山西省部分地区流行的鸡沙门氏菌分离与鉴定及地方分离株灭活苗的研制_(2)
山东省鸡源沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验
山东省鸡源沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验作者：王晓艺李涛吕新新张敏来源：《家禽科学》2017年第04期（1.烟台市牟平区姜格庄街道畜牧兽医工作站，山东烟台 264114；2.青岛润达生物科技有限公司，山东青岛 266200）摘要：为了解山东地区鸡沙门氏菌的流行及耐药情况，本文对山东部分市县的病死鸡只进行沙门氏菌的分离培养鉴定，最终得到12株致病性沙门氏菌菌种，并对分离菌株进行耐药性试验，结果鉴定12株沙门氏菌对沙门氏菌对替米考星、阿莫西林和林可霉素等均产生了一定的耐药性，对润达炎迪克、硫酸粘菌素、呼治常安和强力霉素有一定的敏感性。
关键词：沙门氏菌；分离；药敏试验中图分类号：S858.314.4+3 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2017）04-0051-03沙门氏菌是肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于环境或寄居于人和动物肠道内，绝大多数对人和动物具有致病性。
鸡源沙门氏菌是鸡场的重要病原菌，可引发鸡白痢、鸡伤寒和禽副伤寒[1]，其典型症状为脾脏或肝脏表面密布黄白色坏死灶，心脏出现心肌炎症状，部分肠道或肺脏长有白色肉芽。
鸡源沙门氏菌在鸡群中能垂直感染，被感染成鸡生长性能或产蛋下降，雏鸡大批死亡，死亡率高达80%，已成为危害养禽业的首要传染病之一[2]。
感染沙门氏菌或食用被带菌者粪便污染的食品，可使人发生食物中毒，人畜感染后它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生产力。
沙门氏菌不但会对畜牧业生产造成严重的经济损失，而且会严重威胁人类的健康，沙门氏菌病已成为一种常见多发的人畜共患病[3]。
对山东部分养鸡场的鸡源沙门氏菌病的流行情况进行调查，发现沙门氏菌广泛存在于鸡场中，由于沙门氏菌可以通过生殖道污染禽蛋，造成种蛋的孵化率降低和污染以及鸡只的大规模发病和死亡，引起严重的经济损失，极大困扰着养禽业的发展[4]。
此外，滥用抗菌药物造成耐药菌株不断产生，致使该病的治疗越来越困难，给养鸡业造成了严重的经济损失。
鸡沙门氏菌病的诊断与防治
鸡沙门氏菌病的诊断与防治作者：王岩来源：《家禽科学》2022年第03期中图分类号：S858.31 文献标识码：C 文章编号：1673-1085（2022）03-0019-03鸡沙门氏菌病是由沙门氏菌属的一种或几种沙门氏菌引起的急性或慢性传染病，包括由鸡白痢沙门氏杆菌引起的鸡白痢，由鸡伤寒沙门氏杆菌引起的禽伤寒，以鼠伤寒沙门氏杆菌为主的多种沙门氏杆菌引起的禽副伤寒。
其中鸡白痢最为常见，危害也最大。
沙门氏菌属有2 000多种血清型，在我国就发现200多个血清型，许多血清型可使人感染后发生食物中毒和败血症，是重要的人畜共患病病原体。
在自然界中鸡是沙门氏菌的最大宿主，而人食用患病鸡的肉和蛋类后，会引起沙门氏菌的感染与食物中毒[1]。
近些年来由于抗菌素的广泛应用，使得该类细菌的耐药性日趋严重，发病率也逐渐上升，因而备受重视。
1 流行病学沙门氏菌病对各品种的鸡都易感，初生3周龄以内的雏鸡最易感，发病率与死亡率也最高，以后随着日龄增长而逐渐减少。
雏鸡和带菌鸡是本病的主要传染源，当育雏拥挤、饲舍环境污秽潮湿、通风不良、温度不适宜以及成鸡感染内寄生虫和病毒病时，都会促进本病的发生，雏鸡群感染后往往呈地方流行性。
鸡沙门氏菌病通常通过带菌母鸡产出带菌蛋进行垂直传播，此外也可水平传播。
有的健康蛋的蛋壳受到污染而感染，感染蛋在孵化时产生死胚、病雏或弱雏。
病雏排出的含有大量病菌的分泌物、排泄物污染饲料和饮水、孵化和育雏设备以及饲养场地，健康鸡接触后可经眼结膜、消化道与呼吸道感染。
2 临床症状2.1 鸡白痢鸡白痢主要危害2～3周龄的雏鸡，发病率在20%～40%，雏鸡出生之后抵抗能力较差，很容易受到沙门氏菌的侵袭而表现出腹泻症状[2]。
感染的雏鸡出壳后，经过4～5 d潜伏期后开始出现症状，一周左右雏鸡发病率和病死率逐渐升高，2～3周龄达最高峰。
大多数病雏表现精神萎靡、闭眼、缩颈、翅尾下垂、聚团挤在一起，不食，排白色糊状粪便，肛门周围的绒毛被粪便污染，有的因粪便与绒毛干结一起而封住肛门，影响排粪，故病雏排便时常发出叫声，终因呼吸困难和衰弱死亡。
鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验
１ ． ２ ． ７ 动物试验
将纯 培养的细菌接种 一 ｆＳ ｍｌ 营 养肉汤。
置 于３ ７ ℃培养２ ４ ｈ 。取２ ０ 只小 白 鼠，雌雄各 半 随机 分为
２ Ｎ ，试 验组 小 白鼠为１ ４ 只 ，腹腔 注射菌 液０ ． １ ｍｌ ／ 只 ；对 照组小 自鼠６ 只 ，注 射Ｄ Ｈ值为７ ． ６ 的生理盐水０ ． １ ｍｌ ／ 只 ，４ ｈ
关键词 鸡 白痢 沙 门氏 分离 鉴定 药敏 试验
中图分类号 ：￥ ８ ５ ２ ． ６ １
文 献标识码 ：Ａ
文章编号：１ ０ ０ ７ ． １ ７ ３ ３ （ ２ ０ １ ４ ） ０ １ － ０ ０ ｔ ２ ． ０ ３
酵管和 其他 生化反 应管 中 ，置 于３ ７ ＂ Ｃ温箱培养 ，每 曰观 察 ；采 用 沙 门 氏菌 诊 断 ｍ清 对 分 离 菌株 进 行ｊ ｆ 【 Ｌ 清 型鉴
取肺 组织进 行真 菌分 离培养 来分 离到任何 真菌 ；于
盲肠 内榆查到异刺线虫７ 条 ，ｆ肠道榆 查到绦虫ｌ 条 ，除此 之外 ，末见其他寄生虫和虫卵。 ３ ． ３ 分离菌株培养特性
特 征 。将细 菌 纯 培 养物 接 种 于 ｊ 糖 铁 琼 脂 ，３ ７ ＂ Ｃ培 养
２ ４ ｈ。
所。
养物分别用灭菌生理盐水冲洗 ，稀释 成浓度 为３ ｘ ｌ Ｏｔ ｅ ｆ ｕ ／ ｍｌ
的荫 液 ，吸取稀释 菌液 均匀涂 布 于普通平板 。室温 放置
５ ａｉ ｒ ｎ 后 ，分别 贴上 符 种药 敏 纸片 ，３ ７ ＂ Ｃ条件 下培 养 １ ６ ～
１ ８ ｈ ，观 察 并 测 量 抑 菌 环 大 小 。
鸡沙门氏菌的分离与鉴定
空 气 等 样 品 进 行 细 菌 分 离 、鉴 定 ， 摸 清 鸡 场 沙 门 氏菌 感 染 种 类 。
２ 材 料 与 方 法
２１ 材 料 ，
葡 萄 糖 、 鼠李 糖 、蕈 糖 、乳 糖 、 蔗 糖
和 甘 露 醇 、卫 茅 醇 、 肌 醇 、 山 梨 醇 分
２ １ 样 品 来 源 ．． １
昆 明某 种 鸡 场 ： 病 雏 ３只 、 成 年
发 病 蛋 鸡 ３只 。 病 料 取 心 、 肝 、脾 、 肾 、胆 囊 、畸 形 卵 细胞 、部 分 输 卵 管 。 雏鸡泄殖 腔拭子 ２ ０只 份 、成 年 蛋 鸡泄殖腔拭子 ２ ０份 。
胆 盐 ８ ～０克 、 柠 檬 酸 钠 ０５克 、 牛 ． １ ５ ．
Ｓ 琼 脂 培 养 皿 打 开 ３ ５ 分 钟 取 样 ． Ｓ ～
５份 。
煌 绿 蛋 白 胨 增 菌 液 （ ．％氯 化 钠 ０ ５
非 等 报 道 某 鸡 场 因 改 进 配 方 ．在 种 鸡 育 成 期 、产 蛋 期 的 饲 料 中 添 加 肉 骨 粉 替 代 植 物 性 蛋 白 饲 料 ，事 先 未 对 样 品
液 ０１ 升 ） ．毫 。 尿 素 发 酵 管 （ 白 胨 １克 、葡 萄 蛋 糖 １克 、氯 化 钠 ５克 、磷 酸 二 氢 钾 ２ 克 、蒸 馏 水 １ ０ ０ ０毫 升 、０４ ．％酚 红 溶 液
雏鸡 粪 ２ ０只 份 、成 年 蛋 鸡 粪 ２ ０
只份。
枸 椽 酸铁 ０３克 、酵 母 膏 ３克 、葡 萄 糖 ．
肉膏 ５克 、琼 脂 ２ ０克 、０５ 中性 红 水 ． ％ 溶液 ４ ． ５毫 升 、０ １ ． ％煌 绿 溶 液 ０３ ．３毫 升 、蒸 馏水 １ ｏ ０ ０毫 升 ） 。 三 糖 铁 培 养 基 （ 肉 浸 膏 ３克 、 牛
鸡肠炎沙门氏菌的分离和药物敏感性分析
ｓ ｓ琼脂 、 三糖铁 琼脂 、 生化试 剂购 自杭 州微 生物试 剂有 限公 司 ； 沙门氏菌 Ａ— Ｆ多价 Ｏ血清 、 ９单克 隆抗体 、 ０ ＭＨ琼 脂、 ＭＨ肉汤购 自杭 州微生物 试剂有 限公 司； 血平 板 ： 普通琼
收稿 日期 ：０ １—１ ２１ ０—３ ０
了 ５对引物 ， 分别扩增 口一内酰胺类 耐药基因、 四环素类耐药
中有 ４个菌株对 １ 以上抗生素耐药 ， ４种 对喹诺酮类药物 的耐 药率 （ 除萘啶酮酸 以外） 虽然低于 ５ ％ ， ０ 但是所有非耐喹诺 酮
类 药物分离株都表现出对喹诺酮类药 物中度敏感 ， 导致药 物 治疗效果下降 。其 中有 １ ６株菌 株共 同耐氨 苄青霉 素 、 四环 素、 链霉素 、 萘啶酮酸。
致病性试验 ， 确定为肠炎沙门氏菌 ， 这些 菌株进行抗生素敏 对
感 试验 。
１ 材 料 与 方 法 Ｉ １ 菌株 来 源 ．
根据世界卫生组织推荐的 Ｋ—Ｂ纸 片扩散法和美 国临床
实验室标 准化 协会 （ ｌ ｃ ｎ ａｏａ ｒ ｔ ｄｒ ｎｔｕｅ Ｃｉ Ｍ ａｄＬｂ ｒ ｏ Ｓａ ａｄＩｓｔ ， ｍ ｔｙ ｎ ｉｔ ＣＳ） Ｌ Ｉ手册进 行药敏试验 ， 以大肠杆 菌 Ａ Ｃ ５２ Ｔ Ｃ２９２为药敏
低， 努力从 源头上控制耐药性 的产生 ， 障动物性食 品安全 ， 保
确保 人类健康 。
参 考文献 ：
［］ １ 陆承平． 医微生物学 ［ ． 兽 Ｍ］ ３版． 北京 ： 中国农业 出版社 ， ０ ． ２ ７ ０ ［］ ２ 潘志 明， 焦新安 ， 刘文博 ， ． 白痢沙门氏菌耐药性 的监测研究 等 鸡 ［ ］ 畜牧兽 医学报 ，０２ ３ （ ）３ ７ ３ ３ Ｊ． ２０ ， ４ ： — ８ ． ３ ７ ［］ ３ 丁孟建 ， 高继业 ， 唐 好， 等．肉鸡源肠炎沙门氏菌的分类 与鉴定 及生物学特征观察 ［ ］ Ｊ ．中国畜牧兽医． ０ ９ ３ （ ）２ ３— ０ ． ２０ ， ５ ： ６ ０ ２５
鸡感染新城疫的诊断及抗体水平检测
Ｍ ：ＤＬ２０００ Ｍａｒｋｅｒ；１：检测样本 图 １ ＲＴ—ＰＣＲ 扩 增 结 果
洗 液 ， １ ３０００ ｒｐｍ 离 心 ３０ｓ。 重
复 上 一 步 。 弃 去 收 集 管 中 液 体 ，
１ ３０００ｒｐｍ 空 柱 离 心 ２ｍｉｎ， 以 除 去 残 留 的 洗 涤 液 。 将 吸 附 柱 移
鸡 感 染新 城 疫 的诊 断 及抗 体 水 平 检 测
詹 丽 娥 ，陆 冰 洋 ，刘 华 栋 ，李 婷 婷 ，唐 娟 ，王 彩 先 ， 丁树 荣 （山西省农业科学 院畜牧兽 医研究所太原 ０３００３２）
疾 病 防 治
ｄｏｉ：１０ ３９６９４ ｉｓｓｎ １００８—４７５４ ２０１８．０２ ０１８
２０１７年 ３月 ９ 日 山 西 省 晋 中 地 区 某 养 鸡 场 １５Ｏ日 龄 的 蛋 鸡 发 生 疾 病 ， 此 养 鸡 场 存 栏 鸡 ８０００只 ， 近 期 部 分 鸡 发 生 疾 病 。整 群 精 神 状 态 差 ， 采 食 量 和 饮 水 量 均 下 降 。 场 主携带 ３只 发病鸡 （２只活鸡 ，１只 死鸡 ）来笔者研究室进行诊断。
～～～～ ～～ 后 取 上 清 液 ， 使 用 新 城 疫 病 毒 通
用 型 ＲＴ－ＰＣＲ检 测 试 剂 盒 检 测
ＮＤＶ， 取 已 处 理 的 样 品 ， 加 入 裂
解 液 ６００ ｕ Ｌ，充 分 颠 倒 混 匀 ， 室
温 静 置 ３ ～ ５ｍｉｎ。 将 液 体 吸 入 吸 附 柱 中 ， １３０００ｒｐｍ 离 心 ３０ｓ。 弃 去 收集 管 中的 液 体 ，加 入 ６００ ｕ Ｌ
７讨 论
新城疫 （Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ， ＮＤ）是 由新城疫病毒 （Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ，ＮＤｖ）引 起 的 危 害 多种 家禽特 别 是陆生 禽 类的 最主要 传 染 病 之 一 。一 些 发 达 国 家 采 用 强 制扑 杀强 毒 感染禽 群 为主 的方 法 ，
鸡伤寒沙门菌的分离鉴定及药敏试验
鸡伤寒沙门菌的分离鉴定及药敏试验刘素英;王晶钰;董睿;王利勤;王慧【摘要】为给鸡伤寒沙门菌病的防控提供理论依据与数据参考,采集疑似鸡伤寒病死鸡的肝、脾病料,进行细菌分离.根据细菌形态、培养特性、生化试验等鉴定出13株沙门菌.对分离到的菌株进行21种常用抗菌药物的敏感性试验,结果显示,分离株对阿米卡星、新霉素高度敏感,对卡那霉素、痢特灵中度敏感,而对其他药物则表现为耐药.将筛选出的阿米卡星对发病鸡场后续发病鸡群采用肌肉注射和硫酸新霉素饮水治疗和痢特灵拌料饲喂,用药5d后,鸡群鸡伤寒沙门菌病的发病率从50％降到了5％左右.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2011(032)009【总页数】5页(P37-41)【关键词】伤寒沙门菌;分离鉴定;药敏试验;鸡【作者】刘素英;王晶钰;董睿;王利勤;王慧【作者单位】西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100;西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100;西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100;西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100;西北农林科技大学动物医学院陕西杨陵712100【正文语种】中文【中图分类】S852.612沙门菌属(Salmonella)是一群寄生于人和动物肠道内的无芽胞杆菌,是一大属血清学相关的革兰阴性杆菌[1-3]。
引起禽类发病的沙门菌主要有鸡白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌及其他有鞭毛能运动的多种沙门菌[2-4]。
禽沙门菌病(Avian Salmonellosis)是由多种沙门菌引起的一类传染病的总称,临床上多表现为败血症和肠炎[5-6]。
沙门菌病能导致禽的生产性能下降,种蛋的孵化率降低,对养禽业造成巨大的经济损失[7]。
我国目前控制该病的主要措施是检疫淘汰带菌鸡,净化培育鸡群;对于一些没有条件净化或短期内还无法净化的鸡群则采用抗菌药物进行预防和治疗,但是由于抗菌药物的不合理使用,在抗生素的选择性压力下使得沙门菌产生的耐药性越来越快,耐药谱越来越广[5-7],因此,在目前还没有有效免疫制剂的情况下,敏感而有效的抗菌药物的筛选对该病的防控具有一定的实际意义[8]。
禽沙门氏菌鉴别培养基和PCR检测方法的建立
2019年第10期（总第267期) 试验研究1禽沙门氏菌鉴别培养基和PCR 检测方法的建立张富友 宋 艳 徐煜琳 鞠孜敬 崔治中 孙淑红*（山东农业大学动物科技学院 山东 泰安 271018）摘要 禽沙门氏菌是常见的一种人畜共患病原菌，快速准确地检测对于防控沙门氏菌病非常重要。
传统的沙门氏菌检测方法准确，但操作繁琐、费时费力。
本研究拟建立准确快速的检测技术。
选择疑似发生沙门氏菌病的某种鸡群3个批次共计119份未出壳死胚样品，分别经BPW 增菌，SC 和TTB 分别增菌后，再利用XLD 鉴别培养基培养后，利用PCR 方法进行沙门氏菌的分离鉴定。
同时，所有样品均按照国家标准检测方法(国标法)进行沙门氏菌的分离鉴定。
结果显示，本研究建立的沙门氏菌快速检测方法与国标法相比，沙门氏菌检出率均为41.2%，吻合率100%；血清分型试验显示，该49株沙门氏菌均为鸡白痢沙门氏菌；本研究建立的检测方法用时3~6d ，而国家标准检测方法需要6~9d 。
本研究表明，禽沙门氏菌鉴别培养基和PCR 检测技术可准确、快速地完成沙门氏菌的检测，而且成本更低。
该技术方法可用于种鸡群沙门菌感染状态评估和调查分析以及规模化种禽场沙门菌净化，对生产实践具有重要的指导意义。
关键词 禽沙门氏菌 鉴别培养 国家标准 PCR中图分类号：S852.61+2 文献标识码：A 文章编号：1007-1733(2019)10-0001-03 禽沙门氏菌病是由不同血清型的沙门氏菌引起的禽类不同类型传染病的总称，根据病原体的抗原结构不同可以分为鸡白痢、禽伤寒和禽副伤寒[1]。
禽沙门氏菌在世界各地普遍存在，对养禽业危害很大[2]。
同时，部分血清型的沙门氏菌是人畜共患病原菌，防控禽沙门氏菌病对公共卫生有重要意义[3]。
目前国家标准检测方法(国标法)是用于禽沙门氏菌分离鉴定最常用的方法，该标准可保证检测结果的准确性，但是在疾病预防和疫情的应急处理中不能够适用。
鸡场沙门氏菌分离鉴定及药敏试验
试验研究空鸡场沙门氏菌分离鉴定及药敏试验乜英青（青海省贵德县农畜产品质量检验检测中心811799）摘要：本文对青海省贵德县鸡沙门氏菌的流行及耐药情况、最佳治疗和预防效果进行分析。
试验对该地部分鸡场病死鸡只进行细菌分离，用革兰氏染色、三糖铁试验、尿素酶试验、靛基质（吲哚）试验和赖氨酸脱羧酶试验进行菌株鉴定，并进行14种药物敏感性试验。
结果：试验成功分离到6株禽沙门氏菌，革兰氏染色均为红色，三糖铁试验和赖氨酸脱羧酶试验结果均为阳性，尿素酶试验和靛基质（吲哚）试验结果均为阴性。
药敏性试验结果显示，该地区禽场沙门氏菌对头孢噻肟、阿米卡星和多西环素的敏感率超80%,属高度敏感，而对阿莫西林、恩诺沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素具有不同程度的耐药性。
结论：禽沙门氏菌对鸡群的危害较大，鸡场需要定期进行沙门氏菌的药敏性试验才能更好地了解菌株耐药性，为合理选择抗菌药物和防治沙门氏菌感染提供参考依据遥关键词：禽沙门氏菌；分离鉴定；药敏试验沙门氏菌为肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物肠道内，是一种人畜共患性致病菌，严重威胁食品安全，国际兽疫局将其定为B类传染病。
鸡群感染沙门氏菌后可引发鸡白痢、鸡伤寒和禽副伤寒等疾病，且可通过垂直感染影响产蛋率和雏鸡存活率。
随着我国养鸡业的现代化和规模化发展，鸡群免疫力逐步下降，依赖疫苗免疫或抗生素药物来防治，虽然抗生素能有效控制禽沙门氏菌，但由于药物使用不当造成菌株耐药性越来越严重。
本文对贵德县青源土鸡养殖场沙门氏菌进行分离鉴定，并对分离到的菌株进行多种药物的敏感性试验，为当地鸡场抗菌药物的合理使用提供依据。
1材料与方法1.1试验材料1.1.1培养基营养琼脂培养基，SS琼脂培养基，三糖铁琼脂，尿素酶生化鉴定管，蛋白胨水培养基，赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照生化鉴定管均购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司。
1.1.2病料来源试验所用菌株来自贵德县青源土鸡养殖场所饲养的病死鸡，取其病料组织分离菌株共6株。
近几年我国部分地区鸡沙门氏菌的耐药分析
毛皮 动物掉毛… 脱毛现象直 接影响毛皮 的质量 。在
养 殖实践 中经常 出现 ，困扰着 养殖户 。本文针 对此 问题
进 行 了广 泛而深 入 的探 讨分析 ，并针 对原 因和 养殖 实践
提 出 了一 套 完 整 的防 治 措 施 。
锌 等 时可 出现脱 毛 、 自剪毛 、被 毛生成 障碍等现 象 。当
列 问 题 ， 笔 者 对 我 国 部 分 地 区 鸡 沙 门 氏 菌 耐 药 性 作 了 分
析 ，得 出该菌对 传统 的抗生 素如链 霉素 、新霉 素 、氟 哌 酸 、强 力霉素 不敏感 。但对 头孢 噻呋 、头孢 哌酮 、庆 大
霉 素 、卡 那 霉 素 、壮 观 霉 素 、 甲砜 霉 素 敏 感 。
沙 门氏菌病提 供参考 。喹 诺酮类 药如 恩诺沙星 、氧 氟沙
星 、 氟 哌 酸 对 鸡沙 门 氏 菌 也 有 一 定 治疗 效 果 。
鸡 自痢对许 多药物都产 生了耐药性 ，这与本地 区所使 用的抗菌药物 种类 有关，很 多人在不 了解病 因和治疗方法 的情 况下，盲 目用 药造 成沙 门杆 菌的耐药性增强 ，因此 ， 在临床选药时应根据药敏试 验结果选择 药物 ，同时还应考 虑联合用药、交叉用药、轮换用药、中西药结合等方法 。
生 长 。 因 此 ， 当 以 上 激 素 分 泌 紊 乱 时 可 造 成 被 毛 的 脱 落 。 例 如 ， 当 雌 激 素 过 剩 时 ， 雌 犬 可 发 生 左 右 对 称 脱
毛。
碱 性洗发 香波给犬 洗澡 ，由于犬 皮肤偏 中性 ，可破 坏犬
皮 肤 的酸 碱 平 衡 ， 继 而 ， 出 现 菌 群 紊 乱 、 细 菌 感 染 ，皮 肤 出现 红 疹 、 皮 疹 、 脱毛 等症 状 。
鸡沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验
鸡沙门氏菌的分离鉴定及药敏试验作者：强会萍等来源：《当代畜禽养殖业》 2017年第12期摘要：为了了解江苏省扬州地区鸡沙门氏菌的感染和耐药情况，采取对该地区5个鸡场98份病鸡组织进行细菌分离，并进行了药敏试验、血凝试验和致病性试验。
经过分离，得到24株沙门氏菌，血凝鉴定表明，有18株呈阳性，其中5株均能使雏鸡致死。
药敏试验结果表明，这5株沙门氏菌对甲硝唑、青霉素、替米考星和氨苄西林有高耐药性；对庆大霉素比较敏感。
沙门氏菌不仅耐药性特别严重，而且是危害该地禽类养殖场的主要病原菌。
关键词：沙门氏菌；分离鉴定；药敏试验沙门氏菌病是一种由沙门氏菌属细菌引起的一种人畜共患病。
而沙门氏菌对于食品安全构成严重威胁，我国规模化养鸡产业不断发展，在带来巨大经济效益的同时，也产生了难以避免的危害。
抗生素的使用，使得部分细菌产生极强的耐药性，如沙门氏菌。
针对这一要点，有关部门对江苏省扬州地区鸡沙门氏菌病原进行了分离鉴定和药敏试验，希望对今后防治该病提供扎实的理论依据。
1材料（1）病料来源。
收集的98份来自江苏省扬州地区5个鸡场，从2016年3月至2016年5月疑患沙门氏菌病的病料组织。
（2）培养基。
三糖铁琼脂（TSI）、SS营养琼脂培养基和HE营养琼脂培养基，南京某技术有限公司。
（3）沙门氏菌属诊断血清。
沙门氏菌A～F群“O”多价诊断血清,中国生物技术集团公司江苏生物制品研究所。
（4）试验药物。
痢菌净、替米考星、青霉素、甲硝唑、氨苄西林，江苏南京动物药业有限公司，批号：20150114；庆大霉素、头孢拉定、头孢唑啉，苏州微生物试剂有限公司，批号：20151335[2]。
（5）试验动物。
１日龄健康雏鸡,扬州某鸡场。
2方法（1）病料采集。
于发病地区采集病鸡，临床症状表现为怕冷，减食或废食，排乳白色稀薄黏腻粪便，肛门周围污秽，闭目呆立。
致死，剖检取其心、肝、脾、肺和肠于-20℃保存备用。
（2）沙门氏菌的分离鉴定。
实验室无菌，将病料组织划线接种于HE营养琼脂培养基和SS 营养琼脂培养基，37℃培养18h后观察，挑取直径约0.5mm的菌落进行革兰氏染色，将革兰氏阴性短杆菌接种于TSI中。
禽大肠杆菌病与沙门氏菌病：流行病学、病原、诊断、防治和公共健康的关注上十分近似
大肠杆 菌病和禽沙门氏菌病 ，它们的详细信息还未见报 荐为鉴定禽源性大肠杆菌的替代性技术 。 其它分子技术 ， 道， 因此 ， 本综述着重介绍与公共卫生 问题有关的禽大肠 如核糖分型和同工酶也被用于评价禽大肠杆菌克隆形成 杆菌病和禽沙门氏菌病的各个方面。 能力。一些克隆株对Ａ Ｅ 有特异性 ， ＰＣ 对共生和致病性分 离株进行 的小规模 比较显示８ ３％致病菌属于仅有 的５ 个
2024版沙门氏菌检验实验解析PPT
增加“无菌量筒：容量50mL、无菌均质杯、无菌均质袋、无菌广口瓶：容量500mL、无菌试管15mm×150mm、18mm×180mm、无菌接种环：10μL（直径约3mm）、1μL以及接种针”
对检验用器具规格明确，方便实验室选用
增加“生物安全柜”
对于实验室开展活菌操作、样本检测实验室生物安全等级需“BSL-2”，因此，增加此设备是生物安全必须。
明确接种菌液浓度为“0.5麦氏浊度”，接种量“2滴~3滴”，避免接种量过大导致假阳性；还有增加"接种混匀后滴加一层无菌液体石蜡进行密封"由于氰化钾不稳定容易分解失效，因此，加石蜡密封避免造成假阳性反应。
“符合表3中A1者，为沙门氏菌典型的生化反应”后面补充“进行血清学鉴定后报告结果”
明确的指出符合沙门氏菌典型的生化反应需要进行血清学鉴定后报告结果
调整可疑菌落初筛流程
流程图更清晰易懂
TTB选择性增菌改为：低背景菌36 ℃±1 ℃，高背景菌42 ℃±1 ℃原因：验证试验发现，对于生鲜样品，TTB 42℃比 TTB 36℃的选择性好，所以继续沿用；对于深加工样品，TTB 36℃比 TTB 42℃生长好，所以低背景菌采用36℃±1℃培养。如有需要，可将预增菌的培养物在2 ℃~8 ℃冰箱保存不超过72h，再进行选择性增菌。
2016版“必要时按表5进行沙门氏菌生化群的鉴定”修改为2024版中“必要时,按表5进行沙门氏菌种和亚种的生化鉴定”
“生化群”用“种和亚种”替代，更易懂;
在表5沙门氏菌种和亚种的生化鉴定中增加“肠炎沙门氏菌、邦戈尔沙门菌种名”以及肠炎沙门氏菌种内对应的6个亚种和生化群分型”;生化反应项增加“明胶酶、L(+)-酒石酸盐、半乳糖醛等8项”
主要变化
章节
新标准变更内容
鸡沙门氏菌脉冲场凝胶电泳分型研究
至转移 质 粒 ｐ Ｃｌｑ ． 建 重组 转 移质 ￣（ｓ ｎ Ｇ ５。将 ｐ Ｃｌ ＧＰ Ｓ ｌ －构 ｐ ｃ — Ｐ） Ｓ ｌ － ５转 染 Ｗ Ｒ 株 牛 痘病 毒 感染 的 Ｔ １ ３ Ｋ一 ４
今 日畜 牧 兽 医 固 ２ １ ０ 第 １期 ０年
切 酶 ｘｂ Ｉ 其全基 因组 ＤＮＡ进行 酶切 、 Ｆ Ｅ分型 ， ｆ ｅｔ Ｐ聚 类分析 软 件对 电泳结果进 行 分析 。结 ａ对 ＰＧ Ｉ ｏ Ｑｕ ｓ Ｆ ｎ 果显示． 共鉴 定 出 １ 株 鼠伤 寒 沙 门氏 茵、 株 圣保 罗 沙 门氏菌 、 １ １ ６株 阿姆 斯特 丹沙 门氏菌 、 ５株 亚拉 巴马 沙 门 氏茵 、 株 鸡 白痢 沙 门氏茵 、 １ ２株 纽 波特 沙 门氏 菌和 ２株 肠 炎 沙 门氏菌 ， 一共 １ ２个 Ｐ Ｇ Ｆ Ｅ型 。 实验 结 果表 明 ，
渗 透性 增加 ． 保 护 肠黏 膜屏 障功 能 。 能 鸡 沙 门 氏 菌 脉 冲 场 凝 胶 电 泳 分 型 研 究
为应 用脉 冲 场凝 胶 电泳 （ Ｆ Ｅ ｋ 分 子 水 平上 对 禽 源 沙 门氏 茵之 间的 差 别进 行 分析 和 研 究 ， 研 咒 采 Ｐ Ｇ ）ｋ 本
用 自动微 生物鉴 定仪 对 １ 株 疑 似 鼠伤寒 沙 门氏菌和 １ ２ ５株疑 似 鸡 白痢 沙 门氏菌进 行鉴 定 。以限制性核 酸 内
及结 肠 内容物 大肠 杆 菌数 ． 并分析 回肠上 皮 细胞 紧 密连接 蛋 白 ０ ｃ ｄｎ和 ｚ —１的表 达 。结 果显 示 ： ｃｌ ｉ ｕ ０ 与哺 乳 组相 比 ． 断奶 仔猪 饲 喂 基础 Ｅ粮 ，８ Ｅ龄 时血 浆 ｑ Ｄ一乳酸 、 ｌ ２ Ｉ － 内毒 素含 量 和 ＤＡ 活性显 著 升 高（＜ ．５， Ｏ Ｐ ０ ） 至 ０
禽源性沙门氏菌分离鉴定及耐药表型分析
文献标 志码 ： Ａ
文章编号 ： １ ０ ０ ２—１ ３ ０ ２ （ ２ ０ １ ３ ） １ ０— ０ １ ５ ９— ０ ２
沙门氏菌 （ Ｓ ａ ｌ ｍ ｏ ｎ ｅ ｌ ｌ ａ ） 为肠杆菌科沙门氏菌属成员 ， 绝大 多数沙门氏菌对人 和动物都 有致病性 ， 是 一种重要 的人畜共 患病 病原 ］ 。禽沙 门氏菌病 是 由沙 门氏菌 引起 的禽类 急性 或慢性疾病 的总称 ， 主要有鸡 白痢 、 禽 伤寒 、 禽副伤寒 ３种 ， 可
酮酸 、 诺 氟沙星的耐药率在 ７ ２ ． ７ ３ ％ ～１ ０ ０ ％之 间； 存 在着 ５种 耐药表型 ， 每个耐药表型均在 ４重或 ４重以上 ， 耐药最多 菌株可耐受 １ Ｏ种药物 。 关键词 ： 禽； 沙 门氏菌 ； 分离鉴定 ； 耐药表 型
中图分类号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ６
江苏农业科学
２ ０ １ ３年第 ４ ｌ 卷第 １ ０期
． ． — —１ ５ ９－ — － —
戴建 华， 吴 植 ， 刘俊栋 ， 等． 禽源 性沙 门氏菌分 离鉴定及耐药表型分析［ Ｊ ］ ．江苏农业科学， ２ ０ １ ３ ， ４ １ （ １ ０ ） ： １ ５ ９ — １ ６ １
禽源性沙 门氏菌分 离鉴定及 耐药 表型分析
戴建 华 ， 吴 植 ，刘俊 栋 ， 蔡 丙严
（ 江苏农牧科 技职业 学院 ， 江苏泰州 ２ ２ ５ ３ ０ ０）
摘要 ： 采用 常规方 法 ， 从江苏南通 、 泰州 、 扬州等地规模化 养禽场疑 似感染沙 门氏菌病料 中分离 出 ２ ２株沙 门氏菌 并进行血清学分型 ， 同时采 用 Ｋ—Ｂ法测定分离菌的耐药表 型。结果表 明 ， ２ ２株 分离菌属 于 ４个 血清群 ， 优势血 清群 为 Ｄ群 ， 占５ ９ ． １ ０ ％（ １ ３ ／ ２ ２ ） ， 优势血清型 为 ９ ： ｇ ， ｍ： 一， 占５ ０ ． ０ ０ ％； 所有菌 株对 甲氧胺 嘧啶、 阿米卡星 、 庆大霉素 、 萘啶
鸡沙门氏菌病的检测方法
另 外 ．笔 者 总 结 应 用 就 地 取 材 的
笔 者 总 结 经 验 告 诫 所 有 规 模 化 养 鸡场 （ 户） ，养 鸡 规 模 越 大 ，越 要 严 格
遵守 “ 适时出售”和 “ 全 进 全 出 ”，
些 农 村 常 见 药 材 、 食 物 等 ， 也 能 改
善 鸡 肉 品 质 ．并 且 还 可 以 实 现 增 重 与
试 剂直 接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试验 。为 沙 门氏菌检 验和诊 断提 供 了新 技术 。
２ ． ２ 乳 胶 凝 集 技 术
将 特 异 性 的抗 体包 被 在 乳 胶 颗 粒 上 ，通 过 抗 体 与 相 应 的
益 国际 化 给 沙 门 氏 菌 的 传 播 创 造 了新 的更 为 复 杂 的 机会 ． 中 国 的 情 况 比较 复 杂 ，家 鸡 养 殖 规 模 大 小 差 别 较 大 、水 平 参 差 不 齐 ，沙 门 氏 菌 感 染 的 控 制 方 法 有 限 。 随 着 生 活 水 平 的 提
细 菌 抗 原 结 合 。产 生 肉 眼 可 见 的凝 集 反应 。 通 常 此 法 需 获 得 细 菌 纯 培 育 物 ，再 将 培 养 物 与致 敏乳 胶 反 应 。
２ ． ３ 酶 联 免 疫 测 试技 术
高 ，人 们 对 食 品 安 全 越 来 越 重 视 ，对 人 类 食 品 安 全 构 成 潜 在
快 速 酶 触 反 应 是 根 据 细 菌 在 其 生 长 繁 殖 过 程 中 可合 成 和 释 放 某 些 特 异 性 的 酶 ，按 酶 的特 性 ．选 用 相 应 的 底 物 和 指 示 剂 ，将 它 们 配 制 在 相 关 的 培 养 基 中 。 根 据 细 菌 反 应 后 出 现 的
一株鸡白痢沙门氏菌的分离与鉴定
一株鸡白痢沙门氏菌的分离与鉴定畜牧兽医专接本0901：窦莉莎指导老师：陈素娟摘要：鸡白痢沙门氏菌病是危害雏鸡和成年鸡的一种接触感染性疾病。
2010年10月，扬州一养鸡户送来数只鸡至扬州大学动物医院就诊，根据流行病学的调查、临床症状、剖检的病例变化以及实验室诊断，确诊为鸡白痢沙门氏菌病；同时还对分离出的鸡白痢沙门氏菌菌株进行药敏试验，并根据药敏试验结果及时调整用药方案，从而使病情迅速得到控制。
关键词：鸡白痢沙门氏菌；分离；鉴定Isolation and identification of Salmonella pullorumUndergraduate: Lisha DouAdvisor: Sujuan ChenAbstract: Pullorum disease is an acute systemic disease in chicken. In October 2010, one chick-farmer sent a few chicken to Yangzhou University animal hospital for diagnosis from Yangzhou.According to the investigation of epidemiology, the symptom of clinic, the change of pathology and the diagnosis of laboratory, they were infected by Salmonella pullorum disease. Meanwhile, We also carried out the drug sensitive test about the Salmonella pullorum isolated. According to the result of the susceptibility test, We adjusted the drug regimen in time and the disease was controlled quickly.Key words:Salmonella pullorum; Isolation; Identification文献综述鸡白痢沙门氏菌(S. pullorum) 病(简称鸡白痢) 是危害雏鸡和成年鸡的一种接触感染性疾病。
浅析鸡沙门氏菌病的防治
S i y a n g t i a n d e浅析鸡沙门氏菌病的防治海力古·吐尔地（新疆尉犁县墩阔坦乡畜牧兽医站，新疆尉犁841599）沙门氏菌在自然界分布广泛，干燥、腐败和日光等环境因素有较强的抵抗力[1]。
鸡沙门氏菌病是由沙门菌属中的一种或多种沙门氏菌引起的鸡的急性或者慢性传染病。
对鸡来说，以2周内的雏鸡易感性最高。
在临床上将鸡白痢沙门氏菌引起的沙门菌病称为鸡白痢；鸡伤寒沙门氏菌引起的称为鸡伤寒；而由其他有鞭毛能运动沙门氏菌引起的称为鸡副伤寒。
1细菌特性本菌可在水中能存活2-3周，在粪便中能存活1-2个月，在冰冻土壤中可存活数月，在潮湿温暖的地方虽然能存活4-5周，但在干燥处有较强的抵抗力，可保持8-20周的活力[2]。
该菌对热的抵抗力不强，60摄氏度15分钟即可被杀灭。
对各种化学性消毒剂的抵抗力也不强，常规消毒剂的正常剂量就能达到消毒目的。
2传播方式沙门氏菌病常形成相当复杂的传播循环。
主要通过呼吸道、消化道或者眼结膜水平传播，也可以通过种蛋和繁殖器官进行垂直感染。
感染的小鸡大部分死亡，耐受鸡长期带菌，而后也能产卵，同时卵又带菌，如果作为种蛋使用，就会发生代代传递，一直带菌。
3流行病学特点对本属细菌最为易感的是鸡和火鸡。
其中，褐壳蛋鸡较白壳蛋鸡易感；母鸡较公鸡易感；雏鸡较成年鸡易感，而且多呈隐性感染。
沙门氏菌病的主要传染源是患病鸡只和带菌鸡。
3.1鸡白痢本病的主要传染源是病鸡和带菌鸡。
可以通过消化道水平传播，也可以通过种蛋垂直传播。
种鸡场一旦被感染，鸡群中一定会存在一定比例的病鸡和带菌鸡，其所产种蛋也会有部分带菌。
在孵化过程中可造成胚胎死亡，孵出以后弱雏、病雏的比例也会增加。
这些弱雏和病雏又会不断排出病菌继续感染同群的鸡只。
本病一年四季均可发生，所造成的损失和鸡场该病的净化程度、饲养管理水平以及预防措施是否适当有着密切关系。
3.2鸡伤寒本病主要发生于中年和成年鸡。
，其潜伏期为4-5天。
鸡沙门氏菌耐药性研究进展
工 作 研 究农业开发与装备 2019年第5期摘要：由于各种抗生素在养殖行业的使用，特别是蛋鸡产业抗生素的不规范使用，导致鸡沙门氏菌耐药菌株的不断出现，甚至出现多重耐药性，并且可能通过鸡及其产品传播给人，同时耐药菌株的出现导致沙门氏菌病治疗效果不理想，造成蛋鸡行业因沙门氏菌病而产生不必要的经济损失。
通过对鸡沙门氏菌耐药现状、产生耐药的原因以及对不同抗生素产生耐药的机理的研究进行了阐述，为鸡沙门氏菌的防治提供一定的参考。
关键词：鸡沙门氏菌；耐药；基因；机制沙门氏菌病是由沙门菌属不同菌株引起不同动物沙门氏菌病的总称，是一种人畜共患病，目前，已发现的沙门氏菌血清型共有2 500多种[1]。
禽类是沙门氏菌的主要宿主之一，各种日龄的禽类都能被感染，鸡沙门氏菌病已经给养鸡业带来巨大的威胁。
抗生素类药物作为预防、治疗细菌类疾病的首选药物在畜牧生产中被广泛使用，世界各地报道的沙门氏菌耐药问题越来越严重，耐药谱不断扩大。
关于沙门氏菌耐药方面的研究也越来越深入，本研究将沙门氏菌目前的耐药性研究情况进行阐述。
1 沙门氏菌耐药现状沙门氏菌呈全球性分布，全年均可发病，多发生夏秋季。
我国20世纪80年代以后开始报道有伤寒、副伤寒杆菌的多重耐药性发生[2]。
随着抗菌药物在临床上的广泛应用，细菌耐药性问题已经成为全球关注的一个热点。
我们对临床分离的20株蛋鸡源沙门氏菌进行分析发现：全部菌株都表现了不同程度的耐药性，且耐8种药物以上的达到了80％，对氨苄西林、链霉素、红霉素、多粘菌素的耐药达到95％，对西环素、奥格门汀和氟苯尼考的耐药率分别达80％以上。
美国和欧盟在对沙门氏菌流行病学研究时发现，从耐药性的分子水平而言，人和动物分离株难以区别，但一旦某种抗生素在批准用于兽医几年后，多重耐药沙门氏菌将迅速增加。
多重耐药可由染色体上多重耐药决定簇或基因突变介导，也可由识别耐药基因或水平转移的一组耐药基因而发展形成，这种耐药基因的扩散已引起临床抗生素耐药菌株的快速出现。
鸡沙门氏菌病的临床症状、病理变化与治疗
鸡沙门氏菌病的临床症状、病理变化与治疗作者：王大庚来源：《现代畜牧科技》 2018年第6期摘要：鸡沙门氏菌病是由于感染某些特定血清型沙门氏菌而导致的一类传染性疾病的总称，常见的有鸡白痢病、鸡伤寒、鸡副伤寒等。
病鸡通常以感染单一血清型为主，少数地区会出现混合感染的现象，对鸡健康造成明显危害，严重损害养鸡场的经济效益。
现概述该病的防治措施，供广大养鸡户参考。
关键词：鸡；沙门氏杆菌；传播途径；临床症状；病理变化；治疗；定期检疫中图分类号：S858. 31文献标识码：B文章编号：2095-9737(2018)06-0117-011 传播途径该病可通过两种途径传播，即水平传播和垂直传播。
水平传播是指病菌在同一鸡群内、不同鸡群之间以及养鸡场之间的进行传播，主要是通过污染有感染鸡排出病菌的饲料、水源、饲养设备、鸡场，或者通过媒介携带，如昆虫、老鼠、鸟类以及饲养员等，从而导致其他健康鸡被感染。
垂直传播是指通过感染种鸡或者污染病菌的种蛋，导致后代雏鸡发病。
如果种蛋表面或者蛋膜内存在病菌，可能会导致雏鸡在啄壳期就被感染。
该病散发的主要途径是通过孵化感染雏鸡或者小母鸡进行接触传播，这种传播能够在孵化期间发生。
2 临床症状鸡白痢，通常是孵出的鸡苗弱雏容易感染，在5-7日龄表现出明显的症状，部分甚至没有表现出任何症状就发生死亡，病鸡主要症状是怕冷、聚群，双翅下垂，停止采食，排出黏性稀粪，呈白色、淡绿色或者淡黄色，且粪便往往会黏附在肛门周围，影响排粪，营养不良，呼吸加速；成年鸡患病产蛋量下降，且受精率、孵化率以及健雏率明显降低。
鸡伤寒，雏鸡患病的症状类似于鸡白痢，成年鸡主要是精神沉郁，羽毛蓬松杂乱，鸡冠苍白、萎缩，发生腹泻，排出黄绿色的粪便，急性型大约经过7天发生死亡。
鸡副伤寒，小于10日龄的雏鸡没有表现出任何明显症状就发生死亡，大于10日龄患病后表现出精神不振，食欲废绝，但渴欲增强，被毛蓬松，怕冷，排出水样粪，部分呼吸困难，具有较高的死亡率。
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第二篇研究内容第1章山西省鸡沙门氏菌病流行特性研究鸡沙氏门菌病（包括鸡白痢、鸡伤寒和鸡副伤寒）一直是影响养鸡业的重要细菌性传染病之一，近年来呈现扩大流行的趋势。
为了解山西省鸡沙门氏菌病流行情况，我们对省内有代表的养鸡场进行了鸡沙门氏菌病病原、传播途径等进行了分离、调查、分析和研究。
1 材料与方法1.1 材料⑴培养基营养琼脂培养基、麦康凯琼脂、S.S琼脂、营养肉汤、三糖铁培养基、微量生化鉴定管,均购自杭州天和生物制品公司。
B-P增菌液、亚硒酸盐增菌培养基（SF）基础购自北京奥博星生物技术责任有限公司。
⑵鸡沙门氏菌因子血清购自卫生部兰州生物制品研究所。
⑶药敏纸片恩诺沙星、氨苄青霉素、卡那霉素、阿米卡星、庆大霉素、链霉素、左旋氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星、头孢噻呋、购自购自杭州天和生物制品公司, 批号: 20080806。
⑷实验动物1日龄蛋公雏，购自山西省军区种鸡场，经平板凝集反应检测，鸡白痢和副伤寒均为阴性的种鸡蛋孵出的雏鸡。
⑸菌株分离材料①在山西市场上销售的部分“浓缩饲料”、“全价配合饲料”；②部分种鸡场2008年正值生产的种鸡泄殖腔棉拭子；③部分种鸡场2008年正值生产的种鸡所产种蛋；④部分种鸡场周龄内的父母代雏鸡；⑤部分种鸡场、规模化商品鸡场鸡舍地面、饲槽；⑥周龄内疑似鸡沙门氏菌病死亡的临床病例。
1.2 方法1.2.1 分离材料的采集1.2.1.1 选择在山西境内销售的鸡用“浓缩饲料”和“全价饲料”适量，于无菌包装袋中，尽快送往实验室。
1.2.1.2 选择山西省规模化父母代种鸡场，对不同批次正值生产的种鸡，以每批10只无菌采集泄殖腔棉拭子。
1.2.1.3 无菌采集来自不同祖代鸡场的周龄内父母代雏鸡泄殖腔棉拭子。
1.2.1.4 选择代表性的种鸡场和商品蛋鸡场，无菌采集鸡舍地面和饲槽的样本。
具体方法是：在被选择的鸡舍地面和饲槽各选2个点，每点面积为5×5厘米的正方形（规板），以灭菌的棉拭子蘸取B-P前增菌液，在采样点5×5厘米的地面或饲槽上，滚动涂擦两次后，剪断棉拭子手持端，使其落入试管的增菌液中。
1.2.1.5 部分种鸡场的新鲜种蛋，实验室无菌条件下取其卵黄0.5毫升。
1.2.1.6 无菌操作采集疑似鸡沙门氏菌病死亡的雏鸡肝组织或胆囊，冷藏保存3小时内进行培养分离。
1.3 实验室分离培养1.2.1 将以上浓缩饲料、全价饲料，泄殖腔棉拭子，地面、饲槽棉拭子，种蛋卵黄经过24小时，37℃恒温B-P前增菌培养，接种于SF增菌液中24小时，无菌条件下接种于S.S琼脂培养基，37℃恒温培养24小时。
1.2.2 将死亡雏鸡的病变肝组织或胆汁，无菌条件下接种于S.S琼脂培养基，37℃恒温培养24小时。
1.4 分离菌的培养特性挑取S.S琼脂培养基上，呈灰色、圆形、中心带黑色的可疑菌落，接种于三糖铁琼脂斜面、营养肉汤等培养基中,37℃培养24小时，观察结果。
1.5 分离菌的生化试验和血清型鉴定1.5.1 形态及生化试验按常规方法进行形态结构与染色特性观察；用分离菌的纯培养物进行糖发酵试验、靛基质试验等生化反应。
1.5.2 运动性试验以灭菌的接种针蘸取细菌的纯培养物，垂直穿刺接种于半固体培养基的琼脂柱内，置37℃温箱内培养18～24h，取出观察，运动性的细菌沿穿刺线向四周扩散生长，使培养基变混浊；无运动性的细菌只沿穿刺线生长，周围的培养基仍保持澄清。
1.5.3 血清型鉴定挑取典型三糖铁培养物进行沙门氏A--F多价O诊断血清、O单因子血清玻片凝集反应，并设生理盐水对照观察。
1.6 动物感染实验1日龄雏鸡130只,随机分为15组, 第1～ 13组皮下接种培养18 小时的分离鉴定的沙门氏菌肉汤培养液0. 2 mL，具体地：取从以上六种材料中，分离并鉴定为沙门氏菌的菌株各两株，共12株作动物感染试验；剩余1组用同样的方法接种生理盐水作为对照。
每6 小时观察发病和死亡情况, 并记录到24 小时。
1.6 药敏试验按WHO推荐的Kir-by-Baner法进行。
2结果沙门氏菌实验室分离结果2.1分离菌的培养及形态特性共分离培养鸡沙门氏菌媒介材料及病理材料961份（羽），详细结果见表1.1.分离菌的形态特征数 量 （ 份或羽） BP 前增菌+（份或羽）SF 增菌+（份或羽）SS 培养 +（份或羽） TSI 接种 +（份或羽）饲 料80 80 80 8 4 鸡舍环境160 160 160 11 3 成鸡肛拭300 300 300 30 17 种 蛋100 30 30 20 15 种雏肛拭200 200 200 44 40 疑似病料(2006-2008年）121 -- -- 114 98 961 227 177表1.1 分离菌的形态特征Tab.1.1 The morphological characteristic of isolated strainsBP 增菌液有菌生长，一般显示淡黄色混浊；SF 增菌液有菌生长，培养液多红色并混浊。
SS 琼脂上菌落呈灰色、边缘整齐、多数菌落的中心带有黑色。
SS 琼脂上的可疑菌落三糖铁（TSI ）琼脂培养特性为：底层变为黄色，斜面维持原有的红色，有的菌株培养基中有黑色硫化氢产生，有的菌株培养基底部高层有气泡产生。
同时接种于营养肉汤中，培养结果为液体均匀混浑浊，不形成菌膜或菌环。
半固体培养结果为皆无运动性。
三糖铁琼脂细菌革兰氏染色，镜检，为革兰氏阴性小杆菌。
2.2生化鉴定试验对TSI 琼脂培养基上符合沙门氏菌生长特征的177株菌中的91株进行了生化鉴定（其中饲料4株、环境3株、成鸡拭子8株、种蛋7株、种雏拭子20株、病料49株），结果见表1.291株分离菌生化鉴定结果葡 萄 糖 麦芽糖 蔗 糖 乳 糖蕈 糖甘露醇肌 醇卫矛醇 山梨醇 M.R 试验 V .P 试验 H 2S 试验+ + - - = + + - + - + - + - + - 饲料4 3 1 4 4 4 4 4 1 3 0 4 4 4 1 3 环境3 2 1 3 3 3 3 3 0 3 0 3 3 3 0 3 成鸡拭子8 5 3 8 8 8 8 8 2 6 1 7 8 8 3 5 种蛋7 3 4 7 7 7 7 7 0 7 1 6 7 7 1 6 种雏拭子20 6 14 20 20202020 3 17 5 15 20 20 4 16病料49 1039 49 49494949 5 441237 49 49 9 40阳性率 91 /91 29/91 62 /91 91 /91 91/9191/9191/9191/9111/9180/9119/9172 /91 91 /91 91 /91 18/9173/91表 1.2 91株分离菌生化鉴定结果Tab 1.2 The identification results of 91 strains by biochemical tests从表1.2可看出被检菌株的生化反应结果皆符合鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌的生化特性，但其中菌株对麦芽糖、卫矛醇、山梨醇、H2S的反应无论是同一种媒介材料和病料，还是不同的媒介材料都无规律。
根据菌株对麦芽糖生化反应为依据，区别鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌（即发酵麦芽糖的为鸡伤寒沙门氏菌、否则为鸡白痢沙门氏菌），本研究鸡白痢沙门氏菌占68.13%，鸡伤寒沙门氏菌占31.87%。
2.3血清学鉴定将三糖铁培养基上的177株菌与鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌阳性诊断血清进行玻板凝集反应，结果全部呈阳性凝集，并且大多呈强阳性凝集，盐水对照凝集反应阴性。
对其中20株进行了0血清型分析，结果皆为血清型09、012类型株。
2.4本动物感染试验结果各组在皮下接种6小时后，部分鸡出现不同程度精神萎顿、嗜睡的临床病症，到24小时可见部分死亡，详细情况是：饲料组（第1、2组）3只、5只；环境组（第3、4组）4、5只；成鸡拭子组（第5、6组）2、4只；种蛋组（第7、8组）5、5只；种雏拭子组（第9、10组）5、7只；病料组（第11、12组）8、9只；盐水对照组（第13组）0只。
死亡鸡肝脏皆分离出了与接种菌同样的沙门氏菌。
2.5 20株菌对10种药物敏感性试验结果见表1.3项目高敏中敏耐药株数比例% 株数比例% 株数比例%阿米卡星 20 100 - - - - 卡那霉素 18 90 2 10 - - 庆大霉素 13 65 4 20 3 15 链霉素 5 25 3 15 12 60 左旋氧氟沙星11 55 4 20 5 25 环丙沙星 14 70 1 5 5 25 诺氟沙星 2 10 3 15 15 75 头孢噻呋 20 100 - - - - 恩诺沙星 5 25 5 20 10 50 氨苄青霉素 0 0 2 10 18 90表1.3 药敏结果Tab 1.3 The results of susceptibility test结果说明：卡那霉素、阿米卡星、头孢噻呋高敏比例为90% ～100%效果最好，可作为以临床防治的首选药物；庆大霉素、环丙沙星抑菌能力次子，高敏比例为65%～70%，临床谨慎使用；链霉素、诺氟沙星和氨苄青霉素敏感性低，耐药比例为60%～90%，临床避免使用。
3讨论3.1媒介材料中3日龄内的父母种鸡，泄殖腔分离阳性率为10%，父母代种蛋的分离阳性率为4%，这些是鸡沙门氏菌病传入我省并蔓延的重要原因，提醒广大养殖者，应选择无鸡沙门菌病的祖代或父母代种鸡场引进雏鸡。
3.2 饲料中致病菌的分离率约为 8.7%，环境中为 5 %，病鸡的阳性率为100%，这些媒介是该病在山西省水平传播的重要因素。
应加强饲料原料病原菌的控制，严格鸡舍的消毒，病死鸡的无害化处理以及亚健康鸡的预防和治疗。
3.3 鸡白痢沙门氏菌属于胞内寄生菌，当遇到抗菌素时一方面可躲进动物体细胞内避免药物的作用，另一方面产生耐药性，所以临床上盲目地或超剂量、超疗程使用抗生素是防控该病之大忌，科学的用药方法应该是通过药敏试验，使用高度敏感的药物，此外还可以多种敏感性药物轮换使用或用不常使用的药物。
4小结鸡沙门氏菌病包括鸡白痢、鸡伤寒和鸡副伤寒三种病，一直是鸡的重要传染病。
通过对鸡沙门氏菌可能存在的媒介材料进行了分离和鉴定，结果表明，被分离的媒介材料中皆有鸡沙门氏菌病病原菌的存在，为血清型09、012类型株。
这为从生物安全技术方面有效的控制该病，提供了科学的依据。
第2章PCR技术在鸡沙门氏菌分离鉴定中的应用当前应用在鸡沙门氏菌检测的主要途径就是利用，其在微生物学上的特性，对其进行生化和血清学上的鉴定，这个过程需要5-7天，时间较长。
为此国外的一些专家在PCR技术上对鸡沙门氏菌进行了一些研究和探索，取得了一定的成果。
因此我根据山西地区鸡沙门氏菌的特点，在PCR技术上对其进行了些研究。