公共场所空气微生物检测方法――细菌总数测定(精)
空气中微生物的检测方法
空气中微生物的检测方法空气中微生物的检测对于环境卫生和公共健康至关重要。
微生物污染可以导致空气质量下降，引发过敏反应和传染疾病。
因此，为了保护人们的健康，科学家和卫生专家需要使用可靠和准确的方法来监测和测量空气中的微生物。
以下是一些常用的空气中微生物检测方法：1.空气采样器：空气采样器是一种用于收集空气样本中微生物的设备。
它可以通过空气中的微粒或直接通过气体来捕捉微生物。
常见的空气采样器包括活性气溶胶采样器（ASPs）和生物气溶胶采样器（BASs）。
这些设备使用采样头或滤纸等材料来捕获空气中的微生物。
2.培养方法：传统的微生物检测方法通常使用培养基来培养空气样本中的微生物。
通过将空气样本与适当的培养基接触，在适宜的温度和湿度条件下培养微生物。
然后，通过观察和计数可见生长的菌落来确定微生物的存在与数量。
3.聚合酶链式反应（PCR）：PCR是一种用于检测和复制DNA分子的分子生物学技术。
在空气微生物检测中，研究人员可以使用PCR技术来检测和鉴定空气样本中的微生物DNA。
PCR方法具有快速、敏感和特异性高的优点，可以快速确定微生物种类和浓度。
4.测序方法：测序方法可以进一步确定和分析微生物样本中的微生物种类和群落结构。
通过对微生物DNA进行高通量测序，可以获取更详细的信息，包括微生物种类、基因组组成和遗传变异。
综上所述，空气中微生物的检测方法包括空气采样器、培养方法、PCR和测序方法。
这些方法可以帮助科学家和卫生专家了解空气中微生物的种类、浓度和群落结构，从而采取相应的措施来提高空气质量和保护公共健康。
公共场所公共用品用具微生物、室内空气细菌总数采样操作规程
1.目的公共场所公共用具微生物采样和公共场所/室内空气细菌总数采样，应当规范采样操作、正确使用仪器，保证样品的准确、有效性。
2.文件说明根据公司情况，最为常见、最难的采样类别就是以上两种，以后遵照本文件进行现场检测采样工作。
其他像室内空气质量、水质监测等各类采样和环境采样无实质性的区别，就不一一说明。
3.公共场所公共用具微生物采样方法3.1一般要求随机抽取清洗消毒后准备使用的公共用品、用具，无菌操作，使用灭菌干燥棉试子，于10ml灭菌生理盐水内浸润（吸取约1ml 溶液）后，在用品用具的适当部位来回均匀涂抹进行样品采集，再用灭菌剪刀剪去棉签手接触的部分，将棉拭子放入剩余的9ml 生理盐水内，4h内送检。
3.2采集部位与采集面积3.2.1 杯具在杯具内、外缘与口唇接触处，即1cm-5cm高处一圈采样。
采样总面积为502cm。
3.2.2棉织品1）在毛巾、枕巾、浴巾对折后两面的中央5cm×5cm(252cm)面积范围内分别均匀涂抹5次，每252cm采样面积为1份样品，每件用品共采集2份样品。
2）在床单、被单的上下两部即与颈部、脚部接触部位5cm×5cm(252cm采样面cm)面积范围内分别均匀涂抹5次，每252积为1份样品，每件用品共采集2份样品。
3）睡衣、睡裤随机选择2个5cm×5cm(252cm)面积范围内分别均匀涂抹5次，每252cm采样面积为1份样品，每件用品共采集2份样品。
3.2.3洁具1）浴盆：在盆内一侧壁二分之一高度及盆底中央5cm×5cm(252cm)范围内分别涂抹采样，每252cm采样面积为1份样品，每件用品共采集2份样品。
2）脸（脚）盆：在盆内二分之一高度相对两侧壁5cm×5cm(252cm)范围内分别涂抹采样，每252cm采样面积为1份样品，每件用品共采集2份样品。
3）坐便器：在坐便圈前部弯曲处选择两个5cm×5cm(252cm)范围内分别涂抹采样，每252cm采样面积为1份样品，每件用品共采集2份样品。
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定公共场所的空气质量对人们的健康和舒适度有着重要影响。
其中，微生物的存在是一个重要的指标，尤其是细菌的总数测定。
本文将介绍公共场所空气微生物检验的方法，重点关注细菌总数的测定。
公共场所的空气中存在大量的微生物，包括细菌、真菌和病毒等。
这些微生物可以通过空气传播，并对人们的健康造成潜在威胁。
因此，对公共场所的空气质量进行监测和检验是非常重要的。
细菌是一类常见的微生物，广泛存在于自然界和人类生活环境中。
测定公共场所空气中细菌总数的方法有多种，下面将介绍其中两种常用的方法。
一种常用的方法是采用空气采样器进行采样，然后将采样得到的样品进行培养和计数。
空气采样器可以根据不同的需求选择不同的类型，如空气质量检测仪、空气质量监测仪等。
采样时应注意避免污染和交叉污染，选择合适的采样时间和采样位置。
采样得到的样品需要进行培养和计数。
培养方法可以选择常规的液体培养基或固体培养基，也可以选择特定的培养基，如选择含有某种抗生素的培养基来筛选特定的细菌。
培养时间和培养温度也是影响结果的重要因素，一般情况下，培养24-48小时后进行计数。
另一种常用的方法是采用表面采样法进行采样，然后将采样得到的样品进行培养和计数。
表面采样法可以使用不同的方法，如擦拭法、刮取法、涂抹法等。
采样时应注意选择合适的采样器具和采样面积，避免污染和交叉污染。
采样得到的样品需要进行培养和计数。
培养方法和计数方法与空气采样相似，可以选择常规的液体培养基或固体培养基，也可以选择特定的培养基来筛选特定的细菌。
培养时间和培养温度也是影响结果的重要因素，一般情况下，培养24-48小时后进行计数。
细菌总数的测定结果可以通过计算得到，一般以CFU/m3（每立方米的菌落形成单位）为单位。
根据不同的场所和要求，对细菌总数的限制标准也有所不同，一般情况下，室内空气的细菌总数应控制在一定范围内，以保证公共场所的空气质量。
公共场所的空气微生物检验方法中，细菌总数的测定是一个重要的指标。
公共场所卫生检验方法第三部分空气微生物
公共场所卫生检验方法第三部分空气微生物公共场所的卫生状况直接关系到人们的身体健康。
在众多卫生检验项目中，空气微生物的检测尤为重要。
本文将详细介绍公共场所卫生检验方法中的第三部分——空气微生物的检验方法。
一、概述公共场所空气微生物检验旨在评估室内空气质量，确保公共场所空气中微生物浓度低于国家标准，降低疾病传播风险。
本部分主要针对公共场所空气中的细菌、真菌、病毒等微生物进行检测。
二、检验方法1.采样方法（1）选择采样点：根据公共场所的面积、布局和人员活动情况，合理选择采样点。
采样点应覆盖公共场所的主要区域，包括人员密集区和通风不良区。
（2）采样时间：建议在公共场所正常营业时间内进行采样，以确保采样结果的代表性。
（3）采样工具：使用无菌采样器，如撞击式空气微生物采样器、过滤式空气微生物采样器等。
2.微生物培养与计数（1）细菌培养：将采样后的培养基放入培养箱，37℃培养24-48小时。
观察细菌生长情况，进行计数。
（2）真菌培养：将采样后的培养基放入培养箱，25-28℃培养24-48小时。
观察真菌生长情况，进行计数。
（3）病毒检测：采用实时荧光定量PCR法或其他分子生物学方法，对空气中的病毒进行检测。
三、结果判定与评价1.结果判定：根据公共场所空气微生物浓度限值，判断样品是否符合国家标准。
2.评价：对检测结果进行分析，找出可能存在的卫生问题，提出改进措施。
四、注意事项1.采样过程中，应避免对采样点周围环境造成污染。
2.采样人员需具备一定的微生物检测知识和操作技能。
3.培养基和实验器材需定期进行质量控制，确保实验结果的准确性。
4.检测结果仅作为评价公共场所卫生状况的参考，不能作为法律依据。
总之，公共场所空气微生物检验是确保公共场所卫生安全的重要手段。
通过科学、严谨的检验方法，为公共场所的卫生管理提供有力支持。
公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定
公共场所茶具微生物检验方法细菌总数测定Methods of microbiological examination for tea set in public places--Determination of aerobic bacterial count1范围本标准规定了公共场所茶具细菌总数的测定方法。
本标准适用于公共场所内公用茶具细菌总数的测定。
2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T 18204.2--2000公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定3定义本标准采用下列定义。
细菌总数aerobic bacterial count指公用茶具经过采样处理，在一定条件下培养后（培养基成分、培养温度、培养时间、pH值、需氧性质等），1 cm表面上所含菌落的总数。
本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧菌落总数。
细菌总数是公用茶具被污染程度的标志，检测细菌总数，为公用茶具消毒效果的判定和评价提供了依据。
4仪器4.1高压蒸汽灭菌器。
4.2干热灭菌箱。
4.3培养箱,36℃4.4冰箱。
4.5电炉。
4.6天平。
4.7灭菌平皿：直径9 cm。
1℃。
24.8灭菌刻度吸管：1 mL，I0 mL。
4.9灭菌棉拭子。
4.10灭菌剪刀。
4.11放大镜。
4.12pH计或精密pH试纸。
5培养基和试剂5.1生理盐水5.1.1成分：氯化钠8.5g蒸馏水1 000 mL5.1.2制法；将氯化钠(8.59)溶解于蒸馏水（1000mL）中，分装到试管内，每管10mL，121℃20 min高压灭菌。
5.2营养xx见GB/T 18204.1--2000中第4章第1节。
6检验程序细菌总数检验程序如下：7操作步骤7.1采样方法7.1.1随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具。
试验 公共场所空气微生物细菌总数测定
3 开 2min 80L
4 开 4min 160L
1~4 关 8min 320L
实验注意事项
空气微生物采样应尽量避开空调、门窗气 流量变化较大的区域
采样前与相关公共场管理部门有效的协调 平皿中营养琼脂厚度和制备水平，避免出
现气泡 沉降平板法平皿盖的放置 撞击式空气采样时要注意消毒和无菌操作 采样高度的选择：中心空调出风口
风速 采样者
Ⅵ
0.25
0.65-1.1
FA-1型六级筛板固体撞击式空气微生物采样器
筛板孔径范围 I 1.18um II 0.25um
捕获粒子范围 I >7.0um II 0.65um~1.0um
JWL-2 二级筛板固体撞击式空气微生物采样器
FA-1型撞击式空气微生物采样器采样
采样方法 地点 采样点：布点数量、位置、高度 采样方法和步骤 １平板制备：每平皿约8ml营养琼脂 ２采样器的消毒和安装 ３采样时间和流量： 时间根据空气状况，流量28.3L/min ４ 37℃培养48h (24h)
5 取出采样平皿，平皿加盖。依次编号。
6 细菌培养 采样平皿带回实验室，37℃ 48h
Andersen 采样器 各级喷嘴孔径及捕获粒子大小范围
级别 Ⅰ Ⅱ
喷嘴孔径 mm 1.80 0.91
捕获粒子 um ≥7.0 4.7-7.0
Ⅲ
0.71
3.3-4.7
Ⅳ
0.53
2.1-3.3
Ⅴ
0.34
1.1-2.1
5 样品培养 采样平皿带回实 验室，37℃ 48h
JWL－1A型 单级固体撞击式空气微生物采样器
JWL－1A型空气微生物采样器
采样方法 地点 采样点：布点数量、位置、高度 采样方法和步骤 １平板制备：每平皿5ml营养琼脂 ２调整采样器的采样时间和流量：20L/min，1~3min ３采样头的消毒和平皿的安装 ４现场采样，信息记录 ５ 37℃培养48h (24h)
(完整版)公共场所空气微生物检测方法——细菌总数测定
空缺中微生物检验方法
菌落总数测定
自然沉降法
1 原理：指直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露5min，经37℃、48h培养后，计数生长的细菌菌落数的采样检测方法。
2 仪器：
2.1 高压蒸汽灭菌器
2.2 恒温培养箱
2.3 冰箱
2.4 平皿（直径9cm）
2.5 制备培养基用一般设备
3 培养基
3.1 成分：
蛋白胨10g
牛肉浸膏3g
氯化钠5g
琼脂15～20g
蒸馏水1000mL
3.2 制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min 高压灭菌，用自然沉降法时倾注约15mL于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。
4 操作步骤：
4.1 设置采样点时，应根据现场大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。
通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为一采样点，该点与四墙角对角线的中点为另4个采样点。
采样高度为1.2～1.5m。
采样点应远离墙壁1m 以上，应避开空调、门窗等空气流通处。
4.2 将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5min，盖上皿盖，翻转平板，置36℃±1℃恒温培养箱中，培养48h。
4.3 计数每块平板上生长的菌落数，球场全部采样点的平均菌落数。
以每平皿菌落数（cfu/皿）报告结果。
空气细菌总数的测定
空气细菌总数的测定 The document was finally revised on 2021空气细菌总数的测定一、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。
一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。
在的压力下，锅内温度达121℃。
在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。
空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。
空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。
空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。
某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。
因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。
----测定方法--平皿沉降法二、测定原理空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。
空气中微生物总数的检测方法
空气中微生物总数的检测方法
空气中的微生物总数对于环境卫生和健康具有重要意义。
因此，开发出快速、准确的方法来检测空气中微生物总数至关重要。
目前，有几种常见的方法可以用来检测空气中微生物总数。
一种常见的方法是通过空气采样器来捕集空气中的微生物。
这
些采样器通常使用生物气溶胶采样器或空气生物采样器，可以捕集
空气中的微生物颗粒。
一旦收集到样本，就可以使用培养基来培养
微生物，并通过计数形成菌落来确定微生物总数。
这种方法虽然准确，但需要较长的培养时间，通常需要几天到一周的时间才能得出
结果。
另一种常见的方法是通过聚合酶链式反应（PCR）来检测微生物
总数。
PCR是一种快速、高效的技术，可以在几个小时内检测出微
生物的DNA或RNA。
这种方法不需要培养微生物，因此可以更快地
得出结果。
但是，PCR方法需要特定的设备和技能，因此在实际应
用中可能存在一定的限制。
近年来，基于光学技术的方法也被广泛应用于空气中微生物总
数的检测。
这些方法利用光学原理来测量微生物颗粒的数量和大小，
可以实现实时监测和快速检测。
此外，一些新兴的技术，如流式细胞术和基于质谱的方法，也正在被研究和开发，以提高空气中微生物总数的检测效率和准确性。
总的来说，空气中微生物总数的检测方法多种多样，每种方法都有其优缺点。
随着科学技术的不断进步，相信未来会有更多更快速、更准确的方法被开发出来，为空气质量监测和环境卫生提供更有效的手段。
微生物限度检查——微生物总数检查
微生物限度检查——微生物总数检查微生物限度检查是一种质量控制方法，用于评估样品中微生物的数量和种类，以确保样品符合相关标准和规定。
其中的微生物总数检查是其中一个重要的组成部分，它可以帮助确定样品是否符合卫生要求和产品质量标准。
微生物总数检查是通过特定的培养基和培养条件，对样品中可能存在的细菌、霉菌、酵母等微生物进行培养和计数，以获得样品中微生物总量的信息。
该方法可以检测出不同种类的微生物，包括细菌、霉菌、酵母等，适用于各种食品、药品、化妆品等产品的质量检测。
微生物总数检查的原理是，将一定量的样品接种到特定的培养基中，在适宜的温度和湿度条件下进行培养。
通过计数菌落数目，可以得出样品中微生物的总数。
一般情况下，培养基的选择和培养条件的设置需要根据不同的样品和检测目的进行调整。
微生物总数检查的流程包括以下几个步骤：1、样品处理：将待检测的样品进行适当处理，以便于接种和计数。
2、接种：将处理后的样品接种到相应的培养基中，使微生物在培养基中生长繁殖。
3、培养：将接种后的培养基放在适宜的温度和湿度条件下进行培养，一般需要一定时间，根据具体情况而定。
4、计数：在培养结束后，对培养基中的菌落数目进行计数，得出样品中微生物的总数。
5、结果分析：根据计数结果进行分析，判断样品是否符合相关标准和规定。
微生物总数检查在实际工作中的应用场景非常广泛，包括食品安全、药品质量、环境保护等领域。
在食品工业中，微生物总数检查可以用来检测食品中的细菌数量，判断食品是否符合卫生标准和质量要求。
在药品工业中，微生物总数检查可以用来检测药品中的细菌数量，确保药品的安全性和有效性。
在环境保护领域，微生物总数检查可以用来检测水体中的细菌数量，评估水体的污染程度。
总之，微生物总数检查是微生物限度检查中的重要环节，它可以为产品质量和卫生标准提供重要的依据和支持。
随着科学技术的不断发展，微生物总数检查的方法和技术也在不断改进和完善，相信在未来会发挥更加重要的作用。
04公共场所毛巾床上卧具微生物检验方法细菌总数测定操作规程
04公共场所毛巾床上卧具微生物检验方法细菌总数测定操作规程公共场所的毛巾、床上卧具是人们日常生活中必不可少的物品，然而，由于长时间使用和保养不当，微生物在其表面繁殖滋生，给人们带来了健康隐患。
因此，对这些物品进行微生物检验是十分必要的。
一、器具与试剂准备1.微生物采集器具：包括消毒后的无菌采集棉签、无菌吹球、无菌培养棉签和空气微生物采集器；2.无菌培养皿：选用符合国家标准的无菌培养皿，分为营养琼脂培养基和留样琼脂培养基；3.无菌生理盐水：用于样品的稀释；4.生物安全柜：用于样品处理过程的操作；5.高效过滤器：用于空气样品的操作；6.焙烧卫生箱：用于消毒操作；7.琼脂平板培养箱：用于培养微生物。
二、微生物检验方法1.采样准备（1）毛巾采样：用无菌钳子将毛巾上的样品切下，将样品置入消毒后的样品袋中。
（2）床上卧具采样：用无菌吹球吹取床上卧具上的样品，将样品置入消毒后的样品袋中。
（3）空气微生物采样：连接空气微生物采集器和高效过滤器，在指定时间内采集空气微生物样品，将高效过滤器拆下，置入消毒后的样品袋中。
2.样品处理（1）将样品袋放入生物安全柜中，将样品与适量的生理盐水混合均匀，制备不同稀释度的稀释液。
（2）用吸管吸取稀释液，分别滴入培养皿中，待其凝固并标记好。
（3）将标记好的培养皿放入琼脂平板培养箱中，置于恒温箱内培养一定时间。
3.计数和统计（1）培养箱内培养完毕后，取出培养皿进行研究。
（2）在无菌操作台上，使用显微镜和计数板对培养皿内的菌落进行计数。
（3）根据计数结果，可得到微生物菌落的数量。
将结果进行统计和分析。
三、注意事项1.进行检验操作时，必须保持操作区域的洁净和消毒，从而防止外源性细菌的干扰。
2.所使用的器材和试剂必须进行消毒处理，以确保操作的可靠性和准确性。
3.对于不同样品的处理，需遵循各自的操作规程，防止交叉感染。
5.在操作过程中，应注意个人防护，如佩戴口罩、手套和实验服等，避免微生物的外源性污染。
公共场所卫生检验方法 空气微生物细菌总数的测定方法证实
公共场所空气细菌总数的测定一、项目概述依据GBT 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法空气微生物细菌总数的测定撞击法。
公共场所空气中采集的样品，计数在营养琼脂培养基上经35℃～37℃、48 h培养所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数。
本部分适用于公共场所空气中细菌总数的测定。
二、仪器2.1六级筛孔撞击式微生物采样器。
2.2高压蒸汽灭菌器。
2.3恒温培养箱。
2.4平皿：90 mm。
三、培养基与试剂3.1. 平板计数营养琼脂成分：A 牛肉膏 3gB 蛋白胨 10gC 氯化钠 5gD 琼脂 10～20gE 蒸馏水 1L将上述成分加于蒸馏水中，加热溶解，调节pH值为7.4～7.6，分装于玻璃容器中，121℃高压灭菌20分钟，储藏于冷暗处备用。
3.2. 无菌生理盐水的配制称取8.5g氯化钠溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌30分钟。
四、采样4.1 采样点：4.1.1室内面积不足50m2的设置3个采样点，50m2以上的设置5个采样点。
4.1.2采样点按均匀布点原则布置，室内3个采样点的设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点。
4.1.3采样点距离地面高度1.2 m～1.5 m，距离墙壁不小于1m。
4.1.4采样点应避开通风口、通风道等。
4.2 采样环境条件：采样时关闭门窗15 min～30 min，记录室内人员数量、温湿度与天气状况等4.3 采样方法：采样方法：以无菌操作，使用撞击式微生物采样器以28.3 L/min流量采集5min～15 min。
采样器使用按照说明书要求进行。
五、检验步骤将采集细菌后的营养琼脂平皿置35℃～37℃培养48 h，菌落计数。
六、菌落计数及报告方法6.1采样点细菌总数结果计算：菌落计数，记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m3（每立方米空气中菌落形成单位）。
6.2一个区域细菌总数测定结杲：一个区域空气中细菌总数的测定结果按该区域全部采样点中细菌总数测定值中的最大值给出。
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定随着人们对公共场所环境质量要求的提高，对公共场所空气中微生物的检测也越来越重视。
其中，细菌总数是衡量空气中微生物含量的一项主要指标。
下面将详细介绍公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤。
1.样品采集首先，确定采样位置。
根据公共场所的具体情况，如是否有空调、通风设备等信息，选择具有代表性的采样点位。
一般来说，可选择通风良好、人员流动频繁的位置进行采样。
然后，采用采样器具进行空气采样。
空气采样器具常用的有空气生物分析仪、洒雾器等。
根据采样器具的具体操作手册，按照规定的操作步骤进行采样，同时注意采样时间和采样量的控制。
2.样品处理采样完成后，将采样器具中的采样物转移到适当的载体（如培养基、液体培养基）中。
根据具体情况，选择合适的载体。
对于空气样品，一般选择液体培养基，如生理盐水。
将采样管中的液体转移到含有生理盐水的试管中。
3.稀释操作将采样物进行稀释，以便于接种和计数。
稀释液的选择可依据之前的实验经验，一般选用营养琼脂或平板培养基。
将采样物中的适量细菌悬浮液取出，用移液管分别转移到不同稀释管中，依次进行系列二次稀释。
每次稀释后，需充分摇匀。
根据之前的实验经验，每一次稀释可选用10倍、100倍、1000倍等稀释倍数。
4.接种和培养将稀释液分别接种到含有固体培养基的平板上，均匀涂布。
然后将接种后的平板培养基放置于恒温培养箱中，选择适宜的培养温度和时间。
一般来说，菌落计数应在培养48小时后进行。
5.计数和结果分析计数时，将培养出的菌落进行清点，并将数量记录下来。
根据菌落的大小、颜色和形态等特征，可初步判断不同菌种的存在情况。
最后，将不同菌种的菌落数量进行统计和分析，并将细菌总数计算出来。
需要注意的是，在细菌总数测定过程中，应严格控制实验条件，如温度、湿度等，以确保结果的准确性。
另外，细菌总数的测定结果应与相关标准进行比较，以评估空气中微生物的含量是否符合要求。
总结：公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤包括样品采集、样品处理、稀释操作、接种和培养、计数和结果分析等。
细菌总数测定方法
细菌总数测定方法
常用的细菌总数测定方法有以下几种：
1. 直接计数法：将待测细菌样品进行稀释，然后用显微镜直接计数在计数板或用计数室计数盘，最后通过计算平均细菌数来估计总数。
2. 涂布法：将待测细菌样品均匀涂布在琼脂平板上，然后在适宜的温度下培养一定时间后，以形成菌落个数来估计总数。
3. 膜过滤法：将待测细菌样品通过孔径合适的过滤膜，然后将膜放入适宜的培养基上进行培养，通过统计菌落数来推算总数。
4. 测定细菌生物学活性法：通过测定某些活性细菌所产生的酶活性或特定代谢产物的含量来推测总数。
这些方法各有优缺点，选择适当的方法需要根据实验需求、样品特点和实验条件进行综合考虑。
GBT 18204.4-2013公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物更改对照
6.1
6.2
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
平皿：Φ 90mm
6.2.5
CO2培养箱：35℃～～37℃。
6.2.6
紫外灯：波长360nm±2nm。
6.2.7
涡旋振荡器。
6.2.8
普通光学显微镜、荧光显微镜。
6.2.9
Hale Waihona Puke 水浴箱。6.3试剂和培养基
6.3.1
采样吸收液1——GVPC液体培养 基
6.3.1.1 GVPC添加剂成分
检验步骤 将采集真菌后的沙氏 琼脂培养基平皿置28℃培养，逐 日观察并于第5天记录结果。若 真菌数量过多可于第3天计数结 果，并记录培养时间。
4.2.5
结果报告
采样点真菌总数结果计算：菌落 计数，记录结果并按稀释比与采 4.2.5.1 样体积换算成CFU/m³（每立方米 空气中菌落形成单位）。 一个区域真菌总数测定结果：一 个区域空气中真菌总数的测定结 4.2.5.2 果按该区域全部采样点中真菌总 数测定值中的最大值给出。
删除
4.2
新增： 撞击法
4.2.1
新增： 仪器和设备 见3.2.1
4.2.2
新增：培养基
4.2.2.1 新增： 沙氏琼脂培养基成分
新增： 制法将蛋白胨、葡萄糖 溶于蒸馏水中，校正pH为5.5～ 4.2.2.2 6.0，加入琼脂，115℃，15min 灭菌备用。
4.2.3
采样 见3.2.3
4.2.4
4
真菌总数
4.1
营养琼脂培养基
4.1
原理 采用撞击法或自然沉降法 采样、沙氏琼脂培养基培养技术 的方法测定公共场所空气中的真 菌总数。
一.空气的微生物学监测(精)
一．空气的微生物学监测（1）采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。
（2）采样高度：与地面垂直高度80～150 cm。
（3）布点方法：室内面积≤30 m2，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m处取一点；室内面积>30 m2，设东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。
（4）采样方法：用90mm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5~30 min 后送检培养。
（5）细菌菌落总数检查：将平板置37℃温箱内培养24 h计数菌落。
空气细菌菌落总数（cfu/ m3）=50000NAT式中：A—平板面积（cm2）T—平板暴露时间（min）N—平均菌落数（cfu/平板）二．物体表面的微生物学监测（1）采样时间：消毒处理后4 h内采样。
（2）采样面积：被采表面<100 cm2，取全部表面；被采表面≥100 cm2，取100 cm2。
（3）采样方法：用5cm×5 cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有灭菌9g/L氯化钠溶液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样式1～4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子入装10ml采样液的试管内送检。
门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
（4）细菌菌落总数检查：1ml采样液放入灭菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，放35℃温箱内培养24~48 h计数菌落。
物体表面细菌菌落总数（cfu/ cm2）=平板上菌落数×采样液稀释倍数采样面积（cm2）三．医务人员手的微生物学监测（1）采样时间：在接触患者或从事医疗活动前进行采样。
（2）采样面积及方法：被检人五指并拢，将浸有无菌9g/L氯化钠溶液的棉拭子一支在双手曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积约30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送检。
采样面积按平方厘米(cm2) 计算。
细菌总数的测定方法
细菌总数的测定方法细菌总数测定是微生物检测领域中的一项基本技术，它对于保障食品、药品和环境安全具有重要意义。
通过测定细菌总数，可以评估产品的卫生状况及污染程度，进而采取相应的控制措施。
本文将介绍几种常见的细菌总数测定方法。
平板计数法平板计数法是最传统也是最常用的一种细菌总数测定方法。
该方法通过将样品稀释液均匀涂布在含有营养培养基的平板上，经过一定时间的培养，根据生长出的菌落数量来估算样品中的细菌总数。
具体步骤包括：1. 制备适宜的稀释液。
2. 将稀释液接种到含有固体营养培养基的平板上。
3. 在恒温条件下培养一定时间（通常为24-48小时）。
4. 对形成的菌落进行计数，并乘以相应的稀释倍数得出细菌总数。
膜过滤法膜过滤法适用于液体样品中细菌数量较少的情况。
通过使用特定孔径的滤膜过滤样品，将细菌截留在滤膜上，然后将滤膜放置在营养培养基上培养，最后统计菌落数量。
此方法的优点是可以检测到比平板计数法更低浓度的细菌。
直接计数法直接计数法通过显微镜直接观察和计数样品中的细菌。
常用的有活菌计数和死菌计数两种。
活菌计数通常使用荧光染色剂，如吖啶橙或DAPI，使细菌细胞发出荧光，然后在荧光显微镜下进行计数。
而死菌计数则需使用特定的染色剂，如碘化丙啶(PI)，标记死亡的细菌细胞。
流式细胞术流式细胞术是一种高速分析单个细胞的技术，能够对大量细胞进行快速计数和分类。
在细菌总数测定中，流式细胞术可以通过特定的荧光标记物识别和计数细菌细胞。
这种方法速度快，精度高，但设备成本较高。
分子生物学方法随着分子生物学技术的发展，基于PCR的方法也被用于细菌总数的测定。
通过对细菌的特定基因序列进行扩增和定量分析，可以实现对细菌总数的准确测定。
这种方法灵敏度高，特异性强，但需要专业的实验操作和分析技能。
总结而言，不同的细菌总数测定方法各有优缺点，选择合适的方法需根据样品特性、实验条件和测定目的综合考虑。
无论采用哪种方法，都必须严格遵守无菌操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。
空气中细菌的测定
高压蒸气灭菌器
恒温培养箱
玻璃平皿或一次性灭菌平皿，9cm
六级筛孔撞击式空气微生物采样器
环境卫生学
（四）试剂 营养琼脂培养基 （五）操作方法 布点要求 采样点选择根据采样点面积及环境状况，选择有代表性的位置设置采样点。室内面积不
足50m2的设置1个采样点， 50~200m2的设置2个采样点，200m2以上的设置3~5个采样点。采 样点按均匀布点原则布置，室内1个采样点的设置在中央， 2个采样点的设置在室内对称点上，3 个采样点的设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点，其他的按均匀布 点原则布置。采样点距离地面高度1.2~1.5m，距离墙壁不小于1m。采样点应避开通风口、通风 道等。 采样器准备 ① 仪器的清洁消毒：根据采样点的洁净要求，对仪器表面进行不同程度的清洁或消毒处理。 ② 采样装置的清洁灭菌：取下采样装置上的盖子和端盖，用酒精棉球火焰灭菌约1min，然后将其
置于储存盒内。同一点应重复采样3次，按上述各步骤进，于恒温培养箱中，37 ℃培养24h后计数菌落数。 菌落计数 计数培养后每皿所生长的菌落数，并求出同一点重复采样的平均菌落数。 空气中细菌总数的计算 根据平皿菌落计数结果，用下列公式换算成每立方米空气中的菌落数，以
移回采样装置上，冷却。
环境卫生学
采样 ① 按仪器说明书操作，将采样时间的旋钮调到选定的采样时间档上。选择直流或交流电源，打开
电源开关，设定好采样时间。 ② 将采样的平皿盖略松开，打开已冷却的端盖，将无菌采样平皿置于采样装置座的平皿托架上，
旋紧端盖。 ③ 按下计时开关，仪器便开始采样和计时，调节流量（28.3L/min），采样5~15min。 ④ 设定的采样时间归零后，仪器自动关机，采样结束。旋开端盖，立即将平皿盖盖上，将平皿倒
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空缺中微生物检验方法
菌落总数测定
自然沉降法
1 原理：指直径9cm 的营养琼脂平板在采样点暴露5min ，经37℃、48h 培养后，计数生长的细菌菌落数的采样检测方法。
2 仪器：
2.1 高压蒸汽灭菌器
2.2 恒温培养箱
2.3 冰箱
2.4 平皿（直径9cm ）
2.5 制备培养基用一般设备
3 培养基
3.1 成分：
蛋白胨 10g
牛肉浸膏 3g
氯化钠 5g
琼脂 15～20g
蒸馏水 1000mL
3.2 制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH 至7.4，过滤分装，
121℃20min 高压灭菌，用自然沉降法时倾注约15mL 于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。
4 操作步骤：
4.1 设置采样点时，应根据现场大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。
通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为一采样点，该点与四墙角对角线的中点为另4个采样点。
采样高度为1.2～1.5m 。
采样点应远离墙壁1m 以上，应避开空调、门窗等空气流通处。
4.2 将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5min ，盖上皿盖，翻转平板，置36℃±1℃恒温培养箱中，培养48h 。
4.3 计数每块平板上生长的菌落数，球场全部采样点的平均菌落数。
以每平皿菌落数（cfu/皿）报告结果。