我国南方猪高热病的研究_大肠杆菌的分离_鉴定和致病性测定

( 1. Ch ina Institute of V eterina ry D rug Con trol, B eijing 100081; 2. China A g ricultu ra l U n iversity, B eijing 100094;
3. Hunan P rovincia l V eterina ry S tation, Changsha, Hunan 410007; Ch ina )
1 材料和方法 1. 1 病料 11 头猪的病料 ,分别采自发病猪的心 、
肝、 脾、 肺、 肾、 扁桃体 、 淋巴结 、 胎儿组织 , 胎盘 、 胃 肠等 。
1. 2 细菌分离培养基 MH 肉汤 、 麦康凯培养基 ,
厌气肉汤培养基 。
1. 3 大肠杆菌鉴定用分型血清 由本所细菌ห้องสมุดไป่ตู้品
E. coli by p ri m ary bacteria culture 2 × 10 , 2 × 10 , 2 × 10 CFU /mL. 12 /30 m ice died after 24 h in the first
7 3 0
作者简介 : 宁宜宝 (1956 年 ～) ,男 ,湖北省大悟县人 ,研究员 ,主要从事动物微生物与传染病研究 。
[关键词 ] 猪高热病 ; 大肠杆菌 ; 感染
4 8 4 8
Research on Sw in e H igh Fever w ithout Conf irm ed Pa thogen( Ⅰ) — — — Isola tion and Iden tif ica tion and Pa thogen ic Test about E sche rich ia co li
[摘 要 ] 从湖南 3 个高热病发病猪场 11 头病死猪的病料组织中均分离出了大肠杆菌 ,经血清
学鉴定 ,鞭毛抗原 ( K88 、 K99 、 987P 和 F41 )全为阴性反应 。经过 157 种菌体抗原血清学检测 , 血清 型为 5、 6、 15、 22、 32 和 83 型 。药物敏感试验结果表明 ,分离的大肠杆菌对大多数常用药物耐药 , 7 对氟 喹 诺 酮 和 头 孢 类 药 物 敏 感 。将 其 中 4 头 猪 原 代 分 离 的 大 肠 菌 培 养 物 以 原 倍 ( 2 ×10 个 /mL ) 、 10 和 10 稀释的菌液分别感染 18 ～22 g小白鼠 ,原倍菌液感染的小白鼠 12 /30 在感染 后 24 h内出现死亡 ,而 10 和 10 稀释菌液感染的小白鼠均健活 ; 将未经除菌的病死猪组织悬液 、 过滤除菌的组织悬液 、 大肠杆菌 、 过滤除菌的组织悬液及大肠杆菌分别感染 30 日龄左右的健康小 猪 ,除未经除菌的组织悬液感染猪 3 /3 发病 , 2 /3 死亡外 ,其余所有感染猪只出现体温升高 , 升幅 达 1 ～2 ℃,减食 ,精神萎靡 , 但没有死亡 ; 将死亡猪再次分离到的大肠杆菌感染小白鼠和猪 , 小白 鼠 12 /15 出现死亡 ,感染猪只出现体温升高 (超过 1 ℃) ,没有出现死亡 。结果证明 : 大肠杆菌在高 热病的发病过程中只起协同诱发作用 ,引起猪发病死亡的真正原因可能是病毒感染 。
1. 6 细菌分离鉴定 用白金耳无菌取样 , 分别接
种 MH 肉 汤 、 麦康凯固体培养基和厌气肉肝汤 ,
37 ℃ 培养 , 在证明是大肠杆菌后 , 用大肠杆菌 K88 、
抗原血清进行鉴定 。 1. 7 实验鼠的感染 分别取 4 头猪的大肠杆菌分 7 4 离物混合后以原倍 (菌浓为 2 × 10 个 /mL ) 、 10 和 8 10 稀释的菌液分别肌肉注射或口腔灌服感染 18 ～22 g小鼠 ,每只 0. 2 mL ,感染后每天观察实验鼠 的发病死亡情况 ,连续观察 16 d。 1. 8 实验猪的感染和观察 将 12 头实验猪随机 分成 4 组 ,每组 3 头猪 。第 1 组以 2 mL /头感染大 肠杆菌原倍培养物 ; 第 2 组以 2. 8 mL /头感染过滤 除菌的病料组织悬液 ; 第 3 组每头猪感染大肠杆菌 培养物 2 mL 和过滤除菌的病料组织悬液 3 mL; 第 4 组以 3 mL /头感染不除菌的病猪组织悬液 。感染 途径为肌肉注射 。 20 d 以后 , 对存活猪再次感染 , 第 1 组感染除菌的组织匀浆悬液 ,第 2 组感染厌气 肉肝汤培养物 , 第 3 组感染除菌的组织匀浆悬液 。 所有猪在感染后每天测两次体温 ,观察发病死亡情 况 。连续观察 60 d,然后对实验猪解剖 ,观察病变 。 1. 9 药物敏感试验 采用纸片法进行检测 。 2 结 果 2. 1 大肠杆菌分离和血清型鉴定结果 几乎从所 有猪的内脏器官中都分离到了纯粹的大肠杆菌 。 用鞭毛抗原 K88 、 K99 、 987P和 F41 特异性抗体检测 , 新分离的大肠杆菌全为阴性反应 ,说明这些分离株 不含鞭毛抗原 。用 157 种大肠杆菌菌体抗原分型 血清检测新分离的大肠杆菌 ,血清学阳性反应的血 清型有 O5 、 O6 、 O15 、 O22 、 O32 和 O83 。还有 5 个菌落 样品没有鉴定出来 。 2. 2 耐药性测定结果 共对 19 种药物进行了测 定 ,分离株耐受的药物有青霉素 、 阿莫西林 、 四环 素、 复方新诺明 、 磺胺类 、 红霉素 、 三甲氧苄啶 ; 中度 耐受的药物有链霉素 、 多西环素 ; 敏感的药物有头 孢噻吩 、 头孢呋辛钠 、 阿米卡星 、 庆大霉素 、 氯霉素 、 环丙沙星 、 氧氟沙星和氟苯尼考 。 2. 3 对小白鼠的致病性测定结果 用 20 g左右的 7 - 4 小白鼠以原倍培养物 (菌浓 2 × 10 个 /mL ) 、 10 和
2006, 40 ( 12 ) : 1 ～4 /宁宜宝 ,等 中国兽药杂志
NI N G Yi2bao , ZHENG J ie
1 3 1 1, 2
, ZHANG Chun 2 p ing , SONG L i , L I U Hui2 wen , WANG Q in , Q I U Hui2shen ,
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
QI U Be 2gen , ZHAO Q i2zu , SHEN Q ing2chun , L I U Ye 2bing , FAN Xue 2zheng , XU Lu , J I ANG Huan 2xian
2006 年 8 月中旬开始发病 , 首先从种公 、 母猪开始
K99 、 987P和 F41 四种鞭毛抗原血清和 157 种菌体
出现高热 ,体温突然升高 ,达 41 ～42 ℃,流鼻涕 ,呕 吐、 食欲废绝 , 并连续出现大量死亡 。死猪全身出 血 ,以四肢 、 耳尖 、 腹部出血最为严重 , 解剖观察可 见心 、 肝、 脾、 肺、 肾和全身淋巴结严重出血 , 肠道 、 膀胱出血 。药物治疗基本无效 。该猪场曾经免疫 过猪瘟 、 猪丹毒 、 猪肺疫 、 仔猪副伤寒 、 伪狂犬 、 口蹄 疫、 乙脑 、 细小病毒 、 萎缩性鼻炎和猪链球菌疫苗 , 有规范的免疫程序 。调查采样的其他猪场除规模 较小外 ,发病死亡情况基本相似 。为了从病原学上 搞清猪感染发病死亡原因 ,进行了本实验 。
检测室制备 。
1. 4 实验小鼠 购自北京市实验动物中心 , 体重
为 18 ～22 g,清洁级 。
1. 5 实验猪 30 日龄左右的健康仔猪 。购自河北
省保定市满城县坨南乡本所猪实验基地 。在实验 室观察期间 ,无任何症状 ,体温正常 。经细小病毒 、 伪狂犬 、 猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟抗体检 测 ,均为阴性 。
Abstract: Escherich ia coli ( E. coli) were isolation from 11 infected and dead p igs in three p ig2far m s in Hunan p rovince. Flagellum antigens ( K88 , K99 , 987P and F41 ) wasn ’ t found in all of E. coli isolates by serological identi2 fication; 5, 6, 15, 22, 32 and 83 subtypes were identification by 157 bacteroides antigens serological test . And the result of drug sensitive test showed: these pathogenic E. coli was resistant to 11 most daily used m edicines, but fluoroquinolones and cephalosporin. Then 3 group m ice ( 18 ～22 g / each ) were injected respectively w ith these
( 1、 中国兽医药品监察所 ,北京 100081; 2、 中国农业大学 ,北京 100094; 3、 湖南省兽医总站 ,湖南长沙 410007) [收稿日期 ] 2006 11 06 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1002 1280 ( 2006) 12 0001 04 [中图分类号 ] S858. 28 1 1, 2 1 1 1 1 1
・2・
中国兽药杂志 2006, 40 ( 12 ) : 1 ～4 /宁宜宝 ,等
group , and no mouse dead in other group s during 16 days . Tissues suspension liquid, tissues suspension liquid through filtrated from bacteria, E. coli isolates, tissues suspension liquid through filtrated from bacteria and E. coli isolates were injected respectively into test p igs ( 30 days old ) , 2 /3 p igs died in the first group , and no dead p igs was found in other group s, but body temperature rose ( 1 2 2 ℃) in all the p igs . Results indicated: these E. coli wasn ’ t p rim ary pathogen in sw ine high fever w ithout confirmed pathogen in Hunan p rovince. Key words: s w ine high fever; Escherich ia coli; Infection