2013年最新高中生物精品教学课件：血红蛋白的提取与分离(6)(人教版选修1)
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人教版高二选修一专题5课题3《血红蛋白的提取和分离》 课件 (共47张PPT)
③凝胶色谱柱的装填方法：
A、固定：将色谱柱装置固定在支架上。 B、装填：在与色谱柱下端连接的尼龙管打开的情 况下将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱内，装填 时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀
注意：
1、装填时尽量紧密：降低凝胶颗粒之间的空隙。
2、装填凝胶柱时不得有气泡存在：因为气泡会搅乱 洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。
2.作用:
能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影 响，维持PH基本不变。
一、基础知识
（二）缓冲溶液
3.缓冲溶液的配制:
通常由1－2 种缓冲剂溶解于水中配制而成。 调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范 围内使用的缓冲液。
4.在本课题中使用的缓冲液: 磷酸缓冲液
5.目的利：用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血
(4)四个原因：是指蛋白质分子结构多样性的原因 有4个：
①组成蛋白质的氨基酸分子的种类不同；
②组成蛋白质的氨基酸分子的数量成百上千；
③组成蛋白质的氨基酸分子的排列次序变化多端；
④蛋白质分子的空间结构不同。
(5)五大功能：是指蛋白质分子主要有5大功能(由分子结构 的多样性决定)：
①有些蛋白质是构成细胞和生物体的重要物质，如人和动 物的肌肉主要是蛋白质；
样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定
凝胶 凝胶电泳
（二）操作过程
色谱 法
1.样品处理：
可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血 液来分离血红蛋白。
1.用鸡的红细胞提取DNA，用猪、牛、羊的红细胞 提取血红蛋白的原因是什么？
鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行 DNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血 红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。
垂直向下移动，无规 则扩散进入颗粒内部
血红蛋白的提取和分离课件人教版选修一
第十页，编辑于星期三：七点 一分。
பைடு நூலகம் 第十一页，编辑于星期三：七点 一分。
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第一页，编辑于星期三：七点 一分。
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人教版高中生物选修一5.3《血红蛋白的提取和分离》ppt课件
பைடு நூலகம்
3）常用电泳方法
琼脂糖凝胶电泳 聚丙酰胺凝胶电泳
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白 质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率 仅取决于分子大小。
影响蛋白质分子运动速度的因素
决定 运动方向 电荷性质 √ 电荷量 分子形状 分子大小
电场 作用力
√
形成
决定
阻力 运动速率
√
√
√
√
3.分离血红蛋白
分离过程
红细胞 混合液
脂类物质
高速离心 10min
滤纸 过滤
烧杯
离心 管
有机溶剂 血红蛋白
4.透析血红蛋白
透析的目的是什么？
去除血红蛋 白中的小分 子杂质
1mL
1mL 20mmol/L磷酸缓冲液
纯化－－凝胶色谱操作 1.凝胶色谱柱的制作： 教材图5－19 2.凝胶色谱柱的装填： 3.样品的加入和洗脱
同时，大家要开动脑筋，思考老师是怎样提出问题、分析问题、解决问题的，要边听边想。为讲明一个定理，推出一个公式，老师讲解顺序是怎样的， 为什么这么安排？两个例题之间又有什么相同点和不同之处？特别要从中学习理科思维的方法，如观察、比较、分析、综合、归纳、演绎等。 • 作为实验科学的物理、化学和生物，就要特别重视实验和观察，并在获得感性知识的基础上，进一步通过思考来掌握科学的概念和规律，等等。 • 二、听文科课要注重在理解中记忆 • 文科多以记忆为主，比如政治，要注意哪些是观点，哪些是事例，哪些是用观点解释社会现象。听历史课时，首先要弄清楚本节教材的主要观点，然 后，弄清教材为了说明这一观点引用了哪些史实，这些史料涉及的时间、地点、人物、事件。最后，也是关键的一环，看你是否真正弄懂观点与史料间 的关系。最好还能进一步思索：这些史料能不能充分说明观点？是否还可以补充新的史料？有无相反的史料证明原观点不正确。 • 三、听英语课要注重实践 • 英语课老师往往讲得不太多，在大部分的时间里，进行的师生之间、学生之间的大量语言实践练习。因此，要上好英语课，就应积极参加语言实践活 动，珍惜课堂上的每一个练习机会。
3）常用电泳方法
琼脂糖凝胶电泳 聚丙酰胺凝胶电泳
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白 质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率 仅取决于分子大小。
影响蛋白质分子运动速度的因素
决定 运动方向 电荷性质 √ 电荷量 分子形状 分子大小
电场 作用力
√
形成
决定
阻力 运动速率
√
√
√
√
3.分离血红蛋白
分离过程
红细胞 混合液
脂类物质
高速离心 10min
滤纸 过滤
烧杯
离心 管
有机溶剂 血红蛋白
4.透析血红蛋白
透析的目的是什么？
去除血红蛋 白中的小分 子杂质
1mL
1mL 20mmol/L磷酸缓冲液
纯化－－凝胶色谱操作 1.凝胶色谱柱的制作： 教材图5－19 2.凝胶色谱柱的装填： 3.样品的加入和洗脱
同时，大家要开动脑筋，思考老师是怎样提出问题、分析问题、解决问题的，要边听边想。为讲明一个定理，推出一个公式，老师讲解顺序是怎样的， 为什么这么安排？两个例题之间又有什么相同点和不同之处？特别要从中学习理科思维的方法，如观察、比较、分析、综合、归纳、演绎等。 • 作为实验科学的物理、化学和生物，就要特别重视实验和观察，并在获得感性知识的基础上，进一步通过思考来掌握科学的概念和规律，等等。 • 二、听文科课要注重在理解中记忆 • 文科多以记忆为主，比如政治，要注意哪些是观点，哪些是事例，哪些是用观点解释社会现象。听历史课时，首先要弄清楚本节教材的主要观点，然 后，弄清教材为了说明这一观点引用了哪些史实，这些史料涉及的时间、地点、人物、事件。最后，也是关键的一环，看你是否真正弄懂观点与史料间 的关系。最好还能进一步思索：这些史料能不能充分说明观点？是否还可以补充新的史料？有无相反的史料证明原观点不正确。 • 三、听英语课要注重实践 • 英语课老师往往讲得不太多，在大部分的时间里，进行的师生之间、学生之间的大量语言实践练习。因此，要上好英语课，就应积极参加语言实践活 动，珍惜课堂上的每一个练习机会。
人教版高中生物选修一血红蛋白的提取和分离 PPT课件 图文
析出血浆 5倍体积生理盐水
血液 100mL
低速离心 2 min
血浆 红细胞
重复洗涤3次，直至上清液没有黄色
红细胞
搅拌10min
问题： ①刚采集的血样要做怎样的处理？为什么？ 加入抗凝血剂，防止血液凝固。 ②洗涤的目的是什么？ 去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化。 ③洗涤干净的标志是什么？ 直至上清液不再呈现黄色，表明红细胞已洗涤干净。
抵达民宿时，太阳已落下了帷幕，温馨点点的灯光在落寞的黑夜中显得无比温暖。
热情周到的女主人迎接我的到来，放下随身物品后，我在小镇上随意寻觅了些小食，就来到了后院安静坐下。
头顶上是浩瀚的星空 眼前是闪烁的灯火
心中却是平和幽静的情感
远离了呼啸而过的地铁呼啸声；远离了川流不息的车流声； 等到了一个此时此刻，用我的五官感受到了一个真正美好寂静的夜晚，属于自己的夜晚。
迪士尼乐园，与我们成年人而言，它是一个守护了我们童年的港湾。 在这里的所有伙伴，不论男女老少，都能卸下自己的伪装和枷锁，尽情的享受一个美好的虚幻童话世界。
在这里，不会有人催你长大。 这里有关于梦想幻想的一切，你忘记烦恼，只为把快乐投入其中。
这是一个能让你变回孩子的地方，可以没有顾虑做回真实的自己。 这里虽然可爱却并不幼稚，你会惊叹于华特迪士尼的设计和想象力。 这里充满着无数的童年的回忆，有很多张笑脸，有很多意想不到的创意。 在这里我们得到的幸福不是痛苦或者失去头脑后的自我陶醉，而是我们人格完整的最好证明。
分离过程
红细胞 混合液
3.分离血红蛋白
脂类物质
高速离心 10min
滤纸 过滤
烧杯
离心管
有机溶剂 血红蛋白
（二）凝胶色谱操作
1、 凝胶色谱柱的制作 打孔→挖穴→安管→覆网→纱包→插管 2、凝胶色谱柱的装填 固定色谱柱→配凝胶悬液→装填色谱柱→洗涤平衡 3、样品的加入和洗脱 调节缓冲液面→滴加透析样品→样品渗入凝胶床→ 洗脱→收集分装蛋白质
血液 100mL
低速离心 2 min
血浆 红细胞
重复洗涤3次，直至上清液没有黄色
红细胞
搅拌10min
问题： ①刚采集的血样要做怎样的处理？为什么？ 加入抗凝血剂，防止血液凝固。 ②洗涤的目的是什么？ 去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化。 ③洗涤干净的标志是什么？ 直至上清液不再呈现黄色，表明红细胞已洗涤干净。
抵达民宿时，太阳已落下了帷幕，温馨点点的灯光在落寞的黑夜中显得无比温暖。
热情周到的女主人迎接我的到来，放下随身物品后，我在小镇上随意寻觅了些小食，就来到了后院安静坐下。
头顶上是浩瀚的星空 眼前是闪烁的灯火
心中却是平和幽静的情感
远离了呼啸而过的地铁呼啸声；远离了川流不息的车流声； 等到了一个此时此刻，用我的五官感受到了一个真正美好寂静的夜晚，属于自己的夜晚。
迪士尼乐园，与我们成年人而言，它是一个守护了我们童年的港湾。 在这里的所有伙伴，不论男女老少，都能卸下自己的伪装和枷锁，尽情的享受一个美好的虚幻童话世界。
在这里，不会有人催你长大。 这里有关于梦想幻想的一切，你忘记烦恼，只为把快乐投入其中。
这是一个能让你变回孩子的地方，可以没有顾虑做回真实的自己。 这里虽然可爱却并不幼稚，你会惊叹于华特迪士尼的设计和想象力。 这里充满着无数的童年的回忆，有很多张笑脸，有很多意想不到的创意。 在这里我们得到的幸福不是痛苦或者失去头脑后的自我陶醉，而是我们人格完整的最好证明。
分离过程
红细胞 混合液
3.分离血红蛋白
脂类物质
高速离心 10min
滤纸 过滤
烧杯
离心管
有机溶剂 血红蛋白
（二）凝胶色谱操作
1、 凝胶色谱柱的制作 打孔→挖穴→安管→覆网→纱包→插管 2、凝胶色谱柱的装填 固定色谱柱→配凝胶悬液→装填色谱柱→洗涤平衡 3、样品的加入和洗脱 调节缓冲液面→滴加透析样品→样品渗入凝胶床→ 洗脱→收集分装蛋白质
高二生物人教版选修1课件5.3 血红蛋白的提取和分离
血液组成成分 阅读思考： 血浆 血细胞 1. 血液由 ______ 和________两部分组成。
2. 血细胞中_______ 红细胞 细胞数量最多，细胞的含量最 血红蛋白 高的有机化合物是 _____________。 条β -肽链 构 2条α-肽链 3. 该化合物是由 _____________ 和2 ____________ 成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和 亚铁血红素 CO2结合的 ______________________基团。
2）材料：凝胶
凝胶是微小的多孔性球体，如葡聚糖或琼脂糖。 内部有许多贯穿的通道.
混合物 上 柱
洗 脱
大分子流动快 小分子流动慢
收 集 大分子
收 集 小分子
洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 促使蛋白质分子的差速流动。
2．凝胶电泳法： 电泳：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 1）原理： 不同蛋白质的带电性质（正电荷或负电荷）、电量、 形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、 阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运 动速度不同。 思考：蛋白质为什么带有电荷？ 在一定的PH下，蛋白质可解离的基团会带上电荷
人教版选修1
专题5 DNA和蛋白质技术
课题3 血红蛋白的提取和分离
一、基础知识：
（一）蛋白质提取和分离原理
（二）蛋白质提取和分离的方法
1、凝胶色谱法：又称分配色谱法
2、电泳法
（三）缓冲溶液
二、实验操作－－实验步骤 样品处理 和粗分离 血液组成成分
1.洗 涤 红 细 胞 纯 化 2.释放血红蛋白
3.分离血红蛋白 纯度鉴定 4.透析血红蛋白
2、凝胶色谱柱的装填
材料：交联葡聚糖凝胶G-75 20mmol/L磷酸缓冲液 “G”表示什么？75代表什么？
高中生物《第五章第三节血红蛋白的提取和分离》课件6新人教版选修1[可修改版ppt]
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3. SDS作用机理:
SDS能使蛋白质发生完全变性。解聚成单条肽 链，因此测定的结果只是单条肽链的分子量。 SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物， SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有 的电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差 别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。
用SDS测定蛋白质分子量的方法
其目的是: 利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证
血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科 学研究(活性)
（三） 电泳：
1.概念：
带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
2.原理：
①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有 可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上 正 电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带 电荷相反的电极移动。 ③分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本 身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁 移速度，从而实现样品中各种分子的分离。
高中生物《第五章 第三节血红蛋白的 提取和分离》课件6
新人教版选修1
一、血红蛋白的提取和分离
1.分离生物大分子的基本思路：
选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物 理或化学性质的生物大分子。
2.蛋白质分离和提取的原理：
根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和 大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质 和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种 类的蛋白质。
使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋 白质的分子量时，可选用一组已知分子量 的标准蛋白同时进行电泳，根据已知分子 量的标准蛋白的电泳区带位置，可以测定 未知蛋白质的分子量。市场上有高分子量、 次高分子量及低分子量的标准蛋白试剂出 售。
二、实验操作
（一）蛋白质提取和分离步骤 样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定
SDS能使蛋白质发生完全变性。解聚成单条肽 链，因此测定的结果只是单条肽链的分子量。 SDS能与各种蛋白质形成蛋白质—SDS复合物， SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有 的电荷量。因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差 别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。
用SDS测定蛋白质分子量的方法
其目的是: 利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证
血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科 学研究(活性)
（三） 电泳：
1.概念：
带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。
2.原理：
①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有 可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上 正 电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带 电荷相反的电极移动。 ③分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本 身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁 移速度，从而实现样品中各种分子的分离。
高中生物《第五章 第三节血红蛋白的 提取和分离》课件6
新人教版选修1
一、血红蛋白的提取和分离
1.分离生物大分子的基本思路：
选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物 理或化学性质的生物大分子。
2.蛋白质分离和提取的原理：
根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和 大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质 和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种 类的蛋白质。
使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋 白质的分子量时，可选用一组已知分子量 的标准蛋白同时进行电泳，根据已知分子 量的标准蛋白的电泳区带位置，可以测定 未知蛋白质的分子量。市场上有高分子量、 次高分子量及低分子量的标准蛋白试剂出 售。
二、实验操作
（一）蛋白质提取和分离步骤 样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定
人教版高中生物选修一专题5课题3《血红蛋白的提取和分离》 课件 (共38张PPT)
选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化 学性质的生物大分子。
2、蛋白质提取与分离的依据：不同种类蛋白质的物 理化学性质不同：
蛋白质形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、 吸附性质、对其他分子亲和力等千差万别。从而分离 不同种类的蛋白质。
本课题我们将利用血红蛋白与杂质蛋 白哪方面的差异进行提纯？
一、基础知识--蛋白质提取和分离原理 3 、分离不同的蛋白质方法：
（2）目的：去除杂蛋白。
柜式离心机
初次离心后的结果
3次洗涤后的结果
2 、血红蛋白的释放：
洗涤好的红细胞+蒸馏水+甲苯→磁力搅拌器充分搅拌10min →红细胞 破裂释放血红蛋白
蒸馏水的作用是 使红细胞大量吸水胀破 加入甲苯的作用是 溶解红细胞的细胞膜
充分搅磁拌的力目搅的是拌器加速红细胞的破裂
搅拌器转子
成。如H2CO3/NaHCO3，醋酸/醋酸钠， NaH2PO4/Na2HPO4等
2、 缓冲液的作用是什么？
能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响，维 持PH基本不变。
3、 缓冲液是如何配制的？
通常由1－2 种缓冲剂溶解于水中配制而成。调 节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内 使用的缓冲液。
的电泳迁移率完全取决于
A 电荷的多少 B 分子的大小
C 肽链的多少 D 分子形状的差异
4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是
A 调节pH
B 维持红细胞的能量供应
C 防止微生物生长 D 防止血液凝固
凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋
白质分离不彻底。
③顶塞的制作：打孔→安装玻璃管。 ④组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。 ⑤安装其他附属结构。
2、蛋白质提取与分离的依据：不同种类蛋白质的物 理化学性质不同：
蛋白质形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、 吸附性质、对其他分子亲和力等千差万别。从而分离 不同种类的蛋白质。
本课题我们将利用血红蛋白与杂质蛋 白哪方面的差异进行提纯？
一、基础知识--蛋白质提取和分离原理 3 、分离不同的蛋白质方法：
（2）目的：去除杂蛋白。
柜式离心机
初次离心后的结果
3次洗涤后的结果
2 、血红蛋白的释放：
洗涤好的红细胞+蒸馏水+甲苯→磁力搅拌器充分搅拌10min →红细胞 破裂释放血红蛋白
蒸馏水的作用是 使红细胞大量吸水胀破 加入甲苯的作用是 溶解红细胞的细胞膜
充分搅磁拌的力目搅的是拌器加速红细胞的破裂
搅拌器转子
成。如H2CO3/NaHCO3，醋酸/醋酸钠， NaH2PO4/Na2HPO4等
2、 缓冲液的作用是什么？
能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响，维 持PH基本不变。
3、 缓冲液是如何配制的？
通常由1－2 种缓冲剂溶解于水中配制而成。调 节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内 使用的缓冲液。
的电泳迁移率完全取决于
A 电荷的多少 B 分子的大小
C 肽链的多少 D 分子形状的差异
4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是
A 调节pH
B 维持红细胞的能量供应
C 防止微生物生长 D 防止血液凝固
凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋
白质分离不彻底。
③顶塞的制作：打孔→安装玻璃管。 ④组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。 ⑤安装其他附属结构。