线性范围1
生物样品验证指标和分析方法学考核
第四节生物样品测定方法的验证指标和分析方法的考核任何一种分析测定方法，根据其使用的对象和要求，都应有相应的效能指标。
一般而言，常用的分析效能评价指标包括：精密度、准确度、检测限、定量限、选择性、线性范围、重现性、耐用性等。
生物样品中药物分析方法评价的标准与上述评价指标之间，既有共同点也有其独特之处，测定方法的效能指标可以作为对分析测定方法的评价尺度，也可以作为建立新的测定方法的实验研究依据。
与其他分析方法相比，体内药物分析方法的可行性和可靠性，需要应用若干标准来进行方法学的考察与评价。
在实际工作中评价一个体内药物分析方法的优劣，一般常用精密度、准确度、灵敏度、专属性或选择性及可测浓度范围等指标进行考察。
一、生物样品测定方法的验证指标(一)准确度准确度(accuracy)是指测得结果与真实值接近的程度，表示分析方法测量的正确性，是考察和评价分析方法的最基本要点之一。
由于不可能绝对地确知样品的“真值”，因而常用回收率数值反映测定的准确程度。
也可通过与其他已建立的分析方法进行比较等手段来反映准确度。
回收率是指将已知量的药物纯品加到空白生物基质(如空白血浆、血清)中，经过一系列的前处理、测定，计算所测得的药物量与加入量的比值，以百分率表示。
一般回收率数值越接近100％，准确程度越好。
生物药物分析中，常用标准添加法来计算回收率，即取已准确测定药物含量P(present)的真实样品(如人血浆样品等)，再加入药物标准晶已知量A．(added)，将该混合物作为测定液，其测定值为M(measured)。
测定液要配制成高、中、低三种浓度，每个浓度测定3-5次，求出每种浓度的平均测定值M，且RSD应符合要求。
由于预先要准确测定样品中原含有的药物量P，因此也应测定3-5次，求其平均值P，且RSD也应符合要求。
按上式计算出的回收率，其结果越接近100％表明分析方法准确度越高。
生物样品分析时，一般应将回收率范围控制在85％-115％(样品药浓≥2m心L)及80％-120％(样品药浓<200t~,／L)o但因生物样品组分复杂，药物含量低，前处理步骤多很难达到较高的回收率。
线性范围及检测限
线性与范围（li nearity and ran ge）分析方法的线性是在给定范围内获取与样品中供试物浓度成正比的试验结果的能力。
换句话说，就是供试物浓度的变化与试验结果（或测得的响应信号）成线性关系。
所谓线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的试验结果，而且成线性的供试物浓度的变化范围，其最大量与最小量之间的间隔，可用mg/L ~ mg /L、ug/ml ~ ug/ml等表示。
线性与范围的确定可用作图法（响应值Y/浓度X）或计算回归方程（Y = a+bX）来研究建立。
测定样品时所有生物药物分析方法都必须同时作标准曲线。
每次作标准曲线时，方法应与分析方法考核时完全一致。
标准浓度应包括一定梯度的5-8个浓度（非线性者如免疫分析可适当增加）,每个浓度只需测定一次（免疫分析可测定两次并取均值）;标准曲线应覆盖样品可能的浓度范围，对于含量测定要求一般浓度上限为样品最高浓度的120%，下限为样品最低浓度的80% （但应高于LOQ）;目前仍广泛采用相关系数（r）表示标准曲线的线性度、并控制r > 0.990。
对照品的LOQ必须包括在线性范围。
线性范围是指与检测器响应信号成线性关系的样品的含量范围一般情况下，标准曲线的最低和最高值是包含在线性范围内的，而且不同人做的标准曲线，他所取的最低和最高值也不会都相同，打个比方来说,A做5个点的标准曲线，所选择的标准样品的浓度分别为：1,5,10,15,20,那么最低最高值分别为1和20,而对于这种要检测的物质来说它的线性范围可能是10E5,要远大于制作标准曲线所选择的浓度范围•通常在建立一个新方法的时候可以通过文献查到一些物质的线性范围，而实际工作中，要确切知道某种物质的线性范围必要性可能也不大。
S/N=3时的浓度是检测限，也就是峰高约在基线噪音高的3倍，注入液相色谱仪的对照品百分浓度％。
S/N=10是定量限，也就是峰高约在基线噪音高的10倍时，注入液相色谱仪的对照品量。
体外诊断试剂分析性能评估-线性范围 ppt
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1.1实验样本的基本要求
（1）样本基质应与临床实验样本相似， 但不可采用含有对测定方法具有明确干 扰作用物质的样本，如溶血、脂血、黄 疸或含有某些特定药物的样本。进行血 清学标志物检测时，理想的样本为分析 物浓度接近预期测定上限的混合人血清。
7、对数据组进行精密度检验
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4.结果报告
线性范围报告的具体格式不要求，但至 少应包括以下几方面：
（1）进行线性评价的实验室或生产厂家名 称。
（2）被评价的方法或试剂名称，批号。
（3）测定项目。
（4）线性范围（如为二阶线性应包括临床 允许误差）。
（5）如可能应标出测定项目的医学决定水
平及在此水平处的临床允许误差。
医学决定水平
指在诊断及治疗工作时，对疾病诊断或治疗起关键作用的某一被测成分的浓度，临床 上必须采取措施的检测水平。 例（仅供参考）：
白细胞计数
参考值（4～10）×109/L
决定水平临床意义及措施
0.5×109/L低于此值，病人有高度易感染性，应采取相应的预防性治疗及预防感染措施。
3×109/L低于此值为白细胞减少症，应再作其他试验，如白细胞分类计数、观察外周血涂 片等，并应询问用药史。`
11×109/L高于此值为白细胞增多，此时作白细胞分类计数有助于分析病因和分型，如果需 要应查找感染源。
30×109/L高于此值，提示可能为白血病，应进行白细胞分类，观察外周血涂片和进行骨髓 检查。
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1.2实验样本的制备方法
（1）不同浓度水平的样本可通过将高浓度 样本与低浓度样本进行倍比稀释得到，注意 在进行液体吸取时应选择精密度与准确性好 的移液装置。制备时应将样本完全混合并避 免蒸发或其他使样本变质的情况。每份样本 的浓度与体积单位应统一。
体外诊断试剂分析性能评估-线性范围
1.2实验样本的制备方法
（1）不同浓度水平的样本可通过将高浓度样本与低浓度样本进行倍 比稀释得到，注意在进行液体吸取时应选择精密度与准确性好的移液 装置。制备时应将样本完全混合并避免蒸发或其他使样本变质的情况。 每份样本的浓度与体积单位应统一。 （2）如果高/低浓度血清的值未知，可将每种血清编码，用编码代表 每个血清的相对浓度。对于等浓度间隔样本，可用连续整数（如1、2、 3、4、5）代表连续样本。进行数据处理时可用样本号代替X值。 （3）样本的特殊处理：在无法得到适用的人血清时，需对样本进行 一些特殊处理以满足实验要求。这些处理过程包括稀释、加入添加物 或透析、热处理等，无论进行何种处理均应以保持基质恒定为基本原 则。在评价报告中应对所使用的稀释液、添加物、溶剂等的材料来源 加以注明。 样本稀释液应选用由厂家推荐或经实验室证明可使用的产品，如 可采用5%牛血清白蛋白或人白蛋白溶液。 欲提高样本浓度时可在样本中添加分析物纯品。在添加物为溶液 状态时，应注意添加液体对样本的稀释作用（小于10%）并注明所用 溶剂。
事业发展部-刘会娟
一、概述 二、定义 三、研究时间 四、线性范围评估的基本原则 五、线性范围的评估及数据处理方法
一、概述
线性范围评估资料是评价拟上市产品 有效性的重要依据，也是产品注册所需的重 要申报资料之一。
二、定义
线性范围：是某一方法的校准曲线的直线部 分所对应的待测物质的浓度（或量）的变化 范围。
样本选择
EP6一A中建议应尽可能按以下顺序进行样本种类的选择：①病人混合血清；②用适当 稀释液稀释的病人血清；③添加分析物的病人样本；④用处理过的低浓度物质或处理过的 血清物质稀释的病人血清；⑤商业质控品，校准品／线性物质；⑥使用生理盐水稀释的样 本；⑦稀释不足或过度稀释的商业质控品；⑧水溶液；⑨其他溶剂的溶液。
同型半胱氨酸HCY检测
同型半胱氨酸HCY检测1 检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。
2 实验原理同型半胱氨酸（Hcy）是蛋氨酸代谢产生的一种含硫氨基酸，80%在血中通过二硫键与蛋白结合，只有很少一部分游离同型半胱氨酸参加循环。
同型半胱氨酸经过一系列的反应后，生成340nm波长检测吸收光度值变化与HCY浓度呈线性关系。
3 标本：3.1 病人准备:应禁食12小时抽血.3.2 类型：新鲜不溶血的血清3.3 标本存放留取标本后请尽快分离血清。
在冰箱保存的条件下（2～8℃）稳定3天，-20℃保存至少可以稳定3个月。
3.4 标本运输室温条件下运输3.5 标本拒收标准细菌污染的不能做测定。
4 实验材料4.1 试剂:北京万泰德瑞诊断技术有限公司HCY测定试剂盒（京械注准20152401106）4.1.1 试剂组成乳酸脱氢酶 >35KU/L 丝氨酸 0.76mmol/lNADH 0.47mmol/l 胱硫醚合成酶>20KU/L胱硫醚裂解酶>10KU/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃密闭保存，效期为12个月；开盖2～8℃保存，可稳定28天。
4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。
4.2 校准品：使用北京万泰德瑞诊断技术有限公司提供的HCY标准品血清进行校准操作。
4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。
6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。
6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪，西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。
线性范围1
4．试剂配制中组分投料不足，试剂配制后组分不稳 定，或者因运输、贮存不当等导致试剂组分的含量 发生改变等因素均可造成线性范围变窄。当酶量相 对不足时，用纯标准液所作的线性范围可以达到指 定的高限，但在测定同样浓度高值样品时，结果却 出现明显偏低，这往往是样品中的介质效应引起的。
5.线性范围检查包括仪器线性和测定方法线性两个方 面。线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关 系，出现正偏离和负偏离的现象。这种偏离来自两个 方面，一是化学偏离，如有色物质的电离、水解等原 因。二是仪器偏离，如杂光、检测器噪声、环境条件 的变化、波长的变动、比色杯的误差等。因此，在做 方法学线性范围评价实验时，良好的仪器性能是必须 的。
五、操作步骤
1．按下表设计不同浓度的标准管并进行分析
空白管
加入物 （μl） DDW 5mmol/ 糖标 40mmol /糖标 酶酚试 剂 0 10 1(8) 8 _ 2
标准管
2(16) 6 _ 4 1500 3(24) 4 _ 6 4(32) 2 _ 8 5方法学评价
1.测定上限 测定上限应使95%的临床标本不经稀释即可进行 测定，具体数据值必须通过线性范围实验加以确定，因为检 测上限是不可超越的界限，当测定值高于上限临界值时，应 减少标本用量或将标本稀释后重新测定。 2.测定下限 测定下限实测多少就报多少，如未经验证，随意 延长测定下限的做法是不正确的。 3.对测定范围线性的评价通过制作剂量反应曲线的实验可以确 定某种测定方法的吸光度-浓度线性范围，就能为制作实际工 作中使用的校正曲线打下坚实的基础。随后要对线性拟合的 良好的程度和实用性进行实际检查和评价。 4. 使用高浓度和低浓度临床标本若干份进行实际的线性检查， 理想的情况是该方法的分析范围的最高浓度上限应能使95% 的临床标本不经稀释均能得到正确的测定结果。
检验科性能验证方案(仅供参考)
批间精密度：浓度分别处于正常和病理水平的混合新鲜临床标本，按照临床标本相同的 检测方法（或将室内质控品按照常规标本的方法一样测定，测定结果在遵照厂商参数不出控 的前提下） ，同批次内检测混合的新鲜临床标本 20 次，同一批号室内质控品某一时间段（至 少 20 天）的室内质控数据逐步累积最终得出均值、标准差。 1.1.3 结果判断
其中： D：表示总共检测天数(D=5)； n：单个样本每天重复检测的次数(n=4)； xdi：每个样本每天四次单独检测的结果； xd：每个样本每天四次检测结果的算数均数； xt：单个样本每天检测结果的算数均数的算数均数。 4.1.3 结果判断（可参考）
4.1.3.1 于批内精密度的判断，具体的计算和判断过程： 1)按照下述公式计算出批内精密度的自由度 ν。
1.2 正确度 1.2.1 卫生部临检中心室间质评含盖的项目，则以卫生部临床检验中心室间质评结果为
准；成绩在 80%者即为验证通过。 1.2.2 卫生部临检中心室间质评未涉及的项目，通过仪器之间的比对来实现，以参加卫
生部临检中心的室间质评的作为比对基准仪器，其最近 1 次参加卫生部临检中心的室间质评 结果。采用 5 个患者的样本，样本浓度水平尽量覆盖测量范围，包括医学决定水平。计算在 医学决定性水平下的系统误差（偏倚%） ，偏倚= ︱测定值-靶值︳/靶值*100%，偏倚%应<1/2 CLIA’88 或卫生部临检中心室间质评最大允许误差，80%以上的数据符合以上要求即为通过。 成绩在 80%以上者即为验证通过。 1.3 线性范围 1.3.1 目的：在确定某项目检测上限的同时检测其检测上下限是否呈线性关系，从而保
D：表示总共检测天数(D=5)； n：单个样本每天重复检测的次数(n=4); 因此，按照我们的验证方案，批内精密度(Swithin)的自由度为 15。 2)按照下述公式计算出 C 值百分点。
检测技术第3章部分练习答案
第三章电感传感器思考题与习题答案1. 单项选择题1）欲测量极微小的位移，应选择___A____自感传感器。
希望线性好、灵敏度也高、量程为1mm左右、分辨力为1μm左右，应选择___C___自感传感器为宜。
A. 变隙式B. 变面积式C. 螺线管式2）希望线性范围为±1mm，线性范围是线圈骨架长度的十分之一，应选择线圈骨架长度为___B___左右的螺线管式自感传感器或差动变压器。
A. 2mmB. 20mmC. 800mmD. 1mm3）螺线管式自感传感器采用差动结构是为了____B___。
A. 加长螺线管线圈的长度从而增加线性范围B. 提高灵敏度，减小温漂C. 降低成本D. 增加线圈对衔铁的吸引力4）自感传感器或差动变压器采用相敏检波电路最重要的目的是为了____C___。
A. 提高灵敏度B. 将输出的交流信号转换成直流信号C. 使检波后的直流电压能反映检波前交流信号的相位和幅度5）某车间用轴向式电感测微器来测量直径范围为Φ10mm±1mm轴的直径误差，应选择线性范围为___B___的电感传感器为宜（当轴的直径为Φ10mm±0.0mm时，预先调整电感测微器的安装高度，使衔铁正好处于测微器的中间位置）。
A. 10mmB. 3mmC. 1mmD. 12mm6）希望远距离传送信号，应选用具有____D___输出的标准变送器。
A. 0~2VB.1~5VC.0~10mAD.4~20mA3. 差动变压器式压力传感器见下图a，其压力与膜盒挠度的关系、差动变压器衔铁的位移与输出电压的关系下图b所示。
求：1）当输出电压为50mV时，膜盒的位移是__E___ mm，压力p是__F___kPa。
2）在图a、b上分别标出线性区，综合判断整个压力传感器的压力测量范围是___C___（线性误差小于2.5%，从特性曲线上感觉不出）。
G.-5A. 0~50B.-60~+60C.-55~+55D.-70~+70E.5F.50差动变压器式压力变送器特性曲线4．有一台两线制压力变送器，量程范围为0~1MPa，对应的输出电流为4~20mA。
线性范围评价
EP6-A法分析测量范围评价应用举例分析测量范围(线性检测范围)评价采用的方法有目测法、EP6-P法、改良Douma法、CAP-IRC 法和EP6-A法。
EP6-A法操作简便，适合于临床常规实验室人员评价线性，是目前最好评价线性的方法。
EP6-A 法是NCCL在EP6-P和CAP-IRC线性评价方法的基础上，经过不断的实践和不断的改进，于2003年颁发的批准性指南文件。
一、标本要求推荐用高值和低值浓度的样本按比例精确配置等间距的不同浓度样本，低、高值样本分别测定2〜4次取均值，为2个样本的实测值，如低值以 L表示，高值以H表示，分别为第一管和最后一管，各管依照L与H羊品配置的比例，可以计算出实验样品的预期值。
每管的浓度由以下公式来计算，第1管的浓度为C1,体积为V1,以次类推，第5管的浓度和体积分别为C5和 V5计算浓度C= ( C1X V1+ C5X V5) /(V1+V5),注意每管要充分混匀，并防止蒸发或其它改变。
二、结果判断：该法的线性判断过程大致分为四个步骤：(1 )确定不同项目可接受不精密度和线性偏差。
EP6-A强调任何用户有必要确定自己对线性程度的要求，或非线性的允许误差范围，目标的确定应基于实验室客户的需要及所用方法的特性。
设定误差目标所要考虑的因素：线性目标来源于偏倚目标，因而应小于或等于偏倚目标；偏倚目标应应小于或等于测量误差。
(2 )计算不精密度：目测检查无明显离群值，计算不精密度。
重复性用L个样本的所有重复测量结果的集合方差来评价。
用SDr或 CVr表示。
公式I L工【心-心］'SD r2xZ- ” “L为样本数；ri1和ri2分别为两次测量的实际结果，或与均值的百分比。
(3)不精密度符合要求后，作多项式回归分析。
多项式回归分析可以借助多种商业统计软件完成。
例如用SPSS勺话，选“分析” T“回归分析” T“曲线估计” T“因变量”、“自变量”、“模型(线性、平方、三次方)得三个方程。
线性范围及检测限
欢迎阅读线性与范围 (linearity and range)分析方法的线性是在给定范围内获取与样品中供试物浓度成正比的试验结果的能力。
换句话说，就是供试物浓度的变化与试验结果(或测得的响应信号)成线性关系。
所谓线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的试验结果，而且成线性的供试物浓度的变化范围，其最大量与最小量之间的间隔，可用mg ／L ~ mg ／L 、 ug ／ml ~ ug ／ml 等表示。
线性与范围的确定可用作图法(响应值Y ／浓度X)或计算回归方程(Y ＝a+bX)来研究建立。
，每个LOQ)；线性为是S/N=3度％。
S/N=10（假设X 倍）检出限的限度值）的比值，因此只有在满足最低检出浓度和最低检出量的同时才能够做出检出限。
它主要适用于杂质测定中的杂质限度检查项目的方法验证，即你通过这个验证证明你的方法能够检出足够低的杂质，就是说，如果你作出的检测限（最低检测浓度）比限度好高，那是万万不行的。
检测限不但要低于限度，最好远远小于杂质限度。
根据分析方法是采用非仪器分析还是仪器分析可用几种方法来确定检测限度，除了下面所列的方法外其他的方法也可能被接受。
6．1 根据直观评价直观评价可以用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法。
检测限度的测【通6．23：1或6．3S：6．3．1 根据空白的标准差通过几份空白样品的分析，然后计算其响应值的标准差，测出分析背景响应值的大小。
6．3．2 根据校正曲线通过对含有DL范围内被分析物样品的分析来研究其标准曲线，回归线的剩余标难差或回归线的y轴截距标准差都可作为标准差。
6．4 申报数据必须同时提供检测限度和测定检测限度的方法。
如果见是根据直观评估或信噪比得来的，应提供相关的一些色谱图。
如通过计算或外推法得到检测限度的估算值，可对一系列接近或等于检测限度样品的逐个分析来论证这一估算值。
【上述资料引致ICHQ2B，建议诸位阅读英文原文，恐翻译不到位引起歧义】后空白(S／N＝2或LOD LOD。
线性范围
八、方法学评价
测定上限应使95%的临床标本不经稀释即可 进行测定，其具体数值是通过线性范围试验加以 确定。当测定值高于测定上限时，应减少标本用 量或将标本稀释后重新测定，而对于测定下限， 实测多少就报告多少。如果未经验证，随意延长 测定下限的做法是不正确的。
剂量反应曲线实验可以确定某种测定方法的 线性范围，可作为制作实际工作中使用的校准曲 线的依据。
实验八：线性范围实验
一、实验目的
1．掌握线性范围实验的原理和方法。 2．掌握线性范围数据的处理。
二、实验原理
配制系列不同浓度的葡萄糖标准溶液，用 GOD-POD法测定各标准管的吸光度，以浓度为 横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制出剂量反应曲 线(dose-response curve)，确定方法线性范围。
2．对数据进行线性回归分析，得直线回归方程Y=bX+a；作相
关分析，可求出相关系数(r)。
a和b的计算公式分别为：
a Y b X Y bX
n
n
XY பைடு நூலகம்X )(Y ) / n b
X 2 (X ) 2 / n
如果两方法表示的某分析物量具相同的计量单位时，理
想状态的回归式应为y＝x，即b=1，a=0。b≠1，a≠0分别
表示两方法间的测定标本时的比列误差和恒定误差。 相关性分析：
相关系数r=
XY (X )(Y ) / n
[X 2 (X )2 / n][Y 2 (Y )2 / n]
七、注意事项
1．测定方法的线性范围要求能覆盖正常参考范围和 常见疾病的医学决定水平，以减少标本稀释重测 的机会。
2．一般在试剂更换或者比色计检修后，需重新制作 校准曲线。
3．标本的加量必须十分准确，应用准确度很高的微 量进样器加样。
检验科常见检测指标详解
检验科常见检测指标详解为了确保科学实验的准确性和可靠性，检验科中常用于评估样本特性的指标以及分析结果的相关参数十分重要。
本文旨在详细解析检验科常见的检测指标，以帮助读者更好地理解和应用这些参数。
1. 可靠性指标在科学实验中，可靠性是评估实验结果稳定性和重复性的指标之一。
以下是常用的可靠性指标：1.1 重复性（Reproducibility）：重复性是指在相同条件下，同一实验在不同时间或不同操作者进行重复所得到的结果的一致性。
通过多次重复实验来评估重复性。
1.2 精确度（Precision）：精确度是指多次实验所得结果之间的一致性。
常用的评估指标包括标准差和变异系数。
1.3 准确度（Accuracy）：准确度是评估实验结果与真实值之间的接近程度。
常用的评估指标包括偏差和误差。
2. 效能指标效能指标用于评估检验科实验方法的性能和可行性，以及测定结果的敏感性和特异性。
以下是常用的效能指标：2.1 灵敏度（Sensitivity）：灵敏度是指在真实阳性样本中正确识别阳性结果的能力。
灵敏度越高，说明检测方法对真实阳性样本的检出能力越强。
2.2 特异性（Specificity）：特异性是指在真实阴性样本中正确识别阴性结果的能力。
特异性越高，说明检测方法对真实阴性样本的排除能力越强。
2.3 阳性预测值（Positive predictive value）：阳性预测值是指在得到阳性结果时，该结果是真实阳性的可能性。
阳性预测值越高，说明阳性结果的可信度越高。
2.4 阴性预测值（Negative predictive value）：阴性预测值是指在得到阴性结果时，该结果是真实阴性的可能性。
阴性预测值越高，说明阴性结果的可信度越高。
3. 可行性指标可行性指标用于评估实验方法的可操作性和可行性。
以下是常用的可行性指标：3.1 稳定性（Stability）：稳定性是指实验方法在不同条件下测定结果的一致性。
通过在不同温度、湿度等条件下进行实验来评估稳定性。
全自动生化分析仪基本名词
一．基本名词1.单试剂：只有R1试剂，如：Ca，Mg，ALB，TP，当样本加入到试剂中时，即刻开始反应。
2.双试剂：有Ｒ1,R2配套两种试剂，样本首先加入到试剂R１中参与反应，育温后再加入试剂R2，进一步反应来达到检测的目的。
通常Ｒ1与样本反应，达到去除干扰或为加入Ｒ2后的进一步反应做准备的目的。
3加样模式：不同的仪器有不同的加样方式：3.1双试剂加样模式：R1加入后，加入样本（S），开始为下一步加入R2后的反应作准备，再经一定的时间后，加入R2，开始进行检测所需要的反应。
3.2单试剂加样模式：先加入R1，再加入R2，经过一定的时间再加入样本，再进行检测反应。
4．单试剂与双试剂的界限：在某些双试剂，由于各试剂成份及所参与反应的目的的不同，有的双试剂可以事先混成单试剂，但有的双试剂只能用双试剂通道来做。
如：4.1 R1用来去干扰的目的：R1试剂用来清除血清中的干扰物，防止R2与血清中的干扰物反应。
如化学氧化法的TBIL，DBIL，CR（酶），LDL-C等。
4.2 单试剂不稳定：R1,R2中的成份相互影响发生反应,使试剂中色源提前反应,引起起始吸光度及吸光度变化率的改变等。
（CHE,GGT）4.3仪器自身特点：同时试剂的应用也要考虑到检测仪器的特点，因为有的仪器（如半自动，手工）它没有双试剂的加样模式，那它只能用单试剂来做，一般双试剂加样模式的仪器也可以单试剂加样来做，但是单试剂加样的仪器就不一定能做那些只能双试剂模式的检测。
5.标准品：实际上是一个或几个已知浓度的样本，它在检测中作为一个或几个参照物，使以后的所有的检测都与之比校，以此来得到其它样本的浓度。
6.标准品的定义：6.1国际标准品由WHO或相应组织标定的，用肯定的、公认的、准确的物理或化学方法测定的定值材料。
6.2国际生物学活性标准品根据生物学反应由WHO或相应组织标定的国际活性单位的材料。
6.3参考标准血清国家标准化组织根据国际标准化生产的法定材料。
标准曲线的配置过程及衡量标准
一、概述标准曲线是实验室中常见的一种质量控制工具，它用于确定分析仪器的准确性和精确度。
标准曲线的配置过程非常重要，它涉及到实验前的准备工作、数据处理和结果分析等多个步骤。
本文将介绍标准曲线的配置过程及衡量标准，帮助读者更好地理解和应用标准曲线。
二、标准曲线的配置过程1. 实验前的准备工作在配置标准曲线之前，首先需要准备好实验所需的试剂、仪器设备和标准品等。
保证实验室环境的清洁和安静也是配置标准曲线的前提条件。
2. 标准品的制备标准曲线的配置需要用到一系列浓度已知的标准品，因此在实验中需要准备好这些标准品。
制备标准品需要严格按照标准方法进行，避免出现浓度偏差或杂质污染。
3. 仪器校准在进行配置标准曲线之前，需要对分析仪器进行校准。
校准过程主要包括零点校准和斜率校准，确保仪器测量结果的准确性和精确度。
4. 实验操作在配置标准曲线时，需要按照一定的操作流程和条件进行实验。
确保实验过程中每一步操作都符合标准要求，避免产生误差。
5. 数据处理获得实验数据后，需要对数据进行处理。
通常采用线性回归分析方法，根据浓度和响应值的关系确定标准曲线的斜率和截距。
6. 结果分析对配置好的标准曲线进行结果分析。
检查标准曲线的相关系数、线性范围和斜率截距是否符合要求，以确保标准曲线的质量。
三、衡量标准1. 标准曲线的线性范围标准曲线的线性范围是指在一定浓度范围内，仪器的测量结果与浓度的线性关系。
通常情况下，线性范围越宽，标准曲线的适用范围就越广。
2. 标准曲线的相关系数相关系数是衡量标准曲线拟合程度的指标，它描述了实验数据与线性回归模型之间的关联程度。
一般来说，相关系数越接近1，说明标准曲线的拟合程度越好。
3. 标准曲线的斜率和截距标准曲线的斜率和截距反映了浓度和测量值之间的定量关系。
合理的斜率和截距有助于提高标准曲线的准确性和稳定性。
4. 标准曲线的重现性和精密度标准曲线的重现性和精密度是评价标准曲线质量的重要指标，它反映了实验结果的可重复性和准确性。
线性范围评估的指南
1.463 1.481 1.492 1.496
线性范围的评估及数据处理方法
对回归方程进行线性检验
多元回归方程中以bi表示的系数为回归系数。 在二级与三级方程中，b2与b3为非线性系数。 对回归方程进行线性检验就是对每个非线性系数作t检
验，判断回归系数与零是否有显著性差异。 b0与b1不反映非线性，故不需对其进行检验
建立一种定量测定方法的线性范围时，需在预期测定 范围内选择7-11个浓度水平。如将预期测定范围加宽至 130%，在此范围内选择更多的浓度水平，然后依据实 验结果逐渐减少数据点直至表现出线性关系，可发现 最宽的线性范围。
线性范围的评估及数据处理方法
实验样本的基本要求
对标称线性参数进行验证时，需在已知线性范 围内选择5-7个浓度水平。
临床标准的线性与非线性检验
一般设定ADL小于5%为临床允许误差，即取PctBnd为 5%，通过查表（附录A和B）得到ADL临界值。
如ADL小于临界值，可认为多项式具有临床可接受的 非线性，为二阶线性。如ADL大于临界值，则为临床 不可接受的非线性
线性范围的评估及数据处理方法
临床标准的线
性与非线性检 验
线性范围的评估及数据处理方法
剔除离群值
离群值可由散点图初步判断，标准中建议采用格拉布 斯（GRUBBS）法进行离群值检验。检验步骤如下:
每组数据中有4个测定结果，将4个测定值按大小顺序 排列,最大值记为max,最小值记为 min;
计算均值和标准差S，根据可疑值max或min分别按下 式计算统计量t: t1=(max-均值 )/S，t2=(min-均值)/S
线性范围的评估及数据处理方法
结果报告
线性范围报告的具体格式不要求，但至少应包括以下 几方面：
关于最低检测限与线性范围试验的讨论
回归作统计分析方法。以总蛋白浓度预 期值为横坐标，测定值为纵坐标，在坐
标纸上作图，若所有实验点在坐标纸上
呈明显直线趋势，
建立回归方程y=a+bx，要求a接近于0，
b在0.97~1.03之间，若满足此条件，则可
直接判断该测定方法是否在所要求的线 性范围。
若a较大，b>1.03或<0.97则认为在高浓
临床可报告范围（CRR）：指定量
检测项目向临床能报告的检测范围，患
者样本可经稀释、浓缩或其它预处理。
（一）原理 线性范围是指系统最终输出值（浓度
或活性）与被分析物浓度或活性成比例
的范围。线性范围的测定即测定浓度曲
线接近直线的程度，它反映整个系统的
输出特征。
本试验使用不同浓度的总蛋白标准溶
液，用双缩脲试剂测定各自的浓度，以 标准液预期浓度为横坐标，测得浓度为 纵坐标，在坐标纸上作图，即可绘制出 一条直线，即计量反应曲线。
量。
功能灵敏度（FS）：以日间重复CV
为20%时对应检测限样品具有的平均浓 度确定为检测系统或方法可定量报告的 分析物的最低浓度或其它量值 。
（一）原理
线性范围试验
线性范围试验实验5 线性范围试验在光谱分析中，测定该实验条件下被测物质符合Beer定律的浓度范围(线性范围)，是评价分析⽅法准确性和实⽤性的重要⼯作。
通过线性范围测定，选择线性段作为该⽅法的分析范围，直线上任何⼀点的待测物浓度与吸光度的⽐值均为⼀常数，其斜率tanθ都相等，即tanθ=，此处的值称为校正常数，可⽤于计算测定结果。
这样，可使具有临床意义的标本测定值都限定在此范围内，以保证测定结果的可靠。
线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关系，出现正偏离或负偏离的现象。
这种偏离，按Beer定律现象来⾃两个⽅⾯：⼀是溶液本⾝不符合Beer定律，这种现象叫做化学偏离；⼆是仪器本⾝各种因素的影响，使吸光度与浓度之间不成线性，这种现象叫仪器偏离，如杂光、有限带宽、检测器噪声、环境条件的变化、波长的变动、⽐⾊杯的误差、辐射光的⾮平⾏性、检测器本⾝的⾮线性等。
因此，在做⽅法学线性范围评价实验时，良好的仪器性能是必须的。
【原理】使⽤不同浓度的葡萄糖标准溶液，⽤GOD-POD法试剂测定各⾃的吸光度，以标准浓度为横坐标，以其对应的吸光度为纵坐标，在⽅格纸上作图，即可绘制出⼀条直线，即剂量反应曲线(dose-respones curve)。
⼀般测定⽅法的线性范围要求能覆盖临床上的参考值和常见疾病的医学决定⽔平，以减少标本稀释重测的机会。
【试剂】1．40mmol/L葡萄糖标准溶液称取已⼲燥恒重的⽆⽔葡萄糖0.7208g，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容⾄100ml。
2h后⽅可应⽤。
2．其它试剂同GOD-POD法试剂。
【操作步骤】按表2-1操作表2-1⾎糖与GOD-POD试剂剂量反应曲线的制作加⼊物标准管0 1 2 3 4 5葡萄糖标准液(µl) 0 2 4 6 8 10 蒸馏⽔(µl) 10 8 6 4 2 0 GOD-POD试剂(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5下同GOD-POD法，读取各管吸光度。
检测器的性能指标
检测器的性能指标
灵敏度高、检出限低、线性范围宽、稳定性好。
1、灵敏度
当一定浓度或一定质量的组分进入检测器，产生一定的响应信号R；以进样量C （单位：mg·cm-3或g·S-1）对响应信号（R）作图得到一条通过原点的直线。
直线的斜率就是检测器的灵敏度（S）。
2、检出限（敏感度）
检测器恰能产生二倍于噪声信号时的单位时间引入检测器的样品量或单位体积载气中需含的样品量。
无论那种检测器，检出限都与灵敏度成反比，与噪声成正比。
检出限不仅决定于灵敏度，而且受限于噪声，所以它是衡量检测器性能好坏的综合指标。
3、最小检测量
指产生二倍噪声峰高时，色谱体系所需的进样量。
最小检测量与检出限是不同的两个概念；检出限只用来衡量检测器的性能；而最小检测量不仅与检测器的性能有关，还与色谱柱效及操作条件有关。
4、线性范围
在检测器呈线性时最大和最小进样量之比，或叫最大允许进样量与最小检测量之比。
5、响应时间
进入检测器的某一组分的信号达到其值得63%的所需时间。
检测器的死体积小、电路系统的滞后现象小，响应速度就快。
一般小于1S。
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八、方法学评价
1.测定上限 测定上限应使95%的临床标本不经稀释即可进行 测定，具体数据值必须通过线性范围实验加以确定，因为检 测上限是不可超越的界限，当测定值高于上限临界值时，应 减少标本用量或将标本稀释后重新测定。 2.测定下限 测定下限实测多少就报多少，如未经验证，随意 延长测定下限的做法是不正确的。 3.对测定范围线性的评价通过制作剂量反应曲线的实验可以确 定某种测定方法的吸光度-浓度线性范围，就能为制作实际工 作中使用的校正曲线打下坚实的基础。随后要对线性拟合的 良好的程度和实用性进行实际检查和评价。 4. 使用高浓度和低浓度临床标本若干份进行实际的线性检查， 理想的情况是该方法的分析范围的最高浓度上限应能使95% 的临床标本不经稀释均能得到正确的测定结果。
_
0
1500
1500
15001500源自150015001. 37℃水浴15min，空白管调“0”，505nm比色，0.5cm比 色杯，各浓度测4次，分两个时间段测。第一时间段从低浓 度到高浓度，每管测2次。第二时间段从高浓度到低浓度， 每管测2次，各浓度可得4个吸光度值,最后取平均值。 2.以葡萄糖浓度预期值为横坐标，测定值为纵坐标，将所有 实验结果点在图上，排除离群点。 3.对数据可进行回归分析，得到直线回归方程y=a+bx作相关 分析。
GOD-POD法原理：
葡萄糖氧化酶（GOD） ↓ 葡萄糖+O2——葡萄糖酸+H2O2 过氧化物酶（POD） ↓ H2O2+酚+4-氨基安替比林——醌类+H2O+O2 （色原性氧受体）（红色）
三、器材
微量移液器
三用水浴箱
722型可见光分光光度计
四、试剂
1．葡萄糖标准液（40mmol/L） 2. DDW、酶酚试剂
五、操作步骤
1．按下表设计不同浓度的标准管并进行分析
空白管
加入物 （μl） DDW 5mmol/ 糖标 40mmol /糖标 酶酚试 剂 0 10 1(8) 8 _ 2
标准管
2(16) 6 _ 4 1500 3(24) 4 _ 6 4(32) 2 _ 8 5(40) 0 _ 10
质控管
S _ 10 _
4．试剂配制中组分投料不足，试剂配制后组分不稳 定，或者因运输、贮存不当等导致试剂组分的含量 发生改变等因素均可造成线性范围变窄。当酶量相 对不足时，用纯标准液所作的线性范围可以达到指 定的高限，但在测定同样浓度高值样品时，结果却 出现明显偏低，这往往是样品中的介质效应引起的。
5.线性范围检查包括仪器线性和测定方法线性两个方 面。线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关 系，出现正偏离和负偏离的现象。这种偏离来自两个 方面，一是化学偏离，如有色物质的电离、水解等原 因。二是仪器偏离，如杂光、检测器噪声、环境条件 的变化、波长的变动、比色杯的误差等。因此，在做 方法学线性范围评价实验时，良好的仪器性能是必须 的。
实验八：线性范围实验
一、实验目的
1.掌握线性范围实验的原理、用途。
2.熟悉线性范围实验变窄的原因及具体操作过程。 3.了解影响线性的因素。
二、实验原理
线性范围是指系统最终输出值（浓度或活性） 与被分析物浓度或活性成比例的范围。线性范围 的测定即测定浓度曲线接近直线的程度，它反映 整个系统的输出特性。 配制系列不同浓度的葡萄糖标准溶液，用 GOD-POD法测定各标准管的吸光度，以标准液 预期浓度为横坐标，以测得的浓度为纵坐标，绘 制出剂量反应曲线(dose-response curve)，确定 方法线性范围。
七、注意事项
1.葡萄糖标准液的加量必须十分准确，应用准确度 很高的微量进样器加样。 2.本方法的线性可选22.24mmol/L，造成线性变窄 的原因为试剂配制中组分材料不足；试剂配制后 组分稳定性差，运输、贮存不当等导致试剂组分 的含量发生变化。 3.有的测定特别是酶法测定，当酶量相当不足时， 用标准液所作的线性范围可以达到指定的高限， 但在测定同样高值样品时，结果却明显偏低，这 往往是样品中的介质效应引起的，值得注意。