【儿科PPT课件】流式细胞术在微小残留(MRD)检测中的应用
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流式细胞术在微小残留(MRD)检测
流式细胞术在微小残留（MRD） 检测中的应用
一、MRD概念
指白血病患者经诱导治疗达临床缓解后，体 内残存的少量白血病细胞。此时白血病细胞 仍可达1010，是复发的根源。研究表明当体 内白血病细胞小于106时，肌体通过自身免疫 机制可将之清除。即MRD检测敏感性应达到 10-4，才有意义。
二、MRD检测意义
4、流式细胞术：根据白血病细胞表面或细胞 内免疫分子来区别并计数白血病细胞。可以 直接计数白血病细胞（PCR是根据扩增产物 的量进行推算），并可区分活细胞或将要凋 亡 的 细 胞 及 碎 片 。 敏 感 性 10-4 ， 较 PCR 低 （但达到临床要求）；白血病进展及治疗后，
免表型可能发生改变，造成假阴性。目前 仍是最简单、直接、精确、使用的方法。
3、时机选择：常在化疗第19天取第一次标 本进行检测。此时白血病细胞及正常重建的 细胞都存在；经过化疗后白血病细胞免疫表 型可能发生改变，而此时已经经过一轮强烈 化疗，今后再变的可能性较小；此时白血病 细胞和正常重建细胞在流式图上的分布特点 就是今后区分白血病细胞与正常细胞的依据。
4、常用抗体组合及其有效频率：
12.86% 91.43%
TdT/CD10/CD34/CD19抗体组合
2、 荧光原位杂交（FISH）：依靠区域特异 DNA探针对染色体染色来鉴别染色体数量和 结构的改变，从而区分白血病细胞。分子水 平。敏感性差。
3、聚合酶链反应（PCR）：通过检测扩增 的靶系列（染色体断裂点融合区、免役球蛋 白及T细胞受体基因重排）来区分白血病细胞。 敏感性最高10-6 。但覆盖面小（65%儿童 ALL缺乏特异的含有断裂点融合区的染色体 改变；另由于白血病细胞重组酶活性较强， 重排基因可能进一步重排，造成假阴性。）
一、MRD概念
指白血病患者经诱导治疗达临床缓解后，体 内残存的少量白血病细胞。此时白血病细胞 仍可达1010，是复发的根源。研究表明当体 内白血病细胞小于106时，肌体通过自身免疫 机制可将之清除。即MRD检测敏感性应达到 10-4，才有意义。
二、MRD检测意义
4、流式细胞术：根据白血病细胞表面或细胞 内免疫分子来区别并计数白血病细胞。可以 直接计数白血病细胞（PCR是根据扩增产物 的量进行推算），并可区分活细胞或将要凋 亡 的 细 胞 及 碎 片 。 敏 感 性 10-4 ， 较 PCR 低 （但达到临床要求）；白血病进展及治疗后，
免表型可能发生改变，造成假阴性。目前 仍是最简单、直接、精确、使用的方法。
3、时机选择：常在化疗第19天取第一次标 本进行检测。此时白血病细胞及正常重建的 细胞都存在；经过化疗后白血病细胞免疫表 型可能发生改变，而此时已经经过一轮强烈 化疗，今后再变的可能性较小；此时白血病 细胞和正常重建细胞在流式图上的分布特点 就是今后区分白血病细胞与正常细胞的依据。
4、常用抗体组合及其有效频率：
12.86% 91.43%
TdT/CD10/CD34/CD19抗体组合
2、 荧光原位杂交（FISH）：依靠区域特异 DNA探针对染色体染色来鉴别染色体数量和 结构的改变，从而区分白血病细胞。分子水 平。敏感性差。
3、聚合酶链反应（PCR）：通过检测扩增 的靶系列（染色体断裂点融合区、免役球蛋 白及T细胞受体基因重排）来区分白血病细胞。 敏感性最高10-6 。但覆盖面小（65%儿童 ALL缺乏特异的含有断裂点融合区的染色体 改变；另由于白血病细胞重组酶活性较强， 重排基因可能进一步重排，造成假阴性。）
流式细胞术的临床应用ppt课件
实验诊断科 分子诊断组
数据分析
设门（gating）：
根据某些特性将分析细胞群
圈起来。
淋巴细胞：FSC/SSC CD45++/SSCdim T淋巴细胞：CD3+/SSCdim
实验诊断科 分子诊断组
数据分析
直方图
单参数分析
横坐标：信号强度
纵坐标：细胞数量
实验诊断科 分子诊断组
数据分析
散点图
双参数分析 横、纵坐标代表的均是信号强度 UL: cd3-cd4+ LL: cd3-cd4UR: cd3+cd4+ LR: cd3+cd4-
实验诊断科 分子诊断组
标本染色的一般方法
FCM的临床应用
已开展的临床项目 其他临床应用
实验诊断科 分子诊断组
标本染色的一般方法
标本来源：
外周血、骨髓、组织块、培养细胞、脑脊 液、胸腹水、肺泡灌洗液(BALF)及其脱落细 胞。 血清和各类体液样本（可溶性蛋白）
实验诊断科 分子诊断组
前期处理
CSF、BALF、胸腹 水等：
结合淋巴细胞绝对数来看待百分比的改变
AIDS
实验诊断科 分子诊断组
已开展的项目
HLA-B27
试剂：BD HLA-B27 Kit 标本：外周血 检测指标： T (CD3+)淋巴细胞上HLA-B27 定性检测
实验诊断科 分子诊断组
实验诊断科 分子诊断组
HLA-B27
临床意义：强直性脊柱炎（高度相关） 遗传性关节炎
数量的检测 采集时机的确定
某些肿瘤
实验诊断科 分子诊断组
已开展的项目
白血病和淋巴瘤（L&L）免疫分型
《急性髓系白血病微小残留病检测与临床解读中国专家共识》PPT课件
微小残留病检测的挑战与解决方 案
技术挑战与改进方向
灵敏度与特异性
提高检测方法的灵敏度和特异性，减少假阳性和假阴 性结果。
多参数检测
开发能够同时检测多种标志物的技术，提高检测的全 面性和准确性。
标准化与质量控制
建立标准化的操作流程和质量控制体系，确保检测结 果的准确性和可重复性。
临床解读的困难与对策
其他检测技术
免疫学技术
利用免疫学原理，通过特异性抗体与 白血病细胞结合，实现对微小残留病 的检测。包括免疫荧光、免疫组化等 方法。
细胞遗传学技术
新兴技术
包括基于新一代测序技术的基因突变 检测、基于质谱技术的蛋白质组学分 析等，为微小残留病的检测提供了新 的手段。
利用染色体核型分析、FISH等技术对 白血病细胞的遗传学异常进行检测， 从而评估微小残留病的情况。
临床解读
深入探讨了微小残留病检测结果与预后的关系，以及如何根据检测结 果调整治疗方案。
专家建议
针对目前存在的问题和挑战，提出了具体的改进措施和建议，包括完 善检测标准、提高检测灵敏度、加强临床与实验室沟通等。
展望未来发展趋势
技术创新
随着科技的不断发展，新的检测技术将不断涌现，如单细 胞测序、液体活检等，有望提高微小残留病检测的准确性 和灵敏度。
缺点
对操作人员技术要求较高，且抗体选择和标记方法可能影响检测结果 。
分子生物学技术检测
原理
利用PCR、RT-PCR等分子生物学技术对白血病特异性基因 或融合基因进行扩增和检测，从而实现对微小残留病的分
子水平监测。
优点
具有高灵敏度、高特异性等优点，能够在分子水平上检测 白血病细胞的残留情况。
缺点
可能受到样本质量、引物设计等因素的影响，且部分方法 操作复杂、成本较高。
技术挑战与改进方向
灵敏度与特异性
提高检测方法的灵敏度和特异性，减少假阳性和假阴 性结果。
多参数检测
开发能够同时检测多种标志物的技术，提高检测的全 面性和准确性。
标准化与质量控制
建立标准化的操作流程和质量控制体系，确保检测结 果的准确性和可重复性。
临床解读的困难与对策
其他检测技术
免疫学技术
利用免疫学原理，通过特异性抗体与 白血病细胞结合，实现对微小残留病 的检测。包括免疫荧光、免疫组化等 方法。
细胞遗传学技术
新兴技术
包括基于新一代测序技术的基因突变 检测、基于质谱技术的蛋白质组学分 析等，为微小残留病的检测提供了新 的手段。
利用染色体核型分析、FISH等技术对 白血病细胞的遗传学异常进行检测， 从而评估微小残留病的情况。
临床解读
深入探讨了微小残留病检测结果与预后的关系，以及如何根据检测结 果调整治疗方案。
专家建议
针对目前存在的问题和挑战，提出了具体的改进措施和建议，包括完 善检测标准、提高检测灵敏度、加强临床与实验室沟通等。
展望未来发展趋势
技术创新
随着科技的不断发展，新的检测技术将不断涌现，如单细 胞测序、液体活检等，有望提高微小残留病检测的准确性 和灵敏度。
缺点
对操作人员技术要求较高，且抗体选择和标记方法可能影响检测结果 。
分子生物学技术检测
原理
利用PCR、RT-PCR等分子生物学技术对白血病特异性基因 或融合基因进行扩增和检测，从而实现对微小残留病的分
子水平监测。
优点
具有高灵敏度、高特异性等优点，能够在分子水平上检测 白血病细胞的残留情况。
缺点
可能受到样本质量、引物设计等因素的影响，且部分方法 操作复杂、成本较高。
儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的流式细胞术检测分析
儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病的流式细胞术检测分析目的探讨流式细胞术检测微小残留病（MRD）在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）治疗中的临床价值。
方法用多种四色荧光抗体组合检测50例正常儿童骨髓，据此建立双参数点图分析模型，500例ALL初发患儿行流式细胞分析，选出异于正常骨髓细胞免疫表型组合来检测MRD，根据确定好的免疫表型组合对105例患儿诱导治疗结束及后续治疗中的骨髓标本行MRD监测，同步行细胞形态学检测和PCR检测。
结果流式细胞术检出462例有效MRD免疫表型组合，PCR检出142例判断MRD的融合基因或IgH/T淋巴细胞受体基因重排；细胞形态学对诱导治疗后的患儿的MRD阳性检出率为66.67%，流式细胞术的MRD阳性检出率为91.43%。
结论流式细胞术能对ALL患儿治疗期间的MRD 作出准确评估，具有较好的覆盖面和敏感性，值得临床应用。
标签：急性淋巴细胞白血病；微小残留病；流式细胞术急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leuke- mia，ALL）严重影响患儿健康发育，3～4岁是其高发年龄，发热、贫血、肝脾肿大等是其早期症状。
临床报道指出个体化治疗对ALL患者尤为重要[1]，治疗强度应当同其复发风险相适应。
微小残留病（minimal residual disease，MRD）是经过诱导化疗或骨髓移植治疗后体内仍残留的白血病细胞形态，它是诱发白血病复发的根源，逐渐被纳入指导个体化治疗的关键性指标[2]。
目前聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）和流式细胞术是MRD两种检查方法，本研究探讨分析流式细胞术检测MRD在儿童ALL治疗中的临床价值，现报道如下。
1 资料与方法1.1 一般资料随机选取2009年1月～2012年12月于本院接受诱导缓解治疗的500例ALL 患儿，男性296例，女性204例，年龄1～8岁，平均（4.2±1.2）岁，上述病例经细胞形态学、免疫学、遗传学和分子生物学等方法确诊，B淋巴细胞白血病465例，T淋巴细胞白血病35例。
流式细胞术原理及临床应用-PPT文档
FCM检测白血病微小残留病变(MRD):
MRD 是 白 血 病 复 发 的 主 要 根 源 ， FCM 的 高 特 异性和敏感性可以在患者缓解期检测是否有残 留病变细胞，早期探测MRD，以免复发
FCM在临床肿瘤学中的应用
1.血液标本的检查 ● 肿瘤患者的免疫功能检查 ● 肿瘤患者的粘附分子检查：在肿瘤的浸润与转
细胞凋亡的生物学意义
胚胎形成、肌体正常发 育、衰老和损伤细胞的清 除以及肿瘤的发生、发展 和转归等都与细胞凋亡有 关。
生物医学的研究热点
FCM在血栓性疾与止血中应用
由于活化血小板是血栓的主要
成分之一，血小板活化程度的增 高与疾病的发生发展有关。 利用 流式细胞仪可检测血小板活化指 标，了解血小板状态和活化进程 。 巨血小板 血小板无力症 网织血 小板
肿瘤细胞耐药性
MDR是由多药耐药基因编码的P糖蛋白（P-gp） 亲脂化合物，包括多种抗癌药物和荧光染料的跨膜性 排出泵。当淋巴细胞出现MDR阳性细胞时，患者对 化疗药物开始出现耐
细胞凋亡是由基因控制的细胞自主的有序 的死亡。它涉及一系列基因的激活、表达以及调 控等的作用；是为更好地适应生存环境而主动争 取的一种死亡过程。 坏死（necrosis）：坏死是细胞受到强烈理化或 生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。表 现为细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核 变化较慢，DNA 降解不充分，引起局部严重的 炎症反应
可用流式细胞仪分析的标本
外周血、骨髓、癌组织、癌旁组织、各种体液 （尿、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等）
单细胞生物、特殊处理的植物细胞、某些非细胞 粒子、可溶性分子
流式细胞仪的基本功能
•细胞表型分析：包括细胞膜、胞浆内蛋白表达及核膜成份分析 •DNA含量及细胞周期分析、细胞凋亡检测 •目标细胞分选 •自身免疫性疾病相关HLA抗原分析、自身抗体的检测 •流式蛋白定量技术：血浆中各种细胞因子的含量
流式细胞仪分析技术及应用PPT课件
49
（四）石蜡包埋组织单细胞悬液制备 该制备方法的建立扩大了流式细胞术的应
用范围，有利于进行临床回顾性研究和利 用。 常用的方法有二甲苯脱蜡法、组织清洁剂 脱蜡法和甲氧-双氧水处理法。 对石蜡切片的要求较严格。
50
（五）活检标本单细胞悬液制备 活检标本及各种内镜取材标本也克制备成
能对于处在快速直线流动状态 中的细胞或生物颗粒同时进行 多参数、快速定量分析和分选
5
一、流式细胞仪分析的工作原理
荧光显微镜技术
激发光源改为激光
单克隆抗体与 荧光染料技术
计算机技术 处理光信号
提高检测灵敏度 和特异性
提高检测速度和 统计分析精确性
6
（一）流式细胞仪基本结构
液流系统
1
包括流动室（flow chamber）和液流驱动系统 作用：依次传送待测样本中的细胞到激光照射区 理想状态：细胞逐个传送到激光束的中心，而且
侧向散射光检测器
在激光束的垂直方 向，又称90°散射
SSC信号的强弱与 细胞内颗粒结构的 质量成正比，用于 检测细胞内部结构 属性
28
前向散射光示意图
细胞大小
29
结构复杂程度
侧向散射光示意图
30
当荧光抗体或其他染料染色的颗粒通过 激光束时，染料吸收光子跃迁到激发态，返 回基态时，染料释放出能量，大部分以光的 形式释放。
分选的方式有捕获式分选和电荷式分选，目前应 用最多的是电荷式分选。
21
电荷式分选1
当单细胞悬液形成液柱通过 流动室时，液柱被分割成一 连串均匀的液滴。
根据设定的被分选细胞的某 个参数由逻辑电路判断是否 被分选。
22
电荷式分选2
充电电路对选定细胞液滴充 电，使其带正电荷或负电荷， 未被设定分选参数的细胞液 滴则不带电荷。
（四）石蜡包埋组织单细胞悬液制备 该制备方法的建立扩大了流式细胞术的应
用范围，有利于进行临床回顾性研究和利 用。 常用的方法有二甲苯脱蜡法、组织清洁剂 脱蜡法和甲氧-双氧水处理法。 对石蜡切片的要求较严格。
50
（五）活检标本单细胞悬液制备 活检标本及各种内镜取材标本也克制备成
能对于处在快速直线流动状态 中的细胞或生物颗粒同时进行 多参数、快速定量分析和分选
5
一、流式细胞仪分析的工作原理
荧光显微镜技术
激发光源改为激光
单克隆抗体与 荧光染料技术
计算机技术 处理光信号
提高检测灵敏度 和特异性
提高检测速度和 统计分析精确性
6
（一）流式细胞仪基本结构
液流系统
1
包括流动室（flow chamber）和液流驱动系统 作用：依次传送待测样本中的细胞到激光照射区 理想状态：细胞逐个传送到激光束的中心，而且
侧向散射光检测器
在激光束的垂直方 向，又称90°散射
SSC信号的强弱与 细胞内颗粒结构的 质量成正比，用于 检测细胞内部结构 属性
28
前向散射光示意图
细胞大小
29
结构复杂程度
侧向散射光示意图
30
当荧光抗体或其他染料染色的颗粒通过 激光束时，染料吸收光子跃迁到激发态，返 回基态时，染料释放出能量，大部分以光的 形式释放。
分选的方式有捕获式分选和电荷式分选，目前应 用最多的是电荷式分选。
21
电荷式分选1
当单细胞悬液形成液柱通过 流动室时，液柱被分割成一 连串均匀的液滴。
根据设定的被分选细胞的某 个参数由逻辑电路判断是否 被分选。
22
电荷式分选2
充电电路对选定细胞液滴充 电，使其带正电荷或负电荷， 未被设定分选参数的细胞液 滴则不带电荷。
MRD动态监测简介演示
05
MRD动态监测的未来展望
提高灵敏度和特异性
灵敏度
通过改进检测技术和优化实验流 程，提高MRD动态监测对微小残 留病灶的检测能力，降低假阴性 率。
特异性
加强对MRD动态监测的特异性研 究，降低假阳性率，提高监测结 果的可靠性。
实现标准化和个性化
标准化
制定统一的MRD动态监测标准和操 作规范，确保不同实验室之间的结果 具有可比性，促进临床研究的交流与 合作。
02
MRD动态监测技术
流式细胞术
流式细胞术是一种利用流式细胞仪对细胞进行快速、多参数 分析的技术。在MRD动态监测中，流式细胞术可用于检测和 计数微小残留病灶，从而评估治疗效果和预测复发风险。
流式细胞术的优点包括速度快、通量高、可同时检测多个参 数，适用于大规模样本的快速分析。然而，流式细胞术的灵 敏度和特异性受到抗体选择和细胞异质性的影响，可能导致 假阳性或假阴性的结果。
02
MRD的检测方法通常是通过特定 的分子或细胞检测技术，对肿瘤 细胞进行灵敏度极高的检测。
MRD动态监测的意义
01
02
03
早期发现肿瘤复发
通过对MRD的动态监测， 可以在肿瘤复发早期发现 ，从而及时采取治疗措施 ，提高治愈率。
评估治疗效果
通过监测治疗前后MRD的 变化，可以评估治疗效果 ，为调整治疗方案提供依 据。
MRD动态监测简介演示
汇报人： 2024-01-09
目录
• MRD动态监测概述 • MRD动态监测技术 • MRD动态监测在血液肿瘤中
的应用 • MRD动态监测在实体瘤中的
应用 • MRD动态监测的未来展望
01
MRD动态监测概述
MRD定义
《急性髓系白血病微小残留病检测与临床解读中国专家共识》PPT课件
预测复发风险
微小残留病检测可以检测患者体内残 留的白血病细胞，有助于预测患者的 复发风险，为制定个性化治疗方案提 供依据。
微小残留病检测在巩固治疗中的应用
监测病情变化
在巩固治疗期间，通过微小残留病检测可以实时监测患者病情变化，及时发现复发迹象，调整治疗方 案。
指导治疗决策
根据微小残留病检测结果，医生可以判断患者是否需要继续巩固治疗或调整治疗方案，提高治疗效果 。
《急性髓系白血病微小残留病检测 与临床解读中国专家共识》
2024-01-08 汇报人：xxx
contents
目录
• 引言 • 急性髓系白血病概述 • 微小残留病检测方法及原理 • 微小残留病检测结果解读 • 微小残留病检测在急性髓系白血病治疗
中的应用 • 微小残留病检测的挑战与展望 • 总结与建议
共识由国内急性髓系白血病领域 的临床专家、实验室检测专家以 及方法学专家共同组成。
制定流程
通过文献回顾、专家讨论和会议 研讨等方式，对急性髓系白血病 MRD检测的相关问题进行深入探 讨，并最终形成共识意见。
证据等级和推荐强
度
根据现有研究证据的质量和数量 ，对共识意见进行证据等级和推 荐强度的评估，以确保共识的科 学性和实用性。
未来发展方向及展望
技术创新
多学科合作
继续研发高灵敏度、高特异性的检测技术 ，提高微小残留病检测的准确性。
加强临床医学、生物学、生物信息学等多 学科的交叉合作，推动微小残留病检测技 术的快速发展。
标准化与规范化
普及与应用
建立统一的检测标准和规范，提高不同实 验室和检测方法之间结果的可比性和一致 性。
灵敏度与特异性
当前微小残留病检测方法在灵敏度和特异性方面仍存在一 定局限性，难以准确检测出低水平的残留病灶。
微小残留病检测可以检测患者体内残 留的白血病细胞，有助于预测患者的 复发风险，为制定个性化治疗方案提 供依据。
微小残留病检测在巩固治疗中的应用
监测病情变化
在巩固治疗期间，通过微小残留病检测可以实时监测患者病情变化，及时发现复发迹象，调整治疗方 案。
指导治疗决策
根据微小残留病检测结果，医生可以判断患者是否需要继续巩固治疗或调整治疗方案，提高治疗效果 。
《急性髓系白血病微小残留病检测 与临床解读中国专家共识》
2024-01-08 汇报人：xxx
contents
目录
• 引言 • 急性髓系白血病概述 • 微小残留病检测方法及原理 • 微小残留病检测结果解读 • 微小残留病检测在急性髓系白血病治疗
中的应用 • 微小残留病检测的挑战与展望 • 总结与建议
共识由国内急性髓系白血病领域 的临床专家、实验室检测专家以 及方法学专家共同组成。
制定流程
通过文献回顾、专家讨论和会议 研讨等方式，对急性髓系白血病 MRD检测的相关问题进行深入探 讨，并最终形成共识意见。
证据等级和推荐强
度
根据现有研究证据的质量和数量 ，对共识意见进行证据等级和推 荐强度的评估，以确保共识的科 学性和实用性。
未来发展方向及展望
技术创新
多学科合作
继续研发高灵敏度、高特异性的检测技术 ，提高微小残留病检测的准确性。
加强临床医学、生物学、生物信息学等多 学科的交叉合作，推动微小残留病检测技 术的快速发展。
标准化与规范化
普及与应用
建立统一的检测标准和规范，提高不同实 验室和检测方法之间结果的可比性和一致 性。
灵敏度与特异性
当前微小残留病检测方法在灵敏度和特异性方面仍存在一 定局限性，难以准确检测出低水平的残留病灶。
流式细胞术及其科研应用课件
03
标准化和规范化
为了更好地发挥流式细胞术在科研和临床实践中的作用，需要进一步推
动技术的标准化和规范化，建立统一的实验操作规范和技术标准，提高
实验结果的互通性和可比性。
THANKS
感谢观看
流式细胞术的发展趋势与展望
01 02
技术创新与发展
随着科学技术的发展，流式细胞术将不断进行技术创新和改进，如采用 更高分辨率的检测系统、开发多维数据分析方法等，提高实验结果的准 确性和可靠性。
拓展应用领域
随着科研领域的不断拓展，流式细胞术将进一步应用于生命科学、医学 、环境科学等多个领域，为解决复杂问题提供更多有力的工具。
通过计算机对电信号进行处理和分析 ，可以获得细胞的多种特性，如大小 、内部抗原表达等。
02
流式细胞术的技术特点
流式细胞术的速度与精度
速度
流式细胞术可以同时处理多个样本，每秒钟可以分析数十万个细胞，使得研究 人员能够快速获得大量数据。
精度
流式细胞术具有高分辨率和高灵敏度，能够准确地检测细胞表面的抗原、细胞 内的抗原以及细胞活性等。
流式细胞术及其科研 应用课件
contents
目录
• 流式细胞术概述 • 流式细胞术的技术特点 • 流式细胞术在科研中的应用 • 流式细胞术的未来发展与挑战 • 总结与展望
01
流式细胞术概述
流式细胞术的定义
流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）是一种在 液流中快速检测细胞特性的技 术。
详细描述
流式细胞术能够通过对淋巴细胞、树突状细胞、NK细胞等免疫细胞的检测，揭示免疫细胞的发育、分化、激活 和功能，为研究免疫应答的调控机制提供了重要的手段。同时，流式细胞术还可以用于研究疫苗接种后的免疫反 应、病原感染后的免疫应答等，为疫苗研发和疾病治疗提供了重要的参考。
列出mrd检测方法
MRD检测方法1. 简介MRD（Minimal Residual Disease，最小残余疾病）是指在治疗过程中仍存在的极低水平的癌细胞或其他病理细胞。
MRD检测是一种用于评估治疗效果和预测复发风险的重要方法。
本文将介绍常见的MRD检测方法及其原理、优缺点以及应用领域。
2. 流式细胞术（Flow Cytometry）原理流式细胞术是一种通过对单个细胞进行标记并通过流式细胞仪进行分析的方法。
在MRD检测中，可以使用免疫荧光染色技术标记特定的抗原，然后通过流式细胞仪对标记的细胞进行计数和分析。
优点•可以实现高通量分析，快速获得结果。
•可以同时检测多个抗原。
•可以精确计算MRD水平。
缺点•对样本质量要求高，需要高质量的单个细胞悬液。
•对操作人员技术要求高，需要专业培训和经验。
•需要昂贵的设备和试剂。
应用领域•白血病等血液系统肿瘤的MRD监测。
•免疫治疗后的效果评估。
3. 定量PCR（Quantitative Polymerase Chain Reaction）原理定量PCR是一种通过扩增目标DNA序列并使用荧光探针实时监测扩增过程的方法。
在MRD检测中，可以设计特异性引物和探针来扩增和检测与肿瘤相关的基因或染色体异常。
优点•可以实现高灵敏度的定量分析。
•可以在不同样本之间进行比较。
•技术成熟，广泛应用。
•需要设计特异性引物和探针，对操作人员技术要求较高。
•对样本质量要求高，需要高质量的DNA。
应用领域•白血病、淋巴瘤等血液系统肿瘤的MRD监测。
•固体肿瘤中某些特定基因突变的监测。
4. 高通量测序（Next-generation Sequencing）原理高通量测序是一种通过对DNA或RNA进行大规模并行测序的方法。
在MRD检测中，可以使用特定的引物扩增目标基因区域，然后通过高通量测序仪进行测序，最后通过比对和分析数据来计算MRD水平。
优点•可以同时检测多个基因或区域。
•可以发现新的基因突变或异常。
•可以提供更全面的信息。
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4、流式细胞术：根据白血病细胞表面或细胞
内免疫分子来区别并计数白血病细胞。可以 直接计数白血病细胞（ PCR 是根据扩增产物 的量进行推算），并可区分活细胞或将要凋 亡 的 细 胞 及 碎 片 。 敏 感 性 10-4 ， 较 PCR 低 （但达到临床要求）；白血病进展及治疗后， 免疫表型可能发生改变，造成假阴性。目前 仍是最简单、直接、精确、使用的方法。
预报复发；指导缓解后治疗；指导干细胞移
植（时机的把握、术后的监测）；判断预后 和指导更精确的缓解标准。
三、 常用MRD检测方法原理及其优、 缺点：
1、 传统的细胞遗传学：80%--90%的急性
及95%以上的慢性儿童白血病有染色体的异 常改变，如慢粒的PH染色体，这一特征可作 为MRD检测指标。覆盖面广，但敏感性差 （1%--10%）。尤其当基因改变不足以影响 染色体大体水平时会成假阴性。
Hale Waihona Puke TdT/CD10/CD34/CD19抗体组合
流式细胞术在微小残留（MRD） 检测中的应用
一、MRD概念
指白血病患者经诱导治疗达临床缓解后，体
内残存的少量白血病细胞。此时白血病细胞 仍可达 1010 ，是复发的根源。研究表明当体 内白血病细胞小于106时，肌体通过自身免疫 机制可将之清除。即MRD检测敏感性应达到 10-4，才有意义。
二、MRD检测意义
3 、时机选择：常在化疗第 19 天取第一次标
本进行检测。此时白血病细胞及正常重建的 细胞都存在；经过化疗后白血病细胞免疫表 型可能发生改变，而此时已经经过一轮强烈 化疗，今后再变的可能性较小；此时白血病 细胞和正常重建细胞在流式图上的分布特点 就是今后区分白血病细胞与正常细胞的依据。
2、 荧光原位杂交（FISH）：依靠区域特异
DNA 探针对染色体染色来鉴别染色体数量和 结构的改变，从而区分白血病细胞。分子水 平。敏感性差。
3 、聚合酶链反应（ PCR ）：通过检测扩增
的靶系列（染色体断裂点融合区、免役球蛋 白及T细胞受体基因重排）来区分白血病细胞。 敏感性最高 10-6 。但覆盖面小（ 65% 儿童 ALL 缺乏特异的含有断裂点融合区的染色体 改变；另由于白血病细胞重组酶活性较强， 重排基因可能进一步重排，造成假阴性。）
四、以ALL为例流式细胞术在MRD检 测中的具体应用
1、原理 2、指标的选择：理想的指标是只在白血病 细胞表达而不在正常细胞表达的抗原。尚未 发现。但据白血病细胞抗原表达特点（跨系、 时相紊乱、量的异常），及正常早期B细胞对 糖皮质激素十分敏感等特点，仍能找出相应 指标。常为几种抗原的组合。如 CD34+/CD10+/CD19+
4、常用抗体组合及其有效频率：
TDT/CD34/CD10/CD19 CD38/CD34CD10/CD19 CD58/CD34/CD10/CD19 CD45/CD34/CD10/CD19 CD66c/CD34/CD10/CD19 CD22/CD34/CD10/CD19 合计 65.71% 45.71% 61.43% 44.29% 32.86% 12.86% 91.43%