动物细胞培养基本技术与原理共72页文档
.动物细胞培养技术共42页
动物细胞培养技术绪论部分1）细胞的基本概念：细胞（包括单个个体）在体外条件下的生长，成为细胞培养。
2）组织培养：其本意是指从体内取出组织和细胞，模拟体内生理环境，在无菌，适当温度和一定营养条件下使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。
（组织培养从广义上说分为动物组织营养和植物组织营养两大类。
）组织培养常用术语贴壁依赖性：为细胞需贴附于第五或支撑物上才能生长的性质。
细胞一代时间：单个细胞连续两次分裂的时间相隔，可借助显微电影照相术来精确确定。
群体倍增时间：在对数生长期进行计算的细胞增加一倍所需时间。
克隆;单个细胞通过有丝分裂形成的细胞群体，他们的遗传特性相同。
原代培养：从体内取出细胞或组织的第一次培养。
传代或传代培养：不论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶。
细胞杂交：两个或多个不同的细胞融合导致一个含核体的形成。
细胞培养：其本意是指从体内取出组织和细胞，模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。
细胞培养的作用：在病毒学上的作用（病毒的分离细胞培养在药物学上的作用（新药的制备、药效的鉴别、病毒疫苗的生产、单抗的制备）；细胞培养在肿瘤学研究上的作用（例如化疗中的药物使用剂量、癌症研究等）细胞培养在细胞功能与分化研究中的应用；细胞培养在免疫学中的应用1)Harrison首先解剖出蛙胚原始脊髓节段进行培养。
哈里森悬滴培养法。
建立起一套合理的无菌操作技术。
（淋巴）一般皆公认Harrison为“组织培养之父”，凹玻片悬滴制备培养技术，对生物学知识的研究做出十分重要贡献。
2) Carrel 反复传代的方法使细胞系存活34年。
他采用的无菌技术，以及后来设计的培养瓶(卡氏瓶，Carrel flask)等都是对组织培养的重要贡献。
特别是他的连续培养，为后来的传代培养奠定了基础。
30年代传入我国，50年代逐渐发展细胞培养设施和基本条件（一）细胞实验室基本原则：防止微生物污染和有害物的影响。
动物细胞培养课件
法规实施时间： 2021年4月15日
07 动物细胞培养未来发展
动物细胞培养技术发展趋势
细胞培养技术 将更加成熟， 提高细胞存活 率和生长速度
细胞培养技术 将更加智能化， 实现自动化和
智能化操作
细胞培养技术 将更加环保， 减少对环境的
污染和破坏
细胞培养技术 将更加精准， 实现对细胞生 长和分化的精
动物细胞培养课件
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汇报人：PPT
目录 /目录
01
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04
动物细胞培养 基
02
动物细胞培养 概述
05
动物细胞培养 设备
03
动物细胞培养 技术
06
动物细胞培养 安全性
01 添加章节标题
02 动物细胞培养概述
动物细胞培养环境保护
生物安全：确保细胞培养过程中无 病原体污染
化学试剂：使用环保型化学试剂， 减少对环境的影响
添加标题
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废物处理：妥善处理培养过程中产 生的废物，避免环境污染
生物伦理：遵守生物伦理原则，保 护实验动物的权益
动物细胞培养伦理问题
动物权益：动物细胞培养 是否侵犯动物权益
动物细胞培养基选择与使用
培养基类型：选择适合细胞生长的培养基类型，如DMEM、RPMI等 培养基成分：根据细胞类型和实验需求，选择合适的培养基成分，如血清、抗生素等 培养基配制：按照说明书进行培养基配制，注意无菌操作和温度控制 培养基更换：定期更换培养基，保持细胞活力和生长状态
05 动物细胞培养设备
完全培养基：含有细胞生长所需的所有 营养物质
动物细胞培养(三佰)PPT
细胞分裂是指活细胞增殖及其数 量由一个复制最初的DNA分子， 使遗传信息传递给下一代，是保 证物种稳定的基础。
细胞培养的环境因素
01
02
03
温度
维持一定的温度是细胞培 养的基本要求，因为温度 变化会影响细胞的生长和 代谢。
湿度
培养箱内的湿度应维持在 95%左右，以保证细胞的 正常代谢。
气体环境
细胞系建立与保存
筛选与鉴定
01
从原代细胞或传代细胞中筛选具有特定生物学特性的细胞系，
并进行鉴定。
细胞系建立
02
将筛选出的具有特定特性的细胞系进行培养，建立稳定的细胞
系。
细胞系保存
03
将建立的细胞系进行低温冷冻保存，确保细胞的遗传稳定性和
生物学特性。
细胞克隆技术
细胞克隆
在培养过程中，将单个细胞从群体中分离出来，并在培养瓶中形 成单克隆细胞群。
详细描述
异常的形态和功能可能是由于培养条件不适、基因突变等因 素引起的。为解决这一问题，需要密切观察细胞形态和功能 变化，调整培养条件，并采用适当的检测方法。
细胞传代过程中的变异问题
总结词
在动物细胞培养过程中，传代过程中可能会出现细胞变异问题，影响实验结果。
详细描述
变异可能是由于基因突变、染色体畸变等因素引起的。为解决这一问题，需要采用适当的检测方法，如基因突变 检测、染色体分析等，以确保细胞的稳定性和可靠性。同时，也需要优化传代方法，减少对细胞的损伤和变异的 可能性。
动物细胞培养(三佰)
• 引言 • 动物细胞培养的基本原理 • 动物细胞培养的过程 • 动物细胞培养的挑战与解决方案 • 动物细胞培养培养的定义
动物细胞培养是指在体外人工模拟体 内环境，将动物细胞种植在适宜的培 养基中，使其保持生长和繁殖的技术。
《动物细胞培养技术及其应用》 知识清单
《动物细胞培养技术及其应用》知识清单一、动物细胞培养技术的基本概念动物细胞培养，简单来说，就是在体外模拟体内的环境，让动物细胞生长、繁殖和发挥功能的技术。
这可不是一件简单的事情，需要精心创造一系列适宜的条件。
细胞从生物体中取出后，要放在特制的培养基中。
培养基就像是细胞的“美食”，包含了细胞生长所需的各种营养物质，如氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等。
同时，还得调节好环境的温度、pH 值、氧气和二氧化碳的浓度，给细胞一个舒适的“家”。
二、动物细胞培养的基本流程1、取材首先得从动物体内获取要培养的细胞。
这可以是从胚胎、幼体组织，也可以是成体的某些器官。
但取材的过程得小心翼翼，不能损伤细胞，还要保证细胞的活性。
2、原代培养将取得的细胞放入培养瓶或培养皿中，这就是原代培养的开始。
在这个阶段，细胞会慢慢适应新的环境，开始生长和分裂。
3、传代培养当原代培养的细胞长满了培养容器的表面，就需要把它们分成小份，转移到新的容器中继续培养，这就是传代培养。
4、细胞的冻存与复苏为了长期保存细胞，会把细胞放在低温下冻存。
等到需要的时候，再通过特定的方法让它们复苏，恢复活性。
三、动物细胞培养所需的条件1、无菌环境这是至关重要的一点，任何细菌、真菌或病毒的污染都可能导致细胞培养的失败。
所以，实验操作要在无菌的超净工作台中进行，培养基和培养用具也要经过严格的灭菌处理。
2、合适的培养基培养基的成分要精心调配，既要满足细胞的营养需求，又要维持合适的渗透压和 pH 值。
3、温度和气体环境一般来说，细胞培养的温度在 37℃左右，同时要提供适量的氧气和二氧化碳。
氧气用于细胞呼吸，二氧化碳则有助于维持培养基的 pH 稳定。
4、贴壁和悬浮培养有些细胞需要附着在培养容器的表面才能生长，称为贴壁细胞；而有些细胞可以在培养基中自由悬浮生长。
四、动物细胞培养技术的应用1、生物制品的生产比如疫苗、抗体、生长因子等。
通过大规模培养动物细胞，可以高效地生产这些生物制品，满足医疗和预防疾病的需求。
《动物细胞培养技术及其应用》 知识清单
《动物细胞培养技术及其应用》知识清单一、动物细胞培养技术的基本概念动物细胞培养是指从动物体内取出细胞或者组织，在体外模拟体内的生理环境，使其生长、分裂、分化并维持其功能的一种技术。
这一技术为生物学、医学等领域的研究和应用提供了重要的手段。
二、动物细胞培养的基本条件1、无菌环境细胞培养必须在严格的无菌条件下进行，以防止微生物的污染。
这包括对培养器皿、培养基、操作工具等进行灭菌处理，以及在无菌操作箱中进行细胞的接种、传代等操作。
2、合适的培养基培养基为细胞提供了生长所需的营养物质，包括氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等。
此外，培养基中还常常添加血清，血清中含有多种生长因子和激素，有助于细胞的生长和增殖。
3、适宜的温度和 pH一般来说，动物细胞培养的温度通常在 37℃左右，pH 则在 72 74 之间。
保持稳定的温度和 pH 对于细胞的正常代谢和生长至关重要。
4、气体环境细胞培养需要一定的气体环境，通常是 95%的空气和 5%的二氧化碳。
二氧化碳可以调节培养基的 pH 值。
三、动物细胞培养的基本流程1、取材从动物体内取出所需的组织或细胞，例如通过手术获取肿瘤组织、从血液中分离白细胞等。
2、原代培养将取出的组织或细胞进行处理，使其分散成单个细胞，然后接种到培养器皿中，这就是原代培养。
在原代培养中，细胞会经历一个适应体外环境的过程。
3、传代培养当原代培养的细胞生长到一定密度时，需要将其分成若干份，重新接种到新的培养器皿中继续培养，这就是传代培养。
传代培养可以使细胞不断增殖。
4、细胞冻存与复苏为了长期保存细胞，可以将细胞在液氮中冻存。
当需要使用时，再将其复苏，使其恢复生长和代谢能力。
四、动物细胞培养技术的应用1、生物制品的生产利用动物细胞培养技术可以生产多种生物制品，如疫苗、抗体、蛋白质药物等。
例如，通过培养骨髓瘤细胞来生产单克隆抗体，用于疾病的诊断和治疗。
2、医学研究在医学领域，动物细胞培养技术为疾病的发病机制研究、药物筛选和药效评价提供了重要的实验模型。
《动物细胞培养技术及其应用》 知识清单
《动物细胞培养技术及其应用》知识清单一、动物细胞培养技术的基本概念动物细胞培养是指从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使之生存、生长、繁殖并维持其结构和功能的一种技术。
二、动物细胞培养的基本条件1、无菌环境细胞培养必须在无菌条件下进行，以防止微生物的污染。
这包括对培养器具的严格消毒、操作过程中的无菌操作技术以及使用无菌的培养基和试剂。
2、合适的培养基培养基提供了细胞生长所需的营养物质，包括氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等。
此外，还可能添加血清、生长因子等促进细胞生长和增殖的成分。
3、适宜的温度和气体环境一般来说，动物细胞培养的温度在 37℃左右，同时需要一定的气体环境，如 95%的空气和 5%的二氧化碳，以维持培养基的酸碱度平衡。
4、合适的培养容器常见的培养容器有培养瓶、培养皿、多孔培养板等，其材质和表面特性会影响细胞的附着和生长。
三、动物细胞培养的基本流程1、取材从动物体内取出需要培养的细胞或组织，如从胚胎、器官或肿瘤组织等。
取材过程要尽量减少对细胞的损伤。
2、原代培养将取出的组织或细胞分散成单个细胞，接种到培养容器中进行初次培养。
这一阶段的细胞称为原代细胞。
3、传代培养当原代细胞生长到一定密度后，需要将其分成若干份，重新接种到新的培养容器中继续培养，这个过程称为传代培养。
4、细胞的冻存与复苏为了长期保存细胞，可以将细胞在低温下冻存。
当需要使用时，再进行复苏，使其恢复生长和增殖能力。
四、动物细胞培养技术的应用1、生物制品的生产例如，利用动物细胞培养技术生产疫苗、抗体、激素等生物制品。
疫苗的生产可以通过培养病毒感染的细胞，收获病毒制成疫苗；抗体的生产则是通过培养能产生特定抗体的细胞来实现。
2、基因工程和细胞工程在基因工程中，动物细胞可以作为受体细胞，用于导入和表达外源基因。
在细胞工程中，细胞培养技术是细胞融合、细胞克隆等技术的基础。
3、药物筛选和毒性测试培养的动物细胞可以用于筛选新的药物，评估药物的疗效和毒性。
《动物细胞培养技术及其应用》 知识清单
《动物细胞培养技术及其应用》知识清单一、动物细胞培养技术的概念和发展历程动物细胞培养技术是指从动物体内取出细胞，在体外模拟体内环境，使其生长、繁殖并维持一定的生物学特性的技术。
这项技术的发展可以追溯到 20 世纪初。
早期的研究主要集中在观察细胞的形态和生长特性。
随着技术的不断进步，人们逐渐掌握了如何为细胞提供适宜的营养物质、生长因子和环境条件，使得细胞能够在体外长期存活和增殖。
二、动物细胞培养的基本条件1、无菌环境为了防止微生物的污染，细胞培养必须在严格的无菌条件下进行。
这包括对培养器具的消毒、操作过程中的无菌操作以及培养环境的清洁。
2、合适的培养基培养基是细胞生长所需的营养物质的来源，通常包含氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等基本成分，还可能添加血清、生长因子等促进细胞生长和分化的物质。
3、适宜的温度和气体环境一般来说，动物细胞培养的温度在 37℃左右，同时需要提供一定比例的氧气和二氧化碳来维持细胞的正常代谢。
4、合适的培养容器常见的培养容器有培养瓶、培养皿、多孔板等，其材质和表面处理方式会影响细胞的附着和生长。
三、动物细胞培养的基本操作流程1、取材从动物的组织或器官中获取细胞，常用的方法有酶消化法和机械分离法。
2、原代培养将获取的细胞直接进行培养，称为原代培养。
这一阶段的细胞通常具有较强的活力和分化能力。
3、传代培养当原代培养的细胞生长到一定密度时，需要将其分散并转移到新的培养容器中继续培养，这就是传代培养。
4、细胞的冻存与复苏为了长期保存细胞，可以将其在低温下冻存。
当需要使用时，再进行复苏。
四、动物细胞培养技术的应用1、生物制药通过培养动物细胞来生产各种生物制品，如疫苗、抗体、蛋白质药物等。
例如，利用哺乳动物细胞培养生产的乙肝疫苗、单克隆抗体等，在疾病的预防和治疗中发挥了重要作用。
2、基础医学研究为研究细胞的生理、生化过程，细胞的分化、癌变机制等提供了良好的实验模型。
通过对培养细胞的观察和分析，可以深入了解疾病的发生发展机制，为新药的研发提供理论依据。
动物细胞培养原理
2.2.2.2 饲养细胞制备在杂交瘤细胞的培养过程中，融合后大量骨髓瘤细胞和脾细胞在HAT培养液中相继死亡，此时单个或少数分散的细胞不易存活，必须加入其他细胞方能使之生存，这种被加入的活细胞称为饲养细胞。
一般选用正常小鼠的腹腔巨噬细胞作为饲养细胞。
在细胞融合前的1天制备饲养细胞。
（1）将健康的Balb/c小鼠眼球放血后拉颈脱臼处死，浸泡于75%酒精中消毒3～5min，随即放入超净工作台内，腹部朝上固定于解剖台板上。
（2）用镊子提起小鼠腹部皮肤，用剪刀剪一小口，暴露一小块腹膜，再换把剪刀将暴露的腹膜剪一个小口。
（3）用滴管吸取适量的不完全RPMI-1640培养液注入小鼠腹腔。
反复抽吸、冲洗腹腔3～4次。
（4）抽回腹腔内液体，注入离心管内。
（5）1000rpm离心10min,弃上清。
（6）先用5ml HAT培养液将沉淀细胞悬浮并混匀，做细胞计数，根据细胞计数结果，补加HAT培养液，使细胞浓度为2×105个/ml。
（7）将细胞悬液加入96孔培养板内，每孔100μl.然后将培养板置37℃、5% CO2细胞培养箱内培养。
该项操作及以后的操作都必须严格无菌操作。
2.2.2.3 脾细胞的准备（1）取已经免疫的Balb/c小鼠，摘除眼球放血，并分离血清供检测抗体时的阳性对照用。
同时将小鼠拉颈脱臼处死，浸泡于75%酒精中5min，随即放入超净台内。
（2）在小鼠腹壁上剪一小口，撕开皮肤，用灭菌镊子提起腹膜，剪开左侧腹膜及肋骨，暴露脾脏，换用另一套灭菌器械，用镊子提起脾脏，分离结缔组织，取出脾脏。
放入盛有5ml不完全培养液的平皿中，轻轻冲洗一次。
（3）再将脾脏移入另一盛有5ml不完全培养液的平皿中，再冲洗一次，然后用剪刀剪碎。
（4）将脾脏碎块装入匀浆器中，充分研磨。
之后用不完全培养液冲洗匀浆器，待大的组织块沉降后，吸取上层的细胞移入50ml离心管中，加不完全培养液至30ml，混匀。
（5）1000rpm离心5min，弃去上清。
动物细胞培养
（难）
3、以课本P48克隆高产奶牛为例分析核移植的 大致过程
供体细胞注入 去核卵母细胞
激活受体细胞， 完成分裂、发 育
减数第二次分裂中期 （MⅡ卵母细胞）
去核的卵母细胞
胚胎移植
代孕牛子宫
克隆牛
问题
1.克隆动物性状与供体动物完全一样吗？性别和供体动 物一样吗？ 不完全一样！因为：1、供体动物只提供 细胞核，而细胞质中的遗传物质（如线粒体DNA） 来自于受体卵母细胞.2、生物的性状还受环境的影响。
动物细胞培养、核移植、胚胎移植等
供体细胞 （供核）
细胞培养
体细胞 核移 重
注入
植
组
卵巢卵母细胞 （MⅡ中期：供质）
去核
无核卵 母细胞
细 胞
胚胎 构建重 移植 组胚胎
代孕 母体
生出与供体奶 牛遗传基础相 同的犊牛
4、应用前景：
① 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 ② 保护濒危物种，增加存活数量 ③ 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 ④ 可以作为异种移植的供体 ⑤ 可以用于组织器官的移植
适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4
4）气体环境：“95％空气+5％CO2”的混合气体培养箱。
氧气是细胞代谢必须的； CO2维持培养 液的PH。
5.动物细胞培养技术的应用:
1.蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体
2.应用于基因工程 主要用于作为受体细胞
3.检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4.细胞的生理、药理、病理研究
c.个体水平上：指基因型完全相同的两个或一个 群体。
–思考与回忆：
• 1、动物细胞全能性特点？
• 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制， 分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。