细菌基本检验技术(一)

100ml蒸馏水，加热溶解后调节pH7.4-7.6，分装于试管
（分装量为试管的1/4~1/3） ， 121℃高压灭菌15-20min。
【注意事项】
1. 灭菌时间和温度要严格控制。 2. 倾注培养基时，切勿将皿盖全部开启，以免空气 中尘埃及细菌等微生物的落入。倾注血琼脂时， 由于加血时琼脂表面容易产生气泡，倾注时应适 时转动锥形瓶，使气泡附于瓶壁，以减少血平板 表面的气泡。 3. 制备好的培养基应注明名称、制作日期，如琼脂 平板应将底(带培养基的平皿)在上，盖在下；用 牛皮纸包裹或装于保鲜袋内，以减少水分蒸发。 液体培养基应直立放置。制作好的培养基应存放 于冷暗处或4℃冰箱。
【wk.baidu.com法】
一、常用培养基的制备
1.牛肉膏汤 0.3%牛肉浸膏+1%蛋白胨+0.5%NaCl +100ml蒸馏水，加热溶解后调
节pH7.4-7.6，分装于试管(分装量为试管的1/4~1/3)，121℃高压灭菌
15-20min。 2. 普通琼脂平板
0.3%牛肉浸膏+1%蛋白胨+0.5%NaCl + 2%琼脂粉+ 100ml蒸馏水，加 热溶解后调节pH7.4-7.6，121℃高压灭菌15-20min，冷却50 ℃，倒平 板(13-15ml)。
二、高压灭菌锅的使用 高压蒸气灭菌器
使用方法
1)在外层锅内加适量的水，将需要灭菌的 物品放人内层锅，盖好锅盖并对称地扭紧 螺旋。 2)加热使锅内产生蒸气， 当压力表指针 达到33．78kPa(108.8℃)时，打开徘气阀， 将冷空气排出，此时压力表指针下降，当 指针下降至零时，即将排气阎关好。
3)继续加热，锅内蒸气增加，压力表指 针又上升、当锅内压力增加到所需压力 时，将火力减小．按所灭菌物品的特点， 使蒸气压力维持所需压力一定时间，然 后将灭菌器断电或断火，让其自然冷却 后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后 才能开盖取物。
4)应用：为最常用的灭菌力法， 一般以 101．33kPa(121.3℃)处理15~20min，可 达到对物品进行灭菌的目的。凡耐高温和 潮湿的物品，如常用培养基、生理盐水、 衣服、纱布、玻璃器材等都可用本法灭菌。
【注意事项】
1.待灭菌的物品放置不宜过紧。 2.必须将冷空气充分排除，否则锅内温 度达不到规定温度，影响灭茵效果。 3.灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶 内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚 至导致容器爆裂。需待灭菌器内压力降 至于大气压相等点才可开盖。 4.装培养基的试管或瓶子的棉塞上，应 包油纸或牛皮纸，以防冷凝水入内。
实验一 细菌检验基本技术（一）
【目的】
掌握培养基制备的基本程序和注意事项。 熟悉常用培养基的原理、种类及其用途。
【试剂和器材】
试剂：牛肉膏，氯化钠，蛋白胨，琼脂 粉，蒸馏水，1mol/L NaOH, 1mol/LHCl 器材：锥形瓶，量筒，吸管，精密pH试 纸，试管、硅胶塞，天平，高压蒸气锅， 无菌平皿等。
3. 斜面培养基
0.3%牛肉浸膏+1%蛋白胨+0.5%NaCl + 2%琼脂粉+ 100ml
蒸馏水，加热溶解后调节pH7.4-7.6，分装于试管(分装量为
试管的1/4~1/3,斜面长度约为试管的2/3，且保持管下端有
1cm柱高) ， 121℃高压灭菌15-20min。
4.半固体培养基
0.3%牛肉浸膏+1%蛋白胨+0.5%NaCl + 0.5%琼脂粉+
思考？
1.不耐高热的物质配制成的培养基 应该如 何灭菌？ 2.高压灭菌的过程中为什么要排冷空气？