淋球菌核酸扩增荧光检测(NG-DNA)

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淋球菌核酸检测试剂盒的质量评价

淋球菌核酸检测试剂盒的质量评价王春娥;卢旭;石继春;刘茹凤;李红;陈琼;唐静;陈翠萍;叶强【摘要】目的对12种淋球菌核酸检测试剂盒进行质量评价.方法应用12种淋球菌PCR试剂盒质控参考品,按照各试剂盒说明书的方法提取模板及核酸扩增,检测各试剂盒的阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、批内精密度及最低检测限,并进行比较分析.结果 12种试剂盒的阳性参考品符合率及阴性参考品符合率均为100％;批内精密度:各试剂盒检测结果Ct值的变异系数均小于5.0％;12种试剂盒中有10种试剂盒的最低检出限能达到1×103个菌/mL,其中3种能达到1×102个菌/mL,但另外2种试剂盒的最低检出限仅达到1×104个菌/mL.结论 12种淋球菌核酸检测试剂盒质量均较好,性能可靠.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2016(013)024【总页数】4页(P8-11)【关键词】淋球菌;试剂盒;国家参考品;实时PCR【作者】王春娥;卢旭;石继春;刘茹凤;李红;陈琼;唐静;陈翠萍;叶强【作者单位】中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050;中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050【正文语种】中文【中图分类】R515［Avsteact］Ov jective To evaluate twelve PCR kits for detection of Neisseria gonorrhea.M ethods Twelve kinds of Neisseria gonorrhoeae PCR kitwere selected，the templates extract and nucleic acid amplification of the quality control reference were conducted according to the kit introduction.The coincidence rates of positive and negative reference，the within-run precision and the lowest detection limit of the kits were detected according the national reference panel of Neisseria gonorrhea and were comparatively analyzed.Results The coincidence rates of positive reference and negative reference of all kits were 100%，and the CV of test results for precision was all less than 5.0%.The lowest detection limit of 10 kits was 1×103bacteria/mL，and 3 kits was 1×102bacteria/mL among them.But the CV of the other 2 kits was only 1×104ba cteria/mL.Conclusion The twelve PCR kits for Neisseria gonorrhea are reliable.［Key woeds］Neisseria gonorrhea；Kit；National reference panel；Real-time PCR淋球菌常可引起人类泌尿生殖系统化脓性感染，俗称淋病。

淋病诊断的金标准

淋病诊断的金标准淋病是由淋球菌引起的一种性传播疾病，常见于青壮年人群。

淋病的治疗非常重要，因为不及时治疗可能导致多种严重的后果，如不孕症、输卵管炎、子宫内膜异位症、阴道狭窄和盆腔炎等症状。

早期的淋病症状会与其它疾病症状相似，因此进行淋病的准确诊断非常重要。

目前，淋病诊断的金标准是实验室检测淋球菌。

下面将介绍几种主要的检测方法。

1.聚合酶链反应(PCR)检测PCR是一种高灵敏度和高特异性的分子生物学技术，可以扩增特定DNA序列。

PCR检测法采用采集尿液或分泌物样本中的淋球菌DNA，通过放大特异的DNA片段来检测样本中是否存在淋球菌。

这种方法可以检测到很小的淋球菌数量，因此被视为淋病检测的金标准。

PCR方法非常适用于无症状感染的早期诊断，而且具有高度的敏感性和特异性。

2. 细菌培养法检测细菌培养法是最传统的淋球菌检测方法之一。

该方法采用患者收集的分泌物样本，特别是尿液样本，将其用于培养淋球菌。

这种方法的优点是可以非常确切地识别淋球菌，但需要较长时间才能获得结果，通常需要等待3至5天。

此外，细菌培养法的特异性和灵敏性相对较低，因此可能会产生假阳性或假阴性结果。

3. 病原体抗原检测病原体抗原检测是在采集尿液、分泌物等样本后，通过检测淋球菌表面抗原来发现病原体的一种方法。

这种方法具有较高的特异性和敏感性，通常可以在几个小时内获得结果。

但是，病原体抗原检测的缺点是不能区分活菌和死菌，而且对于静止的菌，也难以检测到它们。

4. 免疫层析技术（ICT）检测免疫层析技术是一种免疫学检测方法，它可以检测到尿液、分泌物或血清样本中淋球菌的特异性抗原，是非常快速和便捷的检测方法。

免疫层析技术通常可以在20分钟内获得结果,同时具有适当的灵敏度和特异性,但需要注意的是，免疫层析技术检测的金标准要求的许多实验条件都需要严格的规范化和标准化，以保证其准确性。

结论：淋病是一种性传播疾病，具有严重的后果。

准确诊断对于早期治疗非常重要。

淋病的报告单模板

淋病的报告单模板摘要淋病是一种性传播疾病，由淋球菌引起。

本文提供了淋病的报告单模板，包括患者信息、检验结果和治疗建议等内容，以供医务人员参考。

患者信息姓名：性别：出生年月：联系电话：病历号：临床表现淋病的症状通常在感染后1-3周内出现，表现为以下症状：•尿道分泌物增多•尿道烧灼、瘙痒、疼痛等不适感•尿频、尿急、夜尿增多•下腹部不适或疼痛•性交后局部不适或疼痛检验结果医生应根据临床表现及检测报告确定诊断结果。

PCR检测PCR检测是目前最为常用的淋病检测方法，其灵敏度和特异性均较高。

一般情况下，PCR检测的结果可在24-48小时内出来。

淋球菌PCR检测结果：阳性/阴性：细菌培养淋病细菌培养需要较长时间，一般需要3-7天。

如果淋球菌分离出来，则诊断结果为淋病。

淋球菌细菌培养结果：阳性/阴性：治疗建议淋病需要使用抗生素治疗，且应避免直接性接触，以免交叉感染。

抗生素治疗淋病治疗的首选药物为头孢菌素或青霉素类抗生素，例如：•头孢孟多（Ceftriaxone）•青霉素G•百福龙（Azithromycin）其他治疗方法•休息•饮食清淡•多喝水•禁止饮酒、性生活预后如果得到及时、恰当的治疗，淋病的预后通常很好。

但如果不治疗或治疗不及时不充分，则可能导致严重后果。

结论淋病是一种常见的性传播疾病，医务人员应该密切关注淋病的诊断和治疗。

本文提供了淋病的报告单模板，帮助医务人员更清晰地了解患者的症状、检测结果和治疗建议。

女性淋球菌检查方法

女性淋球菌检查方法女性淋球菌是一种常见的性传播疾病，由淋球菌引起。

它可以引起女性生殖道的感染，包括宫颈、子宫和输卵管等部位。

如果不及时治疗，女性淋球菌感染可能导致一系列严重的并发症，包括不孕症和盆腔炎等。

因此，对于有性活动的女性来说，及时进行女性淋球菌检查非常重要。

女性淋球菌的检查通常可以通过下面几种方法进行：1. 宫颈涂片检查：这是最常用的女性淋球菌检查方法之一。

医生会使用一根专用的刷子从宫颈表面采集细胞样本，并送到实验室进行分析。

实验室会检测细胞样本中是否存在淋球菌的DNA，从而确定是否感染淋球菌。

2. 核酸扩增技术：核酸扩增技术是一种先进的分子生物学技术，可以直接检测淋球菌的遗传物质。

这种方法的优势在于其高度敏感性和特异性，可以在病原体数量非常低的情况下检测到淋球菌感染。

3. 荧光抗体法：这种方法是通过荧光标记的抗体与淋球菌细胞壁上的特定抗原结合来检测淋球菌感染。

医生会在宫颈涂片上涂抹荧光抗体，然后使用荧光显微镜观察并分析结果。

在进行女性淋球菌检查之前，需要注意以下几点：1. 检查时间：女性淋球菌通常在感染后2-6天内才能被检测出来，因此最佳的检查时间是在性接触后的7天内进行。

如果在这个时间范围内进行检查，可以提高检查结果的准确性。

2. 避免尿液排出：在进行女性淋球菌检查时，需要避免在检查前2小时内排尿。

排尿会冲洗掉淋球菌，导致检查结果不准确。

3. 避免使用抗生素：如果已经接受抗生素治疗，可能会在检查时抑制淋球菌的生长，导致检查结果为假阴性。

因此，在检查前需要避免使用任何抗生素。

女性淋球菌的检查是一项简单而重要的健康检查，可以有效地发现感染并及时进行治疗。

在进行检查时，需要选择合适的方法并注意检查时间和准备事项。

如果发现感染，及时就医并按照医生的建议进行治疗。

此外，还需要采取预防措施，如正确使用安全套，避免多次性伴侣和定期接受性健康检查，以降低感染的风险。

女性淋球菌虽然对女性的生殖系统健康造成了严重威胁，但只要我们保持健康的生活方式，定期接受检查和治疗，就可以有效地预防和控制淋球菌感染的风险。

淋病奈瑟菌的分子生物学检验

一、淋病奈瑟菌的基因组结构特征
淋病奈瑟菌FA1090菌株是最早被完成测序研究的淋病奈瑟菌菌株之一，它的染色体DNA长度为2.15Mbp，其中G+C含量为52.68%。编码区的 DNA长度占总长度的78%。共含有2069个基因，包括2002个具有编码功能的基因和67个编码结构性 RNAs基。Chung GT等人在2008年报道了淋病奈瑟菌新菌株NCCP11945的基因组结构。他们发现 NCCP11945染色体的DNA长度为2.23Mbp，据估计可以编码2622个开放性阅读框。同时，NCP11945 含有一个能编码12个ORFs的质粒，其DNA长度为 4153bp。据他们估计，整个基因组的编码基因的密度约为87%。全基因组平均G+C含量为52.4%。这与FA1090菌株相类似。
4．链替代扩增技术
SDA是一种基于酶促反应的新的DNA体外等温扩增技术。目前使用较多的是Becton Dikinson公司生产的Probe Tec ET，可以同时对CT和NG进行检测，Probe Tec ET特异性扩增 NG染色体PivNg基因，然后用荧光标记的探针检测其相应的DNA靶序列，2小时可以完成96份标本检测。与培养法相比具有很高的敏感性和特异性。
1．克服了淋球菌培养时间长等缺点，提高了临床样本检测的阳性率和准确性。
2．通过分子生物学技术可以进行淋球菌感染的分子流行病学调查。
3．可以准确、快速评价药物治疗的效果。 4．有利于淋病的鉴别诊断。
谢谢！
二、淋病奈瑟菌的分子生物学检验内容
（一）淋病奈瑟菌核酸的检测
1．聚合酶链反应
PCR是分子生物学中最常用检测基因的技术手段，也是淋病奈瑟菌基因诊断中最基本的方法。 PCR引物的设计应选择与其相应的靶基因，多采用：①隐蔽质粒cppB基因(cppBH01/3、1/2及 cppBN3/4)；②16s rRNA基因(SL67/59、NGPl/2)； ③porA假基因；④编码外膜蛋白基因（omp基因）；⑤opa基因等；⑥胞嘧啶DNA甲基转移酶基因(Roche Cobas Amplicor)。不同靶基因设计引物对PCR的敏感性和特异性有一定的影响。

淋球菌快速检测方法

淋球菌快速检测方法淋球菌是一种常见性传播疾病的致病菌，该疾病会引起尿道炎、宫颈炎、盆腔炎等一系列症状，如果不及时治疗，将会带来严重后果。

现代实验室技术的发展，为淋球菌的快速检测提供了可能。

本篇文章将介绍几种常见的淋球菌快速检测方法。

一、核酸扩增技术核酸扩增技术是一种基于淋球菌DNA序列的敏感快速检测方法。

该技术可以通过扩增富含在淋球菌细胞表面的主要外膜蛋白（porB和ompA）基因，将淋球菌DNA检测出来。

核酸扩增技术的优势是敏感度高，可以检测出数量较少的细菌，同时具有较高的特异性，可以排除其他细菌的干扰。

核酸扩增技术还可以分为PCR和LAMP两种方法。

PCR：该方法通过利用DNA聚合酶对模板DNA的扩增，使得淋球菌DNA得以繁殖，最终产生充足的DNA量从而实现快速检测。

LAMP：该方法使用一组特异性高的介导引，引导引物扩增淋球菌DNA；同时，引物对复制DNA进行逐步退火，不断产生大量Tth酶，加速DNA复制。

该方法的优点包括快速、高灵敏度和高特异性。

二、抗原检测技术抗原检测技术是一种基于淋球菌周围结构中的抗原与抗体作用原理的检测方法。

该技术的原理是将尿道、宫颈或其他部位的标本与包含特异性抗体的检测物质结合，如果存在淋球菌抗原，那么该物质中的特异性抗体将与之结合，从而被检测出来。

此外，抗原检测技术还可以分为两种方法。

磁珠免疫分析法（MIA）：该方法主要分别利用MIA系统与放射免疫分析法，通过联合检测尿液中淋球菌抗原，提高淋球菌检测的敏感度和特异度。

免疫色谱检测法（ICA）：该法通常使用比色杆或凝胶将尿液标本转化为表现为颜色变化的带，从而检测淋球菌抗原。

三、细菌培养法细菌培养法是一种常用的淋球菌诊断方法，该方法先将标本放置在适宜的培养基上进行培养，然后镜检检查培养出来的细菌形态学，并通过转化菌株后行凝集抗体判定菌群是否为淋球菌。

该方法具有较高的特异性，可以对淋球菌进行精细的检测。

虽然细菌培养法的特异性和敏感性不高，但它仍然是一种目前最为常见的淋球菌检测体系，对于感染患者的确诊和治疗提供类似于淋球菌感染诊断的金标准。

常规PCR法和培养法检测女性生殖道感染者NG_CT_UU的比较

1 材料与方法
11 1 标本来源 :2003 年 7 月至 2003 年 12 月柳州地区防疫站性病门诊疑诊为女性生殖道感染的患者 110 例 ,均有白带增多、发黄、有异味、伴外阴瘙痒、宫颈分泌物增多或宫颈水肿等炎症。年龄 1 8 ～ 6 2 岁。用棉拭子从宫颈中内 11 5 ～ 3 cm 处稍用力捻转 1～2 周后放入无菌管立即送检。 11 2 仪器与试剂 :仪器为美国 PE 公司产 TC - 48 型 DNA 扩增仪、北京六一仪器厂产电泳仪、上海长明光学电子仪器厂产 ZF - A 型紫外透射分析仪。采用上海复星实业有限公司生产 N G、CT 、U U 的 PCR21 试剂盒 ; N G 采用广西皮研所生产的桂敏培养基 ; UU 采用广东珠海浪峰生物工程公司生产的支原体培养基 ; McCoy 细胞作为 CT 培养细胞。 11 3 方法 11 31 1 常规 PCR 法 :N G、CT 、U U 的常规 PCR 检测按试剂盒说明进行。进行 40 个循环扩增、2 %琼脂糖凝胶电泳 ,在紫外灯上检测 ,出现相应预期扩增片段长度为阳性。每批实验均设阴性及阳性对照。 11 31 2 培养法 :细菌培养严格按全国临床检验操作规程[3] 进行 ,N G 使用淋球菌培养基培养 ,置于 5 %CO2 培养箱中 ,在 361 5°C 温度下培养 24～48 h ,平板出现菌落者再行氧化酶定性实验 ,若出现红色为阳性。UU 置于解脲支原体液体培养基培养 ,置于 361 5 ℃温箱中培养 24～48 h ,培养液由黄色转变为红色 ,判断为阳性。CT 培养采用 McCoy 细胞为宿主细胞 ,按照现代性传播疾病实验室诊断技术[4] 的方法进行 ,最后经姬姆萨染色 ,在细胞中找到包涵体为阳性。 11 4 统计学处理 :运用 SPSS101 0 统计软件进行数据分析 , 采用χ2 检验。

感染性疾病检查项目一览表

结核杆菌核酸扩增（TB-DNA）、
找抗酸杆菌（染色镜检）
不抗凝血3ml
痰液
痰涂片
感染性疾病检查项目一览表
组合项目
内容
标本采集
性病基因诊断五项
淋球菌核酸扩增（NG-DNA）、沙眼衣原体核酸扩增（CT-DNA）、解脲支原体核酸扩增（UU-DNA）、单纯疱疹病毒核酸扩增（HSV-DNA）、乳头瘤病毒6，11型核酸扩增（HPV6,11-DNA）、乳头瘤病毒16，18型核酸扩增（HPV16,18-DNA）
分泌物、精液、前列腺液
性病培养
细菌培养+药敏、淋球菌培养+药敏、
支原体（解脲、人型）培养+药敏
常规检查系列
常规检查（白带、精液、前列腺液）
淋病双球菌涂片检查
淋病双球菌（革兰氏染色）
梅毒二项
梅毒初筛试验（TRUST）、梅毒确证试验（TPPA）
不抗凝血3ml
艾滋病检测
b）、

荧光定量PCR检测UU、CT及NGH的结果分析

荧光定量PCR检测UU、CT及NGH的结果分析摘要：目的：通过对解脲支原体（uu）、沙眼衣原体（ct）、淋球茵（ngh）的检测，探讨泌尿生殖道感染患者的感染现状、特点和规律性。

方法：采用fq-pcr方法对984例泌尿生殖道感染患者解脲支原体、沙眼衣原体和淋球菌同时进行检测。

结果：984例样本中阳性的有435例，阳性率为44.2%，其中uu、ct、ngh分别占总例数的40.7%、7.9%、1.7%，uu、ct混合感染44例，占4.5%，uu、ngh混合感染10例，占1.0%，uu、ct、ngh混合感染的3例，占0.3%。

结论：泌尿生殖道感染患者中，uu、ct、ngh各占有一定比例，应尽可能的为患者进行全面的检查，以及时发现合并感染，给予有效的治疗。

fq-pcr技术检测uu、ct、ngh具有反应时间短、结果客观准确，敏感性和特异性好的优点，适宜门诊初查。

关键词：荧光定量pcr解脲支原体沙眼衣原体淋球茵【中图分类号】r-3【文献标识码】b【文章编号】1008-1879（2012）12-0396-02解脲支原体、沙眼衣原体、淋球茵为临床常见的性病病原体，它们通过性传播所致的泌尿生殖道感染者日益增多，且有逐年上升趋势[1]。

为了解解脲支原体、沙眼衣原体、淋球茵在一般人群中的感染率，评估uu、ct、ngh在人群中传播的危险性，本文应用荧光定量pcr（fq-pcr）技术对984例患泌尿生殖道感染的患者，取其宫颈、尿道分泌物同时进行uu、ct、ngh的检测，现就其结果分析如下。

1材料与方法1.1一般资料。

选择2012年1月到6月我院门诊患者984例，其中男性186例，女性798例，年龄18-49岁。

用无菌棉拭子插入女性宫颈1.0-1.5cm或男性尿道2-3cm，转动10秒并停留数秒钟后将棉拭子取出密闭送检。

1.2仪器与试剂。

采用达安基因股份有限公司生产的da7600全自动荧光定量pcr分析仪，试剂盒为达安基因股份有限公司的配套产品。

淋球菌核酸扩增荧光检测NG-DNA

淋球菌核酸扩增荧光检测（NG-DNA）
一、检验项目：淋球菌核酸扩增荧光检测（NG-DNA）
二、临床意义：
1、人是淋球菌的唯一天然宿主，人对淋球菌感染没有免疫能力，所有人
均有相同的易感性，因此再感染或慢性感染是较普遍的
2、临床常见症状为非淋性尿道炎、盆腔炎、前列腺炎、阴道炎、不育不孕
症等，也有少数无症状携带者
3、性接触传播是淋病的主要传染形式。

但也可以通过非性接触途径传播。

美国疾控中心建议：25岁以下高发年龄段的女性及25岁以上女性中的高危人群每年应当接受NG筛查；所有妊娠期女性第一次产检时应当接受NG检查，高危人群孕晚期时应当接受复查。

我国疾控中心2008年开始将NG列为单独的病种进行传染病报告。

2010年5月国家人口和计划生育委员会下发“国家免费孕前优生健康检查项目试点工作技术服务规范中临床实验室9项检查中就包含NG的检测。

有利于早期诊断
病原体初感染时几乎见不到特异症状，容易延误治疗性
三、标本送检要求：4ml黄色帽血清管，空腹采集后立即送检，如不能立即
送检可于4℃保存一周，如需长期保存请放入－20℃冻存，运输过程中请注意保持低温。

四、开单名称：淋球菌核酸定性检测（NG-DNA）。

五、收费：140元/例
六、送检时间：周一至周五上午12：00前
七、送检地点：检验科PCR室
八、报告时间：抽血后，7个工作日后进入我院计算机检查报告系统，查看
检测结果。

联系电话：84206146。

淋病的五种实验室检查方法

淋病的五种实验室检查方法
1. 尿液检查，尿液检查是最常用的淋病检测方法之一。

医生会
收集患者的尿液样本，然后用显微镜检查样本中是否存在淋病菌。

此外，还可以使用尿液培养法来培养细菌，以确定是否存在淋病菌。

2. 分泌物检查，对于女性患者，医生可能会收集阴道分泌物样
本进行检测。

这可以通过培养法或者PCR（聚合酶链式反应）检测
方法来确定是否存在淋病菌。

3. 尿道拭子检查，医生可能会使用一根细长的棉签或者尖头棉
签在患者的尿道内进行拭子检查。

这样可以采集尿道分泌物样本，
然后进行淋病菌的培养或PCR检测。

4. 血液检查，有时候，医生可能会进行血液检查来确定患者是
否感染了淋病。

这种检查方法通常用于检测淋病引起的并发症，如
关节炎或其他器官的感染。

5. 核酸扩增检测，核酸扩增检测是一种高度敏感的检测方法，
可以检测极小数量的淋病菌。

这种方法通常用于尿液、分泌物或尿
道拭子样本，能够快速、准确地确定是否存在淋病菌。

总之，淋病的实验室检查方法多种多样，医生会根据患者的具体情况选择合适的检测方法。

及早确诊淋病对于治疗和预防疾病的传播至关重要。

如果您怀疑自己感染了淋病，务必及时就医进行检查。

淋病临床诊断标准

淋病临床诊断标准淋病是一种由淋球菌感染引起的性传播疾病，主要通过性接触传播。

它会导致男性尿道和女性生殖道的炎症，并可能引起一系列严重的并发症，如盆腔炎、输卵管堵塞和不孕症等。

及早的诊断和治疗是防止这些并发症的关键。

本文将介绍淋病的临床诊断标准，以帮助医生和患者更好地进行早期检测和治疗。

一、症状和体征淋病患者常常会出现以下症状和体征：1. 男性患者：尿道口灼热、尿道分泌物增多、尿道口红肿、尿道口分泌物呈黄绿色。

2. 女性患者：阴道分泌物增多、异味、阴道瘙痒、尿道口灼热、尿道中段按压痛或不适。

二、实验室检查确定淋病诊断的主要方法是通过实验室检查，包括以下几种：1. 核酸扩增试验：核酸扩增试验是目前最常用的检测淋球菌的方法。

该方法可以通过扩增淋球菌的核酸序列来确定是否存在淋病感染。

常用的核酸扩增试验有聚合酶链反应（PCR）和核酸杂交（NAAT）等。

2. 细菌培养：尿道、分泌物或其他可能受到感染的部位可以进行细菌培养。

这种方法在临床实践中应用较广，但需要较长的培养时间和特殊的培养条件。

3. 抗体检测：通过检测淋球菌的特异性抗体可以确定感染的存在。

然而，抗体检测的敏感性和特异性不如核酸扩增试验高，因此在实际应用中较少使用。

三、诊断标准淋病的诊断标准主要包括以下几个方面：1. 症状和体征：基于患者的症状和体征，如上文所述。

2. 实验室检查：通过核酸扩增试验、细菌培养或抗体检测来确定淋病感染的存在。

3. 排除其他病因：需要排除其他可能引起相似症状的性传播疾病，如非淋球菌性尿道炎和霉菌感染等。

根据以上诊断标准，医生可以对患者进行全面的评估和诊断，确保淋病的早期发现和及时治疗。

此外，患者也应该保持良好的性行为健康，包括定期进行性病筛查、正确使用避孕措施以及与性伴侣进行沟通，以预防淋病和其他性传播疾病的发生。

结论淋病是一种常见的性传播疾病，临床诊断标准的准确应用对于患者的早期治疗至关重要。

通过对症状和体征的仔细观察、实验室检查的正确选择以及排除其他可能病因的综合分析，医生能够及时准确地诊断淋病，并采取合适的治疗措施。

两种检测淋病奈瑟菌方法的比较

两种检测淋病奈瑟菌方法的比较【关键词】PCR；淋病奈瑟菌；淋球菌培养［摘要］目的：比较两种检测淋病奈瑟菌（NG）的方法。

方法：采用荧光定量PCR检测法和NG培养法。

对155例临床分泌物标本同时进行检测。

结果：荧光定量PCR检测阳性率15.5%，培养方法阳性率 4.5%.。

两者比较PCR方法阳性率显著高于培养法（P<0.05）。

结论：对NG的检测，荧光定量PCR检测法更适合，并且可有效减少假阴性。

［关键词］PCR；淋病奈瑟菌；淋球菌培养淋病是国内外最常见的性传播疾病之一,它严重影响着人们的身心健康,其病原体为淋病奈瑟氏菌(简称淋球菌，NG)。

检测淋球菌的方法有很多，最主要的现在是聚合酶链反应（简称PCR）和细菌培养法两种。

2005年下半年我们对155例门诊疑似患者取样进行了这两种方式的比较，通过统计学处理认为FQPCR法提高了淋球菌检测的准确性，也减少了淋球菌的漏检率。

1材料与方法1.1材料1.1.1标本来源与采集标本来源于我院2005年9月至12月日常妇科门诊和男性科门诊及泌尿外科门诊的155例疑似患者，年龄最大的59岁，最小的18岁，其中女性患者96例，男性患者59例。

标本采集：男性用无菌拭子由前尿道2 cm~4 cm处取尿道分泌物，根据病情需要，也可取前列腺按摩液或精液。

女性用女性拭子在宫颈管内1 cm~2 cm处取宫颈分泌物，在取宫颈标本时，应先用拭子将宫颈揩干净，再用另一个拭子取材。

用拭子取材时，要在宫颈（或尿道）内旋转并至少停留20 s 以上，以便获得较好的细胞。

1.1.2仪器及试剂盒荧光定量PCR仪为美国生产的ABI7000型，所用PCR试剂盒为深圳匹基生物工程股分有限公司生产；生物梅里埃公司生产的API NH奈瑟氏菌及嗜血杆菌鉴定系统。

1.2方法1.2.1荧光定量PCR法取100 μl待测样本，加入100 μl DNA提取液1，振荡混匀。

13 000 r/min离心15 min，吸弃上清（离心时注意离心管方向，尽可能吸弃上清且不碰沉淀）。

淋球菌核酸扩增荧光检测

淋球菌核酸扩增荧光检测1．目的：保证NG DNA检测结果准确、可靠。

2．适用范围：NG DNA的TaqMan荧光定量检测，标本类型为分泌物。

3．负责人：操作人：原理：本试剂盒用一对淋球菌特异引物和一条淋球菌体特异性荧光探针，PCR反应液，耐热DNA聚合酶（Taq酶），四种核苷酸单体（dNTPs）等成分，再用PCR体外扩增法检测淋球菌DNA。

4．性能参数：检出低值＜1×103基因拷贝/ml。

5．标本要求：（1）标本类型：分泌物。

（2）标本采集：见标本采集手册。

（3）标本储存和运输：室温放置不超过8小时，4-8℃不超过72小时，-20℃保存期6个月，应避免反复冻融。

室温运输。

（4）标本拒收状态：细菌污染标本不能作测定。

6．容器和添加剂类型：无菌离心管和无菌试管。

7．所需设备：SLAN-96P、台式高速离心机、混匀器、冰箱（4℃、-20℃）、生物安全柜、紫外灯8．试剂：DNA提取液（1.4ml/管）1管；CT-PCR反应液（936 ul）1管；阳性定量质控标准品（100μl/管）1管；阴性质控品（400μl/管）1管，酶（10.4μl/管）。

9．校准程序（计量学溯源性）：送芜湖市计量检测所校准。

10．程序步骤:：11.1标本采集、保存和运送男性：取尿道分泌物或细小棉拭子伸入快尿道约2~4cm，略捻拭子取出分泌物（应略带黏膜）。

将分泌物或棉拭子置入无菌玻璃管，用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。

女性：阴道—用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈内，停5秒钟后旋动棉拭采取宫颈分泌物，将棉拭子置入无菌玻璃管，用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。

尿道—用无菌生理盐水棉球洗净尿道口，再用无菌棉拭子插入尿道约2cm，略捻拭子取出分泌物（应略带黏膜）。

将棉拭子置入无菌玻璃管，用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。

标本可立即用于测试，也可保存于-20℃待测，保存期为6个月。

标本运送应采用0℃冰壶。

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在泌尿生殖道淋病中的应用

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在泌尿生殖道淋病中的应用王彦彬;李瑞鹏;钟春燕;诸靖宇;徐智慧【摘要】目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)检测泌尿生殖道淋病的灵敏度、特异度以及监测疗效的实用性.方法回顾性分析12 816例因怀疑泌尿道淋球菌感染需行淋球菌检测受试者临床资料,其中淋球菌培养检测6 323例,基于SAT开发的淋球菌核酸检测试剂盒(NG-SAT)检测7 107例,比较2种检测方法的阳性率;再以淋球菌培养法为金标准,计算同时行以上2种检测的614例患者NG-SAT检测尿液样本的灵敏度和特异度;对2种检测结果有差别的标本,进行荧光定量DNA杂交及聚合酶链反应法(FQ-PCR)复测与分析;对检测结果阳性的患者进行头孢曲松治疗,待症状消失后3d再次行以上2种检测.结果 NG-SAT检测尿液标本的灵敏度为100.0％,特异度为98.2％.2种检测结果有差别的标本7份,均为SAT检测阳性、淋球菌培养阴性;FQ-PCR复测结果显示6份阳性、1份阴性.179例患者经头孢曲松治疗后,NG-SAT检测阳性15例,淋球菌培养阳性7例.结论 NG-SAT检测尿液中淋球菌简便、准确,且能准确判断预后,值得临床推广应用.【期刊名称】《浙江医学》【年(卷),期】2016(038)018【总页数】4页(P1498-1500,1503)【关键词】淋病;实时荧光核酸恒温扩增检测技术;淋球菌培养;尿液【作者】王彦彬;李瑞鹏;钟春燕;诸靖宇;徐智慧【作者单位】310009 杭州市第三人民医院泌尿外科;310009 杭州市第三人民医院泌尿外科;310009 杭州市第三人民医院检验科;310009 杭州市第三人民医院泌尿外科;浙江省人民医院泌尿外科【正文语种】中文我国性传播疾病监测结果表明，淋病发病率在30/ 10万左右[1]；其发病率高、社会危害性大，感染后若不及时治疗，可伴发多种合并症。

早期诊断与治疗是控制淋病传播的关键。

淋病奈瑟菌核酸检测试剂盒国家参考品的制备_王春娥

基金项目:国家科技基础条件平台国家微生物资源平台奖补经费资助项目(NIM Ｒ2015-2作者简介:王春娥(1980－,女,助理研究员,主要从事医学微生物菌种资源的收集、保藏及相关科研。

通讯作者:叶强,主任技师,E-mail:qiangyee@nifdc．org．cn ·论著·淋病奈瑟菌核酸检测试剂盒国家参考品的制备王春娥,卢旭,刘茹凤,石继春,李红,陈琼,唐静,陈翠萍,叶强中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050摘要:目的制备淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,NG核酸检测试剂盒国家参考品。

方法分别将10株NG和10株非NG参考菌株在各自适宜的培养基和温度下培养,收获新鲜无污染培养物,用比浊法和显微计数法将不同的培养物制备成10份NG菌悬液阳性参考品、5份精密性参考品和10份非NG菌悬液阴性参考品以及最低检出限参考品,然后利用5种不同来源的NG核酸检测试剂盒验证各种参考品,并考察参考品在不同处理条件下的稳定性。

结果每株菌在各自适宜的培养基和温度下培养后,均生长良好,无杂菌污染。

经5种试剂盒验证检测,10份阳性参考品的检测结果均为阳性,10份阴性参考品的检测结果均为阴性,精密性参考品检测结果为Ct值的CV均小于5．0%;5种试剂盒的最低检出限均能达到1000/mL,其中试剂盒B和E的最低检出限达100/mL。

参考品在28ħ放置7d、37ħ放置3d的热稳定性及反复冻融5次以内的稳定性良好。

结论制备的NG核酸检测试剂盒国家参考品的准确性、特异性及精密性均符合要求,可用于NG核酸检测试剂盒的质量评价。

关键词:淋病奈瑟菌;核酸;试剂盒;参考品中图分类号:Ｒ392-33文献标志码:A文章编号:1005-5673(201605-0021-05DOI:10．13309/j．cnki．pmi．2016．05．004Preparation of national reference for detection kit ofneisseria gonorrhoeae nucleic acidWANG Chun-e,LU Xu,LiuＲu-feng,SHI Ji-chun,LI Hong,CHEN Qiong,Tang Jing,CHEN Cui-ping,YE Qiang National Institutes for Food and Drug Control,Key Laboratory of Method and Standardization for Quality Control ofBiotechnical Products,Ministry of Public Health,Beijing100050,ChinaCorresponding author:YE Qiang,E-mail:qiangyee@nifdc．org．cnAbstract:Objective To prepare the national reference for the detection kit of neisseria gonorrhoeae nucleic acid．Metho-d s Allof10strains of neisseria gonorrhoeae and10strains of non-neisseria gonorrhoeae were cultured in a suitable mediaand temperature,then fresh and uncontaminated cultures were collected．The preparation of references was carried out in bacterial susponsion of both10positivereference of neisseria gonorrhoeae and10negtive reference of non-neisseria gonor-rhoeae,bacterial susponsion of5precision reference,and a bacterial susponsion of minimal detection limit reference by tur-bidimetry and microscopic counting．The references were verified by five PCＲdetection kits for neisseria gonorrhoeae from different companies,and evaluated by stability test under various conditions．Ｒesults Each from all strains grew well inits own suitable media and temperature,and the cultures were not contaminated．The detections showed correct results for10positive and10negative references,respectively,and the CV were all less than5．0%for tested results of precision by verification of the five PCＲdetection kits．A bacterial concentration of1000/mL was determined by the five kits,and a concentration of100/mL determined by the kit No．B and E．The stability tests showed good results on the references after stored at2－8ħfor7days,or37ħfor3days,or5cycles of freezing-thawing,respectively．Conclusion The accuracy, specificity,reproducibility can met the relevant requirements for the prepared national references,which could be used in evaluation of quality control of PCＲdetection kit for neisseria gonorrhoeae nucleic acid．Key words:Neisseria gonorrhoeae;Nucleic acid;Kit;Ｒeference淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,NG属革兰阴性球菌,为严格的人体寄生菌。

ctng罗氏组合检测内容

ctng罗氏组合检测内容罗氏组合检测宣布，用于筛查及诊断沙眼衣原体（CT）与淋球菌（fungus)（NG）病原体感染的全新cobas4800CT/NG检测项目，于2014年12月获中国国家食品药品监督管理局（CFDA）批准在华上市。

据悉，该检测是唯一同时获得CFDA和美国食品药品监督管理局（FDA）认证的CT/NG检测项目，通过体外核酸扩增技术，帮助在常规临床筛查和诊断中发现有症状和无症状CT/NG感染者，实现对病患的早期筛查与早期治疗，为减少患者远期并发症及安全提供保障。

CT/NG被认为是全球引起性传播疾病（STD）的首位和第二位的病原体，男女均可感染，以性行为为主要传播途径。

在我国，自1980年以来，STD发生率显著增加。

在所有STD中，由CT/NG感染引起的沙眼衣原体疾病和淋病占比也分别达到20.7%、17.7%。

CT/NG感染在我国存在严重的发现不足，问题之一就是检测方法。

中国疾病防止控制中心性病控制中心副主任陈祥生教授表示，cobas4800CT/NG检测的上市对于预防及控制性传播疾病具有非常重要的意义。

目前，预防及控制性传播疾病已成为全球性的公共卫生问题。

性传播疾病的急性感染、慢性症状都有可能导致女性不孕、异位妊娠、宫颈癌等后果。

若能尽早诊断和治疗，CT/NG感染是可以实现治愈的。

因此，除了对公众进行健康宣传及教育，提高人群对疾病的认识，采取有保护措施等行为干预外，针对高危人群进行筛查，提高临床诊断及治疗的生物医学干预更加重要。

北京大学第一医院妇产科感染学组组长刘朝晖教授指出，需要特别关注的是，CT/NG具有无症状感染的特性。

在女性病患中，约80%－90%的CT感染和50%的NG感染无症状。

CT暴露后约有1－3周的潜伏期，而NG在暴露后有少则2－5天，多至30天的潜伏期。

若未经治疗，会引起严重的感染并发症，如不孕不育、异位妊娠、慢性疼痛。

而男性感染后会引发尿道炎，出现尿道分泌物和排尿的现象，还可并发急性附睾炎。

国外全自动沙眼衣原体及淋球菌核酸双检技术新进展

国外全自动沙眼衣原体及淋球菌核酸双检技术新进展沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，CT）和淋球菌(Neisseria gonorrhoeae, NG）是全球最主要的性传播疾病的病原体。

美国CDC推荐16-25岁的年轻女性每年进行CT的筛查。

我国从2008年已经开始对CT感染进行单独报病，而NG是我国法定上报的传染病。

CT 和NG的共感染现象非常普遍，因此研发的诊断技术平台也通常是检测两种病原体。

最先发展起来的CT和NG核酸检测技术是直接检测核酸技术（NAH）：包括Gen-probe 公司的PACE2、PACE 2C和Digene 公司的杂交捕获HC2，但是NAH的方法其敏感性远不如核酸扩增技术。

随着核酸扩增技术的出现，这类方法逐步被取替而失去其应用价值。

截止目前为止，美国FDA 批准共五家公司的商品化试剂用于检测泌尿生殖道的CT和NG感染检测，分别是罗氏的Amplicor CT/NG 、Cobas 4800，雅培公司的Real Time CT/NG，Gen-probe 的APTIMA Combo2（AC2），Becton Dikinson（BD）公司的Probe Tec ET CT/GC、Probe Tec ET CTQx/GCQx 和Cepheid 公司的GeneXpert CT/NG。

罗氏公司Amplicor CT/NG 产品用于检测CT的靶目标基因位于CT隐蔽的质粒基因上，而用于检测NG的靶目标基因则是DNA胞嘧啶甲基转移酶基因，扩增后的产物检测则基于生物素-亲和素的交互作用利用ELISA的方法进行。

该方法由于不能够检测出瑞典瑞典的CT新变种，现在该公司已出新的产品——Cobas 4800 CT/NG以取代该产品。

Cobas 4800 CT/NG 检测试剂盒在全自动的平台基础上完成实时定量PCR的检测全部步骤。

该试剂利用两个靶基因检测CT，一个位于隐蔽质粒上，另外一个靶基因位于编码主要外膜蛋白的ompA，可以保证能够检测瑞典的CT新变种2。