【CN110003308A】一种从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素及应用【专利】
一种分离、纯化相思子毒素的方法及其产品[发明专利]
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[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101560243A [43]公开日2009年10月21日[21]申请号200810104211.4[22]申请日2008.04.17[21]申请号200810104211.4[71]申请人高南南地址100094北京市海淀区马连洼北路151号百草园8号楼1单元402[72]发明人高南南 林红 [74]专利代理机构北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司代理人孙皓晨 费碧华[51]Int.CI.C07K 1/22 (2006.01)C07K 1/16 (2006.01)C07K 14/415 (2006.01)A61K 38/56 (2006.01)A61P 35/00 (2006.01)权利要求书 2 页 说明书 20 页 附图 10 页[54]发明名称一种分离、纯化相思子毒素的方法及其产品[57]摘要本发明公开了分离、纯化云南相思子毒素的方法，包括：将相思子粗毒素上酸化的Sepharose4B亲和层析柱，先用缓冲液洗脱杂蛋白，然后用半乳糖进行梯度洗脱，收集半乳糖梯度洗脱液；浓缩后加样于DEAE－SepharoseFF凝胶面上，洗脱杂蛋白，梯度洗脱，收集梯度洗脱液，浓缩、脱盐，即得。
本发明方法利用两次层析就可以得到相思子的两种毒素蛋白纯品，不仅简化了纯化步骤，而且再纯度，产率上均有显著提高，为大规模的纯化奠定了基础。
体外抗肿瘤活性试验和动物移植性肿瘤抑制作用试验结果表明，本发明所分离的相思子毒素对Bel7402等10余种肿瘤细胞均有很强的抑制作用，能有效的抑制动物移植性肿瘤的增殖活性。
200810104211.4权 利 要 求 书第1/2页 1、一种分离、纯化云南相思子(Abrus precatorius L.)毒素P1、P2的方法，包括：(1)将云南相思子粗毒素上酸化的Sepharose4B亲和层析柱，先用初始平衡缓冲洗脱掉杂蛋白，然后用半乳糖梯度洗脱液进行梯度洗脱，收集半乳糖梯度洗脱液的前面两个在280nm处有吸收的峰；(2)将步骤(1)所收集的洗脱液浓缩后加样于D E A E-S e p h a r o s e F F凝胶面上，先用洗脱平衡液洗脱掉杂蛋白；然后用含0-0.5mol/L NaCL的10mmol/L Tris-HCL进行梯度洗脱，分别收集在280nm处有吸收的前两个较大的峰，分别浓缩后进行脱盐处理，即得P1、P2。
《大腹园蛛主壶腹腺cDNA文库构建和丝蛋白基因筛选》
《大腹园蛛主壶腹腺cDNA文库构建和丝蛋白基因筛选》大腹园蛛主壶腹腺cDNA文库构建与丝蛋白基因筛选的高质量研究一、引言近年来，随着生物信息学和分子生物学的快速发展，cDNA 文库构建技术已成为研究生物基因组学、蛋白质组学以及生物医药领域的重要工具。
大腹园蛛作为一种重要的经济昆虫，其产出的丝质产品具有优良的物理性能和生物相容性，广泛应用于多个领域。
因此，对大腹园蛛主壶腹腺cDNA文库的构建及丝蛋白基因的筛选研究具有重要的理论和实践价值。
本文将重点探讨大腹园蛛主壶腹腺cDNA文库的构建方法和丝蛋白基因的筛选策略。
二、大腹园蛛主壶腹腺cDNA文库构建1. 材料与方法(1) 样本采集：选取健康的大腹园蛛，采集其主壶腹腺组织。
(2) mRNA提取与纯化：利用Trizol法提取主壶腹腺组织中的mRNA，经过纯化处理后获得较纯净的mRNA。
(3) cDNA合成与双链DNA制备：以mRNA为模板，通过反转录合成cDNA，再利用PCR技术扩增双链DNA。
(4) 文库构建：将双链DNA插入适当的载体，构建cDNA文库。
(5) 文库质量检测：通过蓝白斑筛选、PCR鉴定及测序等方法检测文库的质量。
2. 结果与讨论cDNA文库的构建是基因功能研究的基础。
在文库构建过程中，需确保mRNA提取的纯度、cDNA合成的效率以及双链DNA的准确性。
通过蓝白斑筛选、PCR鉴定等手段，可有效评估文库的质量和完整性。
此外，利用新一代测序技术对文库进行深度测序，可获得更全面的基因信息。
三、丝蛋白基因筛选1. 材料与方法(1) 生物信息学分析：利用生物信息学软件对cDNA文库中的序列进行初步分析，预测可能的丝蛋白基因。
(2) 实时荧光定量PCR：通过实时荧光定量PCR技术，对预测的丝蛋白基因进行表达量的检测。
(3) 基因克隆与测序：将PCR产物进行克隆，并对克隆的基因进行测序验证。
(4) 序列比对与功能注释：将测序结果与已知的丝蛋白基因序列进行比对，并对功能进行注释。
高效蜘蛛毒素提取纯化及其应用前景
高效蜘蛛毒素提取纯化及其应用前景近年来，随着科技不断发展和进步，人们在各个领域中也得到了更多的技术和装备的支持。
其中，生命科学领域不仅仅是传统的研究、诊断、治疗和预防生命体系疾病的工作，更是涉及到了许多的前沿科技和先进技术的应用。
其中，高效蜘蛛毒素的提取和纯化技术的应用，成为了当下研究生命科学不可忽视的一大重点。
一、高效蜘蛛毒素的提取技术蜘蛛毒素是一种可有可无的化学成分，它能够在蜘蛛身上发挥重要的功能。
蜘蛛毒素有多种表现形式，其中包括低毒素、中毒素和高毒素等。
而这些不同的毒素类型，又能够被分解成更为精细的分类，这具体取决于不同的研究目的。
在使用高效蜘蛛毒素进行分析、研究、治疗和预防等方面，要求毒素的提取方法高效、简便。
目前，主要的蜘蛛毒素提取方法有常温浸提法、冻融法、超音波法、离子交换法、反渗透纯化法等。
尽管不同的方法都有其独特的优劣之处，而顶级的高效提取技术，主要既包括常温浸提法和反渗透纯化法。
常温浸提法主要将蜘蛛放置于含有烷基苯、醇或氯仿等溶液的离心管中，让毒素自行浸泡，然后用离心机将毒素沉淀下来即可；反渗透纯化法则是通过半导膜过滤，将蜘蛛体内的毒素分离出来，再进行表征。
二、高效蜘蛛毒素的纯化技术高效蜘蛛毒素的纯化，是蜘蛛毒素应用的重要环节。
在某些情况下，毒素已经被分离出来，但它的质量和纯度都不尽如人意，需要进行组分分离、提纯、纯化和确定化，以得到高纯度的毒素样品并保证后续应用的安全和稳定性。
常见的蜘蛛毒素纯化方法有：上样电泳法、高效液相色谱法、纸层析法、凝胶过滤技术等。
上样电泳法是将毒素按分子大小进行组分分离；高效液相色谱法是通过高效液相色谱来分离毒素。
最后，采用不同的检测方法以判定毒素纯度。
三、高效蜘蛛毒素的应用前景高效蜘蛛毒素具有多种生物学和药理学特性，在医疗、科学和农业等领域都有广泛的应用前景。
在医疗领域，蜘蛛毒素可以作为镇痛剂、中枢神经系统调节剂、抗肿瘤、抗炎和残留药物等多种药剂的前驱物，尤其是作为治疗癌症和中枢神经系统疾病的重要药物，已经获得了不少的关注和重视。
Intein介导的天然大腹园蛛MiSp重复区基因在毕赤醇母的表达研究的开题报告
Intein介导的天然大腹园蛛MiSp重复区基因在毕赤醇母的表达研究的开题报告背景介绍：大腹园蛛（Missulena bradleyi），又称毒拉肚蛛，是一种生活在澳大利亚的有毒蜘蛛。
它们具有强烈的攻击性，毒素也非常危险。
然而，大腹园蛛的毒素却拥有着广泛的药理作用，包括神经调节、肌肉收缩、凝血和慢性疼痛治疗等。
因此，研究大腹园蛛毒素的结构和功能对于开发新型药物具有非常重要的意义。
miSp是大腹园蛛中一种富含甘氨酸和丝氨酸的蛋白质，其重复区域在分子生物学研究中被广泛应用。
很多研究发现，miSp的结构和功能受到Intein介导的剪切和连接作用的调控。
然而，关于Intein介导的miSp 基因在大腹园蛛中的表达机制，目前还没有深入研究。
研究目的：本研究旨在探究Intein介导的miSp基因在大腹园蛛中的表达情况，为进一步研究miSp的结构和功能提供重要的基础数据。
研究内容：1. 通过文献调研和实验分析，确定Intein介导的miSp基因在大腹园蛛中的表达模式和调控机制。
2. 借助生物信息学工具，对大腹园蛛miSp基因的序列进行分析和比对，揭示其重复区域的特征和变异情况。
3. 利用实验手段，对大腹园蛛miSp基因在不同组织、不同发育阶段以及应激条件下的表达情况进行检测和分析。
4. 通过Western blot和质谱技术等方法，验证Intein介导的miSp 蛋白质在大腹园蛛中的表达情况和分布规律。
研究意义：通过深入研究Intein介导的miSp基因在大腹园蛛中的表达机制和调控，我们可以更全面地了解miSp在蜘蛛生物体内的分布和作用方式。
同时，这项研究还可以为探索miSp的结构和功能奠定基础，并且为开发新型药物提供理论依据和实验支持。
一种提取蜘蛛基因组dna的有效方法
动物学杂志 2007,42(6):64~68一种提取蜘蛛基因组DNA 的有效方法陈国亮 邵爱云 孟 清∗(东华大学生物科学与技术研究所 上海 201620)摘要:介绍了用尿素法提取蜘蛛基因组DNA 。
通过与其他DNA 提取方法相比较,证明尿素法具有可在室温条件下进行、DNA 得率高、完整性好、简单快速等优点。
以提取的DNA 为模板进行PCR 扩增,获得预期大小的、高重复、高GC 含量的编码蜘蛛牵引丝蛋白基因的DNA 片段。
关键词:蜘蛛;基因组DNA ;DNA 提取;PCR 扩增中图分类号:Q 81 文献标识码:A 文章编号:0250⁃3263(2007)06⁃64⁃05A E fficien t M ethod for Extraction of Sp i ders ’G eno m ic DNACHEN Guo⁃L iang SHAO A i⁃Yun MENG Q ing ∗(,, 201620,)A b stract :The presen t paper deals w ith the urea lyses m ethod for isolating sp iders’genom ic DNA s .C om pared to othert w o known m ethods ,th is m ethod produced sp ider genom ic DNA s w ith h igher yields and h igher in tegrity .It is also si m p ler and less ti m e⁃consum ing ,involving on ly room tem perature m an ipu lations .H igh quality genom ic DNA s wereisolated from sp ider by th is m ethod .Certain sp ider dragline gene fragm ents ,wh ich con tain h igh ly repetitive sequences of h igh GC con ten ts ,were successfu lly PCR ⁃am p lified .K ey w ord s :Sp ider ;G enom ic DNA ;DNA extraction ;PCR am p lification基金项目 国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(N o .2006AA 03Z0451);∗通讯作者,E ⁃m ail :m engq ing @dhu .edu .cn ;第一作者介绍 陈国亮,男,硕士研究生;研究方向:生物化学与分子生物学;E ⁃m ail :chenguoliang @m ail .dhu .edu .cn 。
狼蛛毒素的分离与纯化
狼蛛毒素的分离与纯化狼蛛毒素是指由狼蛛体内分泌出来的具有毒害性质的化合物。
狼蛛是八脚目中的一种，其毒素对人体具有较强的毒害作用，包括神经、血液、肌肉、心脏等多个系统。
因此，狼蛛毒素在医学和科学研究领域中具有重要的价值和意义。
狼蛛毒素的分离与纯化一直是狼蛛毒素研究领域中的热门话题。
本文将从狼蛛毒素的来源、分离与纯化的方法等方面进行探讨。
一、狼蛛毒素的来源狼蛛毒素存在于狼蛛的毒液中，而狼蛛的毒液是由头盖下部的毒腺分泌产生的，狼蛛通过咬人释放毒液。
一般来说，毒液是由多种不同的成分混合而成的，其中包括狼蛛毒素、蛋白质、酶、氨基酸、糖类等多种生物分子。
二、狼蛛毒素的分离与纯化方法1、毒液采集和提取狼蛛毒素的分离和纯化首先需要采集和提取毒液。
传统的采集方法是通过手套或钳子将活体狼蛛放到一个封闭的器皿中，使其自然释放毒液，然后通过腺泵或口头吸管等方法将毒液集中收集。
此外，也可以通过电刺激或药物刺激等方法促使狼蛛释放毒液。
收集到的毒液需要进行初步的提取处理，一般使用酸、碱、有机溶剂等进行提取。
2、色谱分离技术色谱分离技术是狼蛛毒素的主要分离和纯化方法之一。
色谱分离技术包括液相色谱、气相色谱、离子交换色谱、亲和色谱、大小排除色谱、反相色谱等。
其中，离子交换色谱法是最常用的方法之一。
该方法是根据化合物中所含的离子性结构基团对它们进行分离纯化。
3、电泳分离技术电泳分离技术是一种以电场为驱动力的生物大分子分离方法，包括凝胶电泳和毛细管电泳等。
其中凝胶电泳是最常用的方法之一，可按照分子量将复杂的混合物分为单一的组分。
当混合物通过凝胶时，其成分会被不同程度地延迟或被拖拽移动，从而分离出不同的组分。
4、质谱分析技术质谱分析技术是一种用于分析样品组成及分子结构等的分析方法。
质谱分析技术可以通过测量分子质量、化合物的分子离子碎片、分子中包含的各种化学官能团等分析出一系列信息，这些信息能够帮助研究者确定化合物的结构、组成和性质等信息。
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910299466.9
(22)申请日 2019.04.15
(71)申请人 湖南师范大学
地址 410081 湖南省长沙市岳麓区麓山路
36号
(72)发明人 段志贵 刘凯
(74)专利代理机构 长沙七源专利代理事务所
(普通合伙) 43214
代理人 郑隽 吴婷
(51)Int.Cl.
C07K 5/078(2006.01)
A01N 47/44(2006.01)
A01P 7/04(2006.01)
(54)发明名称
一种从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子
毒素及应用
(57)摘要
本发明属于化学化工技术领域，涉及一种从
大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素及应用，
从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素是季
铵类小分子毒素，相对分子量是757.5112，核磁
共振结构解析从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小
分子毒素的分子式是C 36H 64O 5N 13，本发明提供了
一种对昆虫具有选择性活性、受pH影响较小、作
用更强以及效果更稳定的从大腹园蛛粗毒中分
离纯化的小分子毒素及应用。
权利要求书1页 说明书5页 附图7页CN 110003308 A 2019.07.12
C N 110003308
A
1.一种从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素，其特征在于：所述从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素是季铵类小分子毒素。
2.根据权利要求1所述的从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素，其特征在于：所述从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素的相对分子量是757.5112，核磁共振结构解析从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素的分子式是C 36H 64O 5N 13。
3.根据权利要求2所述的从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素，其特征在于：所述
从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素的结构式为：
4.如权利要求1或2或3所述的从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素在杀虫剂或在神经生物学试剂和/或药物中的应用。
5.如权利要求4所述的从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素以阻断或完全阻断昆虫钠离子通道的方式作为杀虫剂时的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素完全阻断昆虫钠离子通道时，所述从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素的使用浓度不大于10μmol/L；所述从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素对昆虫钠离子通道的半数有效浓度不大于1μmol/L。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述从大腹园蛛粗毒中分离纯化的小分子毒素对昆虫钠离子通道的半数有效浓度是0.77±0.05μmol/L。
权 利 要 求 书1/1页2CN 110003308 A。