置细菌截留一般测试结构压力计蠕动泵化验过滤器支架20细菌截留研究的一般图示接种挑战溶液的再循环21研究设计决策树22validationstrategystudydesign23validationstrategystudydesign24validationstrategystudydesign25validationstrategystudydesign26挑战微生物的选择推荐选择brevundimonasdiminuta作为用于除菌级过滤器验证的微生物
用于细菌截留验证试验的三个膜中至少有一个 膜应该在试验前或使用前物理完整性测试数值 达到或接近过滤器生产商的测试要求。
可能无法获得达到或接近过滤器生产商要求 的膜
在这种情况下，应该从一批使用前完整性测试数值 尽量低的膜产品中选取测试膜。
然后根据（验证研究中）使用前物理完整性测试数 值最接近生产商要求的膜来确定一个特定过滤过程 的完整性测试要求
重要参考 – ASTM F 838-05
ASTM 标准 F838-05, “决定液体过滤器过滤膜细菌 截留性能的标准测试方法”, 宾州Conshohocken美国 测试和材料协会 ASTM 委员会 D19(2005)
2010版gmp实施指南
2010版gmp实施指南(无菌)无菌制剂 GMP实施指南 14.6过滤除菌14.6过滤除菌本节旨在提供系统的方法对除菌过滤工艺进行选择和验证。
除菌过滤过程中的关键设备为除菌(级)过滤器，对其进行的具体确认和验证项目的相关原理和要求等，将在以下14.6.1~14.6.3中详细阐述。
按照不同药品分类，需要、推荐、可选和评估后确定是否进行的确认和验证项目，总结为下表。
项目应用于非最终灭菌产应用于可最终灭菌产品品的除菌过滤的过滤每种型号除菌每种型号除菌级过推荐推荐级过滤器选型滤器的标准细菌截的确认留试验数据与完整(由过滤器生性检测数值的关联产商完成) 每种型号除菌级过推荐推荐滤器的溶出物分析构成过滤器的各种推荐推荐材料的生物安全性每批除菌级过每批除菌级过滤器推荐推荐滤器的确认抽样进行细菌截留(由过滤器生标准试验，并确认与产商完成) 完整性检测数值关联的持续有效出厂前每支完整性推荐推荐检测抽样进行滤出液质量确认，例如:pH、内毒素、总TOC和洁净度抽样进行湿热灭菌推荐推荐耐受测试工艺验证细菌截留需要可选溶出物需要需要化学兼容性需要可选产品润湿的完整性可选可选吸附评估评估很多生产最终灭菌产品的企业，在最终灭菌前，为控制微生物污染水平，使用过滤器对最终灭菌前的产品进行过滤。
此时，不论该企业采用了何种过滤器，包括精度(标称)为0.45μm的过滤器、0.2μm的微生物污染控制过滤器，甚至0.2μm 除菌级过滤器，因为这些过滤器的使用目的都是在最终灭菌之前对微生物污染水平进行控制，而不是作为产品生产过程中最后一步的灭菌手段，对这些过滤器的工艺验证要求，低于非最终灭菌产品除菌过滤过程中所使用的除菌级过滤器。
错误～文档中没有指定样式的文字。
无菌制剂GMP实施指南14.6.1除菌级过滤器的验证/细菌截留【法规要求】《药品生产质量管理规范》2010修订版:附录1 无菌药品第九十条对可最终灭菌的产品不得以除菌过滤工艺替代最终灭菌工艺。
微生物环境检测及潜在风险评估方案
微生物环境检测及潜在风险评估方案随着社会的不断发展和人口的增加，对于环境的重视度也越来越高。
微生物环境检测及潜在风险评估方案的制定，对于保护环境和人类健康具有重要意义。
微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于空气、水、土壤、食物等环境中，与我们的健康密切相关。
因此，对于微生物的检测和评估工作就显得尤为重要。
首先，制定微生物环境检测及潜在风险评估方案需要明确的目标和范围。
例如，是否针对特定场所或特定微生物类型进行检测，或者是广泛覆盖各类微生物。
在明确了目标和范围后，我们可以制定相应的检测计划。
其次，选择合适的微生物检测方法是方案制定中的一个重要环节。
常用的微生物检测方法包括培养法、PCR法、基因测序等。
不同的检测方法有不同的优缺点，选择适合特定目的的方法显得尤为重要。
例如，培养法可以直接检测到可培养的微生物，但不能检测到未培养的微生物；PCR法能够快速检测到微生物的DNA或RNA，但无法区分活体和死体。
因此，在制定方案时需要根据具体情况选择合适的检测方法。
第三，进行微生物环境检测时需要采集适当的样品。
样品采集应具备代表性和可重复性。
根据不同的场所和微生物类型，选择合适的样品采集器具和方法。
例如，在室内环境中，我们可以使用空气采样器采集空气中的微生物颗粒；在水环境中，可以采集水样进行检测。
样品采集时需要注意避免污染，避免误差的产生。
第四，对于采集的样品进行微生物检测。
根据选择的检测方法进行相关操作，例如，进行细菌的培养，或者进行PCR反应。
在检测过程中，需要严格遵循实验室操作规范，避免交叉污染和误差的发生。
并且，还需要根据检测结果进行数据分析和解读。
最后，进行潜在风险评估。
根据微生物检测结果，结合相关的环境因素和流行病学调查资料，评估微生物对于人类健康的潜在风险。
这一步骤需要将微生物的检测结果与相关标准进行比对，判断是否超过了安全标准或引起潜在风险。
在评估过程中，还需要考虑到人群的敏感性和接触方式，对风险进行定量或定性的评估。
除菌过滤器微生物截留的试验分析
除菌过滤器微生物截留的试验分析除菌过滤器微生物截留的试验分析【摘要】目的：探讨非最终灭菌注射剂生产过程中除菌过滤器对微生物的截留效果，确认过滤除菌工艺的有效性与安全性。
方法：采用孔径为0.22μm除菌级聚醚砜滤芯，以直径在0.3～0.4μm的缺陷假单胞菌为生物指示剂，将菌液用滤芯过滤，计算被过滤液体过滤前的微生物数量与过滤后的微生物数量比的常用对数值(LRV)。
结果：菌液过滤前后微生物数量比的常用对数值LRV大于7。
结论：滤芯每平方厘米有效过滤面积符合中国药典2005年版2部附录ⅩⅦ灭菌法的规定，确认除菌过滤工艺在注射剂生产过程中的有效性与安全性。
【关键词】除菌过滤器；缺陷假单胞菌；微生物截留；无菌保证程度除菌过滤器在药品生产中主要用于无菌药品的除菌过滤，除菌过滤是药品生产过程中非常重要的.一种除菌方式，特别是对非最终灭菌的注射剂而言，除菌过滤是消除药液中微生物的唯一方法。
通过对除菌过滤器滤芯材质的选择、灭菌方法、完整性测试以及细菌的截留试验，确认除菌的效果，提高除菌过滤在注射剂生产过程中无菌保证程度重要性的认识。
1材料与方法1.1试验材料(1)滤芯：滤膜材质为聚醚砜，10英寸226卡式，孔径：0.22μm，级别：除菌级，滤膜面积：3600cm2。
来源：颇尔过滤器(北京)有限公司。
(2)全自动过滤器完整性测试仪：上海先维过滤设备厂，型号：212A。
(3)甘露醇：广西南宁化学制药有限公司，批号：0809110，配置20kg浓度为0.5%的水溶液。
(4)微生物指示剂：缺陷假单孢菌(ATCC19146直径0.3～0.4μm)，北京鑫四环消毒技术开发中心。
(5)菌液浓度：每平方厘米应达到107个菌的挑战水平。
(6)培养基：硫乙醇酸盐流体培养基：北京三药科技开发公司，批号:081111；营养琼脂：广东环凯微生物科技有限公司，批号:200902081；营养肉汤：广东环凯微生物科技有限公司，批号:200901071。
无菌制剂工艺的风险评估 2
无菌制剂工艺的风险评估工序失效模式失效原因最差影响严重可能可检风险优控制措施风险接性性测性先性受程度领料原料购进、储存物料质量不符合产品质量不符合高中高低逐包件检查、按可接受条件不符合规定取样检验称量过程物料污染除尘措施差清洁不彻底产品被污染高中低高行外清洁SOP 可接受称改进除尘设施称量物料错误监督、复核失误产品质量不符合高低低低称量前确认物可接受料品名、批号量称量偏差计量器具未校准或过期产品质量不符合中中高中计量器具每次可双人复核失误称量校准，严格接双人复核受清洗去除微粒、清洗水压不足、水温最终产品中受高中高中加强人员培训洗污染物不彻底度不符合工艺要求微粒或污染物岗位每15min检一残留水超标气压不足温柔，产品质次或报警装置可量不符合按规定运行设备瓶子包装完好洗瓶设备经清洗效果和微生物接残留验证。
设置洗瓶水过滤器压瓶差和水压低限保护传感器。
规定受洗瓶水过滤器最长使用时间；对粗洗后的玻璃瓶逐瓶进行灯检，将有缺陷的剔除瓶子干热燧道热分布设备验证失败容器微生物或重新验证，及时可干燥不均匀或温度偏低能源供给不稳定，燧道内毒素残留，高中低高检查电源，每3 接灭菌洁净度不符合出口气流压差较大严重影响月监测洁净度受高效泄漏产品质量胶塞清洗后的胶塞残留清洗水质、时间、水压直接污染产品，重新验证确定相关可清洗微粒，灭菌失败或符合，灭菌温度时间不不溶性微粒、微生高中低高参数，确保SOP 接灭菌储存转移过程污染够，储存转移容器不适合物或热原不符合执行，密闭容器受容器具清洁不彻底，灭菌清洗验证失败，未严格直接污染产品定期进行灭菌效可更换部失败，受到二次执行清洗灭菌SOP，高中低高果验证，执行SOP、接件灭菌污染未干燥或超时限保存规定时限内干燥受保存。
配制投料错误，体积计算投料前未认真核对，操作产品质量不符合，投料前严格核对，可失误，温度控制不失误，现场监督缺失，或溶液溶解度高中高中操作人员加强培训接系统符合，搅拌器转速、均匀性出现配制过程严格双人受功率、搅拌时间错误偏差复核，QA监督。
【精品】灭菌工艺与灭菌柜风险评估教学资料
灭菌工艺 灭7/17菌/20工21艺 几个基本概念和问题的通俗理解
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● D值和Z值
D值：以时间（min）为单位，使微生物降低90%或一个对数值所需要的时间。 制药环境发现的微生物绝大多数是不耐热的，D值121度时小于0.5min（很少发现 0.5min ），通常取1min。
Z值：使D值变化10倍所需的温度，湿热时一般为10度，干热时一般为20度。
● 运行要求：
所有温度探头数据达到灭菌温度时开始计时。 保温段，腔室内温度波动范围应在设置值±1.0℃间波动（需精确控温的灭菌 柜应达±0.5℃），最冷点和最热点间温差≤2℃。 灭菌周期中，喷淋水量的变化幅度、流速。 喷淋 循环使用时，应有水温和水压监测以及报警装置 主循环管路上应带有喷淋水流量检测装置。 喷淋方式。 喷淋无死角。 补充或排出空气的量的可接受标准。 能源（蒸汽、冷却水）波动、、装载方式。
灭菌工艺 灭7/17菌/20工21艺 湿热灭菌工艺设计应考虑的因素
18
● 容器密封系统可靠性、完整性 1、灭菌时的污染和货架（贮存期）污染：防破坏密封系统结构导致灭菌介质污染及贮 存污染 2、灭菌过程中，橡胶和塑料密封受到热应力作用； 3、现有密封型式（密封屏障）主要为：热融，胶塞和铝盖卷边； 4、当容器内压大于腔室2巴时：产品变形，损坏密封； 5、暴露在最大灭菌条件下染料渗入试验，微生物挑战试验或物理完整性测试。
关于水浴灭菌柜 温度对F0值的影响
灭菌柜
水浴灭菌柜灭菌时存在的风险
生物挑战实1
22
关于水浴灭菌柜
● 构成要素： 符合法规的容器（超50%的要求压力值） 安全门及其控制 过程控制系统和数据处理系统 辅助及管路系统（泵、管道、换热器、水位阀、喷头等） 货架/内车 安全泄压阀
工艺验证方案中风险评估报告
1.概述：根据《药品生产质量管理规范》2010年修订第二章第十四条规定：应当根据科学知识及经验对质量风险进行评估，以保证产品质量。
本报告是对公司工艺验证方案中质量风险评估。
2.目的：通过对生产部门质量风险评估，确认目前采取的各项生产管理控制措施可以将产品在生产过程中产生的质量风险控制在可以接受的范围内。
3.范围工艺验证方案中质量风险评估4.风险识别评估--工艺验证中涉及到导致验证失败的风险因素( 表1)5、采取避免风险的措施后再评估针对以上可能产生的情况，我们采取以下措施：（表2）6.评估结论：根据以上分析评估，对存在风险经采取相应措施后，我公司生产工艺验证方案中质量风险基本可控，确保工艺验证的有效性。
工艺验证工作中还应加强以下几点：6.1.认真做好操作人员和验证人员培训工作。
将工艺验证过程中可能发生的质量风险贯彻到每个操作人员思想意识中、落实到每个验证环节中去。
6.2. 操作人员和验证人员严格执行各项管理规程和生产操作规程，所有验证应该复核的工作必须坚持做到。
表1工艺验证风险要素和级别列表风险序号可能的风险风险级别1 文件不完整或内容有错误，或者包含有让人误解的信息。
高2 操作人员没有经过相关培训，导致未按规定的要求进行操作中3 生产设备不匹配、操作不当或没有校验中4 车间洁净区尘埃粒子、沉降菌超标，房间之间压差不符合要求中5 纯化水不符合要求高6设备及场地清洁不彻底，导致成品微生物限度超标高评估意见根据以上分析评估，对工艺验证存在风险点采取相应的消减措施评估人员：年月日表2 采取避免风险的措施后评估表。
PDA技术报告NO.26(2008版)(中文)
液体的除菌过滤PDA第26份技术报告（2008年修订本）制药科学与技术的PDA期刊增刊2008年第62卷，第S-5号1.0引言除菌过滤是从液体流中去除微生物*而对产品质量没有负面影响的过程。
（1-4）这份技术报告的目的是提供系统的方法，用于选择和验证液体除菌过滤应用的最适当过滤器。
PDA的第26份原始技术报告发表于1998年，标题为液体的除菌过滤，其中描述了一代制药科学家和工程师对除菌过滤的使用和验证。
由于过滤技术的加强以及制药行业近期产生了其他的法规要求，因而对原始报告进行了修改。
修订本涉及到了法规文件、标准以及科学出版物，其中包含更多的细节和支持性数据。
在20世纪60年代膜过滤器进入市场，当时认为0.45µm级别的膜为“除菌级”且过滤器成功应用于注射剂的除菌过滤。
使用serratia marcescens作为标准菌对这些过滤器进行确认，确认用于水质量测试的膜。
然而在1960年发布的论文中，美国FDA的Frances Bowman博士发现0.45µm的“除菌过滤的”培养基可受到一种生物的污染，在每平方厘米104-106以上的挑战水平下少量的这种生物可反复穿透0.45µm级别的膜。
（5）ASTM F838也由此产生，这是一种标准测试法，用于评估除菌级别的膜过滤器。
（6）在第6.4部分中对挑战生物进行了讨论。
1.1目的/ 适用范围工作组的主要目标是开发一份有关除菌过滤的科学的技术报告。
报告不会对区域的法规要求进行过多的描述，但是提供了最新的科学建议以供业内人士及制定除菌过滤政策的人员使用。
这份报告是一份指南性文件，其目的不是确立强制的除菌过滤标准。
报告中提出的概念与一些工艺有关，在这些工艺中除菌过滤器的性能是不可缺少的，而且这些概念不能通用于所有过滤工艺（例如，早期过滤或常规生物负载）。
这些概念包括但不限于细胞培养基、缓冲液、无菌工艺中的中间体暂存区、集中和最终无菌灌装。
验证质量风险评估
药业有限公司验证质量风险评估工艺参数关键性评估报告验证项目名称：头孢车间厂房及设备消毒效果验证验证项目代号： WT.YZ.SJ-015-(01) 验证项目阶段：验证回顾阶段报告起草（签名/日期）：张金2012年1月18日审核（签名/日期）：批准（签名/日期）：基本定义和方法一、基本定义与概念二、风险评估（一）风险确认：识别潜在风险源，筛选出影响厂房及设备消毒效果的各种风险因素。
（二）风险分析及评价：对以上风险发生的可能性及其对验证结果造成的危害程度进行分析，包括问题的严重性、发生的可能性、发生的可识别性、可检测性等。
三、风险控制：采取有效措施消除风险发生的根本原因，将风险结果最小化，减少风险发生的可能性，使风险转移或分担，保证风险在可以接受的水平。
四、风险评审：审核风险管理结果，是否采用最佳风险管理策略，执行了预定方案和措施，达到了预期效果。
注：除负责人及完成时间需填写，其余项是打“√”否打“×”。
五、风险沟通：各部门各执行人员共同分享风险管理信息，促进信任和理解，积极沟通和交流，挖掘本次验证风险评估的优缺点，以便在下次或其他方面的风险评估管理中取长补短，不断改进。
六、风险回顾：包括现有风险的回顾，定期风险的回顾，或通过一段时间的运行，需要对整个系统的风险进行审核，之前采用的风险控制措施预期效果是否明显，或许工艺或设备等发生了一些变更，从而需要对整个过程进行再评估，甚至如果变更很大，应该在变更执行完以后就立刻开始风险回顾的工作。
（一）现有质量风险回顾：1.风险因子R=O*S*D3.回顾质量风险管理的整个过程，审核风险最终控制结果。
CR=O*S*D/FX/ZX*RX*XKCR＜1 风险消除1≤CR≤2 风险可控2＜CR＜3 风险降低3≤CR≤4 风险仍在CR＞4 风险未变4.通过对验证风险因子及风险因子消除的回顾，确定为消减风险所采取的补救、纠正和预防方案措施效果较好，执行有力，达到预期目标，风险最终被消除或在可控范围。
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细菌截留验证之工艺风险评估
不同等级的风险与过滤工艺参数是相联系的，有些与过滤前产品中的微生物繁殖有关，而另外一些与较高的细菌穿透过滤器的风险相关。
见表2。
表14-7 工艺风险评估因素
C. 挑战微生物选择标准
缺陷假单胞菌（B.diminuta）ATCC ®19146TM（历史上为P. diminuta），被选择作为细菌挑战实验的微生物。
如果使用了其它细菌，这些细菌必须小至可以挑战除菌级过滤器的截留能力，并可以模拟在产品中发现的最小微生物。
相应地，替代挑战微生物可被用于验证研究，只要原有的过滤前微生物污染水平被发现是更相关的。
如果可能，自有微生物污染水平应该被描述、计数和鉴别，因为这些微生物有穿透除菌级过滤器的潜在可能性。
被分离的微生物形态也要考虑。
挑战微生物的尺寸需要通过穿透0.45微米孔径的膜来确认，这是每个挑战实验的阳性对照。
在标准培养基条件下生长的缺陷假单胞菌（见下“培养基维护和挑战微生物制备”）在高挑战水平下（通常≥107）会少量透过0.45微米滤膜。
有些情况下，缺陷假单胞菌不一定是代表最差条件的模型。
如果选用了不同的挑战微生物，需要提供文件解释。
D. 培养基维护和挑战微生物制备
缺陷假单胞菌ATCC®19146TM可以冻干的形式从美国典型培养物中心（ATCC）或者本国的同等机构获得。
在按照ATCC的规程复壮微生物后，可
以按照微生物操作规范在适宜的培养基中冷藏或冷冻保存。
需要建立用于挑战研究的工艺分离物的储存条件。
两种标准技术被公认适宜用于细菌挑战实验用缺陷假单胞菌的制备和维护。
它们是SLB法和FCP法（冷冻细胞浆法）。
两种方法都被发现可有效生产适宜的缺陷假单胞菌悬液，缺陷假单胞菌的尺寸大约为直径0.3-0.4微米，长度0.6-1.0微米。
替代的培养基和培养方法也可能同样有效制备缺陷假单胞菌，只要这些方法可以生产出单一的，分散的细胞，尺寸适宜穿过0.45微米孔径的膜过滤器。
替代培养法需要被验证。
库存的细菌挑战培养物的聚集情况可用光学显微镜检查。
如果观察到聚集现象，将保存培养物置于超生波清洗槽的冷水中10分钟是可将团聚物分散的一个方法。
水浴的气穴作用可将细菌细胞分散，不影响细胞活性。
应使用光学显微镜、活性计数和0.45微米孔径对照过滤器的下游回收来确认分散效果。
细菌挑战实验浓度应保证在目标工艺时间里提供始终如一的挑战，挑战的水平达到基于过滤器表面积至少107 CFU/cm²。
当计算细菌挑战浓度时，应综合考虑诸如流速、时间和压差等操作参数。
大于等于107/cm²的细菌挑战水平就是对除菌级过滤器的要求（历史上用0.2微米孔径来标称的过滤器）。
这一水平来源于Bowman的观察和她的建议，即缺陷假单胞菌在大于104－106 CFU/ cm²细菌挑战水平时可穿透0.45微米标称的膜，应当用107 CFU/cm2缺陷假单胞菌来证明0.2微米标称的膜为“除菌级”，以确保有足够的灵敏度发现超尺寸孔。
细菌挑战浓度（CFU/ml）不应与细菌挑战水平（CFU/cm2）相混淆。
缺陷假单胞菌悬液的生存力和滴度应使用合适的回收培养基来确认，例如大豆酪蛋白消化肉汤或者米勒辛顿琼脂。
当进行过滤器挑战时，细菌挑战菌悬液的活力滴度应当在挑战前和挑战后立刻被确定。
上游细菌滴度应使用被认可的微生物学测试方法确认。
应使用同样的培养基确认任何在下游回收的缺陷假单胞菌。