吖啶橙染色液
生物学常用染色液汇总
生物学常用染色液汇总在生物学研究和实验中，常常需要使用染色液来观察和分析细胞和组织的结构和功能。
染色液可用于染色细胞核、细胞膜、细胞器、染色蛋白质等。
下面是一些生物学常用的染色液：1.血液染色液：常用的血液染色液有嗜酸性染色液、嗜碱性染色液和中性染色液。
嗜酸性染色液一般用于染色细胞核和染色体，如淡紫色的伊红染色液；嗜碱性染色液一般用于染色细胞质和细胞器，如紫色的甲基蓝染色液；中性染色液则可以同时染色细胞核和细胞质，如黑褐色的赛红染色液。
2.组织切片染色液：常用的组织切片染色液有赛红染色液、伊红染色液、溴甲蓝染色液等。
赛红染色液可染色细胞核和胞质，适用于观察组织细胞的形态和结构；伊红染色液主要染色细胞核和染色体，适用于观察细胞分裂过程和遗传物质的分布；溴甲蓝染色液可染色细胞膜和细胞器，适用于观察细胞内结构和分子分布。
3.核酸染色液：常用的核酸染色液有伊红染色液、乙酰胆碱酯酶染色液等。
伊红染色液可染色DNA和RNA，适用于观察细胞核的形态和结构；乙酰胆碱酯酶染色液可染色DNA片段或蛋白质-DNA复合物，适用于观察转录因子的结合情况和基因表达。
4.蛋白质染色液：常用的蛋白质染色液有银染色液、共染色液等。
银染色液可用于染色蛋白质条带，适用于蛋白质电泳分析；共染色液则可以同时染色蛋白质和核酸，适用于口腔上皮细胞的核蛋白检测和分析。
5.细胞膜染色液：常用的细胞膜染色液有吖啶橙染色液、荧光素DAPI染色液等。
吖啶橙染色液可染色细胞膜，适用于观察细胞膜的形态和分布；荧光素DAPI染色液可染色细胞核和细胞膜，适用于观察细胞形态和细胞数量。
6.细胞器染色液：常用的细胞器染色液有细胞色素染色液、酶染色液等。
细胞色素染色液可染色细胞色素，适用于观察细胞呼吸作用；酶染色液可染色特定酶的活性，适用于观察细胞器功能和代谢情况。
总的来说，不同的染色液在生物学研究中有不同的应用，可以通过染色观察细胞和组织的形态、结构和功能，帮助揭示生物学现象的机制和过程。
吖啶橙染色溶酶体原理
吖啶橙（Acridine Orange）是一种荧光染料，常用于细胞和组织的染色。
它可以与DNA和RNA结合，并发出绿色和橙色的荧光信号。
溶酶体是细胞内的一种细胞器，主要参与细胞内物质的降解和消化。
吖啶橙染色溶酶体的原理是，吖啶橙可以穿过细胞膜进入细胞内，并与溶酶体内的DNA结合。
在酸性环境下，吖啶橙与DNA结合的荧光信号会发生变化。
在弱酸性条件下，吖啶橙发出绿色荧光；而在强酸性条件下，吖啶橙发出橙色荧光。
通过观察细胞或组织中溶酶体的荧光颜色，可以了解溶酶体的酸性程度和功能状态。
正常情况下，溶酶体处于弱酸性状态，吖啶橙发出绿色荧光；而当溶酶体功能异常或酸性增加时，吖啶橙发出橙色荧光。
这种染色方法可以用于研究溶酶体相关的疾病，如溶酶体贮积病和溶酶体功能障碍等。
需要注意的是，吖啶橙染色溶酶体的原理是基于荧光信号的变化，因此在观察时需要使用荧光显微镜或其他荧光检测设备。
吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染色法
吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染⾊法吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染⾊法吖啶橙《acridine oran。
AO)属于三环杂芳⾹类异嗜性阳离⼦荧光染料，主要以两种⽅式与核酸结合，⼀是嵌⼊核酸双链的碱基对之间；⼆是与单链核酸的磷酸发⽣静电相互作⽤。
当吖啶橙与DNA或RNA结合时，最⼤发射波长分别为525nm或650nm，产⽣绿⾊荧光或橙红⾊荧光，因此，吖啶橙是研究核酸的⼀种常⽤荧光组织化学染料。
下⾯介绍应⽤吖啶橙区分活细胞和原位组织细胞DNA和RNA荧光组织化学染⾊法。
1．溶液配制(1)吖啶橙浓缩液(4℃、避光，可保存数⽉)双蒸⽔ 50ml吖啶橙 50mg(2)甲液双蒸⽔ 200mlHCl 16mlNaCl 1．74gTriton X-100 0．2ml(3)⼄液0．2mol／LNa2HP04／0．1mol／L枸橼酸缓冲液(pH 6．0)双蒸⽔ 100mlNa2 HP04?12H20 4．51g枸橼酸(⽆⽔柠檬酸) 0．71g溶解后，依次加⼊以下试剂和吖啶橙浓缩液NaCl(0．15mol／L) 0．87gEDTA-Na(1mmol／1) 0．037g吖啶橙浓缩液 0．6ml加⼊吖啶橙浓缩液后，应尽早使⽤。
2．操作程序(1)取0．2ml含10％⼩⽜⾎清的细胞悬液，再与0．4ml冷“甲液”混合，振荡15秒；(2)加⼊l.2ml"⼄液”，充分混匀；(3)于10分钟内，荧光显微镜观察，激发波长为488nm。
结果：DNA为黄绿⾊荧光，⽽RNA为橘红⾊荧光。
如果同时进⾏DNA和RNA染⾊时，需⽤鳌合剂处理，使双链RNA变性，确保所有的RNA均为单链，⽽双链DNA不受影响，增加结果的可信性。
鳌合剂以⼄⼆胺四⼄酸(EDTA)为佳。
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吖啶橙荧光染色试剂盒
吖啶橙荧光染色试剂盒产品简介：吖啶橙(Acridine Orange,AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA 、RNA ，属于异染性荧光染料。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。
因此AO 常用于细胞内DNA 和RNA 进行检测。
AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO 与DNA 的结合，其荧光发射峰为530nm ，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO 与单链核酸的磷酸根（带负电荷）产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO 与RNA 的结合，其荧光发射峰为640 nm ，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。
因此，吖啶橙嵌合到双链DNA 分子中显绿色，与DNA 单链或RNA 结合时发桔黄色或橙红色荧光。
Jimei 吖啶橙染色试剂盒（Acridine Orange Detection Kit ）主要由AO Stain 、AO Stain Buffer 组成，常用于细胞凋亡的检测。
染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙染色常与EB 染色合用双染， EB 只染死细胞使之产生桔黄荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
自备材料：1、 荧光显微镜2、 低速离心机3、 PBS4、 细胞计数板5、 载玻片、盖玻片操作步骤（仅供参考）：（一） AO 单独染色1、 收集细胞（采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞），用AO Stain Buffer （1×）清洗细胞1次，加入适量的AO Stain Buffer （1×）重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml 。
2、 取适量的细胞悬液和AO Stain ，按照细胞悬液和5μl AO Stain=19：1的比例混合，轻轻混匀。
细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告（经典版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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精子DNA吖啶橙(acridineorange)荧光检测试剂盒
观察绿色荧光：滤波器激发波长 490nm，散发波长 530nm ――可见绿色荧光，表明精子 DNA 正常
注意事项
1． 本产品为 50 次操作 2． 操作时须戴手套 3． 样品检测前，建议在血细胞计数器上进行精子细胞计数 4． 精子细胞计数时乘上稀释倍数 104。标准血细胞计数器（Hemocytometer）的计算方法是：
1 毫米方块的细胞计数 X 104（稀释倍数）＝实际细胞数/毫升 5． 染色完成后，即刻进行检测分析，否则由于其毒性导致精子 DNA 异常 6． 如果流式细胞仪出现干扰，建议使用 630nm 散发波长，或进行补偿处理，建议使用诱导处理样品：10
实验步骤
1
一、 细胞流式仪分析
1． 移取新鲜获得的 1 毫升精液（30 分钟至 1 小时内）到 1.5 毫升离心管 2． 放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 3． 小心抽去上清液 4． 加入 xx 毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群 5． 在血细胞计数器上进行精子细胞计数：1 × 107 精子细胞/毫升 6． 放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 7． 小心抽去上清液 8． 重复实验步骤 4 至 7 一次（不包括实验步骤 5） 9． 加入 xx 微升染色液（Reagent B），混匀颗粒群 10．室温下孵育 10 分钟，避免光照 11．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 12．小心抽去上清液 13．加入 xx 毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群 14．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 15．小心抽去上清液 16．重复实验步骤 13 至 15 一次 17．加入 xx 毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群 18．即刻进行细胞流式仪双通道分析：观察 10000 个细胞以上，200 细胞/秒；激发波长 200mW，散发波长
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙是一种有机化合物，化学式为C17H19N3，是一种荧光色素，主要用作荧光指示剂，可发出不同颜色的荧光。
其染色原理主要基于它能够与细胞中的DNA和RNA结合，并且具有膜通透性，能够透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。
在应用方面，吖啶橙可以用于检测凋亡细胞。
在凋亡过程中，染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体，使得吖啶橙能够染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒。
此外，吖啶橙还可以用于检测坏死细胞，因为坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
此外，吖啶橙还可以用作移码突变的诱变剂。
在DNA复制过程中，吖啶橙能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，导致DNA链增加或缺失一个碱基，从而造成移码突变。
需要注意的是，虽然吖啶橙是一种非常有用的荧光指示剂和细胞染色剂，但在使用过程中也需要遵守相应的安全操作规范，避免直接接触皮肤和眼睛，并确保在通风良好的环境中使用。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色是一种常用于核酸和蛋白质检测的荧光染料，其原理基于荧光共振能量转移（FRET）和DNA或蛋白质的特定
亲和性。
在实验中，通常将吖啶橙与目标分子（如DNA或蛋
白质）结合，通过观察荧光信号的强度和变化来进行检测。
吖啶橙具有两个荧光基团：供体荧光基团（通常为吖啶基团）和受体荧光基团（通常为橙色基团）。
当吖啶橙与目标分子结合时，两个基团之间的距离和相对位置可能会发生改变。
如果供体荧光基团与受体荧光基团的距离在合适的范围内，并且相对位置适当，FRET就会发生。
在FRET过程中，供体荧光基团受到激发光刺激并产生激发态，在受体荧光基团的作用下，供体荧光信号以非辐射方式传递给受体荧光基团。
作为结果，亮一些的橙色荧光发生。
通过观察橙色荧光信号的强度和变化，可以确定目标分子的存在和特定的相互作用。
吖啶橙染色的原理基于荧光共振能量转移和目标分子的亲和性，是一种有效的分析方法。
它常用于实验室研究、生物学检测和医学诊断等领域，具有高灵敏度和广泛的应用前景。
斑马鱼胚胎吖啶橙
斑马鱼胚胎吖啶橙（Acridine Orange，AO）染色（from 黄春筱师姐）：
1.原理：
吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一种核酸选择性染料，它能够掺入DNA分子或者与RNA分子通过静电吸引作用相结合。
掺入了AO染料的DNA分子在525 nm的紫外光照射下，能够激发出绿色荧光。
利用这一原理，AO染料被广泛地用于细胞凋亡的检测。
我们实验中，利用AO染料分别处理24 hpf、48 hpf、72 hpf和96 hpf斑马鱼胚胎，检测注射miR-462/731 Morpholinos的胚胎（MO组）、共注射miR-462/731 Mopholinos和Duplex 的胚胎（挽救组）以及Uninjected Control的胚胎（对照组）的ICM区域（24 hpf）、AGM区域（48hpf）和CHT区域（72hpf-96hpf）的细胞凋亡情况。
2.操作步骤：
2.1 试剂配制：
1)AO染液工作液：
AO染液工作液浓度为5 μg/ml；
首先配制AO贮存液浓度为5 mg/ml，使用时1:1000稀释到工作浓度。
2.2 染色步骤：
1)将斑马鱼胚胎（24hpf，48 hpf，72 hpf，96 hpf）手动剥除卵膜，并用超纯水清洗2次。
2)将斑马鱼胚胎转移到含有5 μg/ml AO染料的培养皿中，28.5°C培养15-30 min（避光）。
3)用新鲜的暴气超纯水（超纯水在28.5°C培养箱中放置一会）替换AO染液，摇床轻摇10 min洗涤胚胎，重复2次。
4)胚胎用0.02% MS-222麻醉后，在荧光显微镜下观察、拍照。
活体细胞溶酶体膜通透性(LMP)完整性吖啶橙荧光检测试
活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂是一种旨在通过吖啶橙吸收和细胞内再分布检测技术，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，即存在于或由溶酶体释放到细胞浆的荧光染料的不同荧光强度变化，来分析和观察溶酶体膜通透性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种活体细胞溶酶体（动物、人体、昆虫等）膜通透性的检测。
产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。
技术背景溶酶体（lysosome）是一种动态性的、多态性的、含有水解酶的细胞器，具有接受和降解来自于分泌性、内吞性（endocytic）、自噬性（autophagic）、吞噬性（phagocytic）膜运转通路中的大分子。
其功能是膜依赖性，具有解毒和防御作用。
溶酶体膜是溶酶体内基质和胞浆之间的生理屏障，为整合性糖蛋白，防止细胞自我降解。
一旦溶酶体膜去稳定（destabilization），例如碱性化或内容物移位（translocation），将导致质子和水解酶外漏，而造成细胞器功能异常，进而产生细胞坏死、凋亡，以及病理症状，例如朊病毒脑病（prion encephalopathies）、阿茨罕默病、心肌缺血、脊髓灰质炎病毒感染、补体激活型肺损伤（complement activation-produced lung injury）、急性组织损伤等疾病。
其中膜通透性增加，是溶酶体膜去稳定性或去完整性的标志之一，溶酶体内容物大量释放到胞浆中，直接影响细胞的存活。
吖啶橙（acridine orange；AO）是一种亲溶酶体（lysomotropic）异染性（metachromatic）的荧光染料，在完整的溶酶体内，为质子化（protonated）寡聚体（oligomeric）形式，呈现红色荧光（激发波长555nm，散发波长617nm），而在胞浆内，为单体去质子化形式，呈现绿色荧光（激发波长490nm，散发波长528nm）。
吖啶橙染色液(1mgml)
吖啶橙染色液(1mg/ml)简介：吖啶橙(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA 、RNA ，属于异染性荧光染料。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。
因此AO 常用于细胞内DNA 和RNA 进行检测。
Leagene 吖啶橙染色液(1mg/ml)为储存液，使用时应稀释到合适浓度后使用。
染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用PBS 清洗细胞1次，计数并调节细胞浓度至106/ml 。
2、 取适量的细胞悬液，加入Acridine Orange Stain(1mg/ml)，轻轻混匀。
3、 室温避光染色15～20ml ，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
4、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长488nm ，阻断滤光片波长515nm)，计数并拍照。
染色结果：正常细胞细胞被均匀染成黄绿色荧光 凋亡细胞染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒注意事项：1、 Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜剂，较少单独使用。
2、 吖啶橙染色常与EB 染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
3、 如有低温离心机进行离心效果更佳。
4、 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
编号 名称 DA0036 Storage Acridine Orange Stain(1mg/ml) 10ml 4℃ 避光 使用说明书 1份相关：编号名称CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CC0130 胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%)DA0001 DAPI染色液(5ug/ml)DA0065 台盼蓝染色液(0.4%)DC0032 Masson三色染色液NH0043 SSC缓冲液(20×,pH7.0)PE0103 Acr-Bis(30%,29:1)TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。
吖啶橙荧光染色法在消化系肿瘤诊断中的临床意义
中图分类号： ７５Ｒ ３．３ Ｒ ３ ； ７ ０ ４
文 献 标 识 码 ： Ｂ
文 章 编 号 ：６１８ ４ （０ ８ ０—７ ８０ １ ７—３ ８ ２ ０ ） ７０ ５—２
消 化 系肿 瘤 的发 病 率 及 死 亡 率 居 各 种 恶 性 肿 瘤 之 首 ， 目前
色为 ＋＋＋； 核荧 光强 ， 明 亮 黄 色 为 ＋ ＋ ＋ ＋ 。浆 较 暗 荧 光 ， 呈
系 。Ｄ ＮＡ 含 量 越 多 ， 光 越 黄 越 亮 ； ＮＡ 含 量 越 多 ， 光 越 红 荧 Ｒ 荧
越 鲜 艳 ＿ 。从 正 常 细 胞 转 变 为 癌 细 胞 ， 细 胞 的 Ｄ ４ ］ 其 ＮＡ、 Ｎ Ｒ Ａ 含 量 不 断 增 加 ， ＡＯ染 色 ， 荧光 显 微 镜 下 ， 过 单 个 细 胞 的 经 在 通
光 。荧 光 的强 度 与 核 内 ＤＮ 与 浆 内 Ｒ Ａ ＮＡ 的含 量 成 正 比例 关
１２ 方 法 胃 、 管 、 结 肠 标 本 通 过 内 窥 镜 取 材 ， 脏 标 本 ． 食 直 肝
通过 细针 穿 刺 取 材 ， 片 １ ２张 ，５ 酒 精 固定 ，５ ｉ 水 涂 ～ ９ １ｒ ｎ后 ａ
摘 要： 目的 探 讨 吖 啶 橙 荧光 染 色检 测 法 对 消 化 系肿 瘤 的诊 断 价值 。方 法 对 １０例 胃癌 、Ｏ例 肠 癌 、Ｏ例 食 管癌 、Ｏ例 ０ ５ ５ ３ 吖啶 橙 荧光 染 色检 测
肝 癌 患 者 ， 行 内窥 镜 及 细 针 肿 物 穿 刺 取 材 ， 标 本 同 时做 吖 啶 橙 荧光 进 将
洗 ， 加 ０ ０ Ｏ浓 度 的 吖 啶 橙 荧 光 染 液 染 色 ５ ｉ， ｐ ． 滴 ．１ ａ ｒ ｎ 用 Ｈ６ ０
吖啶橙荧光染色原理
吖啶橙荧光染色原理吖啶橙荧光染色原理一、前言吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，其原理基于吖啶橙能够与DNA结合形成复合物，并且在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射。
本文将详细介绍吖啶橙荧光染色的原理。
二、吖啶橙的结构和性质吖啶橙是一种双氮杂环化合物，其分子式为C17H19N4Cl。
它是一种黄色晶体，可以通过溶解在水中形成黄色溶液。
吖啶橙分子中含有两个氮原子和两个苯环，这些结构使得它具有与DNA结合的能力。
三、DNA与吖啶橙的相互作用DNA是由四种碱基组成的双链螺旋结构，其中腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）之间形成两个氢键，鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）之间形成三个氢键。
这些氢键使得DNA分子具有稳定的结构，并且能够与吖啶橙形成复合物。
当吖啶橙溶液与DNA接触时，它能够通过静电作用结合到DNA的磷酸基团上。
此外，吖啶橙的分子中含有苯环，这些苯环可以穿过DNA 的双链螺旋，与碱基形成π-π堆积作用。
这些相互作用使得吖啶橙能够与DNA形成稳定的复合物。
四、吖啶橙荧光发射原理在紫外线或蓝光的激发下，吖啶橙分子会从基态跃迁到第一激发态。
在回到基态时，它会通过荧光发射释放出能量。
这种荧光发射是一种特殊的电子跃迁过程，其波长通常在500-600nm之间。
由于DNA和吖啶橙形成了稳定的复合物，并且吖啶橙分子在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射，因此在细胞核染色中加入吖啶橙可以使得细胞核产生荧光信号。
五、吖啶橙荧光染色的实验步骤1. 取一定量的细胞样品，离心沉淀后用PBS洗涤。
2. 加入适量的吖啶橙溶液，静置15-30分钟。
3. 用PBS洗涤样品，去除未结合的吖啶橙。
4. 在荧光显微镜下观察细胞核荧光信号。
六、吖啶橙荧光染色的应用吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，它可以被广泛应用于生物学和医学研究中。
例如，在癌症诊断中可以利用吖啶橙染色技术对肿瘤组织进行检测；在细胞分裂和凋亡等过程中也可以利用吖啶橙技术进行观察和分析。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理的核心是吖啶橙与细胞或组织中的核酸结合。
吖啶橙是一种双
碱基染料，它能够与DNA和RNA中的腺嘌呤发生特异性的结合，形成荧光复合物。
在细胞或组织染色实验中，通过将样本与含有吖啶橙的染色液接触，吖啶橙能够与细胞核中的DNA结合，或者与细胞质中的RNA结合，从而使得这些结构在
荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号。
通过观察这些荧光信号的强度、分布和形态，可以对细胞或组织的结构和功能进行研究和分析。
除了与核酸结合外，吖啶橙还可以与细胞膜中的脂质结合，或者与特定蛋白质
发生相互作用。
这些特异性的结合使得吖啶橙在细胞和组织染色实验中具有多样化的应用。
例如，可以利用吖啶橙染色来观察细胞膜的形态和分布，或者检测特定蛋白质的表达和定位。
这些信息对于研究细胞的生理功能和病理变化具有重要意义。
在实际的实验操作中，吖啶橙染色通常需要配合荧光显微镜或流式细胞仪等设
备来进行观察和分析。
荧光显微镜能够通过激发吖啶橙荧光复合物产生荧光信号，并通过特定的滤光片来捕获和记录这些信号，从而实现对细胞和组织的荧光成像。
而流式细胞仪则可以通过检测吖啶橙的荧光信号来实现对细胞的数量、大小和荧光强度等参数的快速测定和分析。
总的来说，吖啶橙染色原理是基于吖啶橙与细胞或组织中特定结构的特异性结
合而实现的。
通过这种染色方法，可以对细胞和组织的结构、功能和代谢进行研究和分析。
在生物医学研究领域中，吖啶橙染色已经成为一种常用的实验技术，为科学家们深入探索生命的奥秘提供了重要的工具和手段。
化学试剂吖啶溶液用途
化学试剂吖啶溶液用途
一、生物学实验
吖啶溶液在生物学实验中具有广泛的应用，主要用于测定细胞内的DNA、RNA等生物大分子的含量。
它是一种灵敏的荧光染料，可以与DNA和RNA分子结合，并产生特定的荧光信号。
通过检测荧光信号的强度，可以准确地测定细胞内DNA和RNA的含量。
二、诊断试剂
在诊断试剂方面，吖啶溶液也具有多种应用。
它可以用于测定血液、体液中的某些物质含量，用于诊断疾病。
例如，吖啶橙染色可以用于检测细胞凋亡，从而帮助医生对某些疾病进行诊断。
此外，吖啶溶液还可以用于免疫分析，如ELISA等实验，提高实验的灵敏度和准确性。
三、合成中间体
在有机合成中，吖啶溶液可以作为合成中间体，用于合成一系列药物、塑料等中间体。
它可以通过与其它有机物的反应，提供合成这些中间体的必要反应条件。
例如，吖啶可以通过与羧酸的反应生成酰胺，这是一种常见的有机合成反应。
四、实验室研究
在实验室研究中，吖啶溶液也具有多种应用。
它可以用于探究某些化学反应的机理，如氧化还原反应、光化学反应等。
同时，吖啶溶液还可以用于探究蛋白质的折叠机制等生物大分子的结构与功能关系。
这些研究对于深入了解化学反应的本质和生物大分子的结构与功
能具有重要意义。
五、工业应用
在工业应用方面，吖啶溶液主要用于测定工业产品中某些物质含量，如石油、化工产品等。
通过使用吖啶溶液进行检测，可以确保工业产品的质量符合标准。
此外，在监督工业生产过程中，吖啶溶液也可以作为有效的检测工具，保障生产过程符合环保要求。
一种利用吖啶橙染色快速鉴定重力密度梯度沉降法中生精细胞类型的方法
一种利用吖啶橙染色快速鉴定重力密度梯度沉降法中生精细胞类型的方法赵晴;韩睿钦;王琳芳;宋伟【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2017(037)005【摘要】目的建立一种重力梯度沉降法分离粗线期精母细胞,圆形及长形精子细胞的快速精确的镜检方法.方法利用重力密度梯度沉降法分离,将收集到的每管细胞分别放入96孔板中,每孔加入一定浓度的吖啶橙染液,于荧光显微镜下观察.结果通过分析对应荧光通道下3种生精细胞的细胞核/细胞质染色结果,可快速精确的分辨出粗线期精母细胞,圆形及长形精子细胞.结论建立了一种在重力密度梯度沉降法分离生精细胞过程中快速镜检检测粗线期精母细胞,圆形及长形精子细胞的方法.【总页数】5页(P591-595)【作者】赵晴;韩睿钦;王琳芳;宋伟【作者单位】中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室,北京100005;中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室,北京100005;中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室,北京100005;中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室,北京100005【正文语种】中文【中图分类】Q24【相关文献】1.精液中生精细胞染色体的直接低渗制备与初步应用 [J], 叶树俊2.精液中生精细胞染色体直接制备的改良法 [J], 叶树俊3.介绍一种新的精子和生精细胞染色方法 [J], 吕柏尧4.精子受精力的一种简易评价方法——吖啶橙荧光染色法 [J], 庄恭南;黄宇烽;颜建华;武建国5.利用卫星重力数据确定地球外部重力场的一种方法及模拟实验检验 [J], 申文斌;王正涛;晁定波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实验六吖啶橙染色检测细胞凋亡
观察：用蓝紫光滤光片，可见经0.01％的 丫啶橙荧光染料染色的细胞，细胞核和 细胞质被激发产生两种不同颜色的荧光( 亮绿色或暗绿色、橙红色)
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反射荧光显微镜的构造
优点： 由于物镜兼作聚光镜，不需要很多调节。 物镜数值孔径不受限制，在高放大被率时，也
可以获得高分辨率的像。 厚的或不透明的标本也能观察，厚的盖玻片
➢ 正常细胞核因含DNA显示黄绿色荧光，细胞质与 核仁都显示橘红色荧光，细胞体积较大且铺展。 凋亡细胞体积明显缩小，核呈黄绿色，断裂为多 个碎块状，无核仁，碎裂的核由膜包裹着凸起于 细胞表面呈黄绿色。
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荧 光 显 微 镜
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荧光显微镜的成像原理
荧光显微镜是利用一定波长的激发光对样品进 行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于 对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观 察检测。
也能使用。 其它观察法也能与反射荧光结合使用，特别
和相差法和透射微分干涉差法相结合。 可以避免不必要的荧光色衰褪现象。
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缺点： 在用低倍率物镜时，像比较暗，因此必
须用大数值孔径的物镜。 滤光镜系统必须有效地分离开激发光和
荧光。
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激发荧光的方式： 按光的波长范围分为UV激发法(使用紫外
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需要注意，即使像反差最佳的UV激 发暗场聚光器照明，由标本折射或散射 的部分紫外激发光也会进入物镜，这样 在光学系统中的加拿大胶胶合面和光学 玻璃因激发引起的自身荧光会使像的反 应变坏。因此，必须在目镜前面使用紫 外吸收滤光片作为截止滤光片（萤石或 氟石玻璃）。
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➢ 凋亡小体被吞噬：
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吖啶橙染色原理
➢ 吖啶橙(Acridine Orange) 是一种荧光染料，它与双 链DNA的结合方式是嵌入双链之间，而与单链 DNA和RNA则由静电吸引堆积在其磷酸根上。在 蓝光(约502nm)激发下，细胞核发亮绿色荧光(约 530nm)，核仁和胞质RNA发桔红色荧光(＞580nm)。 吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜 上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而 主要显示DNA、RNA两种核酸。
AOEB染料 精确称取AO(吖啶橙)、EB各1mg,分别溶于10ml
AO/EB染料: 精确称取AO(吖啶橙)、EB各1mg，分别溶于10ml pH7.2 PBS中使之配成100μg/ml的储备液，用前等量混合，备用。
AO/EB染色及观察结果：取已经培养好并加样孵育后的预观察细胞悬液100μl，加入AO/EB 染料4μl混匀，置1滴于载玻片，上覆盖玻片，荧光显微镜下观察结果并计数200个细胞统计结果。
凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。
非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。
二者形态迥然相异，很易判别。
在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状。
凋亡比例=(VA+NVA)/(VN+VA+NVA+NVN)*100%正常细胞(核染色质结构正常，胞膜完整，着均匀的绿色);早期凋亡细胞(核染亮绿色呈致密斑块或碎片状);晚期凋亡细胞(核染橘红色呈致密斑块或碎片状);坏死细胞(胞膜破损、核膜完整，染色质染均匀的红色)取AO(100 μg/ml)和EB(100 μg/ml)等体积混匀制成AO-EB荧光染液。
将培养细胞用PBS离心洗涤两次,稀释至106/ml,取1ml细胞悬液(106细胞)离心收集细胞,加入25 μl PBS重新悬浮细胞,与1 μl AO-EB荧光染液混合,取10 μl点片,荧光显微镜下观察、照像。
AO/EB染色液怎么配？吖啶橙和溴乙锭分别溶于PBS(PH7.2)，浓度为100μg/mL。
临用前，按1∶1混合即可。
吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定细胞凋亡（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）：（细胞爬片），在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片，接种细胞悬液，干预后，予95%乙醇固定15分钟，微干，然后准备荧光染色。
细胞铁死亡检测金标准
细胞铁死亡检测金标准一、检测目的细胞铁死亡是一种由铁依赖性的脂质过氧化引起的细胞程序性死亡。
它与多种疾病，尤其是神经退行性疾病如帕金森病、亨廷顿病以及一些癌症的发展和进展密切相关。
本标准旨在提供一种系统的方法，用于检测和量化细胞铁死亡过程。
二、检测原理细胞铁死亡的主要特征是细胞内脂质过氧化物的积累，这些过氧化物可导致细胞膜的通透性改变，进而引起细胞死亡。
本检测方法基于这一特征，利用吖啶橙染色技术（AO染色）来检测细胞膜通透性的改变，从而判断细胞是否发生了铁死亡。
在AO染色中，活细胞被染成绿色，而死细胞被染成红色。
通过计算红色和绿色细胞的比例，可以量化细胞铁死亡的程度。
此外，也可以通过观察细胞形态的变化，如细胞体积缩小、染色质凝集等来判断细胞是否处于铁死亡过程。
三、实验步骤1. 细胞准备：从培养皿中收集细胞，用PBS洗涤并离心（1000 rpm，5分钟），去除培养基和非细胞成分。
2. 染色：将吖啶橙染液与细胞悬液混合（1:1000），37℃孵育15分钟。
染色期间要保持染色液的pH值（可在染液中加入适量氢氧化钠或盐酸盐酸盐酸三、实验步骤（续）3. 洗涤：用PBS洗涤细胞，去除未结合染料。
洗涤次数应足够充分，以去除所有未结合染料。
4. 观察：用荧光显微镜观察细胞，记录红色（死细胞）和绿色（活细胞）细胞的数目和形态。
观察应在染色的即刻进行，以避免因时间延迟导致的细胞状态变化。
5. 数据分析：计算红色和绿色细胞的百分比，以及根据细胞形态进行的其他相关分析。
数据应取自多个视野，并至少重复三次实验以获得可靠的结果。
四、结果分析根据所观察到的红色和绿色细胞的百分比以及细胞形态的变化情况，可以判断细胞是否发生了铁死亡。
通常，铁死亡细胞的百分比会显著高于正常细胞或未经处理的对照细胞。
此外，铁死亡细胞的形态也会发生明显变化，如体积缩小、染色质凝集等。
这些形态学变化可作为辅助判断铁死亡的指标。
需要注意的是，本检测方法仅能提供铁死亡的一个间接指标，即细胞膜通透性的改变。
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吖啶橙染色液
吖啶橙染色液(1mg/ml)
产品简介：
吖啶橙(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。
因此AO 常用于细胞内DNA 和RNA 进行检测。
AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO 与DNA 的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO 与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO 与RNA 的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。
因此，吖啶橙嵌合到双链DNA 分子中显绿色，与DNA 单链或RNA 结合时发桔黄色或橙红色荧光。
(1mg/ml)为储存液，使用时应稀释到合适浓度后使用。
染色
后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙染色常与EB 染色合用双染，因EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
自备材料：
1、 荧光显微镜
2、 低速离心机
3、 PBS
4、 细胞计数板
5、 载玻片、盖玻片
操作步骤(仅供参考)：
1、 收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用PBS 清洗细胞1次，计数并调节
细胞浓度至106/ml。
2、取适量的细胞悬液，加入Acridine Orange Stain(1mg/ml)，使AO终浓度为8.5～17
μg/ml，轻轻混匀。
3、室温避光染色15～20ml，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
4、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm)，计数并拍照。
染色结果：
正常细胞细胞被均匀染成黄绿色荧光
凋亡细胞染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被
染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒
注意事项：
1、Acridine Orange Stain(1mg/ml)不含破膜剂，较少单独使用。
2、吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
3、如有低温离心机进行离心效果更佳。
4、操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
5、试剂有一定毒性，请小心操作。
6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。