酶学基本知识试验
酶的试验实验报告
酶的试验实验报告实验目的：本实验旨在通过一系列实验步骤，探究酶的活性、稳定性以及酶促反应的特点。
通过对酶的活性测定，了解酶在不同条件下的活性变化，以及酶在生物体内催化反应的基本原理。
实验原理：酶是生物体内催化化学反应的生物大分子，通常由蛋白质组成。
酶的活性受温度、pH值、底物浓度、酶浓度等多种因素影响。
酶促反应具有高效性、专一性和可逆性等特点。
实验材料：1. 酶样品：选择一种适合的酶作为实验对象。
2. 底物：与所选酶特异性结合的物质。
3. 缓冲液：用于维持实验过程中的pH值稳定。
4. 温度控制设备：如恒温水浴。
5. pH计：用于测定和调整溶液的pH值。
6. 酶活性测定试剂盒（如适用）。
7. 离心机、移液枪、试管、量筒等实验器材。
实验步骤：1. 准备实验材料，包括酶样品、底物、缓冲液等。
2. 调整缓冲液的pH值，使其达到酶的最适pH条件。
3. 将酶样品和底物分别加入试管中，按照实验设计进行混合。
4. 将试管放入恒温水浴中，控制反应温度。
5. 在设定的时间点，取出试管，迅速终止反应。
6. 使用酶活性测定试剂盒测定酶活性，记录数据。
7. 改变实验条件（如温度、pH值、底物浓度等），重复步骤3-6。
8. 收集所有实验数据，进行统计分析。
实验结果：根据实验数据，绘制酶活性随不同条件变化的曲线图。
分析曲线图，得出酶活性的变化趋势，以及最适反应条件。
实验讨论：根据实验结果，讨论酶活性的变化规律，分析影响酶活性的主要因素。
探讨实验中可能存在的误差来源，以及如何改进实验设计。
结论：本实验成功地测定了酶在不同条件下的活性，并分析了影响酶活性的主要因素。
实验结果表明，酶的活性受温度、pH值、底物浓度等因素的影响。
通过本实验，我们更加深入地理解了酶在生物体内催化反应的基本原理。
参考文献：[1] 酶学基础与应用，张某某，出版社，年份。
[2] 酶活性测定方法，李某某，期刊名称，年份。
实验日期：2024年4月21日实验人员：[实验者姓名][注：以上内容为示例文本，实验的具体细节需根据实际实验设计进行调整。
酶学基本知识和技术
酶学基本知识和技术第四章酶学基本知识和技术酶是活细胞产生的，并能在体内外起催化作用的一类特殊蛋白质。
酶定量测定越来越多的应用与临床，而且在诊断、鉴别诊断上起着重要作用。
第一节酶活性测定的基本知识在临床生化检验中，测定酶活力的方法，通常有两种：1.在一定条件下，单位时间内，被酶作用的底物减少量或产物生成量。
2.在一定条件下，酶活力与反应所需时间成反比的关系。
一、酶活性的概念和单位（一）酶活性的概念在规定条件下，单位时间内底物的减少量或产物的生成量，即酶的活性。
如果将酶反应中S或P对t作图，可得到酶反应时间进程曲线图。
在线性期S和P的变化量与时间呈线性关系：V===K一般情况下，产物的减少量和产物的增加量是一致的，但测定产物的生成比测定底物的减少好。
因为反应体系中底物往往过剩，而产物是从无到有的，只要方法灵敏，测定的准确度可以很高。
所以，酶活性测定大多采用产物生成法。
（二）酶活性单位是指在某特定条件下，使酶反应达到某一速度所需的酶量。
有三种表示方法：1.惯用单位：大多是由方法的作者自己规定，在某一特定的条件下，生成一定量产物为一个单位。
所以不同的酶，甚至同一个酶，不同的测定可有不同的定义。
如ALT测定，改良穆氏法、金氏法、赖氏法的单位定义各不一样。
所以无可比性。
2.国际单位：1964年国际生化协会所规定的国际单位（IU）：即规定实验条件下，每分钟能催化1微摩尔底物的酶量为1个国际单位。
如表示血清中酶浓度多以U/L表示之，即IL标本（血清）中含的酶量。
我国医学界对此表示方法已经熟悉习惯。
缺点：①惯用单位换算国际单位麻烦。
②有些大分子量底物不明。
③同一种酶用不同的测定国际单位仍不相同。
3. Katal单位：Katal，指在最适条件下，每秒能催化1摩尔底物发生变化的酶量为1个Katal 单位。
1U＝16.67μKatal（或1/60μKatal）。
二、酶活性的测定酶活性测定中，一定要保证过量的底物，以保证反应是在线性期进行，酶活性测定分两种类型：1.终点法：(end-point analysis)固定时间法：先让酶与底物在一定温度下作用一段固定的时间，然后停止酶反应，加入试剂进行化学反应呈色测出底物和产物的变化。
酶的基本性质实验报告
一、实验目的1. 了解酶的基本概念和特性。
2. 掌握酶的催化作用及其影响因素。
3. 学习酶活力测定方法。
4. 通过实验，加深对酶学理论的理解。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一、温和等特性。
酶的活性受温度、pH值、底物浓度、酶浓度等因素的影响。
本实验通过测定酶活力，分析不同因素对酶活性的影响。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 酶制剂- 底物- 水浴锅- 移液器- 计时器- pH计- 温度计2. 实验仪器：- 酶活力测定仪- 分光光度计四、实验方法1. 酶活力测定：- 采用比色法测定酶活力。
- 将底物溶液和酶溶液混合，在一定温度和pH值下反应。
- 使用分光光度计测定反应体系在特定波长下的吸光度。
- 根据吸光度变化计算酶活力。
2. 不同因素对酶活性的影响：- 温度：在0℃、25℃、37℃、50℃、70℃等不同温度下测定酶活力。
- pH值：在pH值分别为3、5、7、9、11的缓冲溶液中测定酶活力。
- 底物浓度：在一定范围内改变底物浓度，测定酶活力。
- 酶浓度：在一定范围内改变酶浓度，测定酶活力。
五、实验结果与分析1. 酶活力测定结果：- 在不同温度下，酶活力随温度升高而增大，在37℃时达到最大值，之后随温度升高而降低。
- 在不同pH值下，酶活力在pH值为7时达到最大值，pH值过高或过低都会使酶活力降低。
- 在一定范围内，底物浓度和酶浓度对酶活力有显著影响。
2. 不同因素对酶活性的影响分析：- 温度：酶活性受温度影响较大，过高或过低的温度都会使酶失活。
- pH值：酶活性受pH值影响较大，不同酶的最适pH值不同。
- 底物浓度：在一定范围内，底物浓度越高，酶活力越大。
- 酶浓度：在一定范围内，酶浓度越高，酶活力越大。
六、实验结论1. 酶具有高效、专一、温和等特性。
2. 酶活性受温度、pH值、底物浓度、酶浓度等因素的影响。
3. 在实际应用中，应根据酶的特性选择合适的反应条件，以提高酶的催化效率。
认识酶的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解酶的概念、特性及其在生物体内的重要作用。
2. 掌握酶的催化活性、专一性和影响酶活性的因素。
3. 通过实验验证酶的催化作用，加深对酶的理解。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，由活细胞产生，具有高效性、专一性和温和性。
酶催化作用具有以下特点：1. 高效性：酶催化反应速率比无机催化剂快10^3～10^17倍。
2. 专一性：一种酶只能催化一种或一类底物。
3. 温和性：酶催化反应在较温和的条件下进行。
三、实验材料与仪器1. 材料：（1）酶：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等。
（2）底物：淀粉、蛋白质、脂肪等。
（3）指示剂：碘液、酚酞等。
2. 仪器：（1）恒温水浴箱（2）试管及试管架（3）移液器（4）显微镜四、实验步骤1. 酶催化反应速率实验（1）取两只试管，分别加入相同量的淀粉溶液和碘液。
（2）向一只试管中加入适量的淀粉酶，另一只试管中加入等量的蒸馏水作为对照。
（3）将两只试管放入恒温水浴箱中，观察并记录碘液褪色所需时间。
2. 酶的专一性实验（1）取两只试管，分别加入相同量的淀粉溶液和蛋白质溶液。
（2）向一只试管中加入适量的淀粉酶，另一只试管中加入等量的蛋白酶。
（3）将两只试管放入恒温水浴箱中，观察并记录反应现象。
3. 影响酶活性的因素实验（1）温度对酶活性的影响取两只试管，分别加入相同量的淀粉酶和淀粉溶液。
向一只试管中加入适量蒸馏水作为对照，另一只试管中加入少量NaOH溶液，观察并记录碘液褪色所需时间。
（2）pH值对酶活性的影响取两只试管，分别加入相同量的淀粉酶和淀粉溶液。
向一只试管中加入适量蒸馏水作为对照，另一只试管中加入适量醋酸溶液，观察并记录碘液褪色所需时间。
五、实验结果与分析1. 酶催化反应速率实验：淀粉酶催化淀粉水解反应速率明显快于对照组，证明酶具有催化作用。
2. 酶的专一性实验：淀粉酶对淀粉具有催化作用，而对蛋白质无催化作用，证明酶具有专一性。
3. 影响酶活性的因素实验：（1）温度对酶活性的影响：NaOH溶液对淀粉酶活性有抑制作用，证明温度对酶活性有影响。
第五章酶学基本知识实验
第十四章常用酶类测定第一节氧化还原酶类氧化还原酶能够催化氢氧原子或电子从一种底物转移到另一种底物上，它包括一大类酶如脱氢酶、氧化酶、过氧化物酶以及加单氧酶等。
目前临床诊断中常用的氧化还原酶主要有乳酸脱氢酶及其同工酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、铜蓝蛋白、单胺氧化酶和超氧化物歧化酶等。
实验92 连续监测法测定乳酸脱氢酶总活性(L-P反应法)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LD)是糖酵解和糖异生的一个重要酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆地催化乳酸(L)和丙酮酸(P)之间的氧化还原反应。
乳酸+NAD+ 丙酮酸+NADH+H+其中L→P为正向反应，P→为逆向反应。
正反两向反应的最适pH不同，其中正向反应最适pH为8.8～9.8，偏碱，能使平衡偏向生成丙酮酸的方向。
其优点是乳酸和NAD+稳定性好，且NAD+纯品易得、价格较低，过量乳酸对LD活性的抑制较小，反应线性较好。
缺点是需要较高的底物浓度，反应速度较慢。
逆向反应的最适pH为7.4～7.8，与生理性pH相同。
其显著的优点在于NADH用量少，仅为正向反应的3%左右，而反应速度比前者约快3倍，灵敏度高。
但丙酮酸于NADH的稳定性较差，过量的丙酮酸对LD活性的抑制作用较大。
LD活性测定时正向反应和逆向反应都可以运用，但1996年中华医学会检验学会酶学组专家推荐选择正向反应。
【原理】LD催化下述反应：+++NADHNADL LD丙酮酸乳酸-H+−→+−在反应过程中，乳酸氧化生成丙酮酸，同时使NAD+还原为NADH。
NADH在340nm处有吸收峰，因此反应会引起340nm吸光度的增高，并且吸光度增加的速率与样本中LD活性呈正比的关系。
【试剂与器材】1．Tris-乳酸锂缓冲液(含Tris 52.5mmol/L ，乳酸锂52.5mmol/L) 称取Tris 6.34g ，乳酸锂5.04g ，溶于约800ml 蒸馏水中，置37℃水浴箱，使温度达到平衡后，在pH 计下用1mol/L 的HCl(约加入45ml)调节pH 至8.9，再加入蒸馏水至1 000ml ，冰箱保存。
认识酶的实验报告
认识酶的实验报告一、实验目的本实验旨在通过探究酶的性质和功能，加深对酶作用的认识，并进一步了解酶的作用机制。
二、实验原理1. 酶的定义：酶是一种能够加速生物体内生物化学反应速率的蛋白质。
2. 酶的特性：酶具有专一性、高效性和可逆性。
3. 酶促反应：酶与底物发生特异性结合，形成酶底物复合物，通过酶的催化作用，反应速率得到加快。
三、实验步骤1. 实验材料准备：酶溶液、底物溶液、试管、试管架、试管夹、显色剂等。
2. 实验步骤：- 步骤一：取两支试管，分别加入相同体积的酶溶液和底物溶液，并将其放入不同的试管架中。
- 步骤二：将试管架放入恒温槽中，保持温度恒定。
- 步骤三：同时开始计时器，并在不同的时间点分别取出试管，加入显色剂。
- 步骤四：观察试管中颜色的变化，并记录下时间和变化情况。
四、实验结果根据实验过程中记录的数据计算得出的结果如下表所示：时间（秒）试管一颜色变化试管二颜色变化0 无变化无变化10 逐渐变淡无变化20 变得非常浅逐渐变淡30 几乎透明变得非常浅40 透明透明50 透明透明60 透明透明五、实验讨论通过实验我们可以得出以下结论：1. 酶的作用是加速生物体内生物化学反应的速率，同时具有专一性、高效性和可逆性。
2. 本实验中，试管中的酶溶液通过与底物的特异性结合，催化反应，使底物的颜色变淡或透明。
3. 随着时间的增加，试管一和试管二中的底物都逐渐变淡或透明，说明酶的催化作用随时间的增加而增强。
六、实验总结通过本次实验，我们更加深入地理解了酶的性质和功能。
酶作为生物体内的催化剂，在代谢和生产过程中起着非常重要的作用。
同时，我们也学会了如何进行酶的活性检测实验，通过观察底物的变化情况来评估酶的催化效果。
然而，本次实验的结果可能受到实验条件的限制，如实验温度、酶浓度等因素。
因此，在今后的实验中，我们应该更加精确地控制实验条件，以获取更准确的实验结果。
总之，通过认识酶的实验，我们进一步了解了酶的作用机制，提高了对酶的认识和理解，并为今后的研究和应用提供了基础。
酶的基本性质实验报告
酶的基本性质实验报告酶的基本性质实验报告引言：酶是一类生物催化剂，能够加速和调控生物体内的化学反应速率。
酶的研究对于理解生物体的代谢过程以及开发新药和生物技术具有重要意义。
本实验旨在探究酶的基本性质，包括催化活性、温度和pH值对酶活性的影响。
实验一：酶的催化活性材料与方法：1. 取一小块新鲜牛肉，切成细丝。
2. 准备一杯水，将牛肉丝放入其中。
3. 在室温下观察牛肉丝的变化。
结果与讨论：经过一段时间，我们可以观察到牛肉丝开始变得更加松软。
这是因为牛肉中的酶分解了蛋白质，使其变得更易消化。
这个实验说明了酶具有催化作用，能够加速化学反应的进行。
实验二：温度对酶活性的影响材料与方法：1. 准备三个试管，分别标记为A、B、C。
2. 在试管A中加入一定量的淀粉溶液。
3. 在试管B中加入一定量的淀粉溶液和一滴淀粉酶。
4. 在试管C中加入一定量的淀粉溶液和一滴淀粉酶。
5. 将试管A放入冰箱，试管B放在室温下，试管C放在加热器上加热。
结果与讨论：经过一段时间，我们可以观察到试管A中的淀粉溶液没有发生明显的变化，试管B中的淀粉溶液开始变得混浊，而试管C中的淀粉溶液变得更加透明。
这是因为酶的活性受温度的影响。
在低温下，酶的活性较低，无法有效催化淀粉的降解。
在适宜的温度下，酶的活性最高，可以充分发挥催化作用。
然而，当温度过高时，酶的结构可能发生变化，导致酶的活性降低甚至失活。
实验三：pH值对酶活性的影响材料与方法：1. 准备三个试管，分别标记为A、B、C。
2. 在试管A中加入一定量的牛奶。
3. 在试管B中加入一定量的牛奶和一滴乳酸酶。
4. 在试管C中加入一定量的牛奶和一滴乳酸酶。
5. 分别在试管A、B、C中加入不同pH值的缓冲液。
结果与讨论：经过一段时间，我们可以观察到试管B中的牛奶开始变酸，而试管C中的牛奶保持了原有的味道。
这是因为酶的活性受pH值的影响。
在适宜的pH值下，酶的活性最高，可以催化乳酸的产生。
然而，当pH值偏离适宜范围时，酶的结构可能发生变化，导致酶的活性降低甚至失活。
酶学实验报告
酶学实验报告酶学是研究酶的性质、结构和反应机制的学科，其研究范围涉及酶的产生与合成、酶的性质和功能、酶的组成和结构、酶的催化反应机制、酶的应用等。
在酶学实验中，我们通过对不同酶的酶活性和稳定性等方面进行测定和分析，可以更好地了解酶的特性和催化机制，为酶的应用和开发提供理论依据和实验基础。
本次实验旨在通过测定蛋白酶的活性、比较不同温度对酶的影响、分析不同pH值下酶的活性，以及评估酶的热稳定性和储藏稳定性等方面，探究蛋白酶的特性和性质。
一、实验原理1.酶的活性酶是一种催化生物反应的蛋白质，通过加速化学反应的速率来起到催化作用。
酶的活性是指酶催化某种反应的速率和效果，是衡量酶催化能力的重要指标。
酶活性的测定常采用比色法、电泳法等方法进行。
2.温度对酶的影响温度是影响酶活性的重要参数之一，酶活性在一定温度范围内随温度的升高而增大，在超过一定温度后则会造成酶的变性。
酶的最适温度是在一定温度范围内酶活性最高的温度，一般情况下，不同酶的最适温度是有差异的。
pH值是指溶液中氢离子浓度的负对数。
不同酶对pH值的敏感度不同。
酶的酸碱敏感性是由其结构和催化机制决定的。
pH值对于酶的特性和稳定性都有显著的影响，一般情况下，不同酶的最适pH值也不同。
4.酶的热稳定性和储藏稳定性酶的热稳定性指酶在一定时间内在不同温度下的稳定性，衡量的是酶的热耐受性。
储藏稳定性指酶的储藏过程中的稳定性，衡量的是酶的保存性能。
二、实验步骤将0.1ml的pH 7.0的酶溶液、1.0ml的0.5%凝固玉米淀粉溶液和4.9ml的缓冲液混合搅拌，分别在50℃和60℃下孵育10分钟，加入5ml的双碘栗色液，比色计读取吸光度，计算出酶的活力。
分别将酶溶液分别置于不同温度下孵育1小时，测定酶的活性，同时分别将酶溶液置于4℃和-20℃中保存一定时间后测定酶的活力，比较其活性变化情况。
三、实验结果温度（℃）活力（U/ml）50 12.9660 6.33四、实验分析根据实验结果，可以看出温度对酶的活力有较大的影响，酶在较高的温度下会受到较大的抑制作用，酶的活性明显下降。
酶的相关实验报告
一、实验目的1. 了解酶的专一性原理。
2. 掌握验证酶的专一性的实验方法。
3. 分析实验结果，得出结论。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高度的专一性，即一种酶只能催化一种或一类底物的反应。
本实验以唾液淀粉酶为研究对象，探究其对淀粉和蔗糖的专一性。
三、实验材料1. 试剂：2%蔗糖溶液、0.5%淀粉溶液、班氏试剂、唾液。
2. 仪器：恒温水浴锅、试管、试管架、滴管。
四、实验步骤1. 取两支试管，分别编号为A、B。
2. 在A试管中加入2%蔗糖溶液2ml，B试管中加入0.5%淀粉溶液2ml。
3. 同时向A、B试管中加入唾液2滴。
4. 将两支试管放入恒温水浴锅中，保持37℃水浴30分钟。
5. 取班氏试剂2ml，加入A试管中，摇匀。
6. 将A试管放入沸水浴中，加热5分钟。
7. 取班氏试剂2ml，加入B试管中，摇匀。
8. 将B试管放入沸水浴中，加热5分钟。
9. 观察两支试管中的颜色变化，记录结果。
五、实验现象1. A试管中产生砖红色沉淀，说明唾液淀粉酶催化蔗糖水解产生还原糖。
2. B试管中无颜色变化，说明唾液淀粉酶对淀粉无催化作用。
六、实验结论1. 唾液淀粉酶对蔗糖具有催化作用，但对淀粉无催化作用。
2. 酶具有高度的专一性，只能催化一种或一类底物的反应。
七、讨论1. 实验结果表明，唾液淀粉酶对蔗糖具有催化作用，而对淀粉无催化作用，证实了酶的专一性。
2. 实验过程中，注意控制实验条件，如恒温水浴温度、时间等，以保证实验结果的准确性。
3. 在实验过程中，发现唾液淀粉酶对蔗糖的催化作用与班氏试剂反应时间有关，提示我们在后续实验中应优化实验条件。
八、应用1. 酶的专一性原理在生物工程、医药、食品等领域具有广泛的应用。
2. 通过了解酶的专一性，可以更好地利用酶催化反应，提高生产效率。
九、注意事项1. 实验过程中，注意保持实验操作规范，避免污染。
2. 实验数据应准确记录，便于分析。
3. 实验结束后，及时清洗实验器材，保持实验室卫生。
酶相关实验报告
一、实验目的1. 了解酶的专一性。
2. 掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。
3. 学会排除干扰因素，设计酶学实验。
二、实验原理酶是一种具有催化功能的蛋白质，其催化作用具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。
本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。
三、实验材料1. 新鲜配制的唾液及其稀释液2. 恒温水浴3. 沸水浴4. 试管及试管架5. 2%蔗糖溶液6. 溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液7. 班氏试剂四、实验步骤1. 稀释唾液的制备用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔。
将唾液用吸管吸取，加入等量的蒸馏水进行稀释。
2. 实验分组将实验分为两组，每组设三组平行实验。
A组：唾液淀粉酶对淀粉的作用B组：唾液淀粉酶对蔗糖的作用3. 实验操作A组：（1）取三支试管，分别加入0.5%淀粉溶液、唾液稀释液和班氏试剂。
（2）将三支试管放入恒温水浴中，加热至37℃，保持30分钟。
（3）取出试管，加入班氏试剂，观察颜色变化。
B组：（1）取三支试管，分别加入0.5%蔗糖溶液、唾液稀释液和班氏试剂。
（2）将三支试管放入恒温水浴中，加热至37℃，保持30分钟。
（3）取出试管，加入班氏试剂，观察颜色变化。
4. 实验现象记录A组：（1）淀粉溶液与唾液稀释液混合后，颜色变浅，班氏试剂加入后出现砖红色沉淀。
（2）淀粉溶液与班氏试剂混合后，颜色无变化。
（3）唾液稀释液与班氏试剂混合后，颜色无变化。
B组：（1）蔗糖溶液与唾液稀释液混合后，颜色无变化，班氏试剂加入后颜色无变化。
（2）蔗糖溶液与班氏试剂混合后，颜色无变化。
（3）唾液稀释液与班氏试剂混合后，颜色无变化。
五、实验结果与分析1. 实验结果A组：唾液淀粉酶对淀粉具有催化作用，使淀粉水解为具有还原性的二糖麦芽糖，班氏试剂检测出现砖红色沉淀。
B组：唾液淀粉酶对蔗糖无催化作用，班氏试剂检测无颜色变化。
2. 实验分析本实验结果表明，唾液淀粉酶具有底物专一性，只能催化淀粉的水解，对蔗糖无催化作用。
酶的性质实验报告
一、实验目的1. 了解酶的基本概念和特性。
2. 探究pH值、温度等因素对酶活性影响。
3. 分析酶催化反应的速度与底物浓度的关系。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一、温和等特性。
酶的活性受多种因素影响，如pH值、温度、底物浓度等。
本实验通过观察不同条件下酶催化反应的现象，分析影响酶活性的因素。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：淀粉、碘液、NaOH、HCl、NaCl、蒸馏水、pH试纸、温度计等。
2. 实验仪器：试管、酒精灯、烧杯、移液器、计时器等。
四、实验步骤1. pH值对酶活性的影响（1）取三支试管，分别编号为1、2、3。
（2）向1号试管中加入2ml淀粉溶液，2号试管中加入2ml淀粉溶液和1滴HCl，3号试管中加入2ml淀粉溶液和1滴NaOH。
（3）观察并记录三支试管中淀粉溶液的颜色变化。
2. 温度对酶活性的影响（1）取三支试管，分别编号为1、2、3。
（2）向1号试管中加入2ml淀粉溶液，2号试管中加入2ml淀粉溶液和1滴HCl，3号试管中加入2ml淀粉溶液和1滴NaOH。
（3）将1号试管放入冷水浴中，2号试管放入温水浴中，3号试管放入热水浴中。
（4）观察并记录三支试管中淀粉溶液的颜色变化。
3. 底物浓度对酶活性的影响（1）取三支试管，分别编号为1、2、3。
（2）向1号试管中加入1ml淀粉溶液，2号试管中加入2ml淀粉溶液，3号试管中加入3ml淀粉溶液。
（3）向每支试管中加入1滴碘液，观察并记录三支试管中淀粉溶液的颜色变化。
五、实验结果与分析1. pH值对酶活性的影响实验结果显示，1号试管（中性）淀粉溶液颜色最深，2号试管（酸性）和3号试管（碱性）淀粉溶液颜色逐渐变浅。
这说明pH值对酶活性有显著影响，最适pH值约为中性。
2. 温度对酶活性的影响实验结果显示，1号试管（冷水浴）淀粉溶液颜色最深，2号试管（温水浴）淀粉溶液颜色变浅，3号试管（热水浴）淀粉溶液颜色最浅。
这说明温度对酶活性有显著影响，最适温度约为温水浴温度。
酶的性质实验报告
酶的性质实验报告实验名称：酶的性质实验实验目的：通过本实验了解酶的性质以及其对底物的影响。
实验材料：1. 酶溶液（例如：淀粉酶、蛋白酶）2. 底物溶液（例如：淀粉溶液、牛皮胶溶液）3. 试管4. 烧杯5. 定量管6. 显微镜7. 加热器8. 活性试纸（例如：碘液等）9. 滤纸10. 温度计实验步骤：1. 准备不同浓度的底物溶液，分别注入试管中。
2. 加入相同浓度的酶溶液到每个试管中。
3. 按照实验要求，在不同的温度下进行反应。
可以使用加热器进行加热，或者将试管放在恒温器中。
4. 在反应一定时间后，取出试管，加入一滴活性试纸，观察变色情况。
5. 在显微镜下观察试管中的反应物，记录变化情况。
6. 重复上述步骤，改变底物和酶的浓度，并进行比较分析。
实验结果及分析：1. 在适宜的温度和酶浓度下，底物溶液会在一定时间内发生显著的变化，例如变色、形成沉淀等。
2. 随着温度的升高，反应速率会增加，但达到一定温度后，酶可能会失去活性，导致反应速率下降。
3. 随着底物浓度的增加，反应速率也会增加，但超过一定浓度后，反应速率会趋于饱和，即酶饱和。
4. 不同种类的酶对不同的底物具有特异性，即酶对底物的选择性。
5. 显微镜观察可以观察到底物的形态变化，例如淀粉被酶分解成糖的过程。
6. 活性试纸可用于定性评估酶的活性，例如当底物被完全分解时，试纸会显示反应产物的存在。
实验结论：1. 酶是一种生物催化剂，能够加速生物体内化学反应的进行。
2. 酶具有温度和pH敏感性，适宜温度和pH范围内可以保持最佳活性。
3. 酶对底物具有特异性，不同酶对应不同底物。
4. 酶对底物浓度和酶浓度具有饱和性，即反应速率会达到一个最大值。
5. 实验中的观察结果可以用于研究酶的性质以及底物与酶之间的相互作用。
实验改进：1. 可以进一步探究酶的最适温度和最适pH，以及对酶活性的影响。
2. 可以尝试不同种类的酶和底物组合，观察它们的反应情况。
3. 可以通过测定反应速率的方法，quantitively评估酶的活性。
“酶”及相关实验设计
“酶”及相关实验设计酶是一类催化生物反应的蛋白质，它能够降低反应的活化能，加快生物化学反应的速率。
酶在生物体内起着至关重要的作用，参与了几乎所有的生物代谢过程，包括消化、呼吸、免疫等。
酶的活性和反应特异性使得它们成为生物科学研究的重要工具，也为生物技术和医药工业提供了重要的基础。
酶的活性受到多种因素的影响，如温度、pH值、离子强度、底物浓度等。
在实验室中，人们经常会设计一些实验来研究酶的特性和功能。
下面将介绍一些常用的酶实验设计：1.酶活性测定实验：酶活性是酶在单位时间内分解或合成底物的量，它可以反映酶催化反应的速率。
常用的测定酶活性的方法包括比色法、荧光法、放射性测定法等。
在比色法中，可以通过测定底物和产物的吸光度差值来计算酶活性。
在实验设计中，需要确定合适的底物浓度、温度、pH值等条件，并考虑选择适当的检测方法和控制实验中的干扰因素。
2.酶底物特异性实验：酶对底物的特异性是指酶只对特定的底物反应而不对其他底物发生反应。
通过设计一系列含有不同底物的反应体系，可以研究酶对底物的特异性。
这种实验设计可以帮助我们理解酶与底物之间的互作机制，有助于酶的功能和催化机理的研究。
3.酶与抑制剂相互作用实验：抑制剂是一类能够降低酶活性的化合物，它们可以通过竞争性抑制、非竞争性抑制等方式影响酶的催化活性。
设计酶与抑制剂相互作用的实验可以研究抑制剂对酶的影响，了解其对酶活性和特异性的调控机制。
这对于新药物设计和开发具有一定的参考价值。
4.酶在不同条件下的活性比较实验：酶的活性受到温度、pH值、金属离子等因素的影响。
设计在不同条件下比较酶活性的实验可以研究这些因素对酶的影响，并优化酶的应用条件。
通过这种实验设计，可以找到最适合酶活性的条件，提高酶的稳定性和催化效率。
酶是生物体内重要的催化剂，对于理解生物代谢过程、疾病发生机制等具有重要的意义。
通过设计不同类型的酶实验，可以深入研究酶的结构、功能和调控机制，为生物科学的发展和生物技术的应用提供重要的支持。
酶学实验实验报告
一、实验目的1. 了解酶的专一性原理和实验方法。
2. 掌握验证酶专一性的基本操作步骤。
3. 分析实验结果，加深对酶专一性的理解。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高度的底物专一性，即一种酶只能催化一种或一类底物发生反应。
本实验以唾液淀粉酶为例，探讨其专一性。
唾液淀粉酶能够催化淀粉水解生成麦芽糖，但对蔗糖无催化作用。
三、实验材料1. 试剂：唾液、淀粉溶液、蔗糖溶液、班氏试剂、碘液、氢氧化钠溶液、盐酸溶液、蒸馏水。
2. 仪器：试管、试管架、恒温水浴、移液器、滴管。
四、实验步骤1. 取三支试管，分别标记为A、B、C。
2. 向A、B、C试管中分别加入2ml淀粉溶液。
3. 向A试管中加入2滴唾液，混合均匀。
4. 向B试管中加入2滴蔗糖溶液，混合均匀。
5. 将A、B试管置于37℃恒温水浴中反应5分钟。
6. 取两支新的试管，分别标记为D、E。
7. 向D、E试管中分别加入2ml淀粉溶液。
8. 向D试管中加入2滴唾液，混合均匀。
9. 向E试管中加入2滴碘液，混合均匀。
10. 观察A、B、D、E试管中溶液颜色的变化。
11. 向F试管中加入2ml淀粉溶液，加入2滴氢氧化钠溶液，混合均匀。
12. 向G试管中加入2ml淀粉溶液，加入2滴盐酸溶液，混合均匀。
13. 将F、G试管置于37℃恒温水浴中反应5分钟。
14. 观察F、G试管中溶液颜色的变化。
五、实验结果与分析1. A试管中溶液颜色变浅，说明唾液淀粉酶能够催化淀粉水解生成麦芽糖。
2. B试管中溶液颜色未发生变化，说明唾液淀粉酶对蔗糖无催化作用，验证了酶的专一性。
3. D试管中溶液颜色变浅，说明唾液淀粉酶在碱性条件下仍具有活性。
4. E试管中溶液颜色未发生变化，说明唾液淀粉酶在酸性条件下活性降低。
5. F、G试管中溶液颜色未发生变化，说明pH值对唾液淀粉酶的活性有影响。
六、结论1. 唾液淀粉酶具有专一性，只能催化淀粉水解生成麦芽糖。
2. 唾液淀粉酶在碱性条件下活性较高，在酸性条件下活性降低。
酶的基本性质实验
⑵0.1%淀粉溶液
⑶1.0%氯化钠溶液
⑷1.0%硫酸铜溶液
⑸1.0%硫酸钠溶液
⑹碘化钾-碘液
四、实验器材与仪器：
1.试管及试管架
2.量筒
3.漏斗
4.脱脂棉花
5.点滴板
6.吸量管
7.恒温水浴（37℃）
五、操作方法和实验步骤：
1号试管呈紫红色，2，3，4，5，6，7，8号试管均呈棕黄色，最终确定最佳反应时间为1 min。
利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同的呈色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活和抑制现象。
淀粉+碘→蓝色
淀粉+淀粉酶Cl-或Cu2+水解产物 + 碘液 → 颜色变化
水解的程度是通过水解混合物遇碘溶液所呈现的颜色之变化来判断的。
三、实验材料与试剂：
1、实验材料
新鲜唾液（1：200稀释）
2、实验试剂
六、实验结果与分析：
试剂处理
试管编号
1
2
3
4
0.1%淀粉溶液（ml）
3
3
3
3
1%CuSO4溶液（ml）
1
1%NaCl溶液（ml）
1
1%Na2SO4溶液（ml）
1
蒸馏水（ml）
1
唾液淀粉酶溶液（ml）
1
1
1
1
混匀，37℃水浴1分钟
KI-I2溶液（滴）
1
1
1
1
记录观察结果
七、讨论、心得：
1、本实验中，试管1是为了验证抑制剂对酶促反应速率的影响；试管2是为了验证激活剂对酶促反应速率的影响；试管3是为了排除氯离子和硫酸根离子的干扰；试管4是作为对照的。
第三部分 酶学相关实验技术
温度、pH等对酶促反应速度的影响一.实验目的了解温度、pH、激动剂和抑制剂对酶促反应的影响。
二.实验原理温度与酶促反应速度关系密切。
温度降低时，酶促反应速度降低以至完全停止；随着温度升高，反应速度逐渐加快。
在某一温度时反应速度达到最大值，此温度称酶作用的最适温度。
温度继续升高，反应速度反而下降。
人体内大多数酶的最适温度在37℃左右。
PH值影响酶促反应速度，是由于酶本身是蛋白质。
PH不仅影响酶蛋白分子某些基团的解离，也影响底物的解离程度，从而影响酶与底物的结合。
当酶促反应速度达到最大值时的溶液pH值，称为该酶的最适pH。
不同的酶最适pH值不尽相同，人体多数酶的最适pH值在7.0左右。
例如唾液淀粉酶的最适pH值为6.8。
凡是能够提高酶活性，加快酶促反应速度的物质都称为酶的激动剂。
例如Cl-是唾液淀粉酶的激动剂。
凡是能够降低酶的活性，使酶促反应速度减慢，又不使酶变性的物质称为酶的抑制剂。
例如C u2+是唾液淀粉酶的抑制剂。
三.试剂器材试剂⑴0.5％淀粉液⑵0.5％NaCl溶液⑶不同pH值缓冲溶液的配制:①1/15mol/L KH2PO4液：称取纯KH2PO4 9.078g加蒸馏水溶解并稀释成1000ml。
②1/15mol/L Na2HPO4液：称取Na2HPO4 ·2H2O 11.815g，加蒸馏水溶解并稀释成1000ml。
上述两液下列比例混合均匀，即可得到不同pH值的缓冲溶液。
⑷u4器材水浴锅、电驴、比色盘、试管吸管、烧杯三.实验方法及步骤制备稀唾液：用清水漱口，含蒸馏水少许，咀嚼以刺激唾液分泌。
在小漏斗中垫入一块薄薄的脱脂棉，直接将唾液吐入漏斗过滤。
取过滤的唾液2ml加蒸馏水18ml混匀备用。
（一）温度对酶促反应速度的影响1.取试管3支，编号，按下表依次加入各种试剂。
2.混匀后，将1号、2号、3号试管分别置于沸水浴、温水浴（37～40℃）和冰水浴中5分钟，此间振荡之，使温度达到平衡。
然后向各试管中加入稀唾液1ml混匀，15分钟后取出，并向各试管加碘液1滴，观察颜色变化并予以分析。
专题二、酶的相关实验
专题二酶的相关实验命题点一鉴定酶的本质【迎考必备】两种方法鉴定酶的本质是蛋白质从化学成分上分析，绝大多数酶是蛋白质，少数是RNA，通过下面的方法鉴定酶的本质是蛋白质。
1.显色鉴定法：根据双缩脲试剂与蛋白质作用产生紫色反应，设计实验：(1)实验组：酶液+双缩脲试剂→是否发生紫色反应(检测)(2)对照组：蛋白质+双缩脲试剂→紫色反应(检测)2.酶解鉴定法：用蛋白酶处理某种酶，再观察其功能是否受到影响，来确定该酶的本质。
(1)实验组：唾液淀粉酶(用蛋白酶处理)+淀粉→ 用斐林试剂检测(是否出现砖红色)(2)对照组：唾液淀粉酶(不用蛋白酶处理)+淀粉→ 用斐林试剂检测(出现砖红色)【典例】(2019·武汉七校联考)猪笼草是一种食虫植物，为了验证猪笼草分泌液中有蛋白酶。
某学生设计了两组实验，如图所示。
在35 ℃水浴中保温一段时间后，甲、乙试管中加入适量的双缩脲试剂，丙、丁试管中不加任何试剂。
对实验现象的预测正确的是()A.甲和乙中溶液都呈紫色；丙和丁中蛋白块消失B.甲中溶液呈紫色、乙中溶液不呈紫色；丙中蛋白块消失、丁中蛋白块不消失C.甲和乙中溶液呈紫色；丙中蛋白块消失、丁中蛋白块不消失D.甲和乙中溶液都不呈紫色；丙中蛋白块消失、丁中蛋白块不消失【解析】选C【赢考必练】现有无标签的稀蛋清、葡萄糖、淀粉和淀粉酶溶液(淀粉酶的本质是蛋白质，可将淀粉水解成还原糖)各一瓶，可用双缩脲试剂、斐林试剂和淀粉溶液将它们鉴定出来。
(1)用一种试剂将上述4种溶液区分为两组，这种试剂是________，其中稀蛋清和_________将发生______色反应。
(2)用_________试剂区分不发生显色反应的一组溶液。
产生_________现象的为_________溶液。
(3)区分发生显色反应一组溶液的方法、鉴定结果及结论分别是：℃方法：将淀粉溶液分别与发生显色反应的两种溶液混合，一段时间后，用_________试剂在一定条件下分别处理上述两种混合液。
生物实验报告酶
一、实验目的1. 了解酶的概念和特性。
2. 探究酶活性受温度、pH值和底物浓度的影响。
3. 通过实验验证酶活性测定的方法。
二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效性、专一性和可调节性。
酶的活性受多种因素的影响，如温度、pH值、底物浓度等。
本实验通过测定酶催化反应的速率，来研究酶活性受各种因素的影响。
三、实验材料与仪器材料：1. 酶制剂（如淀粉酶、蛋白酶等）2. 底物（如淀粉、蛋白质等）3. 温度计4. pH计5. 酶活性测定试剂盒仪器：1. 恒温水浴锅2. pH计3. 酶活性测定仪4. 移液器5. 试管四、实验方法与步骤1. 实验一：探究酶活性与温度的关系- 将淀粉酶、淀粉和缓冲液分别加入试管中，混匀。
- 将试管放入不同温度的恒温水浴锅中，分别设定为0℃、25℃、37℃、50℃、75℃。
- 定时取样，用酶活性测定试剂盒测定酶活性。
- 记录不同温度下的酶活性。
2. 实验二：探究酶活性与pH值的关系- 将淀粉酶、淀粉和缓冲液分别加入试管中，混匀。
- 调整pH值分别为2、4、6、7、9、11。
- 将试管放入恒温水浴锅中，设定温度为37℃。
- 定时取样，用酶活性测定试剂盒测定酶活性。
- 记录不同pH值下的酶活性。
3. 实验三：探究酶活性与底物浓度的关系- 将淀粉酶、不同浓度的淀粉和缓冲液分别加入试管中，混匀。
- 将试管放入恒温水浴锅中，设定温度为37℃。
- 调整pH值为7。
- 定时取样，用酶活性测定试剂盒测定酶活性。
- 记录不同底物浓度下的酶活性。
五、实验结果与分析1. 实验一：酶活性与温度的关系- 结果：随着温度的升高，酶活性逐渐增加，在37℃时达到最大值，之后随着温度的升高，酶活性逐渐降低。
- 分析：酶活性受温度影响较大，高温会使酶分子结构发生变性，导致酶活性降低。
2. 实验二：酶活性与pH值的关系- 结果：在pH值为7时，酶活性达到最大值，pH值过高或过低都会使酶活性降低。
- 分析：酶活性受pH值影响较大，因为pH值会影响酶分子中的活性中心，使其失去活性。
实验9-酶化学实验
酶化学
1. 唾液淀粉酶的作用 原理：唾液中含有淀粉酶，此酶催化淀粉水解 成麦芽糖。 利用碘试剂、斑氏试剂检查淀粉及水解产物可 断定酶的作用。
淀粉 淀粉糊精 紫色糊精 红色糊精 麦芽糖 碘试剂：蓝色 紫色 蒸馏水漱口，清除口腔内 食物残渣，收集唾液，并用脱脂棉过滤（在实验 过程中不断收集），过滤得唾液用蒸馏水稀释， 稀释倍数根据酶活力大小而定。
唾液 蒸馏水 5滴 —
1%淀粉（ml）
对照管 实验管 1 1 — 5滴
将两管混匀后，立即各取1滴于比色盘内，各 加1滴碘试液观察颜色，以后再隔30秒钟做一 次，待实验管的水解液加碘无颜色改变为止。
2.唾液淀粉酶的专一性
原理： 酶是具有高度专一性的催化剂，一种酶只能 催化一种或一类物质的化学反应，淀粉酶只能催 化淀粉的水解而不能催化蔗糖水解。 麦芽糖＋斑氏试剂 棕红色沉淀
【操作】 1．取试管1支加2%蔗糖液3滴，斑氏试剂1ml、直接加热 煮沸2-3min，溶液颜色不变，说明（why？）
2．取试管2支，分别加1%淀粉1ml及2%蔗糖1ml，向两管 中各加唾液2滴混匀，放置10分钟。 3．于两试管中各加斑氏试剂1毫升直接煮沸，观察并解释 结果。
【试剂】 斑氏试剂：柠檬酸钠173g，无水Na2CO3100g溶于700ml， 水中加热熔解，冷却，慢慢加入17.3％CuSO4100ml，边加 边摇，加蒸馏水至1000ml。
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第十四章常用酶类测定第一节氧化还原酶类氧化还原酶能够催化氢氧原子或电子从一种底物转移到另一种底物上，它包括一大类酶如脱氢酶、氧化酶、过氧化物酶以及加单氧酶等。
目前临床诊断中常用的氧化还原酶主要有乳酸脱氢酶及其同工酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、铜蓝蛋白、单胺氧化酶和超氧化物歧化酶等。
实验92 连续监测法测定乳酸脱氢酶总活性(L-P反应法)乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LD)是糖酵解和糖异生的一个重要酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆地催化乳酸(L)和丙酮酸(P)之间的氧化还原反应。
乳酸+NAD+ 丙酮酸+NADH+H+其中L→P为正向反应，P→为逆向反应。
正反两向反应的最适pH不同，其中正向反应最适pH为8.8～9.8，偏碱，能使平衡偏向生成丙酮酸的方向。
其优点是乳酸和NAD+稳定性好，且NAD+纯品易得、价格较低，过量乳酸对LD活性的抑制较小，反应线性较好。
缺点是需要较高的底物浓度，反应速度较慢。
逆向反应的最适pH为7.4～7.8，与生理性pH相同。
其显著的优点在于NADH用量少，仅为正向反应的3%左右，而反应速度比前者约快3倍，灵敏度高。
但丙酮酸于NADH的稳定性较差，过量的丙酮酸对LD活性的抑制作用较大。
LD活性测定时正向反应和逆向反应都可以运用，但1996年中华医学会检验学会酶学组专家推荐选择正向反应。
【原理】LD催化下述反应：+++NADHNADL LD丙酮酸乳酸-H+−→+−在反应过程中，乳酸氧化生成丙酮酸，同时使NAD+还原为NADH。
NADH在340nm处有吸收峰，因此反应会引起340nm吸光度的增高，并且吸光度增加的速率与样本中LD活性呈正比的关系。
【试剂与器材】1．Tris-乳酸锂缓冲液(含Tris 52.5mmol/L ，乳酸锂52.5mmol/L) 称取Tris 6.34g ，乳酸锂5.04g ，溶于约800ml 蒸馏水中，置37℃水浴箱，使温度达到平衡后，在pH 计下用1mol/L 的HCl(约加入45ml)调节pH 至8.9，再加入蒸馏水至1 000ml ，冰箱保存。
2． 底物应用液(含Tris 52.5mmol/L ，乳酸锂52.5mmol/L ，NAD + 6mmol/L ，临用前现配) 1ml Tris-乳酸锂缓冲液加4.2mg NAD +的浓度比例配制。
3．仪器以半自动生化分析仪为例。
【操作步骤】1．血清稀释度 血清50μl ，加37℃预温的底物应用液1.0ml ，立即吸入自动分析仪，此时血清稀释倍数为21。
2．主要参数：系数 3 376孵育时间 30s连续检测时间 60s波长 340nm吸样量 0.5ml温度 37℃【计算】05.005.16220106min /⨯⨯∆=A L U LD ）（ 3376min ΔA ⨯=式中，△A/min ：平均每分钟吸光度增加值；6220:340nm 处NADH 的微摩尔吸光系数；1.05：比色液体总体积(ml)；0.05：血清用量(ml)。
【参考范围】 成人109～245 U/L 。
【临床意义】 LD 活性增高主要见于心肌梗死、肺梗塞、病毒性肝炎、肝硬化、肾脏疾病、某些恶性肿瘤、白血病、以及非恶性疾病如传染性单核细胞增多症、贫血、肌营养不良、胰腺炎等，一些肿瘤转移所致的胸腹水中LD 活性往往有升高。
目前临床测定LD 活性常用于心肌梗死、肝病和恶性肿瘤的辅助诊断。
LD 活性降低目前没有发现重要的临床意义。
【注意事项】1．不同的LD 同工酶对温度的敏感性是不同的，组织提取液若放于－20℃过夜，LD 4和LD 5会丧失全部的活性。
血清标本应存放于室温下，一般2～3d 不会出现活性的丢失。
如果血清标本需要存放较长时间，应加入10mg/ml的NAD+或3.1mg/ml的谷胱甘肽后于4℃保存。
2．LD活性测定也可用抗凝血浆，但不同抗凝剂对LD测定的影响不同：草酸盐抗凝剂、EDTA能抑制LD活性，而肝素的影响不大。
3．由于红细胞、血小板中含有大量的LDH，故严禁使用溶血标本。
在采用血浆作为标本时必须用3 000r/min离心15min以除去血小板。
4．LD活性能被巯基试剂所抑制，硼酸、丙二酸、草酸、以及EDTA都是竞争性抑制剂。
【评价】1．LD广泛存在于人体各组织的细胞浆中，以肝、心肌、肾、骨骼肌、胰腺和肺含量最多。
各组织、器官中酶活性是血清酶活性的1 000倍，因此各种组织病变时可以释放LD入血，导致血清中酶活性的升高，特异性较差。
2．本实验是根据正向反应(L-P)建立的连续监测法，其优点在于：乳酸盐与NAD+底物溶液的稳定性较好，冰冻放置可稳定6个月以上。
且两溶液的浓度对测定方法的影响最小，NAD较少被产物抑制。
反应的线性范围较宽(726U/L)，重复性较好，精密度较高(LD为65U/L 时日间CV%为5.8%，LD为149U/L时日间CV为3.2%)，特异性高(血清中存在的非LD的其它NAD+类氧化还原酶的内源性底物很少，加上样本被高度稀释，故这些酶的干扰作用可忽略不计)。
实验93 比色法测定乳酸脱氢酶总活性【原理】以NAD+为受氢体，乳酸脱氢酶(LD)催化L-乳酸脱氢，生成丙酮酸。
丙酮酸与2,4-二硝基苯肼反应生成丙酮酸二硝基苯腙，后者在碱性的溶液中呈棕红色。
其颜色的深浅与丙酮酸的浓度呈正比，由测得的丙酮酸含量计算出酶的活性。
【试剂】1．底物缓冲液(pH 8.8 ，含0.3mol/L乳酸锂) 称取二乙醇胺2.1 g，乳酸锂2.9 g，加蒸馏水约80ml，用1mol/L HCl调节pH至8.8，加蒸馏水至100ml。
2．11.3mmol/L NAD+溶液称取NAD+ 15mg(若含量为70%，则取21.4mg)，溶于2ml 蒸馏水中，4℃可保存至少2周。
3．1mmol/L 2,4-二硝基苯肼溶液取2,4-二硝基苯肼198mg，加10mol/L盐酸100ml，待溶解后加蒸馏水至1L。
于棕色瓶中室温放置。
4．0.4mol/L NaOH。
5．0.5mmol/L丙酮酸标准液(临用前配制) 准确称取丙酮酸钠(AR)11mg，以底物缓冲液溶解后，移入200ml容量瓶中，用底物缓冲液定容至刻度。
【操作步骤】1．校正曲线的制作按表14-1操作。
2．表14-1 校正曲线的制作加入物(ml) B 1 2 3 4 5丙酮酸标准液0 0.025 0.05 0.10 0.15 0.20 底物缓冲液0.5 0.475 0.45 0.40 0.35 0.30 蒸馏水0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 0.11 2,4-二硝基苯肼溶液0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.5037℃水浴15min0.4mol/L NaOH 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 相当于LD活性(金氏)单位0 125 250 500 750 1 000室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用B管调零，读取各管吸光度。
以吸光度值为纵坐标，相应的酶活性单位为横坐标绘制校正曲线。
3．酶活性的测定按表14-2操作。
表14-2 LD酶活性的测定加入物(ml) 测定管对照管血清0.01 0.01NAD+底物缓冲液0.50 0.5037℃水浴15minNAD+溶液0.1 －37℃水浴15min2,4-二硝基苯肼溶液0.5 0.5NAD+溶液－0.137℃水浴15min0.4mol/L NaOH 5.0 5.0混匀，室温放置5min后，于440nm波长处比色，比色杯光径为1.0cm，用蒸馏水调零，读取各管吸光度。
以测定管与对照管吸光度之差值查校正曲线，得酶活性。
单位定义以100ml血清，37℃，作用底物15min，产生1μmol丙酮酸为一个金氏单位。
【参考范围】190～437金氏单位【注意事项】1．乳酸锂、乳酸钾、乳酸钠都可以作为LD的底物，但后两种为水溶液，若保存不当容易产生酮酸类物质从而抑制酶促反应，且含量不够准确，目前少用。
而乳酸锂为固体，稳定、易称量。
2．除用二乙醇胺缓冲液外，还可用Tris或焦磷酸缓冲液。
而甘氨酸对LD有抑制作用，故不采用甘氨酸缓冲液。
3．标本严禁溶血，也不采用草酸盐、EDTA抗凝血浆。
由于LD4、LD5对冷不稳定，不应贮存于冰箱中，血清标本室温可存放2～3d。
4．比色应在5～15min内完成，否则吸光度值会降低。
【评价】LD活性测定多采用乳酸生成丙酮酸的反应方向，但反应开始的转化速率是不成线性的。
反应速率与温度有关，温度越高，速度越快。
以2,4-二硝基苯肼作为底物测定酶活性所得结果不精确。
实验94 琼脂糖电泳法测定乳酸脱氢酶同工酶LD广泛存在于人体各组织的细胞浆中，总活性的测定缺乏组织器官特异性，临床应用有限。
而其同工酶的测定具有器官特异性和更高的灵敏度。
因此目前除总活性测定外，还结合LD同工酶的测定来提高LD测定的临床应用价值。
LD在体内共有5种同工酶形式，每个酶分子由不同数量的H和M亚基共4条多肽链构成，各组织所含的主要同工酶有差异。
血清LD同工酶可用多种方法进行分离测定，包括：①电泳法；②免疫化学法；③层析法；④热稳定和抑制法。
电泳法分离LD同工酶使用的支持介质包括琼脂糖凝胶和醋酸纤维薄膜、聚丙烯酰胺凝胶等。
琼脂糖凝胶电泳法灵敏度高，易于定量分析，由阳极至阴极分别为：LD1、LD2、LD3、LD4和LD5。
电泳结束后可用光密度计扫描、比色法和荧光法测定每种同工酶的相对含量。
【原理】LD各同工酶的一级结构和等电点不同，在一定的电泳条件下，使其在支持介质上分离。
然后利用酶的催化反应进行显色：以乳酸钠作为底物，LD催化乳酸脱氢生成丙酮酸，同时使NAD+还原为NADH。
吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)将NADH的氢传递给氯化碘代硝基四唑蓝(INT)，使其还原为紫红色的甲臢化合物。
有LD活性的区带就会显紫红色，且颜色的深浅与酶活性呈正比，利用光密度仪或扫描仪可求出各同工酶的相对含量。
【试剂】1．巴比妥缓冲液(pH 8.6，离子强度0.075) 称取巴比妥钠15.458 g，巴比妥2.768 g，溶解于蒸馏水中，加热助溶，冷却后定容至1L (用于电泳) 。
2．0.082mol/L巴比妥-盐酸缓冲液(pH 8.2) 称取巴比妥钠17.0 g，溶解于蒸馏水中，加1mol/L 盐酸24.6ml，蒸馏水定容至1L (用于凝胶配制) 。
3．10mmol/L乙二胺四乙酸二钠称取EDTA·Na2372mg，溶解于蒸馏水中，并定容至100ml。
4．5g/L缓冲琼脂糖凝胶称取琼脂糖0.5g，加入50ml pH 8.2的巴比妥-盐酸缓冲液中，再加入EDTA·Na2 溶液1.2ml，以及蒸馏水48.8ml，隔水煮沸溶解，不时摇匀，趁热分装到大试管中，冷后用塑料膜密封管口置冰箱备用。