第四节基因工程抗体和抗体工程
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第四节基因工程抗体和抗体工程
抗原的测定有： ①夹心法 ②间接法 ③竟争法
常用标记抗体试剂有 ①HBsAg放射性核素标记抗体 诊断试剂
第四节基因工程抗体和抗体工程
②HBeAg放射性核素标记抗体 诊断试剂
③HAV抗原放射性核素标记抗体 诊断试剂
④AFP放射性核Leabharlann Baidu标记抗体 诊断试剂
⑤CEA放射性核素标记抗体 诊断试剂
二、免疫标记技术用的抗体 类试剂
⒈荧光抗体诊断试剂 ⑴荧光抗体的制备 ⑵免疫荧光测定方法
⒉免疫酶抗体诊断试剂 ⑴免疫酶染色法用抗体诊断试剂 ⑵酶免疫测定用抗体诊断试剂 ①HBsAg酶标诊断试剂 ②HBeAg酶标诊断试剂
第四节基因工程抗体和抗体工程
③HAVAg（甲型肝炎病毒抗原） 酶标诊断试剂
④测定HIV（人免疫缺陷病毒）抗 原的酶标抗体诊断试剂
⑤甲胎蛋白（AFP）酶标抗体诊 断试剂
⑥癌胚抗原（CEA）的酶标抗体 诊断试剂
第四节基因工程抗体和抗体工程
第四节基因工程抗体和抗体工程
⒊放射免疫用抗体诊断试剂 放射免疫技术是将放射性核素 分析的高度灵敏性与抗原抗体 反应的特异性结合起来建立的 检测技术。 放射性核素标记抗体的方法： ①氯胺-T法 ②Iodogen氏法
第四节基因工程抗体和抗体工程
⒉免疫毒素的制备方法 ⑴毒素的来源
细菌毒素 植物毒素 ⑵载体的种类 ①小分子抗体FV或SCFV ②细胞生长因子 ③激素 ④CD4
第四节基因工程抗体和抗体工程
⑶制备方法 先克隆毒素基因，再利用基因重组技 术去除毒素中非特异性细胞结合部位 基因。经改造的毒素基因，再与载体 基因重组，转入受体菌中表达，形成 融合蛋白，再经过纯化就得到重组免 疫毒素。
⒉抗体类药物逆转耐药性 肿瘤细胞对抗原药物可产生多药耐药 性（MDR）。 MDR是由基因调控的，其编码蛋白 称为P糖蛋白，其中P170是与肿瘤 耐药相关的主要蛋白，由Mdr1基因 编码，1280氨基酸残基，分子量 170K。
第四节基因工程抗体和抗体工程
认为P蛋白是ATP酶依赖性药泵，药物 进入细胞后与P蛋白结合，利用ATP水 解释放的能量将药物泵出胞外，使胞 内药物蓄积减少，因而产生耐药性。
第四节基因工程抗体和抗体工程
建立预定位技术需解决3个问题： ①抗体在肿瘤组织滞留要7天以上。 ②Ab-DTPA偶联物比较稳定； ③内源性金属离子对DTPA的封闭 作用要小。
第四节基因工程抗体和抗体工程
第六节 抗体治疗药物
以抗体为载体的导向治疗药物，还不成 熟。
一、放射性核素标记的抗体治疗药物 抗体作为放射性核素的导向载体，标记
第四节基因工程抗体和抗体工程
三、基因工程抗体表达
⒈原核细胞表达 ⒉真核细胞表达 ⒊转基因植物表达 ⒋转基因动物表达
第四节基因工程抗体和抗体工程
第五节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体类试剂 ⒈鉴定病原菌的抗体试剂 ⑴常用诊断血清的品种和用途
①沙门氏菌属诊断血清 ②志贺氏菌属诊断血清 ③病原性大肠埃希氏菌诊断血清
第四节基因工程抗体和抗体工程
三、导向诊断药物
放射性核素标记抗体 肿瘤放射免疫显像 放射免疫显像优点： ①在体内确切肿瘤定位作用，准确性 达90%，灵敏度达100%。 ②在体内可检出0.5cm大小的病灶，并 可检出肺脑的转移灶。
第四节基因工程抗体和抗体工程
③小分子抗体易到达肿瘤部位， 可显著提高N/NT值。
第四节基因工程抗体和 抗体工程
2020/11/29
第四节基因工程抗体和抗体工程
一、噬菌体抗体库技术的 基本方法
⒈获取目的基因 ⒉抗体库技术的载体 ⒊淘筛 ⒋表达与鉴定
第四节基因工程抗体和抗体工程
二、噬菌体抗体库技术的 特点
⒈模拟天然全套抗体库 ⒉避开了人工免疫和杂交瘤技术 ⒊可获得高亲和力的人源化抗体
第四节基因工程抗体和抗体工程
3rew
演讲完毕，谢谢听讲!
再见，see you again
2020/11/29
第四节基因工程抗体和抗体工程
操作简便用量小。放射性核素标记的 抗体对肿瘤细胞杀伤较大。
第四节基因工程抗体和抗体工程
二、抗癌药物偶联的抗体药物 ⒈常用的抗癌药物
氨甲喋呤（MTX）、阿霉素 （ADM）、丝裂霉素（MMC）等。 以人血浆白蛋白作为中间载体，可 明显提高每分子抗体所携带的MTX 量，使体外细胞毒性体高二倍。
第四节基因工程抗体和抗体工程
④抗体在肿瘤部位可保留6～9日 ⑤能观擦抗体在血中的半衰期和
可能出现的不良反应。
第四节基因工程抗体和抗体工程
放射免疫显像定位技术
将抗肿瘤单克隆抗体（Ab）与二乙基 三胺五乙酸（DTPA）在体外偶联成 Ab-DTPA，再注入体内后，就能与体 内组织相结合。由于抗体分子量大， 需3天完成。3天后注入放射性核素In113M（半衰期100m），因DTPA是重 金属离子络合剂，所以In-113M可以结 合到DTPA分子上，使肿瘤组织显像。 这一过程在2小时内可完成。
第四节基因工程抗体和抗体工程
三、毒素偶联的抗体药物
⒈免疫毒素及其换代制品 在导向药物中，毒素和抗体的交联物 称为免疫毒素。 第一代免疫毒素是包含有A、B链完整 毒素和抗体的交联物，其中B链非特异 性结合，使其仅在体外应用。
第四节基因工程抗体和抗体工程
第二代免疫毒素是利用抗体或抗体片 段与毒素的A链或与A链相似的单链核 糖体失活蛋白的结合物。因避免了第 一代免疫毒素的非特异性，故能在体 内有一定的抗肿瘤作用。 第三代免疫毒素重组免疫毒素用基因 克隆方法改造毒素基因和小分子抗体 基因重组表达。特异性好、稳定性强、 渗透性佳、免疫源性低、可大量制备。
第四节基因工程抗体和抗体工程
⑵诊断血清的制备步骤 ①制备细菌抗原 ②免疫动物和制备抗体血清
⑶诊断血清诊断方法
第四节基因工程抗体和抗体工程
第四节基因工程抗体和抗体工程
⒉乙型肝炎病毒表面抗原的 反向被动血凝诊断试剂
⒊妊娠诊断试剂 ⒋抗ABO血型系统血清
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抗原的测定有： ①夹心法 ②间接法 ③竟争法
常用标记抗体试剂有 ①HBsAg放射性核素标记抗体 诊断试剂
第四节基因工程抗体和抗体工程
②HBeAg放射性核素标记抗体 诊断试剂
③HAV抗原放射性核素标记抗体 诊断试剂
④AFP放射性核Leabharlann Baidu标记抗体 诊断试剂
⑤CEA放射性核素标记抗体 诊断试剂
二、免疫标记技术用的抗体 类试剂
⒈荧光抗体诊断试剂 ⑴荧光抗体的制备 ⑵免疫荧光测定方法
⒉免疫酶抗体诊断试剂 ⑴免疫酶染色法用抗体诊断试剂 ⑵酶免疫测定用抗体诊断试剂 ①HBsAg酶标诊断试剂 ②HBeAg酶标诊断试剂
第四节基因工程抗体和抗体工程
③HAVAg（甲型肝炎病毒抗原） 酶标诊断试剂
④测定HIV（人免疫缺陷病毒）抗 原的酶标抗体诊断试剂
⑤甲胎蛋白（AFP）酶标抗体诊 断试剂
⑥癌胚抗原（CEA）的酶标抗体 诊断试剂
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⒊放射免疫用抗体诊断试剂 放射免疫技术是将放射性核素 分析的高度灵敏性与抗原抗体 反应的特异性结合起来建立的 检测技术。 放射性核素标记抗体的方法： ①氯胺-T法 ②Iodogen氏法
第四节基因工程抗体和抗体工程
⒉免疫毒素的制备方法 ⑴毒素的来源
细菌毒素 植物毒素 ⑵载体的种类 ①小分子抗体FV或SCFV ②细胞生长因子 ③激素 ④CD4
第四节基因工程抗体和抗体工程
⑶制备方法 先克隆毒素基因，再利用基因重组技 术去除毒素中非特异性细胞结合部位 基因。经改造的毒素基因，再与载体 基因重组，转入受体菌中表达，形成 融合蛋白，再经过纯化就得到重组免 疫毒素。
⒉抗体类药物逆转耐药性 肿瘤细胞对抗原药物可产生多药耐药 性（MDR）。 MDR是由基因调控的，其编码蛋白 称为P糖蛋白，其中P170是与肿瘤 耐药相关的主要蛋白，由Mdr1基因 编码，1280氨基酸残基，分子量 170K。
第四节基因工程抗体和抗体工程
认为P蛋白是ATP酶依赖性药泵，药物 进入细胞后与P蛋白结合，利用ATP水 解释放的能量将药物泵出胞外，使胞 内药物蓄积减少，因而产生耐药性。
第四节基因工程抗体和抗体工程
建立预定位技术需解决3个问题： ①抗体在肿瘤组织滞留要7天以上。 ②Ab-DTPA偶联物比较稳定； ③内源性金属离子对DTPA的封闭 作用要小。
第四节基因工程抗体和抗体工程
第六节 抗体治疗药物
以抗体为载体的导向治疗药物，还不成 熟。
一、放射性核素标记的抗体治疗药物 抗体作为放射性核素的导向载体，标记
第四节基因工程抗体和抗体工程
三、基因工程抗体表达
⒈原核细胞表达 ⒉真核细胞表达 ⒊转基因植物表达 ⒋转基因动物表达
第四节基因工程抗体和抗体工程
第五节 抗体诊断试剂
一、血清学鉴定用的抗体类试剂 ⒈鉴定病原菌的抗体试剂 ⑴常用诊断血清的品种和用途
①沙门氏菌属诊断血清 ②志贺氏菌属诊断血清 ③病原性大肠埃希氏菌诊断血清
第四节基因工程抗体和抗体工程
三、导向诊断药物
放射性核素标记抗体 肿瘤放射免疫显像 放射免疫显像优点： ①在体内确切肿瘤定位作用，准确性 达90%，灵敏度达100%。 ②在体内可检出0.5cm大小的病灶，并 可检出肺脑的转移灶。
第四节基因工程抗体和抗体工程
③小分子抗体易到达肿瘤部位， 可显著提高N/NT值。
第四节基因工程抗体和 抗体工程
2020/11/29
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一、噬菌体抗体库技术的 基本方法
⒈获取目的基因 ⒉抗体库技术的载体 ⒊淘筛 ⒋表达与鉴定
第四节基因工程抗体和抗体工程
二、噬菌体抗体库技术的 特点
⒈模拟天然全套抗体库 ⒉避开了人工免疫和杂交瘤技术 ⒊可获得高亲和力的人源化抗体
第四节基因工程抗体和抗体工程
3rew
演讲完毕，谢谢听讲!
再见，see you again
2020/11/29
第四节基因工程抗体和抗体工程
操作简便用量小。放射性核素标记的 抗体对肿瘤细胞杀伤较大。
第四节基因工程抗体和抗体工程
二、抗癌药物偶联的抗体药物 ⒈常用的抗癌药物
氨甲喋呤（MTX）、阿霉素 （ADM）、丝裂霉素（MMC）等。 以人血浆白蛋白作为中间载体，可 明显提高每分子抗体所携带的MTX 量，使体外细胞毒性体高二倍。
第四节基因工程抗体和抗体工程
④抗体在肿瘤部位可保留6～9日 ⑤能观擦抗体在血中的半衰期和
可能出现的不良反应。
第四节基因工程抗体和抗体工程
放射免疫显像定位技术
将抗肿瘤单克隆抗体（Ab）与二乙基 三胺五乙酸（DTPA）在体外偶联成 Ab-DTPA，再注入体内后，就能与体 内组织相结合。由于抗体分子量大， 需3天完成。3天后注入放射性核素In113M（半衰期100m），因DTPA是重 金属离子络合剂，所以In-113M可以结 合到DTPA分子上，使肿瘤组织显像。 这一过程在2小时内可完成。
第四节基因工程抗体和抗体工程
三、毒素偶联的抗体药物
⒈免疫毒素及其换代制品 在导向药物中，毒素和抗体的交联物 称为免疫毒素。 第一代免疫毒素是包含有A、B链完整 毒素和抗体的交联物，其中B链非特异 性结合，使其仅在体外应用。
第四节基因工程抗体和抗体工程
第二代免疫毒素是利用抗体或抗体片 段与毒素的A链或与A链相似的单链核 糖体失活蛋白的结合物。因避免了第 一代免疫毒素的非特异性，故能在体 内有一定的抗肿瘤作用。 第三代免疫毒素重组免疫毒素用基因 克隆方法改造毒素基因和小分子抗体 基因重组表达。特异性好、稳定性强、 渗透性佳、免疫源性低、可大量制备。
第四节基因工程抗体和抗体工程
⑵诊断血清的制备步骤 ①制备细菌抗原 ②免疫动物和制备抗体血清
⑶诊断血清诊断方法
第四节基因工程抗体和抗体工程
第四节基因工程抗体和抗体工程
⒉乙型肝炎病毒表面抗原的 反向被动血凝诊断试剂
⒊妊娠诊断试剂 ⒋抗ABO血型系统血清
第四节基因工程抗体和抗体工程
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