SYBR GreenⅠ 核酸染料
DNAGREEN核酸染料使用说明
DNAGREEN核酸染料使用说明货号：G7140规格：0.5ml(10000×)保存：常温运输，4℃保存，有效期一年。
注意：DNAGREEN核酸染料属于微量核酸检测试剂，使用时请按照说明书操作。
产品简介：目前最常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I（属于花氰类染料）虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高，但由于其化学稳定性差；此外，SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位，很容易使DNA条带模糊和扭曲，电泳清晰度和分辨率下降。
所以在实际应用中依然不能有效替代EB。
本产品是同时具有EB稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料，其特点如下：1.低毒。
其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品，有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2.灵敏。
检测灵敏度跟EB相当，能满足常规核酸电泳实验要求。
3.稳定。
对光、水和热的稳定性跟EB相当，可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
4.无分子间位移现象。
不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。
5.使用方法多样。
既可以加入熔化的胶中，也可以电泳后染色，还可用于PAGE。
6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液（如SuperBuffer-2、TBE、TAE）兼容，但在SuperBuffer-2和TBE中背景最低。
7.观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源，可以使用现成的观察EB的300nm UV。
8.可用于RNA染色(也呈绿色)。
9.DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察（需要将胶放在黑色背景下）。
由于避免了UV对DNA的伤害，尤其适用于胶回收实验。
使用方法:电泳中染色：本方法是将DNAGREEN直接加入溶化的凝胶中使用，只适用于琼脂糖凝胶电泳，不适用于PAGE。
1.将DNAGREEN直接加入到融化的琼脂糖凝胶中，每100mL凝胶加3-10uL DNAGREEN，混合均匀后倒胶。
琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料（如EB和SYBR Green I，否则会相互干扰）。
SYBRGreen I 使用介绍
SYBR Green I使用介绍SYBR Green I核酸染料简介SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单，无须脱色或冲洗；至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低，可适用于多种电泳分析。
SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。
SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用；另外，SYBR Green I 与EB相比，诱变能力大大降低。
SYBR Green I 核酸染料特点● 灵敏高：至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
● 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。
● 操作简单：无须脱色或冲洗。
● 适用范围广：可适用于多种电泳分析。
● 使用方便：不影响其它修饰酶作用。
● 经济：价格比银染便宜。
电泳用SYBR Green I 使用方法简介一、SYBR Green I预染色方法1、该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
2、工作液的配制：用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR Green Ⅰ工作液。
SYBR GreenⅠ工作液可以置2-8℃冷藏一个月以上。
3、制胶：按常规方法制胶，不含任何染料。
4、样品染色：向分析样品中加入SYBR GreenⅠ工作液和载样缓冲液，室温放置10分钟，使SYBR GreenⅠ与样品中DNA充分结合。
SYBR GreenⅠ工作液加入量为总上样量的1/10。
5、DNA Marker染色：将5μL DNA Marker和5μL DNA Marker稀释液和1μLSYBR Green Ⅰ工作液混匀，室温放置5分钟，使SYBR GreenⅠ与DNA充分结合。
EB的替代物
溴化乙(ethidium bromide )：溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。
溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。
缺点：溴化乙锭可以嵌入碱基分子中,导致错配。
许多人认为溴化乙锭是强诱变剂,具有高致癌性。
EB的替代物：GelRed和GelGreen、SYBR Green Ⅰ、GoldView、GelRed和GelGreen：是一种新型的聚次甲基染料，不能穿透细胞膜，但可以和游离的DNA 高效结合，是一种高灵敏的核酸染料，与EB染料灵敏度相当。
不具有致癌毒性，是一种安全的核酸染料。
废弃的Gill green在自然环境下会分解，因此无需特殊处理。
优点：1.无毒性：具有独特的油性和大分子量特点因此不能穿透细胞膜进入细胞内，诱变性远远小于EB。
2.灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色。
3.稳定性高:室温、酸碱溶液极其稳定，耐光强，不挥发。
4.信噪比高：样品荧光信号强，背景低。
5.用法简单：可制胶中加，也可电泳后染色。
缺点：价格昂贵。
SYBR GreenⅠ：是高敏度的DNA荧光染料，在紫外照射透视下，与双链DNA接合的SYBR GreenⅠ呈现绿色荧光，单链DNA则呈橘黄色。
适用于各种电泳分析。
优点:1.高灵敏度：与双链DNA的亲和力非常高，因此可用作电泳前染色，至少可检出20pgDNA，高于EB25~100倍。
2.信噪比高：样品荧光信号强，背景低。
3.适用范围广：适用于多种凝胶电泳方法，琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳。
4.对分子生物学中常用的酶（Taq酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶）没有抑制作用。
与EB相比，诱变能力大大降低。
缺点：不稳定，易降解。
GoldView：是一种可以替代EB的新型核酸染料，采用琼脂糖电检测DNA时，其与核酸结合后能产生很强的荧光信号，其灵敏度与EB相当，使用方法与之完全相同。
LAMP染料选择
为满足现场快速检测需求，本研究比较了在反应体系中加入不同核酸染料对LAMP反应的影响，以为建立基于颜色变化判定试验结果的现场LAMP检测方法所参考。
对于反应前加入LAMP反应的四种核酸染料Calcein（钙黄绿素）, SYBR GreenⅠ, Eva Green和HNB, Calcein对反应速度的影响最小，是适合反应前加入环介导等温扩增反应以观察颜色变化的最佳颜色指示剂。
HNB的抑制作用最大且容易导致反应稳定性差，不建议用作LAMP反应的颜色指示剂。
而SYBR Green Ⅰ和Eva Green在反应前加入，浓度低时颜色变化不明显，浓度大了会抑制反应速度，因此也不建议用作LAMP反应前加入的颜色指示剂。
生工的GREENDYE染料就是SYBR Green I，10000×的阳性扩增反应中会产生大量的类似花椰菜结构的产物和白色焦磷酸续沉淀，扩增产物的检测方法多样，可用凝胶电泳检测、直接用肉眼检测或在反应体系中加人染料，根据颜色的变化进行检测，还可以利用浊度仪，根据扩增产物混浊度的不同对原始核酸分子进行实时定量分析。
1．LAMP引物的设计：LAMP引物的设计主要是针对靶基因的六个不同的区域，基于靶基因3’端的F3c、F2c 和Flc区以及5’端的Bl、B2和B3区等6个不同的位点设计4种引物。
FIP(Forward Inner Primer)：上游内部引物，由F2区和F1C区域组成，F2区与靶基因3’端的F2c区域互补，F1C区与靶基因5’端的Flc区域序列相同。
F3引物：上游外部引物(Forward Outer Primer)，由F3区组成，并与靶基因的F3c区域互补。
BIP引物：下游内部引物(Backward Inner Primer )，由B1C和B2区域组成，B2区与靶基因3’端的B2c区域互补，B1C域与靶基因5’端的Blc区域序列相同。
B3引物：下游外部引物(Backward Outer Primer )，由B3区域组成，和靶基因的B3c区域互补。
猪圆环病毒1型、2型、3型SYBR_GreenⅠ实时荧光定量PCR鉴别方法的建立及应用
·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘 要：猪圆环病毒（PCV ）包括猪圆环病毒1型（PCV1）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪圆环病毒3型（PCV3）。
近些年来，PCV1、PCV2、PCV3基因型之间存在共感染，因此建立一种快捷、特异、敏感的PCV1、PCV2、PCV3的SYBR Green Ι实时荧光定量PCR 鉴别检测方法显得尤为必要。
本试验通过特异性引物筛选，各项反应条件优化，建立了实时荧光定量PCR 鉴别方法。
结果表明：PCV1、PCV2、PCV3检测下限分别为40.3、25.2、22.4 copies/μL 。
与猪瘟病毒（CSFV ）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV ）、猪伪狂犬病病毒（PRV ）、猪细小病毒（PPV ）均无交叉反应。
批内及批间变异系数均小于1%。
对98份PCV 疑似阳性病料检测结果表明，PCV1、PCV2、PCV3感染率分别为10.2%、65.3%、53.1%，共感染率为7.1%。
该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性，为PCV1、PCV2、PCV3的早期检测、定量检测及后期研究提供了技术手段。
关键词：猪圆环病毒；特异性；敏感性；SYBR Green Ι实时荧光定量PCR 中图分类号：S852.65文献标志码：A文章编号：1674-6422（2023）06-0085-07D evelopment and Application of a SYBR Green Real-Time Quantitative PCR Method for Differentiation of Porcine Circoviruses 1, 2 and 3收稿日期：2021-05-24基金项目：山东省重大科技创新工程项目（2023CXGC010705）；山东省现代农业产业技术体系项目（SDAIT-08-06）；山东省自然基金（ZR2022MC011）；济南市“新高校20条”资助项目（202228112）；山东省科技型中小企业创新能力提升工程（2023TSGC0734）；山东省农业科学院创新工程（CXGC2018E10, CXGC2023G03, CXGC2023E02, CXGC2023A21）作者简介：田瑶，女，硕士，主要从事动物病毒学与免疫学研究通信作者：李俊，E-mail：***************；韩先杰，E-mail：**********************猪圆环病毒1型、2型、3型 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR 鉴别方法的建立及应用田 瑶1,2，时建立2，彭 喆2，李 琛2，徐绍建2，吴晓燕2,3，李佳昕1,2，杨 莹2,3，王 硕2，刘 畅2，韩 红2，李 俊1,2,3，韩先杰1（1.青岛农业大学动物医学院，青岛266109；2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所，济南250100；3.山东师范大学生命科学院，济南250100）2023,31(6):85-93Abstract: Porcine circovirus (PCV) includes three genotypes: Porcine circovirus 1 (PCV1), Porcine circovirus 2 (PCV2) and Porcine circovirus 3 (PCV3). In recent years, there have been co-infections among these 3 genotypes. Therefore, it is particularly necessary to develop a fast, specifi c and sensitive SYBR Green I real-time quantitative PCR method for differentiation of PCV1, PCV2 and PCV3. In this experiment, a real-time fl uorescent quantitative PCR method was developed by using specifi c primers and optimizing various reaction conditions. The results showed that the lower limits of detection were 40.3 copies/μL for PCV1, 25.2 copies/μL for PCV2 andTIAN Yao 1,2, SHI Jianli 2, PENG Zhe 2, LI Chen 2, XU Shaojian 2, WU Xiaoyan 2,3, LI Jiaxin 1,2,YANG Ying 2,3, WANG Shuo 2, LIU Chang 2, HAN Hong 2, LI Jun 1,2,3, HAN Xianjie 1(1. College of Veterinary Medicine, Qingdao Agricultural University, Qingdao 266109, China; 2. Institute of Animal Science and Veterinary Medicine , Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100, China; 3. College of Life Sciences, Shandong Normal University,Jinan 250100, China)· 86 ·中国动物传染病学报2023年12月猪圆环病毒（Porcine circovirus, PCV）是圆环病毒科圆环病毒属的一种无囊膜环状单链 DNA 病毒，也是迄今为止发现的具有自主复制能力的最小的动物病毒[1-2]。
SYBR Green I
SYBR Green I概念SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。
在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。
因此，SYBR GSYBR Green Ireen I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR 体系存在的双链DNA数量。
SYBR Green I 的最大吸收波长约为497nm，发射波长最大约为520nm。
SYBR Green I核酸染料(电泳用)SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。
至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。
SYBR Green I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。
可适用于多种电泳分析。
SYBR Green I 适合于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶，聚丙烯酰胺凝胶电泳，脉冲电场凝胶电泳，和毛细管电泳等。
SYBR Green I 与双链DNA的亲和力非常高，因此可以用做电泳前染色，对分子生物学中常用的酶（如：Taq 酶、逆转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。
另外，SYBR Green I 与EB相比，诱变能力大大降低。
SYBR Green I 核酸凝胶染液(SYBR Green Ndcleic Acid Gel Stains)是一种高敏感性的荧光染液，用于检测琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶中的双链DNA和寡核苷酸。
当染液与核酸结合后，SYBR Green I 核酸凝胶染液的荧光信号会明显增强，因此经SYBR GreenI 核酸凝胶染液染色的凝胶显示出非常好的性价比，没有背景荧光。
为获得最佳的结果，凝胶最好在跑胶后再进行染色。
SYBR GreenI 核酸凝胶染液用于低含量的PCR产物，凋亡研究及异源双链分析中少量DNA的检测较为理想。
常用的核酸染料有哪些
EB（溴化乙锭）：溴化乙锭是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂，为强致癌诱变剂，但价格便宜。
它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。
在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。
EB的这种特性使其成为一种核酸染料，常用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸染色。
溴化乙锭在紫外区302nm和366nm处有吸收峰，在紫外光的照射下，溴化乙锭可被激发出橙红色的荧光（590nm）。
结合有DNA的溴化乙锭复合物的荧光强度要比没有结合DNA的染料高出20-30倍，因此溴化乙锭可检测到少至10ng的DNA条带，非常灵敏。
Gel Green和Gel Red：GelRed 和 GelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定性于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。
其特点有：高灵敏度：GelRed 和 GelGreen 是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料之一；稳定性极好：可以使用微波炉加热，可以在室温下保存；更安全：艾姆斯氏试验结果表明，该染料的诱变性远小于溴化乙锭（EB）；广泛的适应性：适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色；染色过程简单：与EB一样，在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗；对 DNA 和 RNA 的迁移影响小：对核酸迁移的影响小于 SYBR Green 。
与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容：使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时，GelRed 可以完美的替代EB；使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时，GelGreen 足以替代任意一种 SYB染料。
但该染料会使小片段DNA迁移慢一些（与EB相比).Gold View I型/II型：Goldview对于大片段DNA的染色效果良好，但是在对于500bp以下的片段效果不是很好，还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般5-10min条带就会消失。
sybrgreen荧光染料原理
sybrgreen荧光染料原理SybrGreen是一种常用于荧光实验中的染料，其原理是通过与DNA结合来发射荧光信号。
SybrGreen染料属于靶向DNA结合的染料，能够与DNA的双链结构结合形成复合物，从而发射荧光信号。
SybrGreen的结构是一种孔雀石绿类似物，含有孔雀石绿的三苯基甲烷和二甲基氨基吡啶结构。
其对DNA结合的特异性通过与DNA之间的静电相互作用、氢键和疏水作用来实现。
SybrGreen与DNA结合后，其荧光发射强度会明显增加。
SybrGreen在实验中的应用非常广泛，可以用于许多DNA相关的实验，如实时荧光定量PCR、凝胶电泳和脱氧核糖核酸（DNA）染色等。
在实时荧光定量PCR中，SybrGreen用于检测PCR反应体系中的DNA扩增产物。
当PCR反应体系中存在DNA扩增产物时，SybrGreen与DNA结合形成复合物，通过荧光检测器检测到的荧光信号强度与扩增产物的量呈正相关。
SybrGreen的荧光信号可以通过PCR反应的循环数来定量分析扩增产物的初始模板数量。
通过绘制扩增曲线，可以根据荧光信号的变化来确定PCR反应的效果，并进行相对或绝对定量分析。
SybrGreen的使用非常方便，它不需要特定的标记或探针，只需在PCR反应体系中加入一定浓度的SybrGreen染料即可。
但是，需要注意的是，由于SybrGreen是非特异性染料，它可以与任何双链DNA结合，包括扩增产物以外的DNA，因此需要进行后续的熔解曲线分析来确定扩增产物的特异性。
此外，还需要注意的是，SybrGreen的荧光信号可能会受到PCR反应体系中其他物质的干扰，如副产物、背景荧光和PCR反应体系中的杂质等。
因此，在使用SybrGreen进行实验时，需要进行相应的优化实验来消除这些干扰因素。
总之，SybrGreen荧光染料的原理是通过与DNA结合来发射荧光信号，其广泛应用于实时荧光定量PCR等DNA相关的实验中。
sybr green荧光定量pcr原理
sybr green荧光定量pcr原理
Sybr Green I的实际名称是二(4-羟基苯基)-6(4-甲氧基苯基)-三甲基吡啶三乙酸铵，是由美国绿色流动技术(Invitrogen)推出的一种新型定量荧光染料。
荧光染料可以与双链DNA或RNA特异性结合，在发光光度受到激活基因上的复制影响时，就可以快速、特异性
地检测到基因表达水平及其变化。
说白了，Sybr Green I荧光染料可以反映出基因特异度复制数、拷贝数及表达量。
由于Sybr Green I的荧光发射集中在500nm附近，因此把它用作qPCR的检测染料是
一个不错的选择。
另外，它的特性还表明它可以作为双链DNA特异性结合的染料，包括基
因检测、筛选特异性cDNA文库等。
Sybr Green I的定量检测原理是：在Sybr Green I染料的体系中，双链DNA和Sybr Green I结合之后，会使染料发出一种特殊的荧光，当基因发生复制时，双链DNA会越来
越多，Sybr Green I染料中结合的双链DNA会越来越多，随之形成新的染料-DNA复合物，同时使荧光发射强度增加。
最终，通过荧光定量仪记录荧光的强度，就可以获得目的基因
的复制状态和相应复制产物的量。
Sybr Green I也具有应用程度高、成本低、容易操作、体系稳定等优点。
Sybr Green I主要是作为定量PCR的检测染料，它能够检测和定量分析特定基因序列，比传统定量
PCR技术更灵敏、更精准，并可以作为SNP和MLPA扩增研究的PCR定量方法。
SYBR Green I核酸染料说明书
SYBR Green I核酸染料说明书货号：SR4110规格：50/100ul保存：-20℃避光保存，有效期至少一年。
产品说明：SYBR Green I染料是一种直接与双链DNA(dsDNA)结合的荧光染料，是荧光定量PCR最常用的DNA 结合染料。
在定量PCR中，SYBR Green I可与双链DNA（dsDNA）非特异性结合后发出荧光，则可以通过检测反应体系中的SYBR Green I荧光强度，达到检测PCR产物扩增量的目的。
游离状态下，SYBR Green I 发出微弱的荧光，一旦与dsDNA结合，其荧光增加1000倍，一个反应发出的全部荧光信号与出现的dsDNA 量成比例，且会随扩增产物的增加而增加；所以通过检测PCR反应液中的荧光信号强度，可以对目的基因进行准确定量，同时还可以测定扩增的目的DNA片段的熔解温度。
使用说明：使用时，配置PCR反应混合液，将10000×SYBR Green I浓缩液加入到PCR反应体系，使终浓度为0.5×（0.2×到1×之间调整）。
以上操作建议在冰上进行。
注：①反应液配制方法和PCR扩增条件请参照DNA聚合酶使用说明。
②Realtime PCR扩增仪的使用方法，请参照各仪器说明书。
注意事项：使用浓度对荧光PCR结果的影响SYBR Green I的使用浓度是保证荧光定量PCR实验成功非常关键的因素。
如果SYBR Green I的浓度过低会使荧光信号的变化降低，这就意味着低拷贝的样品可能无法检出；而在高浓度时，将会抑制PCR反应，降低PCR反应效率。
所以一般在使用SYBR Green I时应根据实际情况优化使用浓度，反应的终浓度为0.2×到1×之间。
镁离子浓度的影响提高镁离子浓度可以降低SYBR Green I对PCR反应的抑制作用。
我们建议在用SYBR Green I进行荧光PCR反应时，镁离子浓度比无SYBR Green I的普通PCR反应高出0.5～3mM。
SYBRGreenI荧光染料法解析
SYBRGreenI荧光染料法解析SYBR Green I⽅法是⽬前最为常见的荧光染料，其作⽤原理为：SYBR Green I是⼀种只与双链DNA⼩沟结合的染料，并不与单链DNA链结合，⽽且在游离状态不发出荧光，只有掺⼊DNA双链中才可以发光，因此，在PCR体系中，随着特异性PCR产物的指数扩增，每个循环的延伸阶段，染料掺⼊双链DNA中，其荧光信号强度与PCR产物的数量呈正相关（见图1-1）。
基于SYBR Green I染料法的荧光定量PCR的最⼤优点是通⽤性强，适⽤于所有的荧光定量PCR反应，同时，其缺点也在于其⾮特异性。
当PCR反应中有引物⼆聚体或者⾮特异性扩增时，该染料也可以和这些⾮特异性扩增产物结合，发出荧光，从⽽⼲扰对特异性产物的准确定量。
但是通过对PCR产物的熔解曲线进⾏分析，使⾮特异性扩增的问题得以解决，从⽽保证荧光信号的特异性。
Tm值得概念：Tm为DNA解链⼀半时的温度，不同的双链DNA由于其碱基组成不同，长度不同，因此Tm值也不同，据此可以判断是否获得同⼀PCR产物（见图1-2），当⾮特异峰Tm＞特异峰Tm时，⼀般为⾮特异扩增，当⾮特异峰Tm＜特异峰Tm，或者在72左右时，⼀般为引物⼆聚体，当然最后要依据琼脂糖电泳的结果进⾏验证。
在PCR过程中，SG染料只有在延伸阶段形成双链时，才通过和双链DNA的⼩沟结合，在激发情况下发出荧光，在变性和退⽕的单链状态时，不能发出荧光。
荧光量与产物中双链的量呈正相关。
结合有染料的双链DNA随温度的升⾼逐步解链后不再结合染料，因此，荧光强度（纵坐标）随温度（横坐标）的升⾼⽽减弱。
将温度与荧光强度的变化求导（-dI/dT），即得Tm值，对应图中的熔解曲线峰图。
左图表明产物的特异性，右图熔解曲线分析出现⾮特异峰，说明有引物⼆聚体或者⾮特异扩增，导致定量不准确。
sybr green荧光定量pcr原理
sybr green荧光定量pcr原理实时荧光定量聚合酶链反应（Real-TimeFluorescenceQuantitative-PolymeraseChainReaction，简称Real-Time PCR或RT-PCR）是一种新兴的现代技术，可以检测的某个特定的DNA序列存在的量，并可将该序列的样品分类为病毒感染的载体和非感染的载体。
它的特点是其高的灵敏度，快的反应速度以及能够以一个低的浓度进行检测。
SYBR Green，又名SYBR Green I，是一种荧光染料，正是因为它，才使得Real-Time PCR能够实现定量检测，取得了极大的成功。
二、SYBR Green荧光染料的原理SYBR Green是一种荧光染料，可以被用于Real-Time PCR技术，并能反映在PCR过程中特定DNA基序列扩增的变化。
SYBR Green染料是一种可被氨基酸体系吸收的荧光染料，可以在反应基质中吸收发出荧光。
最关键的是，当DNA聚合酶正式介入PCR循环时，它们可以将SYBR Green染料与溶液中的DNA结合，使染料开始发射荧光，从而实现特定DNA片段的检测。
三、SYBR Green荧光定量PCR的应用SYBR Green荧光定量PCR大大简化了实时PCR技术，使其在临床检测中发挥得更强大的作用。
最常见的应用是对细菌、病毒和真菌感染的研究，以及比较样本的分析，是检测细菌、病毒及真菌抗药性的有效方法。
此外，SYBR Green荧光定量PCR还可用于检测某些特殊的基因组和基因片段，例如检测BRCA1和BRCA2基因和HER2/neu基因的突变等。
四、总结从上文可以看出，SYBR Green荧光定量PCR在实时PCR技术中发挥了重要的作用。
SYBR Green荧光染料是这一技术的核心，它通过与DNA结合使荧光染料发出荧光，从而实现特定DNA片段的检测。
它大大简化了实时PCR技术，广泛应用于临床检测，如检测细菌、病毒及真菌感染以及疾病基因突变等。
核酸染料 rna电泳专用
核酸染料 rna电泳专用
核酸染料是一种用于可视化核酸的染料。
它们通常用于电泳实验，以帮助研究人员观察和分析核酸分子的大小、形状和数量。
RNA 电泳专用的核酸染料通常具有一些特殊的性质，使其更适合用于 RNA 电泳。
这些染料通常具有更高的灵敏度和更低的毒性，以确保它们不会对 RNA 分子造成损害。
此外，RNA 电泳专用的核酸染料通常具有更强的结合能力，以便更好地结合 RNA 分子并使其可视化。
在 RNA 电泳实验中，核酸染料通常用于染色 RNA 分子，以便在电泳过程中观察它们的迁移情况。
常用的 RNA 电泳专用核酸染料包括溴化乙锭（Ethidium Bromide）、SYBR Green I 和 SYBR Gold 等。
需要注意的是，核酸染料通常具有一定的毒性，因此在使用时需要遵循安全操作规程，并采取适当的防护措施。
此外，不同的核酸染料可能具有不同的特性和应用范围，因此在选择染料时需要根据具体的实验需求进行选择。
总之，核酸染料是一种非常有用的工具，它们可以帮助研究人员更好地观察和分析核酸分子，从而推动生命科学研究的进展。
齐岳SYBRGreenI：SYBR绿色IDNA染料GREEN-DNADYE核苷酸胶体染料，。。。
齐岳SYBRGreenI：SYBR绿⾊IDNA染料GREEN-DNADYE核苷酸胶体染料，。
SYBR Green I是⼀种结合于所有dsDNA双螺旋⼩沟区域的具有绿⾊激发波长的染料。
在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但⼀旦与双链DNA结合后，荧光⼤⼤增强。
因此，SYBR Green I的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出PCR体系存在的双链DNA数量。
SYBR Green I 的最⼤吸收波长约为497nm，发射波长最⼤约为520nm。
基本参数【中⽂名】SYBRGREENⅠ核苷酸胶体染料【中⽂同义词】SYBRGREEN1荧光染料/SYBRGREENⅠ核苷酸胶体染料/SDNA核苷酸染液/GREEN-DNADYE核苷酸胶体染料;SYBR绿⾊II核苷酸胶体染料;核苷酸胶体染料;SYBRGREEN1荧光染料;SYBR绿⾊IDNA染⾊液;GREEN-DNADYE核苷酸胶体染料;SDNA核苷酸染液;SYBRGREENⅠ核苷酸胶体染料【英⽂名】SYBR Green ISYBRGREENⅠ核苷酸胶体染料物理化学性质【分⼦式】C32H37N4S【分⼦量】509.727【结构式】【质量】509.273346【PSA】 44.35000【LogP】5.42750【特点】⾼灵敏：⾄少可检出20pg DNA，⾼于EB染⾊法25-100倍。
信噪⽐⾼：样品荧光信号强，背景信号低。
操作简单：⽆须脱⾊或冲洗。
适⽤范围⼴：可适⽤于多种电泳分析。
使⽤⽅便：不影响其它修饰酶作⽤。
经济：价格⽐银染便宜。
CDP Star160081-62-9CSDP142456-88-0（4-氯苯巯基）（10-甲基-9,10-⼆氢化吖啶亚甲基）磷酸⼆钠盐/APS-5193884-53-6吖啶盐(NSP-SA-NHS)?199293-83-9吖啶酯(NSP-DMAE-NHS)194357-64-7AMPPD系列SYBR Green I163795-75-3?PICO Green177571-06-13-[3-(胆酰胺丙基)⼆甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)?75621-03-32-丁酮酸钠盐；2-羰基丁酸钠盐；a-丁酮酸钠盐2013-26-5β-雌⼆醇-3-(β-D-葡萄糖苷酸)钠盐14982-12-8TOOS?82692-93-1N-(2-羟基-3-磺丙基)-3'5-⼆甲氧基苯胺钠盐?82692-88-4磷酸烯醇式丙酮酸单环⼰胺盐10526-80-43,3',5,5'-四甲基联苯胺盐酸盐64285-73-0TMB 溶液过氧化脲124-43-6过氧化脲稳定剂过氧化脲溶液5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-N-⼄酰神经氨酸钠盐160369-85-7 5-溴-4-氯-3-吲哚⼄酯3252-36-65-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷钠盐129541-41-9以上内容来⾃齐岳⼩编zzj 2021.7.1。
SYBR Green Ⅰ核酸染料(10000×)
SYBR GreenⅠ核酸染料（10000×）货号：SY1020规格：50/100ul保存：-20℃避光保存，有效期12个月。
产品简介：采用琼脂糖电泳或聚丙烯酰胺电泳方法检测双链DNA时，SYBR GreenⅠ是最灵敏的荧光染料，当其结合到核酸上时，会产生很强的荧光及高量子产额，DNA/SYBR GreenⅠ复合物的量子产额均为0.8。
由于与核酸结合后能产生很强的信号，背景极低，并且对核酸的亲和力高，因此SYBR染料可在低浓度条件下使用。
SYBR GreenⅠ的最低检出限：20pg DNA(254nm);60pg DNA(300nm紫外透射)；此外，SYBR GreenⅠ还可以用于检测寡核苷酸(1-2ng,300nm紫外透射)，比EB灵敏20至100倍。
SYBR GreenⅠ用于电泳检测DNA时，既可预染，也可电泳后再进行染色。
SYBR GreenⅠ用于琼脂糖电泳检测DNA后，可直接将DNA转移至膜上，进行后续核酸印迹杂交反应。
此外，SYBR GreenⅠ与DNA的结合对多种常用的限制性内切酶活性无抑制作用，可直接进行消化或连接。
使用说明：该产品使用方法同EB.点染法：用于琼脂糖凝胶电泳：取原液1ul加入TE缓冲液或灭菌双蒸水1ml，再加入6×DNA Loading buffer上样缓冲液1ml混匀，(此时溶液为1：2000稀释，即为工作液)电泳时取1-2ul工作液和5ul电泳样品混匀后静置5min后直接上样。
胶染法：常规配置琼脂糖凝胶100ml，加热至融化，待温度将至50-70℃（感觉不烫手）加入该原液10ul。
待胶凝固后即可电泳，电泳结束后即可在紫外照射下观察。
第1页共2页注意事项：1.SYBR GreenⅠ应避光存放，原液保存于-20℃；建议分装冻存，短期可以4℃保存。
2.胶染法灵敏度较高，须将商品化的DNA marker稀释5-10倍后使用。
3.在预染色方法中，电泳时间不要超过2小时，否则SYBR GreenⅠ会从DNA上分离出来，会产生弥散状条带。
DNAGREEN核酸染料使用说明
DNAGREEN核酸染料使用说明货号：G7140规格：0.5ml(10000×)保存：常温运输，4℃保存，有效期一年。
注意：DNAGREEN核酸染料属于微量核酸检测试剂，使用时请按照说明书操作。
产品简介：目前最常见的替代EB的核酸染料SYBR Green I（属于花氰类染料）虽然毒性比EB低、灵敏度比EB高，但由于其化学稳定性差；此外，SYBR Green I在电泳过程中能在DNA分子间移位，很容易使DNA条带模糊和扭曲，电泳清晰度和分辨率下降。
所以在实际应用中依然不能有效替代EB。
本产品是同时具有EB稳定性和SYBR Green I低毒性的新性核酸染料，其特点如下：1.低毒。
其主要成分未发现对人体有致癌性、未被列入有毒有害品，有利于保护使用者的健康和保护日益恶化的环境。
2.灵敏。
检测灵敏度跟EB相当，能满足常规核酸电泳实验要求。
3.稳定。
对光、水和热的稳定性跟EB相当，可加入琼脂糖凝胶中反复熔化。
4.无分子间位移现象。
不会出现SYBR染料常见的条带模糊和扭曲现象。
5.使用方法多样。
既可以加入熔化的胶中，也可以电泳后染色，还可用于PAGE。
6.跟各种常用的核酸电泳缓冲液（如SuperBuffer-2、TBE、TAE）兼容，但在SuperBuffer-2和TBE中背景最低。
7.观察时不需要任何额外的仪器设备或UV光源，可以使用现成的观察EB的300nm UV。
8.可用于RNA染色(也呈绿色)。
9.DNA或RNA浓度较高时还可以直接在日光下观察（需要将胶放在黑色背景下）。
由于避免了UV对DNA的伤害，尤其适用于胶回收实验。
使用方法:电泳中染色：本方法是将DNAGREEN直接加入溶化的凝胶中使用，只适用于琼脂糖凝胶电泳，不适用于PAGE。
1.将DNAGREEN直接加入到融化的琼脂糖凝胶中，每100mL凝胶加3-10uL DNAGREEN，混合均匀后倒胶。
琼脂糖凝胶中不能含任何其他染料（如EB和SYBR Green I，否则会相互干扰）。
SYBGreen染料荧光定量原理
SYBGreen染料荧光定量原理sybgreen是用于QPCR的荧光染料，拟提出的问题实际上就是定量PCR(QPCR)的原理和方法。
可以参考有关书籍很多。
所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
1.在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念——Ct值。
C代表Cycle，t代表threshol，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。
2. 荧光域值（threshold）的设定 PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：threshold = 10 ´ SDcycle 6-15 3. Ct值与起始模板的关系研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。
利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值。
因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
4. 荧光化学荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。
现将其原理简述如下： 1）TaqMan 荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’－3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
2）SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
sybr荧光染料名词解释
sybr荧光染料名词解释
SYBR荧光染料是一类广泛应用于生物学和分子生物学领域的
荧光染料。
SYBR是"Synergetic Binding Reagent"的缩写，意为协同结合试剂。
SYBR染料可与DNA结合并发出荧光，用于DNA凝胶电泳、实时定量PCR等实验技术中。
SYBR染料的特点包括灵敏度高、检测范围广、使用方便等。
它可以在凝胶电泳中将DNA带的彩色带和染料的荧光信号进
行关联，从而能够可视化分析DNA样本。
在实时定量PCR中，SYBR染料可与PCR扩增产物特异结合，测量PCR反应的荧
光信号强度，从而实现对DNA扩增的实时监测和定量分析。
SYBR染料适用于各种类型的DNA样本和PCR反应体系，包
括单一基因的扩增、多基因拷贝数的测定、突变分析等应用。
此外，SYBR染料的荧光信号相对稳定，可进行多次检测。
总的来说，SYBR荧光染料是一种常用的DNA染料，具有灵敏、广泛适用性和简便易用等优点，被广泛应用于生物学和分子生物学研究中的DNA分析技术。
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6μl
ddH O 2
补足至50μl
上海美季生物技术有限公司 Tel : 021-61452531 Fax : 021-61452532 Email : info@
该产品可用作实时定量 PCR专用荧光指示剂。用于任何一台 real-time PCR 仪上进行 PCR 反应。一般 使用时将 SYBR GREEN Ⅰ 稀释至 1X 浓度。 为了得到更高的荧光信号强度，根据所使用的聚合酶对其 耐受程度的不同，可以选择性的提高SYBR GREEN Ⅰ的浓度至3-4×。
上海美季生物技术有限公司
模板DNA
引物1[10 μM] 引物2[10 μM] 10×PCR Buffer dNTP Mixture (2.5mM each) Taq （2.5U/μl）
20×SYBR Green Ⅰ
<0.1μg
1μl 1μl 5μl 4μl
0.5-2μl
2.5μl
25mM MgCl2
特点
操作简单 价格便宜 适用范围广
储存方法
长期储存在 -20 ℃ 以下，避光 ；4Tel : 021-61452531 Fax : 021-61452532 Email : info@
上海美季生物技术有限公司
产品简介
SYBR GreenⅠ 核酸染料
SYBR Green Ⅰ是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料。与双链DNA结合后，其荧光大大增 强。这一性质使其用于扩增产物的检测非常理想。 SYBR Green Ⅰ的最大吸收波长约为 497nm，发射波长最大约为520nm。在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR Green Ⅰ荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射强荧光信号，而不掺入链中的SYBR Green Ⅰ染料分子仅有微弱荧光信号背景，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加同步。