实验五微生物显微计数和大小测量
微生物大小测定及计数
2、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一菌体大小时，其测定结果是否相同，为什么？
答：测定结果不相同。因为在不同倍数的目镜下，细菌大小发生变化，而目镜测微尺每格大小不变，所以测定结果不同。
四、仪器和其他用品：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、接种环、血球计数板、显微测微尺、滴管、酒精灯
五、操作步骤：
1、微生物大小的测定
（1）取下显微镜右目镜，将目镜测微尺放在目镜镜筒内的隔板上，然后放上目镜透镜，将目镜装回镜筒。
（2）校正目镜测微尺：在低倍镜下调节焦距，当清晰看到镜台测微尺的刻度后，用推进器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别输出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。
（2）将血球计数板盖上盖玻片，用无菌毛细管吸取少量摇匀的酿酒酵母菌液，滴在盖玻片的一个顶点，待菌液从盖玻片另一对角流出为满。
（3）先在低倍镜下找到计数室，再用高倍镜计数。每小格内的菌数不能超过8个为宜。当每小格内的菌数过多时，适当稀释。
（4）任选5个中格计数（5个中格不可以挨着；酵母菌出芽计1个菌体；计数时，位于边线上的细胞，记上不记下，计左不计右）
（3）用同样的方法在高倍镜下和油镜下进行校正。并计算目镜测微尺每小格所代表的实际长度。
（4）制酵母菌玻片：用接种环取菌在蒸馏水中涂抹，加热干燥，用美兰染色1’30”，流水脱色，自然干燥。
（5）先在低倍镜和高倍镜下找到菌株，再在油镜下测出酵母菌的长度和宽度。重复3次并记下平均值。
2、酵母菌的显微计数
（1）将血球计数板洗净，再用95%乙醇棉球擦洗，自然干燥。
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微生物大小及数量测定
一、实验目的：
微生物大小测定和显微镜直接计数
实验五微生物大小测定和显微镜直接计数一、实验目的：1、了解显微测微尺的结构；2、掌握显微测微尺用于测量菌体的方法；3、学习使用血细胞计数板计算酵母细胞数的原理和方法；4、了解微生物活体染色的原理的技术的方法。
二、实验原理：1、显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。
用于校正目镜测微尺没小哥的长度.目镜测微尺其中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度,再以后作为测量微生物细胞的长度.目镜测微尺每格长度/μm = 两条重合线间镜台测微尺的格数×10/两条重合线间目镜测微尺的格数2、利用血球计数板直接在显微镜下计数微生物的细胞（或孢子）数目。
优点：直观、快速、操作简便，其缺点为：不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察1ml菌液中的总菌数=（5个方格中的总菌数/5）×25×104×稀释倍数本实验中暂规定：计上不计下，计左不计右，即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中三、实验步骤：（一）微生物大小的测定：1、放置目镜测微尺：取出目镜，旋开目透镜，目镜测微尺放在光阑上，旋上目镜，将目镜插入镜筒2、将镜台测微尺放在井台上，调焦看清镜台测微尺的刻度3、低倍镜下使镜台测微尺与目镜测微尺刻度平行，一段起止线重合，分别数出格数并求出目镜测微尺每小格的实际长度，同样的方法在高倍镜下重复进行4、按公式计算目镜测微尺每格的长度5、测量菌体的大小：取下镜台测微尺，制作酵母菌涂片，分别在低倍镜、高倍镜下测量10个菌体的长宽，求其平均值，用长（μm)*宽（μm）表示（二）显微镜直接计数1、制备酵母菌的稀释液，将菌液稀释10倍2、将计数板的盖玻片放在计数室上面的两边平台架上，混匀后酵母菌悬液吸取滴加在盖玻片与计数板的边缘缝隙处，待菌液渗入计数室，菌体自然沉降与稳定后计数3、在计数室移至视野中央，选取25中格（4觉与中央）计含菌数，重复计数2-4个计数室内的含菌量，求其平均值。
显微镜的直接计数和细菌大小测定-精选文档
四、操作方法
(一)酵母菌大小测定的操作方法 1.测微尺的构造和使用方法 (1)目镜测微尺的构造 目镜测微尺是一块圆形玻片， 其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50 格，实际每格等于100μm。刻度的大小是随使用 的接目镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用 物镜测微尺来标定，如图。 (2)物镜测微尺的构造 物镜测微尺为一块特制的 载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将 长1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm， 如图 。
五、实验报告及思考题
1、微生物大小测定实验结果
（1）将目镜测微尺校正结果填入下表：
接物镜 接物镜倍数 目镜测微尺格 镜台测微尺格
数
数
低倍镜
高倍镜
油镜
目镜测微尺每格代表 的长度(μm)
接目镜的放大倍数________
（2） 酵母细胞大小的测量结果：
微生物 名称
目镜测微尺每 格代表的长度
/μm
宽
目镜测微 尺格数
2.目镜测微尺的标定
(1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微 尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下， 再旋上目透镜，并装入镜筒内。 (2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度 的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆 圈位于视野中央。 (3)先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺 的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜 测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相 重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。如图 (4)记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测 微尺的格数。
4.酵母菌大小的测定
(1)取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸制片。
(2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺 几格，然后换算出菌体的实际长度。
微生物大小的测定及显微镜直接计数法
微生物大小的测定及显微镜直接计数法微生物的大小测定与显微计数生32 程雨婧 2013012406一、实验目的1. 学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。
2. 了解血细胞计数板的构造及计数原理。
3. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
二、实验原理1. 显微测微尺可用于测量微生物细胞或孢子的大小，包括镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
镜台测微尺全长1mm，等分为100格，每格0.01mm。
用于校正目镜测微尺的长度.目镜测微尺的中央刻有50等分或100等分的小格.测量前应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大镜下,目镜测微尺每小格所代表的实际长度(见图1),再以后作为测量微生物细胞的长度。
2. 球菌用直径表示大小;杆菌用宽和长来表示(μm)图一:测微尺的校正3. 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间较宽的平台，被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。
计数区的刻度有两种:一种是计数区(大方格)分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种是一个计数区分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。
计数区由400个小方格组成。
每个大方格边长为1mm，其面2积为lmm，盖上盖玻片后，盖载玻片间的高度为0.1mm，所以每个计数区的体3积为0.1mm。
使用血球计数板计数时，通常测定四或五个中方格的微生物数量，求其平均值，再乘以16或25，就得到一个大方格的总菌数，然后再换算成1毫升菌液中微生物的数量。
设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数B，则: A441mL菌液中的总菌数= ×25×10×B=5×10×A?B (25个中格) 5图二:血细胞计数室构造三、实验器材1. 菌种:啤酒酵母2. 器材:普通光学显微镜、目镜测微尺镜头、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、试管、无菌水、血细胞计数板、计数器、吸管、生理盐水、移液器。
微生物学实验5 酵母菌细胞总数和大小的测定
2022/9/12
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三．实验原理
➢ 利用血球计数板进行微生物计数的原理？ 总菌数（个/ml）＝5×104 A·B A：5个中方格中的总菌数，B：稀释倍数（＝1） ；
➢ 利用接目测微尺测定微生物大小的原理？
接目测微尺每格长度（mm）=10n/m n：两重合线间镜台测微尺格数 m：两重合线间接目测微尺格数
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四．实验内容
1. 利用血球计数板对所给酵母培养液进行计数：上下两 个计数室各计数一次
2. 微生物大小测定 ➢ 40 ×10放大系统下对接目测微尺进行标定； ➢ 在同样放大系统下测定所给酵母细胞大小：要求测定
10个细胞长和宽
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五. 实验结果报告与思考题
1. 计数：将2个计数室结果分别填入P14的表中，并按公式 计算菌体细胞浓度：
2. 大小测定
➢ 接目测微尺标定结果：高倍镜下两重合线间镜台测微
尺 格、目镜测微尺
格；
目镜测微尺每小格实际长度为
μm。
➢ 10个细胞测定结果填入 P17的表中，计算酵母细胞大小 的范围及平均值（宽×长）
3. 思考题：讲义P14 2，3； P17 3
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实验五 酵母菌细胞总数和大小的数板进行微生物计数的方法。 2. 学习并掌握接目测微尺的标定方法及微生物大小的测
定方法，增强微生物细胞大小的感性认识。
二．实验材料
1. 菌种：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液 2. 其他：血球计数板，接目测微尺，镜台测微尺，显微
实验五微生物大小的测定
实验五微生物大小的测定实验五微生物大小的测定一、实验目的1. 学会测微尺的使用和计算方法。
2. 学习用测微尺对细菌和酵母菌的测量方法。
二、实验内容：1．认识测微尺，学习目镜测微尺的标定。
2．测定细菌和酵母菌菌体的大小。
三、实验材料和用具金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和酵母菌的菌种斜面。
香柏油、擦镜液。
显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。
四、操作步骤l．测微尺的构造显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成，目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在5mm刻尺上分50份。
目镜测微尺每格实际代表的长度随使用接目镜和接物镜的放大倍数而改变，因此在使用前必须用镜台测微尺进行标定。
镜台测微尺为一专用中央有精确等分线的载玻片，一般将长为1mm的直线等分成100个小格每格长0.0lmm即10μm，是专用于校正目镜测微尺每格长度的。
2．目镜测微尺的标定把目镜的上透镜旋开，将目镜测微尺轻轻放在目镜的隔板上，使有刻度的一面朝下。
将镜台测微尺放在显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上。
先用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度相平行，并使两尺左边的一条线重合，向右寻找另外一条两尺相重合的直线。
3．计算方法标定公式：目镜测微尺每格长度（μm）=两条重合线间镜台测微尺的格数×10／两条重合线间目镜测微尺的格数例如，目镜测微尺20个小格等于镜台测微尺3小格，已知镜台测微尺每格为10μm，则3小格的长度为3×10=30μm，那么相应地在目镜测微尺上每小格长度为3×10÷20=1.5μm。
用以上计算方法分别校正低倍镜、高倍镜及油镜下目镜测微尺每格实际长度。
4．菌体大小的测定将镜台测微尺取下，分别换上大肠杆菌及金黄色葡萄球菌玻片标本，先在低倍镜和高倍镜下找到目的物，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的大小。
先量出菌体的长和宽占目镜测微尺的格数，再以目镜测微尺每格的长度计算出菌体的长和宽。
实验五.革兰氏染色.细菌大小测定.细胞计数
举例
计算公式： 目镜尺每一小格的长度(单位: m)=镜台尺重叠格
数×10m(每一小格的长度)÷目镜尺重叠格数 • 例如：目镜测微尺上的第五小格与镜台测微尺上
的第八格重叠 则目镜测微尺上的每小格= 8×10 ÷ 5 = 16 m
• 测量菌体时不再用镜台测微尺，如改变显微镜的 放大倍数，则需对目镜测微尺重新进行标定
革兰氏染色步骤
• 初染:结晶紫使菌体着上紫色 • 媒染:碘和结晶紫形成脂溶性大分子复合物，
分子大，能被细胞壁阻留在细胞内 • 脱色：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，
出现不同的反应 • 复染：沙黄复染，增加脱色菌与背景的反
差并区别于脱色菌
革 兰 氏 染 色 机 制
细菌大小的测量方法
• 在显微镜下使用显微测微尺测定
菌数(个/ml) x1 x2 x3 x4 x5 25(或1指引手册》p34-35
– 通过镜台测微尺标定目镜测微尺的长度 – 用目镜测微尺测量细菌的大小 – 根据显微镜放大倍数进行换算
菌体的大小=目镜测微尺下菌占的格数目镜测微尺每格的标定值
镜台测微尺
目镜测微尺
A.目镜测微尺 和 镜台测微尺 不平行 B.旋转目镜筒，让 目镜测微尺 和 镜台测微尺 两者平行
C.移动 镜台测微尺（如何操作？） 让 镜台测微尺 和 目镜测微尺 最左边 的第一条刻度线互相重合 从左往右找两把尺子再重合的刻度线
• （思考题：为什么？）
细胞计数
血球计数板是一块特制的载玻 片，其上四条纵槽构成了三个平 台，中间的平台又被一短横槽隔 成两半，每一边的平台上各刻有 一个方格网，每个方格网共分成 9个大方格，中央的大方格为计 数室。计数室边长1mm，共有 400个小方格，加盖玻片于突起 部分上时，即形成一个体积为 0.1mm3的计数室。
微生物大小与数量的测定实验报告
微生物大小与数量的测定实验报告一、实验目的本次实验旨在掌握使用显微镜测量微生物大小的方法，以及学会运用血球计数板对微生物数量进行测定。
通过实验操作和数据处理，深入了解微生物的形态特征和种群密度，为后续的微生物学研究打下基础。
二、实验原理（一）微生物大小的测定微生物细胞的大小是微生物的基本特征之一。
使用显微镜测微尺可以较为准确地测量微生物细胞的长度、宽度和直径等参数。
显微镜测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形小玻片，上面刻有刻度；镜台测微尺是一块特制的载玻片，中央有精确的刻度，用于校正目镜测微尺。
（二）微生物数量的测定血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物数量的工具。
它由一块特制的厚玻璃片制成，玻片上有四个槽构成三个平台。
中间的平台又被一短横槽隔成两半，每半边上面各刻有一个方格网。
方格网上刻有 9 个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格。
但无论哪种规格，每个大方格的边长均为 1 毫米，盖上盖玻片后，计数室的容积是一定的。
因此，在一定体积的菌液中，通过计算微生物在计数室中的数量，就可以换算出菌液中微生物的数量。
三、实验材料与仪器（一）材料枯草芽孢杆菌、酿酒酵母的菌悬液。
（二）仪器显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、血球计数板、盖玻片、滴管、擦镜纸、吸水纸等。
四、实验步骤（一）微生物大小的测定1、安装目镜测微尺将目镜测微尺装入目镜的隔板上，注意有刻度的一面朝下。
2、校正目镜测微尺（1）将镜台测微尺置于载物台上，先用低倍镜观察，找到镜台测微尺的刻度线。
（2）移动镜台测微尺，使镜台测微尺与目镜测微尺的刻度线平行，并使两者的“0”刻度线重合。
（3）换用高倍镜观察，找出两尺再次重合的刻度线。
分别记录目镜测微尺和镜台测微尺在重合线段内各自的格数。
实验五 酵母菌形态的观察和显微镜下细胞测量和计数
实验五酵母菌形态的观察和显微镜下细胞测量和计数刘洋生物101 1002040120一、实验目的1、观察酵母菌的形态，掌握区分酵母菌死活细胞的染色方法。
2、掌握利用显微测微尺测量酵母菌大小的方法。
3、学习利用血球计数板测定微生物细胞数量的原理和方法。
二、实验原理（一）酵母菌的形态观察酵母菌是单细胞真核微生物，细胞呈圆形、椭圆形或柱状。
酵母的细胞比细菌大得多，经过特殊的染色，在高倍镜下就可以观察到。
酵母菌既可无性繁殖，又可有性繁殖。
无性繁殖有芽殖和裂殖两种，芽殖又有单出、双出和多出之分。
酵母菌的有性生殖一般能形成4~8个子囊孢子。
在一定条件下，有的酵母菌进行芽殖后，长大的子细胞不与母细胞立即分离，并继续出芽，细胞成串排列，这种菌丝状的细胞串就称为假菌丝。
假菌丝的各细胞间仅以狭小的面积相连，呈藕节状。
酵母菌的死活细胞可以通过美兰染色加以区分。
美兰是一种无毒性染色剂，其氧化型为蓝色，还原型为无色。
由于活细胞具有较强的还原能力，可以使美兰由蓝色的氧化型转变为无色的还原型。
处于代谢旺盛的细胞还原美兰的能力强，细胞为无色，为代谢缓慢的老细胞、幼嫩芽体为浅蓝色，死细胞为深蓝色。
（二）显微镜下的细胞计数本次实验采用血球计数法测定微生物细胞数。
方法是将经过适当稀释的菌体细胞或孢子悬液，加到血球计数板的计数室内，在显微镜下逐格计数。
因为计数室的容积是固定的（0.1mm3），所以可以将在显微镜下计得的菌数换算成单位体积试样中的菌数。
血球计数板使一块特制的载玻片，中部有H形的沟槽将中部分成上下两个计数室。
计数室方格的边长为3mm，每个方格分为9个大方格，正中央的大方格被分为25个中方格，而每个中方格又被分为16个小方格。
这样正中央的大方格总共分成400个小方格，每个小方格的体积为1/4000 mm3（计数室的高度为0.1mm）。
由此得到如下公式：每毫升的菌数(个)=平均每个中方格内的菌数16×稀释倍数×4000×1000（三）显微镜下细胞大小的测量用来测量微生物大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
实验微生物细胞的大小测量和显微计数目
四、操作步骤
2、显微直接计数
1）血球计数室的观察和清洗 取血球计数板置于载物台上→ 观察熟悉计数室的中 方格和小方格 → 取下血球计数板→用自来水冲洗计 数室后，再用无水乙醇将血球计数室冲洗干净→ 置 干燥箱干燥 。
2）样品中酵母菌细胞的直接计数：
取干净血球计数板→ 在计数室上方盖上盖玻片→ 用无 菌吸管，吸取摇匀的酵母菌稀释液→ 在盖玻片边缘沾 一下，让菌液沿缝隙靠毛细管渗透作用进入计数室→ 静置5min → 低倍镜或高倍镜计算每个中方格内的细 胞数→ 完毕后清洗血细胞计数板→ 冲洗、干燥
五、实验数据及处理结果
1、大小测量
1）将目镜测微尺校正结果填入下表：
接物镜 接物镜倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数
低倍镜 高倍镜 油镜
接目镜放大倍数： 2）将各菌测定结果填入下表
目镜测微尺每格代表的长度
（μm ）
微生物类型
杆菌 球菌 螺旋菌
目镜测微 尺每格代 表的长度 （μm ）
宽
长
菌体大小范
采用目镜测微尺测量经显微镜放大后的细胞物象，由于 不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微 尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此在测量前要先对目 镜测微尺进行校正。
10μm
校正公式： 目镜测微尺每格长度(μm)＝两重合线间镜台测微尺小格数×10/ 两重合线间目镜测微尺小格数
计数室
二、基本原理
1、微生物细胞大小的测量
微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也 是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要 在显微镜下，借助特殊测量工具――测微尺（包括 镜台测微尺和目镜测微尺）。
测微尺原理：镜台测微尺是中央部分刻有精确等 分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格，每格长 0.01mm(即10μm)。镜台测微尺并不直接用来测量细 胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长 度，然后再用目镜测微尺测量微生物细胞的大小。
实验5微生物大小及量测定
【实验报告】
3）用表5-3对各菌测定结果进行计算和表述。
细菌名称
目镜测微尺 每格代表的 长度/μm
宽
目镜测微尺 平均格数
金黄色葡萄球菌
宽度 μm
长
目镜测微尺 平均格数
长度 μm
菌体 大小
枯草芽孢杆菌
迂回螺菌
注：球菌用直径（宽度）表示细胞大小，杆菌和螺菌用宽度×长度表示细胞大小。
【实验报告】
2. 思考题 1）为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台
12 345
第一室
第二室
2. 思考题 1）根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪 些方面？应如何尽量减少误差，力求准确？ 2）某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1～2 种可行的检测方法。
Thanks for your attention!
Central laboratory of Biology
【基本原理】
目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精 确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。测量时， 需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微放大后的细胞物 象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目 镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。
【实验用品】
1.菌种：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和迂回螺菌的染色玻 片标本。 2.试剂：香柏油，二甲苯。 3.仪器和其他用品：镜台测微尺，目镜测微尺，普通光学显微 镜，擦镜纸等。
【方法步骤】
1. 目镜测微尺的安装 2. 校正目镜测微尺 3. 菌体大小的测定 4. 测定完毕
获得本实验成功的关键
【基本原理】
血细胞计数板是一块特制的载玻片，其上由4条槽构成3个平台。 中间较宽的平台又被一段横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有 一个方格网，每个方格网共分9个大方格，中间的大方格即为计 数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成25 个中方格，而每个中方格又分成16小方格（图5-2）；另一种是 一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格， 但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是 400个。每一个大方格边长为1mm，则每一个大方格的面积为1mm2， 盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数 室的容积为0.1mm3（10-4mL）。
实验五 显微测微尺使用与细胞大小的测量
实验二显微测微尺使用与细胞大小的测量2011.03.16班级：姓名：一、实验目的学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定细胞大小的方法。
二、实验原理通常的目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分、把10 mm 长度刻成100等分或将1mm长度刻成100等分。
测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
通常的镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。
校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
三、实验用品显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、固定装片等。
四、实验步骤l、目镜测微尺的校正将目镜测微尺装入目镜的隔板上，使刻度朝下（已安装到位）。
把镜台测微尺置于载物台上，使刻度朝上，并对准光源。
先用低倍镜找到镜台测微尺的刻度，改用高倍镜观察，当看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺的“0”点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后，仔细寻找两尺第2个完全重合的刻度。
计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。
因为镜台测微尺的刻度每格长10μm，所以由下列公式就可以算出所校正的目镜测微尺每格所代表的长度。
实验五微生物数量和大小测定霉菌的观察
生长条件
霉菌可以在多种环境条 件下生长，如湿度、温
度、pH等。
分布广泛
霉菌在自然界中分布广 泛，可在土壤、空气、
水体等环境中生长。
03 实验步骤
样品采集与制备
样品采集
选择具有代表性的样品，如食品、土壤、水等，采集时要避免污染和交叉感染。
样品制备
将采集的样品进行适当处理，如破碎、稀释、过滤等，以便后续的实验操作。
实验五：微生物数量和大小测定霉菌的观察
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与分析 • 结论与讨论 • 参考文献
01 实验目的
了解微生物数量和大小的测定方法
01
02
03
显微镜计数法
通过显微镜观察并计数样 品中的微生物数量，根据 视野范围和放大倍数计算 出微生物的数量。
平板计数法
将样品稀释后涂布在培养 基上，培养后统计菌落数 量，计算出样品中的微生 物数量。
流式细胞术
利用流式细胞仪对微生物 进行计数和大小测量，具 有快速、准确和高通量的 特点。
学习观察霉菌的方法和技巧
Hale Waihona Puke 010203
04
培养基制备
选择适合霉菌生长的培养基， 如PDA培养基，按照配方配
制培养基并灭菌。
接种与培养
参考文献
霉菌的形态特征
霉菌在显微镜下呈现丝状或分支状结构，通常为白色或灰色。
观察培养基
选择适合霉菌生长的培养基，如孟加拉红培养基或察氏培养基，以 促进霉菌的生长和观察。
计数方法
采用菌落计数法，通过在显微镜下观察培养基表面上的霉菌菌落数 量，计算出每克或每毫升样品中的霉菌数量。
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微生物大小测定和微生物的显微镜直接计数法
微生物大小测定和微生物的显微镜直接计数法一、实验目的1、了解显微测微尺的结构及掌握显微测微尺用于测量菌体大小的方法。
2、学习使用血细胞计数板计酵母菌细胞数的原理和方法。
二、实验原理（一）、显微测微尺的使用：可用于测量微生物细胞或孢子的大小，它包括镜台测微尺和目镜测微尺两部分。
镜台测微尺是一块特制的载玻片，其中央有一全长为1mm 的刻度标尺，等分成100小格，可用它校正目镜测微尺每小格的长度。
目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形玻片，每小格的长度随目镜、物镜放大倍数的大小而变动。
在测量之前，应预先用镜台测微尺来校正并计算出在某一放大倍数物镜下，目镜测微尺每小格所代表的实际长度，再以它作为测量微生物细胞的尺度。
标定公式为：目镜测微尺每格长度(um)=（两条重合线间镜台测微尺的格数/两条重合线间目镜测微尺的格数）*10；计算公式：微生物大小(um)=目镜测微尺格数* 目镜测微尺每格长度(um) （二）、显微镜直接计数法：其原理是将经过适当稀释的微生物细胞或孢子悬液，加至血细胞计数板的计数室中，在显微镜下逐格计数。
由于计数室的容积是固定的（0.1mm3）,故可将在显微镜下计得的菌体细胞数换算成单位体积试样中的含菌量。
此法是一种常用的微生物总菌计数法。
血细胞计数板上的计数室位于中央平台短槽两侧的2个短平台；其上各有一方格网，它被划分成9大格，中央大格为计数室。
该计数室又被划分为400个小格，其中包括25个中格，四周均有双线界限加以区分。
计数公式：1ml菌液中的总菌数 =（5个方格中的总菌数/5）× 25 ×10000 × 稀释倍数三、实验器材菌种：酵母菌仪器：显微镜，镜台测微尺，目镜测微尺，血细胞计数板等其它：载玻片，盖玻片，擦镜纸等四、实验步骤（一）、微生物大小测定：1、装目镜测微尺；2、放置镜台测微尺；3、目镜测微尺的格数标定：按照标定公式的要求，分别测出低倍镜和高倍镜下的目镜测微尺每格所代表的实际长度。
实验五 微生物的大小和数量的测定优选PPT文档
酵母的直径大小测定结果
（X1+X2+X3+X4+X5） T表示五个中方格中的总菌数；
﹟
学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。
乘上25（或16）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。
× 25（或16） × 10 × 1000 ×稀释倍数
3、菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将酵母菌染色标本置于载物台上，然后在高倍镜下用目镜测微尺测量菌体的大小。
1、目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使 目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合
（X1+X2+X32+、X4+仔X5）细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微
乘上25（或16）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。
细胞数/ml=[每中方格平均细胞数×25（16）/10-4] ×稀释倍数
二、实验原理---酵母菌大小测定
测量工具及构造
镜台测微尺
目镜测微尺
目镜测微尺的校正
酵母的直径大小测定结果 将显微计数结果记录于下表中。 长颈胶头吸管、盖玻片、擦镜纸等。 学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。 ×稀释倍数 6、计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。 T表示五个中方格中的总菌数； 二、实验原理---血球计数板对酵母菌培养液计数： 5、压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内； 将显微计数结果记录于下表中。 目镜测微尺标定结果： 40×镜下 倍目镜测微尺每格长度是 μm。 学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？ 遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。 酵母的直径大小测定结果 （X1+X2+X3+X4+X5）
实验五--微生物计数法与大小测定
微生物的分离纯化与平板菌落计数 （一） 培养基的配制和灭菌
Petroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌 器等。
各种计数板的计数原理相同，只是血球计
数板较厚，不能使用油镜观察，只能计数 较大的霉菌孢子和酵母菌；而后两种计菌 器细菌，可以使用油镜观察，因此可以直 接计数细菌。
血球计数板
Petroff-Hauser计菌器
Hawksley计菌器
实验原理
显微镜直接计数法是将小量待测样品的
悬浮液置于一种特别的具有确定面积和 容积的载玻片上，于显微镜下直接计数 的一种简便、快速、直观的方法。 直接计数法优缺点
优点：直观、快速、பைடு நூலகம்作简单。 缺点：
不能区分死菌与活菌，所得为总数； 不适于对运动细菌的计数。
常用计菌器
常用计数器有血球计数板(血细胞计数板)、
设5个中方格的总菌数为A，菌液稀释倍数为B
计数板为25个中方格(本次试验) ： 1ml菌液的总菌数=A/5×25×104×B 计数板为16个中方格： 1ml菌液的总菌数=A/5×16×104×B
注意事项
取样时先要摇匀菌液； 加样时计数室不可有气泡； 一般样品稀释度要求每小格内约有5-10个菌 体为宜； 每个计数室选5个中格（4个角和中央）计数； 位于格线上的菌体一般数上不数下，数右不 数左； 若芽体大小达到母细胞的一半，则作为两个 菌体计数。 血球计数板使用完毕，用水冲洗干净，切勿 用硬物洗刷，以免损坏网格刻度；洗净后自 行晾干或吹风机吹干。
25中格X16小格 1ml菌液中的总菌数= ？ 答案：(3+4+4+3+2)／5×25×104 =8×105个/ml
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清洗。 3.2.5 清洗。 自来水冲洗 95%酒精棉球擦洗 95%酒精棉球擦洗
吹干
放入盒中
实验报告
1 2 用文字描述实验项目、实验目的、材料与方法. 用文字描述实验项目、实验目的、材料与方法. 实验结果。 实验结果。 设计表格表达实验结果。 设计表格表达实验结果。 3 实验分析。分析实验过程中存在的问题，如何改 实验分析。分析实验过程中存在的问题， 进？
实验六 微生物显微计数和大小测量
1 实验目的 掌握使用血细胞计数板测定微生物数量的方法。 1.1 掌握使用血细胞计数板测定微生物数量的方法。 1.2 掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。 掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法。
2 实验原理(通过了解下列问题来掌握实验原理 通过了解下列问题来掌握实验原理) 通过了解下列问题来掌握实验原理 测量微生物数量的方法有哪些? 2.1 测量微生物数量的方法有哪些?为什么可用血细 胞计数板来测量微生物的数量？ 胞计数板来测量微生物的数量？ 测量微生物细胞大小的方法有哪些？ 2.2 测量微生物细胞大小的方法有哪些？目镜测微尺 为什么要校正? 为什么要校正?
3
材料与方法 实验器材
3.1
3.1.1 药品： 生理盐水。 药品： 生理盐水。 3.1.2 菌种： Saccharomyces cerevisiae（酿酒酵母）2菌种： （酿酒酵母） 3 d培养物。 d培养物 培养物。 3.1.3 仪器：显微镜（MODEL E100）,显微测微尺 仪器：显微镜（ ） 显微测微尺 目镜测微尺、镜台测微尺），血细胞计数板， ），血细胞计数板 （目镜测微尺、镜台测微尺），血细胞计数板，电 吹风机。 吹风机。 3.1.4 其它物品：擦镜纸，毛细滴管，接种环，酒精灯， 其它物品：擦镜纸，毛细滴管，接种环，酒精镜计数
菌悬液制备。 mL的生理盐水加到酿酒酵母 3.2.1 菌悬液制备。将5 mL的生理盐水加到酿酒酵母 的斜面培养物上，用接种环刮取菌苔， 的斜面培养物上，用接种环刮取菌苔，将菌悬液倒入 盛有5 mL的生理盐水和玻璃珠的三角瓶中 的生理盐水和玻璃珠的三角瓶中， 盛有5 mL的生理盐水和玻璃珠的三角瓶中， 振荡使细胞分散。（集体完成） 。（集体完成 振荡使细胞分散。（集体完成）
检查血细胞计数板。在显微镜下检查计数室， 3.2.2 检查血细胞计数板。在显微镜下检查计数室， 若有污物，用自来水冲洗，再用95% 95%酒精棉球轻轻擦 若有污物，用自来水冲洗，再用95%酒精棉球轻轻擦 洗后，用电吹风机吹干。 洗后，用电吹风机吹干。
加样品。在血细胞计数板上盖上盖片， 3.2.3 加样品。在血细胞计数板上盖上盖片，用毛细滴 管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖片边缘滴一小滴， 管将摇匀的酿酒酵母菌悬液由盖片边缘滴一小滴，再用 镊子轻压盖片，静置5 镊子轻压盖片，静置 min 。 显微镜计数。 3.2.4 显微镜计数。将加有样品的备细胞计数板置于载 物台上，先用低倍镜观察计数室位置， 物台上，先用低倍镜观察计数室位置，再换高倍镜进行 计数。要求稀释度为每小格内5 10个菌体为宜 个菌体为宜。 计数。要求稀释度为每小格内5－10个菌体为宜。 25×16型：分别计数左上、右上、左下、右下及中央 25×16型：分别计数左上、右上、左下、右下及中央 五大格80小格中酵母菌数量。 五大格80小格中酵母菌数量。 16×25型：分别计数左上、右上、左下、右下四大格 16×25型：分别计数左上、右上、左下、右下四大格 100小格中酵母菌数量。 100小格中酵母菌数量。
3.2 方法
B. 微生物大小的测定
目镜测微尺安装：将目镜透镜旋下， 3.2.1 目镜测微尺安装：将目镜透镜旋下，将目镜测 微尺刻度朝下放在目镜镜筒内的隔板上。（教师示范） 。（教师示范 微尺刻度朝下放在目镜镜筒内的隔板上。（教师示范） 校正目镜测微尺。将镜台测微尺放载物台上， 3.2.2 校正目镜测微尺。将镜台测微尺放载物台上， 在低倍镜下观察刻度，转动目镜测微尺， 在低倍镜下观察刻度，转动目镜测微尺，使两尺在 某一区域内完全重合。 某一区域内完全重合。数出两重合线间镜台测微尺 和目镜测微尺格数。 和目镜测微尺格数。 目镜测微尺每格长度（ 目镜测微尺每格长度（μm）＝两重合刻度间镜台 测微尺格数×10/两重合刻度间目镜测微尺格数 测微尺格数×10/两重合刻度间目镜测微尺格数