水相分子尺寸排阻色谱柱
色谱柱参数
色谱柱参数
色谱柱的参数主要包括以下几个方面：
1. 尺寸：包括长度、内径和壁厚。
色谱柱的长度一般在10-30厘米之间，内径一般在1-5毫米之间，壁厚一般在0.1-0.5毫米之间。
尺寸的选择取决于分离物的性质和分析要求。
2. 粒径：色谱柱内填充物的粒径。
粒径越小，表面积越大，分离效果越好，但压力也会增大。
常见的填充物粒径有3、5、10和15微米等。
3. 填充物化学性质：填充物可以是无机物如硅胶、氧化铝等，也可以是有机物如聚苯乙烯、聚乙烯醇等。
填充物的选择取决于被分离物的性质。
4. 凝胶类型：色谱柱可以是非凝胶柱，也可以是凝胶柱。
凝胶柱多用于大小分离，凝胶类型一般为聚丙烯酰胺凝胶。
5. 柱包装密度：色谱柱内填充物的包装密度影响着柱内流体的扩散和分离效果。
一般来说，包装密度越大，分离效果越好，但压力和时间也会增加。
6. pH范围：色谱柱的填充物和柱壁材料需要具有一定的化学稳定性，以适应不同pH值的条件。
7. 温度范围：色谱柱的填充物和柱壁材料需要具有一定的热稳定性，以适应不同温度的条件。
以上是常见的色谱柱参数，根据具体的分析要求和分离物的性质，选择合适的色谱柱参数是非常重要的。
分子排阻色谱柱类型
分子排阻色谱柱类型
分子排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC）是一种常用的色谱技术，用于分离和分析生物大分子，如蛋白质、多肽和核酸。
分子排阻色谱柱是SEC技术中的重要组成部分，不同类型的分子排阻色谱柱对于分离不同分子的能力和分辨率有所不同。
下面将介绍几种常见的分子排阻色谱柱类型。
1. 硅胶基分子排阻色谱柱。
硅胶基分子排阻色谱柱是最常见的一种类型，通常用于分离中小分子量的生物大分子。
它具有较大的孔径，能够有效地排除大分子，因此适用于蛋白质、多肽等生物大分子的分离和分析。
2. 凝胶基分子排阻色谱柱。
凝胶基分子排阻色谱柱是另一种常见的类型，通常用于分离大分子量的生物大分子。
它的孔径较大，能够允许大分子进入孔隙内部，从而实现对大分子的分离和分析。
3. 超高效分子排阻色谱柱。
超高效分子排阻色谱柱是近年来发展起来的一种新型色谱柱类型，具有更小的颗粒大小和更高的分离效率，能够实现更快速、更高分辨率的分离和分析。
它适用于对分子量较小的生物大分子进行分离和分析。
总之，不同类型的分子排阻色谱柱在分离和分析生物大分子时具有各自的优势和适用范围，科研人员在选择分子排阻色谱柱时应根据样品的特性和分析要求进行合理选择，以获得准确、可靠的分离和分析结果。
分子排阻色谱
分子排阻色谱1、分子排阻色谱介绍分子排阻色谱（Mobility-Resolved Chromatography，MRC）是一种非常有效的拆分技术，它利用运动势垒来分离物质源（如大分子聚合物和小分子有机物）。
MRC是结合色谱技术拆分物质源和结束拆分过程的连续仪器。
分子排阻色谱通过调整电泳驱动力工作，当离子被电场加速时，会移动到电凝胶上，从而实现拆分。
MRC的优点包括快速拆分，可靠的拆分时效，少量的样品的可用性，和良好的信息还原，以及有效的拆分步骤。
2、分子排阻色谱的原理分子排阻色谱原理涉及用极低水平的电压（最低10mV）将质谱室（MS）色谱数据隔离为两个基础元素：入口离子势垒（IEP）和出口离子势垒（EIP）。
这主要是通过电展的半电位（pH）来控制电展的pH，它们在被电场加速后也会受到不同的被拖动力或离子拖动力的影响。
当条件合适时，离子可以在电凝胶的收集器上脱附，实现物质源的拆分。
3、应用领域分子排阻色谱应用于很多领域，特别是分子疾病学，环境科学以及生命科学和医学研究，用于拆分物质源，以及有效把关键复合物分离出来。
它主要应用于食品安全分析、药物分析、环境实验室等领域。
例如，MRC可用于航空燃料中残留的有毒物质的检测，也可以帮助准确鉴定分解化学品、水杂质和其他混合物的组分物质；它的应用也被用于复合结构物的表征，用于结构变化的断定，以及有机物质的物种鉴定。
4、MRC与传统色谱技术比较MRC的灵敏度和稳定度要优于传统的高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱（GC）技术。
它比HPLC更加灵敏。
它们之间的差异主要表现在MRC相对而言更加灵敏，可收集器也更加有效，而且拆分时间更短，具有更好的峰形效果。
MRC技术最大的好处在于可以检测出更小的分子，因为电展的半电位更容易被调节。
另外，这是一种非常灵活的技术，可以应用于多种不同的情况。
5、分子排阻色谱的未来MRC正在受到越来越多的关注，且越来越多的应用正在出现。
它正被用于生物技术、分子生物学、基因学和分子复合物的研究。
体积排阻色谱
一. 分离原理尺寸排阻色谱法：是按分子尺寸的差异进行分离的一种液相色谱方法，也称凝胶色谱法。
排阻色谱的固定相多为凝胶。
凝胶是一种由有机分子制成的分子筛, 其表面惰性, 含有许多不同大小孔穴或立体网状结构。
凝胶的孔穴大小与被分离组分大小相当, 对不同大小的组分分子则可分别渗到凝胶孔内的不同深度。
尺寸大的组分分子可以渗入到凝胶的大孔内, 但进不了小孔, 甚至于完全被排斥，先流出色谱柱。
尺寸小的组分分子, 大孔小孔都可以渗进去, 最后流出。
因此, 大的组分分子在色谱柱中停留时间较短, 很快被洗出。
小的组分分子在色谱柱中停留时间较长。
经过一定时间后, 各组分按分子大小得到分离。
当组分X进入柱子后,它就要从高浓度的流动相向固定相孔隙内的流动相扩散。
当组分X进入色谱固定相达到扩散平衡时：Xm ⇌ Xn组分的分配系数为：尺寸排阻色谱中任何组分的分配系数应符合：0 ≤ K ≤ 1二. 固定相尺寸排阻色谱常用固定相有无机和有机两大类。
无机凝胶：又称硬质凝胶。
是具有一定孔径范围的多孔性凝胶，如多孔硅胶、多孔玻璃珠等，此类凝胶化学惰性、稳定性及机械强度均好，耐高温，使用寿命长，但装柱时易碎，不易装紧，柱效较低。
有机凝胶：又称半硬质凝胶。
如苯乙烯二乙烯苯交联共聚物凝胶，能耐较高压力，适用于有机溶剂作流动相，有一定可压缩性，可填得紧密，柱效较高。
但在有机溶剂中有轻度膨胀。
新型凝胶色谱填料，克服了传统软填料的一些弱点，粒度细，机械强度高，分离速度快，效果好，特别是无机填料表面键合亲水性单分子层或多层覆盖的单糖或多糖型等填料广泛用于生物大分子的分离。
三. 流动相尺寸排阻色谱流动相：从样品的溶解性考虑，流动相应与凝胶本身有相似性，黏度低，与样品的折光率相差大;能润湿凝胶，防止吸附作用。
常用的流动相有四氢呋喃、甲苯、N，N’-二甲基甲酸胺、三氯甲烷(凝胶渗透色谱);水(凝胶过滤色谱)等。
(可用于分离相对分子质量大的分子，如蛋白质、核酸等)。
高效体积排阻色谱
高效体积排阻色谱高效体积排阻色谱是一种高效的液相色谱技术，可用于分离和富集混合物中目标化合物，通常用于生物分子的分离和纯化。
与其他色谱技术相比，高效体积排阻色谱拥有更高的分离功率和更短的分离时间。
本文将对高效体积排阻色谱技术的原理、仪器配置和应用进行介绍。
1. 原理高效体积排阻色谱技术是一种基于体积排阻机理的分离方法。
这种方法基于生物分子（例如蛋白质、核酸）与分离柱中填充的亲水基聚合物的相互作用。
当生物分子进入分离柱后，会与填充材料的极性相互作用并被减速。
这种作用是随着生物分子的分子量增加而增加。
因此，在分离柱中，具有不同分子量的混合物组分可以分离出来。
分离柱内填充的聚合物是高分子橡胶，通常是依赖于水相流动的层层化聚合物，如纤维蛋白、聚磺酸等。
填充材料的孔径大小可以控制生物分子离子的进入和排除，这也是高效体积排阻色谱方法的另一种分离机制。
2. 仪器配置高效体积排阻色谱的仪器配置很简单。
通常涉及液相色谱装置及连接的检测装置。
液相色谱装置由一台高压泵、一个样品自动进样器、一台分离柱和一个植入器组成。
高压泵以恒定的流速输送流体，样品自动进样器将要分离和富集的混合物样品注入流体。
分离柱中填充的聚合物分离混合物，分离的样品通过植入器并进入检测装置进行检测。
检测装置通常是紫外线检测器，可检测生物分子的吸收波长。
3. 应用高效体积排阻色谱技术主要用于生物分子（例如蛋白质、核酸）的分离和富集。
这项技术可用于研究生物化学、制药、食品科学和环境检测中。
例如，生物化学研究人员可以使用此技术纯化、富集和识别目标蛋白质，并了解其结构和功能。
制药应用中高效体积排阻色谱可用于制备药物和疫苗。
食品科学和环境检测方面，高效体积排阻色谱可用于检测食品和水中的有害物质和环境污染。
总结一下，高效体积排阻色谱技术是其它色谱技术的高效液相色谱技术。
该技术的原理是基于生物分子与聚合物的相互作用，以及孔径大小控制生物分子的进入和排除作为分离机制。
体积排阻色谱_(sec)柱用的仪器_概述说明以及解释
体积排阻色谱(sec)柱用的仪器概述说明以及解释1. 引言1.1 概述体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC）是一种常用的分离和测定高聚物、生物大分子以及纳米材料的方法。
它基于溶剂流动时样品在柱填充物中的渗透性，通过这种渗透性差异来实现对不同大小分子的分离。
SEC在生命科学、化工、材料科学等领域具有广泛的应用前景。
本文旨在对体积排阻色谱所使用的仪器进行概述说明，并解释其工作原理和关键组件。
同时，我们将介绍体积排阻色谱柱的结构、选择和优化方法，以及对样品准备、流动相选择和优化、参数设置和调整等方面给出操作注意事项。
1.2 文章结构本文包括引言、体积排阻色谱(SEC)柱介绍、体积排阻色谱仪器装置及关键组件说明、体积排阻色谱分析方法和操作注意事项以及结论部分。
在引言中，我们将对文章内容进行概述说明，并明确文章结构。
接下来，我们将详细介绍SEC柱的原理、结构以及选择和优化方法。
然后，我们将对体积排阻色谱仪器装置中的压力控制系统、流速控制系统和柱温控制系统进行说明。
在接下来的部分，我们将介绍体积排阻色谱分析方法所涉及的样品准备与预处理要点、流动相选择和优化方法以及参数设置和调整技巧。
最后，我们通过结论对整篇文章进行总结。
1.3 目的本文的目标是全面介绍体积排阻色谱所使用的仪器，帮助读者了解仪器的工作原理和关键组件，并提供一些操作须知。
通过阅读本文，读者将对体积排阻色谱有更深入的了解，并能够在实验中正确选择和使用相关设备，从而更好地开展SEC 柱分析工作。
2. 体积排阻色谱(SEC)柱介绍:2.1 SEC柱原理:体积排阻色谱（Size Exclusion Chromatography，简称SEC）是一种基于分子尺寸差异的色谱技术。
该技术利用特殊设计的SEC柱实现对溶液中分子的分离和纯化。
其原理是根据样品中溶质分子在柱填料孔隙中的扩散速度而进行分离。
大尺寸分子由于无法进入较小的孔隙而沿柱床快速流过，而小尺寸的分子则能进入较小孔隙并在其中被滞留更长时间，因此产生了不同尺寸分子之间的强迫排阻现象。
色谱柱常用知识
色谱柱使用常识1.色谱柱的安装⑴、用过滤和脱气的流动相（不含缓冲盐）彻底冲洗色谱仪的泵和管路，务必使系统中不含气泡。
⑵、根据色谱柱上所标示的流动相流向，将色谱柱入口与泵端管路相连，柱出口不连。
⑶、将泵的流速设为0.1mL/min或更低，流速缓慢地上升到正常流速（t>5min）。
⑷、当溶剂从色谱柱出口端自由流出时，将流速设为0，把柱出口与检测器端的管路相连。
⑸、用10－30倍柱体积的流动相、正常流速平衡色谱柱。
⑹、氨基柱、氰基柱既可在正相环境下使用，也可在反相环境下工作。
当需要从反相变为正相或正相变为反相时，需要用20－30倍柱体积的THF作为过渡溶剂冲洗系统，否则易使泵的单向阀堵塞，出现压力异常的现象。
2.色谱柱使用注意事项①、流动相：a、溶剂必须是HPLC级的，试剂则尽可能使用高纯度的；b、不与固定相发生化学反应，粘度小，且对样品有适宜的溶解度，要求k在1～10范围内（可用范围）或2～5（最佳范围），k值太小，不利于分离；k值太大，可能使样品在流动相中沉淀；c、流动相使用之前必须过滤和脱气；d、确保溶剂间是相互混溶的；e、流动相必须与检测器相匹配，如用紫外检测器时，不能选用截止波长大于检测波长的溶剂。
痕量的杂质会极大地降低色谱柱的性能，当需要更换流动相时，确保溶剂（缓冲液）之间是相互混溶的。
若使用的溶剂与色谱柱中的溶剂不能混溶，则需使用过渡溶剂，否则会对色谱柱产生永久性的伤害。
盐或缓冲液从流动相中析出也会对色谱柱产生永久性的伤害。
每次进样前应该检查样品在流动相中的溶解性，如果可能尽量使用流动相溶解样品。
②、固定相：a、流动相的pH值应保持在2.0－8.0之间（除非有特殊说明）；b、如果有必要可使用预饱和柱和保护柱；c、使用氨基柱时，流动相和样品中尽量避免含醛类和酮类物质。
当前的反相色谱柱填料可分为以下三种：⒈硅胶柱：柱效高，机械强度大，但对pH敏感，低pH值(<2.0)会使键合相水解（除去键合的功能集团）；高pH值（>8.0），硅胶溶解。
sec排阻色谱
sec排阻色谱
SEC（Size Exclusion Chromatography），即排阻色谱法，是一种根据试样分子的尺寸进行分离的色谱技术。
它根据待测物质的体积和质量差异导致的在色谱柱中的洗脱速度和时间差异实现待测物质的多种表征，如分子量、分子量分布和纯度等。
SEC被广泛应用于表征蛋白生物药中的体积异构体，这是因为在开发、生产、运输和储存等过程中，蛋白生物药容易形成高分子量（HMW）聚集体和低分子量（LMW）片段等体积异构体。
这些体积异构体可能导致蛋白药物出现免疫原性反应、药代动力学或效价差异等，因此需要对这些关键质量属性（CQA）进行表征。
SEC是分析ADC药物体积异构体的标准技术。
此外，SEC还分为凝胶过滤色谱法（GFC）和凝胶渗透色谱法（GPC）。
GFC一般用于分离水溶性的大分子，凝胶的代表是葡萄糖系列，洗脱溶剂主要是水；而GPC则主要用于有机溶剂中可溶的高聚物相对分子质量分布分析及分离，常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶，洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。
请注意，排阻色谱可能不适用直径比最小孔隙直径小的分子或比凝胶颗粒内部通道直径大的分子，这两种情况下，分子可能无法通过凝胶床或者全部进入凝胶颗粒内部，因此不能实现有效的分离。
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水相分子尺寸排阻色谱柱
TSKgel SW系列补充说明书
东曹株式会社
出厂溶剂操作注意事项
色谱柱的出厂溶剂：
0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液＋0.1 mol/L Na2SO4＋0.05 % NaN3（pH 6.7）
填料操作注意事项
阻燃填料（改性硅胶）
TSKgel G2000SW XL，G3000SW XL，G4000SW XL，G2000SW，G3000SW，G4000SW，G2000SW Glass，G3000SW Glass，G4000SW Glass，SuperSW2000，SuperSW3000，SuperSW
mAb HR，SuperSW mAb HTP，UltraSW Aggregate，UP-SW3000
TSKgel guardcolumn SW XL，SW，SW Glass，SuperSW，SuperSW mAb，UltraSW，UP-SW，UP-SW DC
TSKgel SW系列产品补充信息
半微型色谱柱：
TSKgel SuperSW3000（2.0 mmI.D.×30 cm/1.0 mmI.D.×30 cm），TSKgel SuperSW mAb HR，TSKgel SuperSW mAb HTP ，TSKgel UltraSW Aggregate，TSKgel UP-SW 3000，TSKgel guardcolumn UP-SW 和TSKgel guardcolumn UP-SW DC的使用说明书
为防止财产损失、确保个人安全，请在使用本产品之前，仔细通读本补充说明书。
本补充信息中所用的章节编号与“TSKgel SW系列”的使用说明书一致。
有关TSKgel SuperSW3000，TSKgel SuperSW mAb HR，TSKgel SuperSW mAb HTP，TSKgel UltraSW Aggregate和TSKgel UP-SW3000 色谱柱的相关内容，请参阅本补充信息的“注意事项”，第1节，第3节，第4节（表1），第6节，第7节（表3），第11节（表4）和第13节（表6和表7），忽略“TSKgel SW系列”的使用说明书中的相应章节。
有关TSKgel guardcolumn UP-SW色谱柱的相关内容，请参阅本补充信息的“注意事项”，第3节和第11节（表4），忽略“TSKgel SW系列”的使用说明书中的相应章节。
有关TSKgel guardcolumn UP-SW DC色谱柱的相关内容，请参阅本补充信息的“注意事项”，第1节，第3节，第4节和第11节（表4），忽略“TSKgel SW系列”的使用说明书中的相应章节。
1. 简介
本说明书中所提到的色谱柱的主要应用领域如下所示：
·半微型色谱柱TSKgel SuperSW3000：高灵敏度分析
· TSKgel SuperSW mAb HR，TSKgel UP-SW3000 （4.6 mmI.D.×30 cm）：抗体的高分辨率分析· TSKgel SuperSW mAb HTP，TSKgel UP-SW3000 （4.6 mmI.D.×15 cm）：抗体的高通量分析· TSKgel UltraSW Aggregate：蛋白质多聚体的分析
TSKgel guardcolumn UP-SW DC保护柱的出口末端接头配有外部公头连接器，非常便于连接分析柱。
3. 色谱柱部件
* 关于半微型色谱柱TSKgel SuperSW3000，TSKgel SuperSW mAb HR ，TSKgel UltraSW Aggregate ：请参阅“TSKgel SW 系列”的使用说明书中的图2。
* 关于TSKgel SuperSW mAb HTP ，TSKgel
UP-SW3000
关于TSKgel guardcolumn UP-SW
关于
TSKgel guardcolumn UP-SW DC
图2 不锈钢色谱柱
4. 安装及安全注意事项 4.1 连接
若要直接将TSKgel guardcolumn UP-SW DC 保护柱连接到TSKgel UP-SW3000色谱柱，请先用手将TSKgel guardcolumn UP-SW DC 的柱出口和TSKgel UP-SW3000的柱入口连接在一起，然后使用适当的扳手拧紧。
确认接口是否有溶剂泄漏。
以下操作可能会对柱子造成永久性的损害。
a) 柱子忽然摔落可能会损坏保护柱出口的末端接头。
b) 连接两根柱子时使用的扭矩超过了2.0 N ･m （大约30°以上）。
c) 反复连接/断开两个柱子，也可能会严重损害色谱柱的性能。
建议保存时，让两个柱子保持连接。
d) 其他公司的色谱柱与东曹株式会社的保护柱不兼容。
4.10 长期保存
表1 替换溶剂时的推荐流速
4.11 清除颗粒杂质的污染（附加章节）
颗粒杂质的污染常会降低半微型色谱柱的性能。
因此，强烈建议在泵和进样器之间安装孔径在0.2～0.5 μm之间的在线过滤器。
在线过滤器
部件货号0014594 Filter assembly
部件货号0006280 Fluoropore filter（0.45 μm，100枚/组）
6. 溶剂
6.2 选择溶剂
6.2.3 有机溶剂
TSKgel SuperSW mAb HR，TSKgel SuperSW mAb HTP和TSKgel UltraSW Aggregate应使用0～20 %的水溶性有机溶剂，如甲醇和乙腈。
TSKgel UP-SW3000应使用0～30 %的水溶性有机溶剂，如甲醇和乙腈。
有关如何替换溶剂，请参阅“TSKgel SW系列”的使用说明书的第6节。
7. 流速
7.2 推荐流速
表3 推荐流速
11. 保护柱
11.2 保护柱的种类和选择
表4保护柱
13. 质量标准和质量保证
13.1 检测报告
13.1.2 流速和色谱柱内径
TSKgel SuperSW3000：16 μL/min（用于1.0 mmI.D.），65 μL/min（用于2.0 mmI.D.）。
TSKgel UP-SW3000：0.35 mL/min（用于4.6 mmI.D.）。
13.1.3 样品以及样品配制浓度
表6 检测用样品
注：*1 用于TSKgel SuperSW3000（2.0 mmI.D.×30 cm, 1.0 mmI.D.×30 cm）。
*2用于TSKgel SuperSW mAb HR，TSKgel SuperSW mAb HTP，TSKgel UltraSW Aggregate 和TSKgel UP-SW3000。
13.1.4 样品进样量和色谱柱内径
TSKgel SuperSW3000：0.2 μL（用于1.0 mmI.D.），1.0 μL （用于2.0 mmI.D.）。
13.1.5 检测器
UV检测器（响应：0.3 s，流通池：毛细管流通池（35 nL））用于1.0 mmI.D.和2.0 mmI.D.。
UV-8020（东曹株式会社制造）用于4.6 mmI.D.和7.8 mmI.D.，波长：所有色谱柱都是280 nm。
13.2 质量标准
表7
东曹（上海）生物科技有限公司
上海市徐汇区虹梅路1801号A区
凯科国际大厦1001室
电话：021-3461-0856
传真：021-3461-0858
E-mail：info@
网址：/home-cn
TSKgel，TSKgel SuperMultipore，TSKgel STAT，BioAssist，Lipopropak，TOYOPEARL，ToyoScreen，TOYOPEARL GigaCap，TOYOPEARL MegaCap，TOYOPAK以及EcoSEC是东曹株式会社在日本，中国，美国，欧盟等的注册商标。
HLC是东曹株式会社在日本和中国的注册商标。
未经东曹株式会社的书面许可，禁止影印或复印本书的全部或部分内容。
本书中的内容如有更改，恕不另行通知。
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