吖啶橙荧光染色法
吖啶橙染色液
吖啶橙染色液吖啶橙染色液(1mg/ml)产品简介：吖啶橙(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。
因此AO 常用于细胞内DNA 和RNA 进行检测。
AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO 与DNA 的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO 与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO 与RNA 的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。
因此，吖啶橙嵌合到双链DNA 分子中显绿色，与DNA 单链或RNA 结合时发桔黄色或橙红色荧光。
(1mg/ml)为储存液，使用时应稀释到合适浓度后使用。
染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙染色常与EB 染色合用双染，因EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
自备材料：1、 荧光显微镜2、 低速离心机3、 PBS4、 细胞计数板5、 载玻片、盖玻片操作步骤(仅供参考)：1、 收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用PBS 清洗细胞1次，计数并调节细胞浓度至106/ml。
2、取适量的细胞悬液，加入Acridine Orange Stain(1mg/ml)，使AO终浓度为8.5～17μg/ml，轻轻混匀。
3、室温避光染色15～20ml，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
4、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm)，计数并拍照。
吖啶橙荧光染色试剂盒
吖啶橙荧光染色试剂盒产品简介：吖啶橙(Acridine Orange,AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA 、RNA ，属于异染性荧光染料。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。
因此AO 常用于细胞内DNA 和RNA 进行检测。
AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO 与DNA 的结合，其荧光发射峰为530nm ，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO 与单链核酸的磷酸根（带负电荷）产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO 与RNA 的结合，其荧光发射峰为640 nm ，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。
因此，吖啶橙嵌合到双链DNA 分子中显绿色，与DNA 单链或RNA 结合时发桔黄色或橙红色荧光。
Jimei 吖啶橙染色试剂盒（Acridine Orange Detection Kit ）主要由AO Stain 、AO Stain Buffer 组成，常用于细胞凋亡的检测。
染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙染色常与EB 染色合用双染， EB 只染死细胞使之产生桔黄荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
自备材料：1、 荧光显微镜2、 低速离心机3、 PBS4、 细胞计数板5、 载玻片、盖玻片操作步骤（仅供参考）：（一） AO 单独染色1、 收集细胞（采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞），用AO Stain Buffer （1×）清洗细胞1次，加入适量的AO Stain Buffer （1×）重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml 。
2、 取适量的细胞悬液和AO Stain ，按照细胞悬液和5μl AO Stain=19：1的比例混合，轻轻混匀。
细胞凋亡染色方法
细胞凋亡染色方法
最常见的一种是吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双染色法。
这个方法就像是给细胞穿上了不同颜色的小衣服来区分它们的状态。
AO可以嵌入双链核酸，让正常细胞和凋亡细胞的细胞核都呈现绿色荧光。
而EB呢，它只能进入那些膜完整性被破坏的细胞，像凋亡晚期细胞，这些细胞的核就会被染成橙红色荧光。
咱们把细胞一染，放在荧光显微镜下看，就可以很清楚地区分正常细胞、凋亡早期细胞（只有绿色荧光）和凋亡晚期细胞（绿色加橙红色荧光）啦，是不是很神奇 ？
还有一种是Annexin V - FITC/PI双染法。
Annexin V是个很聪明的小蛋白，它对磷脂酰丝氨酸（PS）有很高的亲和力。
在细胞凋亡早期，细胞膜的PS会从膜内侧翻转到外侧，这时候Annexin V - FITC就能结合上去，发出绿色荧光。
PI呢，它和EB有点像，是不能进入活细胞和早期凋亡细胞的，只有当细胞死亡，细胞膜完全破损了，它才能进去把细胞核染成红色。
这样通过双染，我们就能准确地检测到凋亡细胞啦，就像给细胞们做了个精准的小体检 。
另外，TUNEL染色法也很厉害哦。
这个方法主要是检测细胞凋亡时断裂的DNA。
细胞凋亡的时候，内源性核酸内切酶会被激活，把染色体DNA在核小体间切断，产生180 - 200bp整数倍的寡核苷酸片段。
TUNEL法就是利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）把生物素或地高辛等标记的dUTP连接到3' - OH末端，然后再用相应的荧光标记的抗体或者酶标抗体去检测这些标记的dUTP，这样凋亡细胞就能被染上色啦，在显微镜下就可以看到那些凋亡的小细胞们啦，是不是感觉像在细胞世界里玩侦探游戏一样 ？。
精子DNA吖啶橙(acridineorange)荧光检测试剂盒
观察绿色荧光：滤波器激发波长 490nm，散发波长 530nm ――可见绿色荧光，表明精子 DNA 正常
注意事项
1． 本产品为 50 次操作 2． 操作时须戴手套 3． 样品检测前，建议在血细胞计数器上进行精子细胞计数 4． 精子细胞计数时乘上稀释倍数 104。标准血细胞计数器（Hemocytometer）的计算方法是：
1 毫米方块的细胞计数 X 104（稀释倍数）＝实际细胞数/毫升 5． 染色完成后，即刻进行检测分析，否则由于其毒性导致精子 DNA 异常 6． 如果流式细胞仪出现干扰，建议使用 630nm 散发波长，或进行补偿处理，建议使用诱导处理样品：10
实验步骤
1
一、 细胞流式仪分析
1． 移取新鲜获得的 1 毫升精液（30 分钟至 1 小时内）到 1.5 毫升离心管 2． 放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 3． 小心抽去上清液 4． 加入 xx 毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群 5． 在血细胞计数器上进行精子细胞计数：1 × 107 精子细胞/毫升 6． 放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 7． 小心抽去上清液 8． 重复实验步骤 4 至 7 一次（不包括实验步骤 5） 9． 加入 xx 微升染色液（Reagent B），混匀颗粒群 10．室温下孵育 10 分钟，避免光照 11．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 12．小心抽去上清液 13．加入 xx 毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群 14．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 15．小心抽去上清液 16．重复实验步骤 13 至 15 一次 17．加入 xx 毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群 18．即刻进行细胞流式仪双通道分析：观察 10000 个细胞以上，200 细胞/秒；激发波长 200mW，散发波长
吖啶橙染色法
吖啶橙染色法检测细胞凋亡
实验试剂、仪器：
吖啶橙，稀释液PBS（磷酸缓冲液pH7.0～7.2），1％吖啶橙贮存液，细胞爬片，载玻片，盖玻片，荧光显微镜。
吖啶橙：3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3·HCl ·ZnCl2, 分子量438.12g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。
它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。
因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。
实验步骤：
1.配置吖啶橙贮存液（1%）：300mg吖啶橙溶解于30mlPBS缓冲液中，滤过，4
度避光保存。
2.染色时，稀释100倍至终浓度为0.01%。
取300微升的PBS缓冲液，加3微
升的吖啶橙贮存液混匀，室温避光染色5min。
3.在荧光显微镜下选520nm的激发光观察。
实验结果：
正常细胞核的DNA为黄色或黄绿色均匀荧光，细胞质和核仁的RNA为桔黄或桔红荧光。
出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见致密浓染的黄绿色荧光，甚至见黄绿色碎片。
细胞坏死时，细胞质内黄绿色或桔黄色荧光均减弱或消失。
2种染色方法在微核试验中的比较
浸于染色缸中， 染色 １ ｉ 后晾干。Ｐ Ｓ ０ ｎ ｍ Ｂ 液起到稀释的作用 ， 吉姆萨染液须现用现配 。 吖啶橙 荧光染 色法 ： 涂有 蜘蛛细胞 涂 片的载 玻片用 甲醇 固定 １ ｎ 待 甲醇 挥发 干净后 ， 将 ５ ｍｉ， 现配 １ ｍＬ 母 液加 １１ 磷 酸缓 冲液 （Ｈ＝４８ ９ ／５ Ｍ ｐ ．） 将 玻 片浸 于染 色缸 中 ， 色 １ ｎ 晾 干 。 ｍＬ， 染 ０ｍｉ， 吖啶橙 是一 种荧 光
２１ 对 照组 ２种染 色方 法 的比较 ．
图 １吉姆萨染色法观察对照组蜘蛛血细胞结构
１ 实验方 法 ． ２
ｌ ． 单 细胞悬 液 的制备 －１ ２
将活体蜘蛛用 ７％的酒精 冲洗 ３ ， ５ 次 再用不锈钢剪刀将其剪碎 ， １０ 加 ０ Ｌ生理盐水到玻璃匀浆器 研磨并过 ２ ０目筛得单细胞悬液 ， ０ 用苔盼蓝排斥法镜检细胞存活率达 ９ ％以上。 ５
１２ 阿维 菌素致 Ｄ ．． ２ ＮＡ断裂 作用 的研 究
通迅作者（ ｏｒｓｏ ｄａｔｅ）Ｅ ｍａ ：ｘｕｉ ＠１ ６ ｏ Ｃ ｒ ｐ ｎ ｈ ｒ， — ｉ ｓａｌ ｃ ２ ． ｍ ｅ ｕ ｌ ｓ ｔ 收稿 日期（ ｅｅ ｅ ） ｏ８０ ．８ Ｒ ｃｉ ｄ ： ０ ．８０ ｖ ２ 山西省青年基金 （０ ８２ ０ １ 、 ２ ０ ０ １４ ） 山西省科技攻关项 目（０ ８ ３ １２ ，０ ６３ ０ ８ 资助 ２０ ０ １０ ３ ２ ０ ０ １４ ）
吖 啶橙 （ ｃｉｉｅ ａｇ ， Ｏ） １ 荧 光 色 素 ， 检 测 激 发 滤 光 片 波 长 ４８ｎ 阻 断 滤 光 片 波 长 Ａ ｒ ｎ ｎｅＡ 是 种 ｄ Ｏｒ 其 ８ ｍ， ５５ｎ １ ｍ。它 与细 胞 中 Ｄ ＮＡ 和 Ｒ ＮＡ结 合量 存在 差别 ， 发 出不 同颜 色 的荧光 ， Ｄ 可 与 ＮＡ结合 量 少 发绿 色
细胞凋亡 染色种类
细胞凋亡染色种类
细胞凋亡染色有多种方法，包括以下几种常见的染色种类：
1. HE染色：这是一种常用的细胞凋亡染色方法，使用苏木素-伊红染料对细胞进行染色。
在光学显微镜下观察，凋亡细胞会呈现圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状的现象。
2. Giemsa染色：Giemsa染色也是一种常见的细胞凋亡染色方法。
正常细胞的核色泽均一，而凋亡细胞的染色质会浓缩、边缘化，核膜裂解，染色质分割成块状和凋亡小体等。
3. AO/PI双染色法：吖啶橙(AO)是一种荧光染料，能透过细胞膜使核DNA和RNA染色。
在荧光显微镜下观察，活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。
凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
碘化丙啶(PI)是一种DNA 结合性染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而将细胞核染红。
因此，通过AO/PI双染色法可以区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞。
4. Hoechst染色：Hoechst染料与DNA的结合是非嵌入式的，主要结合在DNA的A-T碱基区。
在紫外光激发下，活细胞核呈均匀淡蓝色荧光，凋亡细胞则呈现亮蓝色，或核呈分叶状、边集的荧光。
5. TUNEL染色：这是一种检测细胞凋亡中DNA断裂的方法。
在细胞凋亡过程中，会激活DNA内切酶，导致DNA断裂。
TUNEL 染色可以标记这些断裂的DNA，从而检测细胞凋亡。
以上信息仅供参考，如需了解更多关于细胞凋亡染色的信息，建
议查阅专业书籍或咨询相关领域的专家。
斑马鱼胚胎吖啶橙
斑马鱼胚胎吖啶橙（Acridine Orange，AO）染色（from 黄春筱师姐）：
1.原理：
吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一种核酸选择性染料，它能够掺入DNA分子或者与RNA分子通过静电吸引作用相结合。
掺入了AO染料的DNA分子在525 nm的紫外光照射下，能够激发出绿色荧光。
利用这一原理，AO染料被广泛地用于细胞凋亡的检测。
我们实验中，利用AO染料分别处理24 hpf、48 hpf、72 hpf和96 hpf斑马鱼胚胎，检测注射miR-462/731 Morpholinos的胚胎（MO组）、共注射miR-462/731 Mopholinos和Duplex 的胚胎（挽救组）以及Uninjected Control的胚胎（对照组）的ICM区域（24 hpf）、AGM区域（48hpf）和CHT区域（72hpf-96hpf）的细胞凋亡情况。
2.操作步骤：
2.1 试剂配制：
1)AO染液工作液：
AO染液工作液浓度为5 μg/ml；
首先配制AO贮存液浓度为5 mg/ml，使用时1:1000稀释到工作浓度。
2.2 染色步骤：
1)将斑马鱼胚胎（24hpf，48 hpf，72 hpf，96 hpf）手动剥除卵膜，并用超纯水清洗2次。
2)将斑马鱼胚胎转移到含有5 μg/ml AO染料的培养皿中，28.5°C培养15-30 min（避光）。
3)用新鲜的暴气超纯水（超纯水在28.5°C培养箱中放置一会）替换AO染液，摇床轻摇10 min洗涤胚胎，重复2次。
4)胚胎用0.02% MS-222麻醉后，在荧光显微镜下观察、拍照。
吖啶橙荧光染色法在胃癌诊断中的临床意义
ＭＯＤ ＥＲＮ Ｏ ＮＣＯ ＯＧＹ。 ｅ ． ０ ７． Ｌ Ｄ ｃ ２ ０ ＶＯＩ １ ． ５．ＮＯ． ２ １
Ｏ Ｓ ８ 则 反 映 治疗 获 益 （ 状改 善 ， 吞 咽 困难 、 食 Ｅ１） 症 如 进 等） 。这一 结果 与 Ｂａｅｙ＿ 等 的研究相 似。Ｅ Ｒ Ｃ Ｑ Ｑ— ｌ ｂ ４ ｚ Ｏ Ｔ Ｌ
Ｓ ｒ ，９７，０ ５ ：５ ４ ９ ｕｇ１ ７ ２ （ ） ４４～ ５ ．
【 考文献】 参
［ ］ 全国肿瘤防治研究办公室 ， １ 卫生部卫 生统计信 息中心 ． 中国恶
性肿瘤危险因素研究 ［ ． 京 ： Ｍ］ 北 中国协 和 医科大学 出版 社 ，
２ ｏ ２ ５ ｏ ３． ３ ．
［ ］ ＢａｅｙＪ Ｎｃｌ ， ｒｏｅ Ｔ，ｔ １ ｅｓ ｉｔ ｆ ａｉ ｆ ８ ｌ ｂ Ｍ， ｉ ｉ Ｊ ＢｏｋｓＳ ｅ ａ．Ｆ ａｉ ｌｙｏ ｌ ｔ ｏ ｚ ｋｎ ｂｉ ｕ ｑ ｙ
一
［ ］ ＢａｅｙＪ Ａ ｄｒ ｎ Ｄ， ｎｔ ｅ Ｋ，ｔａ．Ｄ ｖｌｐ ｎ ｏ １ ３ ｌ ｂ Ｍ， ｌｅｓ Ｗｉｓ ｎ ｅ １ ｅｅ ｍｅｔ ｆ８ ｚ ｏ ｏ ｏ １
Ｅ Ｔ ｕ ｓｏｎｉ ｄ ｌ ｅｕｅ ｎＱ ａｉ ｆ ｉ ｓｅｓ ＯＲ ＣＱ ｅｔ ｎ ａｒ Ｍｏ ｕ ｔ ｂ ｓｄｉ ｕ ｌｙｏ ｆ ａｓｓ— ｉ ｅ ｅｏ ｔ Ｌｅ
ｔ ｉ ｏ ａ ｎ ｔ ｍｙ ｉ ｃ ｓ ｌ ｔ ａ ｄ ｐ ｔａ ｔｄ ｅ ｏ Ｉ ｒ ｃ ｍｐ ｒ ｇ ｍｉ ｌ ａ ｉ ｏ ｃｎ， ｉｐ ａｉ ｎ ｒ ｒ ｃ ｅ ｖ ｎ Ｙｓ— ｉ ｆ － ｎ， ｏ ｎｕ
需要开发 出适合测评我 国食管癌患 者 Ｑ Ｌ的量表 。实际操 Ｏ 作 中， 多数 患者 还可 能需 要 医务 人 员给 予一 定 帮 助才 能完
吖啶橙荧光染色法在消化系肿瘤诊断中的临床意义
中图分类号： ７５Ｒ ３．３ Ｒ ３ ； ７ ０ ４
文 献 标 识 码 ： Ｂ
文 章 编 号 ：６１８ ４ （０ ８ ０—７ ８０ １ ７—３ ８ ２ ０ ） ７０ ５—２
消 化 系肿 瘤 的发 病 率 及 死 亡 率 居 各 种 恶 性 肿 瘤 之 首 ， 目前
色为 ＋＋＋； 核荧 光强 ， 明 亮 黄 色 为 ＋ ＋ ＋ ＋ 。浆 较 暗 荧 光 ， 呈
系 。Ｄ ＮＡ 含 量 越 多 ， 光 越 黄 越 亮 ； ＮＡ 含 量 越 多 ， 光 越 红 荧 Ｒ 荧
越 鲜 艳 ＿ 。从 正 常 细 胞 转 变 为 癌 细 胞 ， 细 胞 的 Ｄ ４ ］ 其 ＮＡ、 Ｎ Ｒ Ａ 含 量 不 断 增 加 ， ＡＯ染 色 ， 荧光 显 微 镜 下 ， 过 单 个 细 胞 的 经 在 通
光 。荧 光 的强 度 与 核 内 ＤＮ 与 浆 内 Ｒ Ａ ＮＡ 的含 量 成 正 比例 关
１２ 方 法 胃 、 管 、 结 肠 标 本 通 过 内 窥 镜 取 材 ， 脏 标 本 ． 食 直 肝
通过 细针 穿 刺 取 材 ， 片 １ ２张 ，５ 酒 精 固定 ，５ ｉ 水 涂 ～ ９ １ｒ ｎ后 ａ
摘 要： 目的 探 讨 吖 啶 橙 荧光 染 色检 测 法 对 消 化 系肿 瘤 的诊 断 价值 。方 法 对 １０例 胃癌 、Ｏ例 肠 癌 、Ｏ例 食 管癌 、Ｏ例 ０ ５ ５ ３ 吖啶 橙 荧光 染 色检 测
肝 癌 患 者 ， 行 内窥 镜 及 细 针 肿 物 穿 刺 取 材 ， 标 本 同 时做 吖 啶 橙 荧光 进 将
洗 ， 加 ０ ０ Ｏ浓 度 的 吖 啶 橙 荧 光 染 液 染 色 ５ ｉ， ｐ ． 滴 ．１ ａ ｒ ｎ 用 Ｈ６ ０
AO EB染色的讨论
吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色AO / EB原理与流程zhongyisheng:1 原理：吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。
溴乙锭(E仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。
凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。
非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。
二者形态迥然相异，很易判别。
在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状。
2 AO/EB染色及观察结果：取20-100μl的1：100稀释的染色剂置于载玻片的贴壁细胞上室温下静置20min，PBS洗涤2-3遍，上覆盖玻片，荧光显微镜下观察结果并计数20-200个细胞。
ym1051: 1.能否提供具体实验步骤?2.您在文中所说的"1：100稀释的染色剂"是怎样稀释的?如何在载玻片上种上贴壁细胞? zhongyisheng:1 用1mlEP管稀释时，先取微量的染色剂，然后再取稀释剂（如BSA）加入EP管吹打即可。
2 消毒灭菌处理后的盖玻片平放入培养皿或中即可实验。
ym1051:我好像已明白具体过程了:首先要进行细胞爬片,然后将染色剂滴加在已爬有细胞的盖玻片上,温育后洗涤,再盖上盖玻片则可进行观察了.是这样吗?如果不经过爬片处理而将细胞进行消化,再将细胞和染色剂滴加在盖玻片上进行观察,行吗?zhongyisheng:的确，不经过爬片而是将贴壁细胞消化下来一样可以进行进一步的实验。
这是悬浮细胞的典型方法。
当然，由于进行免疫组化染色进行的形态学检查经常考虑到细胞的原貌，在国际上比较通用，尤其是在进行动态检查时。
医琳师妹：我将我所作的方法与大家共享：吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）：1）细胞爬片：在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片，接种细胞悬液，干预后，予95%乙醇固定15分钟，微干，然后准备荧光染色。
吖啶橙荧光染色原理
吖啶橙荧光染色原理吖啶橙荧光染色原理一、前言吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，其原理基于吖啶橙能够与DNA结合形成复合物，并且在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射。
本文将详细介绍吖啶橙荧光染色的原理。
二、吖啶橙的结构和性质吖啶橙是一种双氮杂环化合物，其分子式为C17H19N4Cl。
它是一种黄色晶体，可以通过溶解在水中形成黄色溶液。
吖啶橙分子中含有两个氮原子和两个苯环，这些结构使得它具有与DNA结合的能力。
三、DNA与吖啶橙的相互作用DNA是由四种碱基组成的双链螺旋结构，其中腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）之间形成两个氢键，鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）之间形成三个氢键。
这些氢键使得DNA分子具有稳定的结构，并且能够与吖啶橙形成复合物。
当吖啶橙溶液与DNA接触时，它能够通过静电作用结合到DNA的磷酸基团上。
此外，吖啶橙的分子中含有苯环，这些苯环可以穿过DNA 的双链螺旋，与碱基形成π-π堆积作用。
这些相互作用使得吖啶橙能够与DNA形成稳定的复合物。
四、吖啶橙荧光发射原理在紫外线或蓝光的激发下，吖啶橙分子会从基态跃迁到第一激发态。
在回到基态时，它会通过荧光发射释放出能量。
这种荧光发射是一种特殊的电子跃迁过程，其波长通常在500-600nm之间。
由于DNA和吖啶橙形成了稳定的复合物，并且吖啶橙分子在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射，因此在细胞核染色中加入吖啶橙可以使得细胞核产生荧光信号。
五、吖啶橙荧光染色的实验步骤1. 取一定量的细胞样品，离心沉淀后用PBS洗涤。
2. 加入适量的吖啶橙溶液，静置15-30分钟。
3. 用PBS洗涤样品，去除未结合的吖啶橙。
4. 在荧光显微镜下观察细胞核荧光信号。
六、吖啶橙荧光染色的应用吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，它可以被广泛应用于生物学和医学研究中。
例如，在癌症诊断中可以利用吖啶橙染色技术对肿瘤组织进行检测；在细胞分裂和凋亡等过程中也可以利用吖啶橙技术进行观察和分析。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色是一种常用于核酸和蛋白质检测的荧光染料，其原理基于荧光共振能量转移（FRET）和DNA或蛋白质的特定
亲和性。
在实验中，通常将吖啶橙与目标分子（如DNA或蛋
白质）结合，通过观察荧光信号的强度和变化来进行检测。
吖啶橙具有两个荧光基团：供体荧光基团（通常为吖啶基团）和受体荧光基团（通常为橙色基团）。
当吖啶橙与目标分子结合时，两个基团之间的距离和相对位置可能会发生改变。
如果供体荧光基团与受体荧光基团的距离在合适的范围内，并且相对位置适当，FRET就会发生。
在FRET过程中，供体荧光基团受到激发光刺激并产生激发态，在受体荧光基团的作用下，供体荧光信号以非辐射方式传递给受体荧光基团。
作为结果，亮一些的橙色荧光发生。
通过观察橙色荧光信号的强度和变化，可以确定目标分子的存在和特定的相互作用。
吖啶橙染色的原理基于荧光共振能量转移和目标分子的亲和性，是一种有效的分析方法。
它常用于实验室研究、生物学检测和医学诊断等领域，具有高灵敏度和广泛的应用前景。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理的核心是吖啶橙与细胞或组织中的核酸结合。
吖啶橙是一种双
碱基染料，它能够与DNA和RNA中的腺嘌呤发生特异性的结合，形成荧光复合物。
在细胞或组织染色实验中，通过将样本与含有吖啶橙的染色液接触，吖啶橙能够与细胞核中的DNA结合，或者与细胞质中的RNA结合，从而使得这些结构在
荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号。
通过观察这些荧光信号的强度、分布和形态，可以对细胞或组织的结构和功能进行研究和分析。
除了与核酸结合外，吖啶橙还可以与细胞膜中的脂质结合，或者与特定蛋白质
发生相互作用。
这些特异性的结合使得吖啶橙在细胞和组织染色实验中具有多样化的应用。
例如，可以利用吖啶橙染色来观察细胞膜的形态和分布，或者检测特定蛋白质的表达和定位。
这些信息对于研究细胞的生理功能和病理变化具有重要意义。
在实际的实验操作中，吖啶橙染色通常需要配合荧光显微镜或流式细胞仪等设
备来进行观察和分析。
荧光显微镜能够通过激发吖啶橙荧光复合物产生荧光信号，并通过特定的滤光片来捕获和记录这些信号，从而实现对细胞和组织的荧光成像。
而流式细胞仪则可以通过检测吖啶橙的荧光信号来实现对细胞的数量、大小和荧光强度等参数的快速测定和分析。
总的来说，吖啶橙染色原理是基于吖啶橙与细胞或组织中特定结构的特异性结
合而实现的。
通过这种染色方法，可以对细胞和组织的结构、功能和代谢进行研究和分析。
在生物医学研究领域中，吖啶橙染色已经成为一种常用的实验技术，为科学家们深入探索生命的奥秘提供了重要的工具和手段。
吖啶橙荧光染色法
. ’. 吖啶橙荧光染色法【实验原理】吖啶橙（acridine orange ，AO ）是最经典的极灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA 和RNA 同时染色而显示不同颜色的荧光。
其激发峰为492nm ，荧光发射峰为530nm（DNA ）、640（RNA ），它与双链DNA 的结合方式是嵌入双链之间，而与单链DNA 和RNA 则由静电吸引堆积在其磷酸根上。
在蓝光（502nm ）激发下，细胞核发亮绿色荧光（约530nm ），核仁和胞质RNA 发橘红色荧光（>580nm ）。
吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而主要显示DNA 、RNA 两种核酸。
【实验用品】1、 器材荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸。
2、 试剂（1）0.1mol/l pH7.0 PBS 液A 液：NaH 2PO 4·H 2O 2.76g ，加蒸馏水至100ml ；B 液：Na 2HPO 4·7H 2O 5.36g ，加蒸馏水至100ml ；取A 液16.5ml ＋B 液33.5ml ＋NaCl 8.5g ，用蒸馏水稀释至100ml 。
（2）1%吖啶橙原液取0.1g 吖啶橙加蒸馏水稀释至100ml （临用时配制0.01%吖啶橙染液：将1%吖啶橙原液用pH7.0 PBS 溶液稀释10倍）。
3、 材料口腔黏膜上皮细胞临时制片或人肝癌BEL-7402细胞爬片。
（1）取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上。
（2）95%乙醇溶液固定5min 。
（3）滴加0.01%吖啶橙染液5min 。
（4）盖上盖玻片，吸水纸吸去盖玻片周围多余液体，镜下观察。
【结果与观察】荧光显微镜下（选用蓝色激发滤片），可见含DNA 的细胞核显示黄绿色荧光，含RNA 的细胞质及核仁显示橘红色荧光体外培养的肝癌细胞吖啶橙荧光染色【注意事项】（1）制片后一定要晾干玻片，在进行后续步骤，否则会导致细胞脱落。
吖啶橙染色溶酶体原理
吖啶橙（Acridine Orange）是一种荧光染料，常用于细胞和组织的染色。
它可以与DNA和RNA结合，并发出绿色和橙色的荧光信号。
溶酶体是细胞内的一种细胞器，主要参与细胞内物质的降解和消化。
吖啶橙染色溶酶体的原理是，吖啶橙可以穿过细胞膜进入细胞内，并与溶酶体内的DNA结合。
在酸性环境下，吖啶橙与DNA结合的荧光信号会发生变化。
在弱酸性条件下，吖啶橙发出绿色荧光；而在强酸性条件下，吖啶橙发出橙色荧光。
通过观察细胞或组织中溶酶体的荧光颜色，可以了解溶酶体的酸性程度和功能状态。
正常情况下，溶酶体处于弱酸性状态，吖啶橙发出绿色荧光；而当溶酶体功能异常或酸性增加时，吖啶橙发出橙色荧光。
这种染色方法可以用于研究溶酶体相关的疾病，如溶酶体贮积病和溶酶体功能障碍等。
需要注意的是，吖啶橙染色溶酶体的原理是基于荧光信号的变化，因此在观察时需要使用荧光显微镜或其他荧光检测设备。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙是一种双碱性染料，具有两个氨基和两个芳香环结构。
它可以与DNA
和RNA结合，通过静电作用和氢键作用，与核酸中的腺嘌呤和胞嘧啶基团结合，
从而实现对核酸的染色。
吖啶橙的结构中含有芳香环和氨基，使其具有较强的荧光性能，能够在紫外光下产生橙色荧光。
在细胞或组织染色实验中，吖啶橙可以通过渗透染色或者固定染色的方式，将
其加入到待染细胞或组织中，与核酸结合形成吖啶橙-核酸复合物。
当使用荧光显
微镜观察时，激发波长为紫外光，吖啶橙-核酸复合物会发出橙色荧光信号，从而
实现对核酸的观察和检测。
吖啶橙染色的原理基于其与核酸的结合特性，通过与核酸的特异性结合，实现
对核酸的染色和检测。
由于吖啶橙具有较强的荧光性能，能够产生明亮的橙色荧光信号，因此在细胞生物学和分子生物学研究中得到了广泛的应用。
吖啶橙染色原理的了解对于科研工作者在实验设计和数据解读中具有重要意义。
在细胞和组织的荧光染色实验中，科研人员需要根据样本的特点和实验要求，选择合适的染色方法和条件，合理设计实验方案，以确保获得准确可靠的实验结果。
总之，吖啶橙作为一种重要的荧光染料，在生物学和医学领域发挥着重要作用。
了解其染色原理，可以帮助科研人员更好地应用吖啶橙进行细胞和组织的荧光染色实验，为科研工作提供有力支持。
希望本文对吖啶橙染色原理有所帮助，同时也希望科研人员能够在实验中充分
发挥吖啶橙的优势，取得更多有意义的研究成果。
实验四 荧光显微镜细菌计数
四、实验步骤
1、滤器装配 放置滤膜（光滑面朝上）装好滤器及抽滤装置。
2、细菌染色 加5ml蒸馏水于滤器中，移入适量样品（控
制在每个视野出现菌体50个左右），再滴入10％ 的吖啶橙，混匀，染色2min。 3、抽洗滤膜
用蒸馏水淋洗滤器内壁2-3次，并抽滤至滤 膜刚好呈湿润状态。 4、制片 加一滴荧光显微镜油于载玻片上，贴上载菌体的 滤膜，再向滤膜加一滴油，盖上盖玻片（滤膜两面均 不能有气泡）。
而死细胞呈绿色荧光。
三、实验材料
1、细菌水样
2、试剂： 1）吖啶橙（AO） 吖啶橙（AO）染色液：将0.1g吖啶橙染
色剂溶于100ml蒸馏水，经0.22μm滤膜过滤。可 于冰箱4度中存放两周。
2）甲醛溶液
经0.22μm滤膜过滤的40%（V/V）甲醛溶 液。
3） 无菌水、低荧光浸润油等。 3、主要仪器设备
Hale Waihona Puke 五、实验结果1. 显微计数：在荧光显微镜镜下，随机取20个视 野，计算呈亮绿色和桔红色的个体数。
2. 计算样品含菌数。
N=X*Na*S/(St*V) N: 样品含菌数, 个/ml Na：各视野平均菌数，
个 X: 样品稀释倍数 S: 滤膜滤水面积, cm2 St: 视野面积, cm2 V: 过滤样品量, ml
实验四 荧光显微镜细菌计数
一、实验目的 1.了解水样细菌的荧光显微镜计数原理; 2. 掌握水样细菌的荧光显微镜计数方法。
二、实验原理
吖啶橙(Acridine Orange)是吖啶的衍生物之一。 它是一种荧光染料，激发峰492nm，荧光发射峰 530nm(DNA)，640nm(RNA)，它与双链DNA的结合方式 是嵌入双链之间，而与单链DNA和RNA则由静电吸引 堆积在其磷酸根上。在蓝光(给502nm)激发下，DNA 发出绿色荧光(约530nm)，RNA发桔红色荧光(＞ 580nm)。吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多 糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合， 从而主要显示DNA、RNA两种核酸。细菌经吖啶橙染 色后，在荧光显微镜下观察，活细胞呈橙色荧光，
免疫荧光菌团法
免疫荧光菌团法免疫荧光菌团法是在荧光抗体技术的基础上，由我国医学科学工作者创立的一种荧光染色技术，该法是用荧光免疫血清直接着染标本中的活菌，使其不但形成带有特异荧光，而且还具有一定形态结构(使被检细菌发生特异性凝集)的荧光菌团，据此可对被检标本作出诊断。
所用免疫血清既不需要提纯，也不需要标记，是一种更为简便的免疫荧光染色法——吖啶橙免一、将特异诊断血清与吖啶橙溶液混合制成诊断液，加入被检标本中，当抗原、抗体一致时，即结合形成菌团，而后被吖啶橙着染，在荧光显微镜下观察，可看到带有荧光的具有一定形态结构的菌团。
如标本中无相应的细菌存在，抗原与抗体不能发生反应，也就不能形成特异的吖啶橙免疫荧光菌团法是一项把荧光抗体染色技术的敏感性、血清学反应的特异性、显微镜检查的精确性三者结合一体的实验方法，同时，还可用适当的方法取出荧光菌团进行常规的分离二、(一)1 01%吖啶橙(acridine orange,AO)溶液，用无菌蒸馏水配制，4?23(二)1 吖啶橙荧光抗体的制备高免血清09ml(1?8稀释)，加入01%吖啶橙01ml，混匀，即为吖啶橙荧光抗体(AOAb)2 操作方法取2支洁净试管，分别加入09ml被检菌悬液，试验管再加入01mlAOAb诊断液，对照管加01ml对照液，混匀，以1000,1500 r/min离心10,15min，倾去上清液，将试管直立片刻，然后将试管内残留液体和沉淀物轻轻摇匀，倒在玻片上，置荧光显微镜下进行三、结果判荧光菌团直径1mm，荧光菌团直径2mm，，荧光菌团结构清晰，3,4mm，，，荧光菌团结构清晰，5,6mm，，，，荧光菌团结构清晰，10mm四、注意事1 高免血清的稀释倍数应根据其效价而定，效价高时，稀释倍数要高，效价低时，稀释倍数也应2 离心速度不宜过高，时间不宜过长，否则可使凝集物呈结实块状，影响对菌团结构的观3 吖啶橙的最终浓度可在1?10万,1?100万之间选择，过高或过低都影响结果的判定，45 对于疑似菌团，可于37?湿盒中感作3,4h相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。
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吖啶橙荧光染色法
【实验原理】
吖啶橙(acridine orange, A0)是最经典的极灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染
色而显示不同颜色的荧光。
其激发峰为492nm，荧光发射峰为530nm (DNA )、640 ( RNA )，它与双链DNA
的结合方式是嵌入双链之间，而与单链DNA和RNA则由静电吸引堆积在其磷酸根上。
在蓝光( 502nm) 激发下，细胞核发亮绿色荧光(约530nm)，核仁和胞质RNA发橘红色荧光(>580nm)。
吖啶橙的阳离子
也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而主要显示DNA、RNA两
种核酸。
【实验用品】
1、器材
荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸。
2、试剂
(1)0.1mol/l pH7.0 PBS 液
A 液：NaH2PO4・H2O 2.76g，加蒸馏水至100ml;
B 液：Na2HPO4 • 7H2O 5.36g，加蒸馏水至100ml;
取A 液16.5ml + B 液33.5ml + NaCl 8.5g，用蒸馏水稀释至100ml。
(2)1%吖啶橙原液
取0.1g吖啶橙加蒸馏水稀释至100ml (临用时配制0.01%吖啶橙染液：将1%吖啶橙原液用pH7.0 PBS溶液稀释10倍)。
3、材料
口腔黏膜上皮细胞临时制片或人肝癌BEL-7402细胞爬片。
(1 )取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上。
(2)95%乙醇溶液固定5min。
(3)滴加0.01%吖啶橙染液5min。
(4)盖上盖玻片，吸水纸吸去盖玻片周围多余液体，镜下观察。
【结果与观察】
荧光显微镜下(选用蓝色激发滤片)，可见含DNA的细胞核显示黄绿色荧光，含RNA的细胞质及核仁显
示橘红色荧光
【注意事项】
(1 )制片后一定要晾干玻片，在进行后续步骤，否则会导致细胞脱落。
(2)每种荧光染料，均有自己的最适pH,此时荧光最强。
当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长
将有所改变，因此荧光检测时要在一定的pH缓冲液中进行。