乙型肝炎患者YMDD变异的检测及意义

者 。全 部 病 例 符 合 ２ ０ ０ ０年 ９月 西 安 会 议 修 订 的《 毒 性 肝 炎 病
防 治方 案 》 的 慢 性 乙 型 肝 炎 的 诊 断 标 准 ， 用 拉 米 夫 啶 ６ 中 服 ～ １ ２个 月 ２ ７例 ，３ ２ １ ￣ ４个 月 １ ７ ，５ ３ ２ 例 ２ ～ ６个 月 ３ Ｏ例 ，７个 月 ３
异 的发 生 率 随 着 拉 米 夫 啶 用 药 时 间 的 延 长 而 增 加 ； Ｖ Ｙ Ｄ 变 异 的 发 生 同 血 清 ＨＢ ＮＡ 水 平 相 关 ＨＢ Ｍ Ｄ ＶＤ
【 键 词】 慢 性 乙 型 肝 炎 ； 拉 米 夫 啶 ； ＹＭＤ 变 文 献标 志码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ ２ ９ ５ （ ０ ８ ２ — ５ ６０ １ ７ — ４ ５ ２ ０ ） ４１ ０ —２
【 要】 目的 了 解 拉 米 夫 啶 治疗 慢性 乙 型肝 炎 患者 乙型 肝 炎 病 毒 （ Ｖ） ＮＡ Ｙ 摘 ＨＢ Ｄ ＭＤ 变 异 的存 在 情 况 及 意 Ｄ 义 。方 法 采 用 聚 合 酶链 反应 结 合 Ｔ ｑ ｎ荧 光 技 术 检 测 昆 明 市 第 三 人 民 医 院 ２ １例 拉 米夫 啶 治 疗 慢 性 乙 型 肝 炎 ａｍａ ０ 患 者 ＨＢ ＮＡ ＹＭＤ 变 异 ， 发 生 ＨＢ Ｄ ＶＤ Ｄ 对 Ｖ ＮＡ ＹＭＤ 变 异 的 ９ Ｄ ９例 患 者 的 ＨＢ ＮＡ、 氨 酸 氨 基 转 移 酶 ＶＤ 丙 （ Ｌ ） ＨＢ Ｄ Ａ Ｔ及 Ｖ ＮＡ ＹＭＤ 变 异 情 况 进 行 分 析 。 结 果 ２ １例 拉 米 夫 啶 治 疗 慢 性 乙 型 肝 炎 患 者 中 检 出 ＨＢ Ｄ ０ Ｖ Ｄ ＭＤ 变 异 共 ９ ＮＡ Ｙ Ｄ ９例 （ 阳性 率 ４ ． ５ ）野 生 株 ４ ９ ２ ， ９例 ， ２ ． （ ９２ １ ，３例 未 检 出病 毒 株 ， ２ ． （３ 占 ４ ３ ４ ／ ０ ）５ 占 ６３ ５／ ２ １ ， 生 ＹＭＤ 变 异 株 患 者 有 ６ ． ＡＬ Ｏ ）发 Ｄ ０３ Ｔ异 常 。结 论 拉 米 夫 啶 在 ｆＢ ＭＤ 变 异 中起 主 导 作 用 ， 且 该 变 ｔＶ Ｙ Ｄ 并
检 验 医 学 与临 床 ２０ ０ ８年 １ ２月 第 ５卷 第 ２ ４期
Ｌ ｂＭｅ ｌ ， ｃｍｂ ｒ ０ ８ Ｖｏ． ， ．４ ａ ｄＣｉ Ｄｅｅ ｅ ０ ， １５ Ｎｏ２ ｎ ２
乙型肝 炎 患者 ＹＭＤ 变 异 的检 测 及 意 义 Ｄ
普 冬， 吴芳 华 ， 刘红伟 （ 南省 昆明市 第三人 民 医院检 验 科 云 ６ ０４ ） ５ ０ １
Ｄ ＮＡ ＹＭＤＤ变 异 患 者 情 况 作 了 初 步 分 析 ， 期 对 临 床 治 疗 提 以
供 有 利 的帮 助 ， 报 道 如 下 。 现
１ 资 料 与 方 法
１ １ 一 般 资 料 ２ １例 血 清 样 本 均 来 自本 院 ２ ０ ． ０ ０ ７年 ８月 至 ２ ０ 年 ３月 收 治 的经 拉 米 夫 啶 抗 病 毒 治 疗 的慢 性 乙 型 肝 炎 患 ０８
供 。 ＨＢ ＭＤ 变 异 采 用 Ｐ Ｒ 结 合 Ｔ ｑ ｎ荧 光 探 针 技 术 ， ＶＹ Ｄ Ｃ ａｍａ 分 ３管 平 行 检 测 ， 中 Ｃ检 测 管 检 测 样 本 中 的 总 ＨＢ ＮＡ 其 ＶＤ 包 括 野 生 型 和 突 变 型 ＤＮ Ａ， 工管 检 测 管 检 测 样 本 中 ＹＩ Ｄ 突 Ｄ 变Ｄ ＮＡ， Ｖ管 检 测 管 检 测 样 本 中 ＹＶ Ｄ 突 变 ＤＮＡ。 试 剂 盒 Ｄ 由上 海 克 隆 生 物 高 技 术 有 限 公 司 提 供 ， 器 为 Ｄ ７ ０ 仪 Ａ ６ ０荧 光 Ｐ Ｒ 检 测仪 。 Ｃ １３ 标本采集 ． 用 一 次 性 注射 器 抽 取 患 者 静 脉 血 ４ｍＬ， 添 不 加 抗 凝 剂 ， 离 血清 ， 一７ ℃保 存 。 分 于 ｏ １ ４ 检 测 方 法 血 清 标 本 、 剂 盒 内 强 Ｉ／ 阳性 血 清 、 界 ． 试 Ｖ 临 Ｉ阳性 血 清 、 界 Ｖ 阳 性 血 清 、 性 血 清 各 取 ５ Ｌ分 别 加 入 临 阴 Ｏ ５ Ｉ核 酸 提 取 液 Ａ， 荡 １ ，３０ ０ｒｍｉ 心 １ ｎ 去 ０“ 振 ５ｓ １ ０ ／ ｎ离 ０ｍｉ， 上 清 液 。分 别 加 入 １ ０“ ０ Ｌ核 酸提 取 液 Ｂ至 沉 淀 中 ， 荡 １ ， 振 ０Ｓ
拉 米 夫 啶 是 常 用 的 核 苷 类 抗 乙 型 肝 炎 病 毒 （ Ｖ） 物 ， ＨＢ 药 对 ＨＢ Ｖ有 明显 抑 制 作 用 ， 随 着 拉 米 夫 啶 的 广 泛 应 用 ， 步 但 逐 发 现 它 同时 存 在 可 产 生 ＨＢ ＮＡ Ｙ Ｖ Ｄ ＭＤ 变 异 的 情 况 。 为 了 Ｄ
１ ０ Ｃ保 温 １ ｎ １ ０ ／ ｎ离 心 ２ ｍｉ 。处 理 后 的样 品 ０ ０ ｍｉ ， ３０ ０ ｒ ｍｉ ｎ
解 拉 米 夫 啶 治 疗 慢 性 乙型 肝 炎 患 者 ＹＭＤ Ｄ变 异 的存 在 状 况 及
意 义 ， 者 对本 院 ２ １ 拉 米 夫 啶治 疗 慢 性 乙型 肝 炎 患 者 进 行 笔 ０例 了 ＨＢ ＤＮ Ｖ Ａ ＹＭＤ 变 异 的检 测 ， 对 所 检 出 的 ９ Ｄ 并 ９例 ＨＢ Ｖ
以上 １ ７例 。
应 在 １ｈ内使 用 ， 一２ 或 Ｏ℃最 长 保 存 １个 月 （ 宜 反 复 冻 融 ）。 不 按 试 剂 盒 要 求 配 置 反 应 液 并 进 行 操 作 。选 择 ５ ℃ ２ｍｉ， ４ Ｏ ｎ ９ ℃ ５ｍｉ， 按 ９ ｎ再 ４℃ ２ 一 ５ ０ｓ ３℃ ３ ， 环 ４ ０ｓ循 Ｏ次 进 行 Ｐ Ｒ扩 Ｃ 增 反 应 。在 ５ ３℃荧 光 通 道 ， 择 Ｆ 选 ＡＭ 进 行 荧 光 检 测 。 １５ 结 果 判 断 ． ＨＢ ＭＤ 变 异 检 测 ， 线 调 整 取 ５ １ ＶＹ 基 ～ Ｏ个