吖啶橙溴化乙锭双荧光染色试剂盒
吖啶橙荧光染色法
吖啶橙荧光染色法【实验原理】吖啶橙(acridine orange, A0)是最经典的极灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光。
其激发峰为492nm，荧光发射峰为530nm (DNA )、640 ( RNA )，它与双链DNA的结合方式是嵌入双链之间，而与单链DNA和RNA则由静电吸引堆积在其磷酸根上。
在蓝光( 502nm) 激发下，细胞核发亮绿色荧光(约530nm)，核仁和胞质RNA发橘红色荧光(>580nm)。
吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而主要显示DNA、RNA两种核酸。
【实验用品】1、器材荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸。
2、试剂(1)0.1mol/l pH7.0 PBS 液A 液：NaH2PO4・H2O 2.76g，加蒸馏水至100ml;B 液：Na2HPO4 • 7H2O 5.36g，加蒸馏水至100ml;取A 液16.5ml + B 液33.5ml + NaCl 8.5g，用蒸馏水稀释至100ml。
(2)1%吖啶橙原液取0.1g吖啶橙加蒸馏水稀释至100ml (临用时配制0.01%吖啶橙染液：将1%吖啶橙原液用pH7.0 PBS溶液稀释10倍)。
3、材料口腔黏膜上皮细胞临时制片或人肝癌BEL-7402细胞爬片。
(1 )取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上。
(2)95%乙醇溶液固定5min。
(3)滴加0.01%吖啶橙染液5min。
(4)盖上盖玻片，吸水纸吸去盖玻片周围多余液体，镜下观察。
【结果与观察】荧光显微镜下(选用蓝色激发滤片)，可见含DNA的细胞核显示黄绿色荧光，含RNA的细胞质及核仁显示橘红色荧光【注意事项】(1 )制片后一定要晾干玻片，在进行后续步骤，否则会导致细胞脱落。
(2)每种荧光染料，均有自己的最适pH,此时荧光最强。
当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的pH缓冲液中进行。
吖啶橙 溴化乙锭双荧光染色
吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色AO / EB原理与流程zhongyisheng:1、原理：吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。
溴乙锭(E仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。
凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。
非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。
二者形态迥然相异，很易判别。
在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状。
2、AO/EB染色及观察结果：取 20-100μl的1：100稀释的染色剂置于载玻片的贴壁细胞上室温下静置20min，PBS洗涤2-3遍，上覆盖玻片，荧光显微镜下观察结果并计数20-200个细胞。
ym1051:1、能否提供具体实验步骤?2、您在文中所说的"1：100稀释的染色剂"是怎样稀释的?如何在载玻片上种上贴壁细胞?zhongyisheng:1、用1mlEP管稀释时，先取微量的染色剂，然后再取稀释剂（如BSA）加入EP 管吹打即可。
2、消毒灭菌处理后的盖玻片平放入培养皿或中即可实验。
ym1051:我好像已明白具体过程了:首先要进行细胞爬片,然后将染色剂滴加在已爬有细胞的盖玻片上,温育后洗涤,再盖上盖玻片则可进行观察了.是这样吗?如果不经过爬片处理而将细胞进行消化,再将细胞和染色剂滴加在盖玻片上进行观察,行吗?zhongyisheng: 的确，不经过爬片而是将贴壁细胞消化下来一样可以进行进一步的实验。
这是悬浮细胞的典型方法。
当然，由于进行免疫组化染色进行的形态学检查经常考虑到细胞的原貌，在国际上比较通用，尤其是在进行动态检查时。
医琳师妹：我将我所作的方法与大家共享：吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）：（1）细胞爬片：在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片，接种细胞悬液，干预后，予95%乙醇固定15分钟，微干，然后准备荧光染色。
吖啶橙染色液
吖啶橙染色液吖啶橙染色液(1mg/ml)产品简介：吖啶橙(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA，属于异染性荧光染料。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。
因此AO 常用于细胞内DNA 和RNA 进行检测。
AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO 与DNA 的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO 与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO 与RNA 的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。
因此，吖啶橙嵌合到双链DNA 分子中显绿色，与DNA 单链或RNA 结合时发桔黄色或橙红色荧光。
(1mg/ml)为储存液，使用时应稀释到合适浓度后使用。
染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙染色常与EB 染色合用双染，因EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
自备材料：1、 荧光显微镜2、 低速离心机3、 PBS4、 细胞计数板5、 载玻片、盖玻片操作步骤(仅供参考)：1、 收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用PBS 清洗细胞1次，计数并调节细胞浓度至106/ml。
2、取适量的细胞悬液，加入Acridine Orange Stain(1mg/ml)，使AO终浓度为8.5～17μg/ml，轻轻混匀。
3、室温避光染色15～20ml，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
4、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm)，计数并拍照。
AO_EB双重染色法检测紫杉醇体外诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡
［８］张细元，邹开芳。钱伟。等．泰素诱导ＭＩ【Ｎ２４５胃癌细胞凋亡及 对ｃｙｃｌｉｎＥｌ、ｃｙｃｌｉｎＤｌ表达的影响［Ｊ】．华中科技大学学报： 医学版，２００５。３４（６）：７３７—７４０．
华南宠物园地．４１．
·组间差异极显著（Ｐ＜Ｏ．０１） 图３紫杉醇对ＣＨＭｍ细胞ＬＤＨ活性的影响
撑组内差异极显著（Ｐ＜Ｏ．０１） 图４紫杉醇作用后ＣＨＭｍ凋亡率的变化
图５ 荧光显微镜下ＡＯ／ＥＢ双荧光染色法紫杉醇致ＣＨＭｍ凋亡情况
并沉积在细胞中，而死细胞无此功能，其形成量与 细胞活力呈正比。但是ＭＴＴ法只能间接反映细胞 活力，不能反映细胞死亡的数量。本实验用这两种 方法共同验证紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞的毒性。 实验结果显示台盼蓝排斥试验和ＭＴＴ细胞活性检 测显示结果一致。表明紫杉醇对ＣＨ‰具有明显的 抑制作用，药物作用时间越长，抑制作用越强，并 且对细胞的抑制率呈明显的时间依赖性关系。崔 洪尊等同在紫杉醇抑制Ｓ删Ｃ一７７２ｌ肝癌细胞增值 时也证明了这种结果。
ａｐｏｐｔｏ“ｃ
ｍｏｆｐｈ０１嚼ｃａｌ ｃｌｌａｌｌｇｅｓ ｗｅ托ｅｘ锄ｎｉｎｅｄ咖ｄｅｒ ａ ｎｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ＩｎｉｃｒＤ§ｃｏｐｅ．Ｔｈｅ ｆｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔａｘｏｌ ｃｏｕｌｄ
ｉｎｈｉｂｉｔ也ｅ ｐｒｏｌｉｆ．鼬ｔｉ∞ｏｆ ｃａｎｉｎｅ ｂ托勰ｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ锄ｄ ｉｎｄｌｌｃｅ印ｏｐｔｏｓｉｓ ｗｉｔｈ ｍｅ ｔ），ｐｉｃａｌ ｍｏ印ｈｏｌｏ百ｃａｌ ｆｅａｔＩｌｒｃｓ
万方数据
．４２． 华南宠物园地
ＡＯ／ＥＢ双重染色法检测紫杉醇体外诱导犬乳腺肿瘤细胞凋亡一陈萌，等
吖啶橙溴化乙锭双荧光染色试剂盒
吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色试剂盒简介：细胞凋亡(Apoptosis)的检测方法有形态学、生物化学、DNA片段化检测方法以及TUNEL等标记片段化DNA方法，但从细胞凋亡概念产生的历史及准确性方面考虑，使用显微镜进行的形态学观察也是很重要的。
细胞死亡的检测可以通过荧光色素染色区分活细胞、死细胞，测定细胞代谢活性和形态学观察。
这些方法都是利用细胞凋亡这种情况进行测定的，因而不一定反映实际情况。
MTT法是测定线粒体中特有酶的活性，反映细胞数目的变化，其结果与细胞死亡的数目未必完全一致。
吖啶橙(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA,属于异染性荧光染料，AO常用于细胞内DNA和RNA进行检测。
AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO与RNA的结合，其荧光发射峰为640nm，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。
因此，吖啶橙嵌合到双链DNA分子中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发橙红色荧光。
溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)嵌合到双链DNA或RNA的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光。
吖啶橙可透过活细胞膜，EB不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。
组成：自备材料：1、荧光显微镜2、PBS3、细胞计数板4、载玻片、盖玻片操作步骤(仅供参考)：1、AO/EB工作液的配制：取试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)，试剂(A):试剂(B):试剂(C)按照一定的比例稀释成AO/EB工作液。
2、每份细胞样品中加入AO/EB工作液，混合均匀。
3、低速离心：离心，弃上清。
4、用AO/EB Dilution Buffer重悬细胞，细胞计数，将细胞密度调整。
吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染色法
吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染⾊法吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染⾊法吖啶橙《acridine oran。
AO)属于三环杂芳⾹类异嗜性阳离⼦荧光染料，主要以两种⽅式与核酸结合，⼀是嵌⼊核酸双链的碱基对之间；⼆是与单链核酸的磷酸发⽣静电相互作⽤。
当吖啶橙与DNA或RNA结合时，最⼤发射波长分别为525nm或650nm，产⽣绿⾊荧光或橙红⾊荧光，因此，吖啶橙是研究核酸的⼀种常⽤荧光组织化学染料。
下⾯介绍应⽤吖啶橙区分活细胞和原位组织细胞DNA和RNA荧光组织化学染⾊法。
1．溶液配制(1)吖啶橙浓缩液(4℃、避光，可保存数⽉)双蒸⽔ 50ml吖啶橙 50mg(2)甲液双蒸⽔ 200mlHCl 16mlNaCl 1．74gTriton X-100 0．2ml(3)⼄液0．2mol／LNa2HP04／0．1mol／L枸橼酸缓冲液(pH 6．0)双蒸⽔ 100mlNa2 HP04?12H20 4．51g枸橼酸(⽆⽔柠檬酸) 0．71g溶解后，依次加⼊以下试剂和吖啶橙浓缩液NaCl(0．15mol／L) 0．87gEDTA-Na(1mmol／1) 0．037g吖啶橙浓缩液 0．6ml加⼊吖啶橙浓缩液后，应尽早使⽤。
2．操作程序(1)取0．2ml含10％⼩⽜⾎清的细胞悬液，再与0．4ml冷“甲液”混合，振荡15秒；(2)加⼊l.2ml"⼄液”，充分混匀；(3)于10分钟内，荧光显微镜观察，激发波长为488nm。
结果：DNA为黄绿⾊荧光，⽽RNA为橘红⾊荧光。
如果同时进⾏DNA和RNA染⾊时，需⽤鳌合剂处理，使双链RNA变性，确保所有的RNA均为单链，⽽双链DNA不受影响，增加结果的可信性。
鳌合剂以⼄⼆胺四⼄酸(EDTA)为佳。
编辑： viviank分享到：。
1003吖啶橙_溴乙锭双荧光染色检测细胞凋亡的形态学方法
实验技术吖啶橙/溴乙锭双荧光染色检测细胞凋亡的形态学方法南京医科大学第一附属医院临床实验研究室(南京210029)汪承亚 盛瑞兰 汪 凡 丁小健 邱宁雷 细胞凋亡(apoptosis)是不同于细胞坏死的一种细胞主动性死亡,近年已引起人们广泛重视。
Kerr等[1]首先用电子显微镜检描述凋亡细胞核浓缩、密度增高,细胞膜、细胞器相对完整等形态特征。
之后Wyllie[2]等提取凋亡细胞的DNA作电泳分析,见到相差为180～200bp 整倍数的DNA梯状条带,成为鉴定细胞凋亡的经典方法。
近期文献报道应用流式细胞仪测定受检细胞群体中凋亡细胞的百分率。
然而,电子显微镜,流式细胞仪非一般实验所能装备,操作较为复杂。
DNA电泳分析则不能估计细胞凋亡的发生率。
最近,我们在研究人结肠肿瘤细胞的细胞凋亡时,采用吖啶橙(acridine orange,AO)/溴乙锭(ethidium bromide,E B)双荧光染色,在荧光显微镜下观察凋亡细胞核的形态学改变[3,4]。
结果表明这是一种简单可行的检测细胞凋亡的方法。
既可早期发现凋亡细胞,又可分析细胞凋亡的发生率。
结果可靠,适于一般实验室开展。
材 料 与 方 法 一、受检细胞的收集:人结肠肿瘤细胞株Vaco330等系贴壁培养细胞株。
培养条件同前[3,4]。
收集脱落在培养液中的悬浮细胞为受检细胞。
经1500r/min 离心5min,细胞再悬于适量培液中,使悬浮细胞浓度达109/L左右。
立即作荧光染色形态学检测。
抽提细胞DNA时,受检细胞用PBS洗涤3次,立即提取DNA,或保存细胞于-80℃,供以后提取DNA之用。
二、AO/E B双荧光染色及荧光显微镜观察: 用PBS配制AO(Sigma A-6014)/EB(Sigma E-8751)各为100mg/L的混合染液,避光保存于室温或4℃,可使用半年以上。
取100μL受检细胞悬液,加4μL上述荧光染色液,轻轻打匀后,取细胞悬液一滴滴在洁净玻片上,加盖玻片后立即置荧光显微镜下观察。
吖啶橙荧光染色试剂盒
吖啶橙荧光染色试剂盒产品简介：吖啶橙(Acridine Orange,AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA 、RNA ，属于异染性荧光染料。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。
因此AO 常用于细胞内DNA 和RNA 进行检测。
AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO 与DNA 的结合，其荧光发射峰为530nm ，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO 与单链核酸的磷酸根（带负电荷）产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO 与RNA 的结合，其荧光发射峰为640 nm ，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。
因此，吖啶橙嵌合到双链DNA 分子中显绿色，与DNA 单链或RNA 结合时发桔黄色或橙红色荧光。
Jimei 吖啶橙染色试剂盒（Acridine Orange Detection Kit ）主要由AO Stain 、AO Stain Buffer 组成，常用于细胞凋亡的检测。
染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙染色常与EB 染色合用双染， EB 只染死细胞使之产生桔黄荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
自备材料：1、 荧光显微镜2、 低速离心机3、 PBS4、 细胞计数板5、 载玻片、盖玻片操作步骤（仅供参考）：（一） AO 单独染色1、 收集细胞（采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞），用AO Stain Buffer （1×）清洗细胞1次，加入适量的AO Stain Buffer （1×）重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml 。
2、 取适量的细胞悬液和AO Stain ，按照细胞悬液和5μl AO Stain=19：1的比例混合，轻轻混匀。
细胞凋亡染色方法
细胞凋亡染色方法
最常见的一种是吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双染色法。
这个方法就像是给细胞穿上了不同颜色的小衣服来区分它们的状态。
AO可以嵌入双链核酸，让正常细胞和凋亡细胞的细胞核都呈现绿色荧光。
而EB呢，它只能进入那些膜完整性被破坏的细胞，像凋亡晚期细胞，这些细胞的核就会被染成橙红色荧光。
咱们把细胞一染，放在荧光显微镜下看，就可以很清楚地区分正常细胞、凋亡早期细胞（只有绿色荧光）和凋亡晚期细胞（绿色加橙红色荧光）啦，是不是很神奇 ？
还有一种是Annexin V - FITC/PI双染法。
Annexin V是个很聪明的小蛋白，它对磷脂酰丝氨酸（PS）有很高的亲和力。
在细胞凋亡早期，细胞膜的PS会从膜内侧翻转到外侧，这时候Annexin V - FITC就能结合上去，发出绿色荧光。
PI呢，它和EB有点像，是不能进入活细胞和早期凋亡细胞的，只有当细胞死亡，细胞膜完全破损了，它才能进去把细胞核染成红色。
这样通过双染，我们就能准确地检测到凋亡细胞啦，就像给细胞们做了个精准的小体检 。
另外，TUNEL染色法也很厉害哦。
这个方法主要是检测细胞凋亡时断裂的DNA。
细胞凋亡的时候，内源性核酸内切酶会被激活，把染色体DNA在核小体间切断，产生180 - 200bp整数倍的寡核苷酸片段。
TUNEL法就是利用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）把生物素或地高辛等标记的dUTP连接到3' - OH末端，然后再用相应的荧光标记的抗体或者酶标抗体去检测这些标记的dUTP，这样凋亡细胞就能被染上色啦，在显微镜下就可以看到那些凋亡的小细胞们啦，是不是感觉像在细胞世界里玩侦探游戏一样 ？。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙是一种双碱性染料，具有两个氨基和两个芳香环结构。
它可以与DNA
和RNA结合，通过静电作用和氢键作用，与核酸中的腺嘌呤和胞嘧啶基团结合，
从而实现对核酸的染色。
吖啶橙的结构中含有芳香环和氨基，使其具有较强的荧光性能，能够在紫外光下产生橙色荧光。
在细胞或组织染色实验中，吖啶橙可以通过渗透染色或者固定染色的方式，将
其加入到待染细胞或组织中，与核酸结合形成吖啶橙-核酸复合物。
当使用荧光显
微镜观察时，激发波长为紫外光，吖啶橙-核酸复合物会发出橙色荧光信号，从而
实现对核酸的观察和检测。
吖啶橙染色的原理基于其与核酸的结合特性，通过与核酸的特异性结合，实现
对核酸的染色和检测。
由于吖啶橙具有较强的荧光性能，能够产生明亮的橙色荧光信号，因此在细胞生物学和分子生物学研究中得到了广泛的应用。
吖啶橙染色原理的了解对于科研工作者在实验设计和数据解读中具有重要意义。
在细胞和组织的荧光染色实验中，科研人员需要根据样本的特点和实验要求，选择合适的染色方法和条件，合理设计实验方案，以确保获得准确可靠的实验结果。
总之，吖啶橙作为一种重要的荧光染料，在生物学和医学领域发挥着重要作用。
了解其染色原理，可以帮助科研人员更好地应用吖啶橙进行细胞和组织的荧光染色实验，为科研工作提供有力支持。
希望本文对吖啶橙染色原理有所帮助，同时也希望科研人员能够在实验中充分
发挥吖啶橙的优势，取得更多有意义的研究成果。
精子DNA吖啶橙(acridineorange)荧光检测试剂盒
观察绿色荧光：滤波器激发波长 490nm，散发波长 530nm ――可见绿色荧光，表明精子 DNA 正常
注意事项
1． 本产品为 50 次操作 2． 操作时须戴手套 3． 样品检测前，建议在血细胞计数器上进行精子细胞计数 4． 精子细胞计数时乘上稀释倍数 104。标准血细胞计数器（Hemocytometer）的计算方法是：
1 毫米方块的细胞计数 X 104（稀释倍数）＝实际细胞数/毫升 5． 染色完成后，即刻进行检测分析，否则由于其毒性导致精子 DNA 异常 6． 如果流式细胞仪出现干扰，建议使用 630nm 散发波长，或进行补偿处理，建议使用诱导处理样品：10
实验步骤
1
一、 细胞流式仪分析
1． 移取新鲜获得的 1 毫升精液（30 分钟至 1 小时内）到 1.5 毫升离心管 2． 放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 3． 小心抽去上清液 4． 加入 xx 毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群 5． 在血细胞计数器上进行精子细胞计数：1 × 107 精子细胞/毫升 6． 放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 7． 小心抽去上清液 8． 重复实验步骤 4 至 7 一次（不包括实验步骤 5） 9． 加入 xx 微升染色液（Reagent B），混匀颗粒群 10．室温下孵育 10 分钟，避免光照 11．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 12．小心抽去上清液 13．加入 xx 毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群 14．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g 15．小心抽去上清液 16．重复实验步骤 13 至 15 一次 17．加入 xx 毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群 18．即刻进行细胞流式仪双通道分析：观察 10000 个细胞以上，200 细胞/秒；激发波长 200mW，散发波长
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙是一种有机化合物，化学式为C17H19N3，是一种荧光色素，主要用作荧光指示剂，可发出不同颜色的荧光。
其染色原理主要基于它能够与细胞中的DNA和RNA结合，并且具有膜通透性，能够透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。
在应用方面，吖啶橙可以用于检测凋亡细胞。
在凋亡过程中，染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体，使得吖啶橙能够染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒。
此外，吖啶橙还可以用于检测坏死细胞，因为坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
此外，吖啶橙还可以用作移码突变的诱变剂。
在DNA复制过程中，吖啶橙能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，导致DNA链增加或缺失一个碱基，从而造成移码突变。
需要注意的是，虽然吖啶橙是一种非常有用的荧光指示剂和细胞染色剂，但在使用过程中也需要遵守相应的安全操作规范，避免直接接触皮肤和眼睛，并确保在通风良好的环境中使用。
eb试剂说明书
一、产品概述EB试剂（Ethidium Bromide，溴化乙锭）是一种常用的荧光染料，主要用于核酸的荧光染色和凝胶电泳检测。
EB试剂能够嵌入核酸分子中，使核酸在紫外光照射下发出荧光，从而实现对核酸的定性和定量分析。
二、产品规格1. 产品名称：溴化乙锭（EB）2. 化学名称：1,8-二溴荧光素3. 分子式：C20H10Br24. 分子量：409.935. 形态：黄色或橙黄色粉末6. 溶解性：溶于水、乙醇、丙酮等有机溶剂7. 稳定性：对光敏感，易分解，需避光保存8. 储存条件：-20℃以下，避光，密封保存三、产品用途1. 核酸荧光染色：用于DNA、RNA的荧光染色，便于在紫外光下观察和摄影。
2. 凝胶电泳检测：与核酸结合后，通过凝胶电泳分析核酸的分子量和纯度。
3. 核酸分子杂交：作为探针与靶标核酸结合，用于分子杂交实验。
4. 其他：在分子生物学、生物化学、细胞生物学等领域有广泛应用。
四、使用方法1. 标准溶液配制：- 称取1.5mg EB，加入100ml 10%的醋酸水溶液，溶解后用蒸馏水定容至1000ml，即为1mg/ml的EB储备液。
- 使用时，根据需要稀释储备液，配制工作浓度（一般为0.5-1.0μg/ml）。
2. 核酸荧光染色：- 将EB储备液稀释至所需浓度。
- 将核酸样品与EB染料混合，室温下避光孵育5-10分钟。
- 使用紫外灯照射，观察荧光。
3. 凝胶电泳检测：- 将EB储备液稀释至所需浓度。
- 将核酸样品与EB染料混合，室温下避光孵育5-10分钟。
- 进行凝胶电泳，观察荧光条带。
五、注意事项1. EB试剂对皮肤和眼睛有刺激性，操作时需穿戴防护手套和护目镜。
2. 操作过程中避免接触皮肤和眼睛，如不慎接触，立即用大量清水冲洗。
3. EB试剂对光敏感，避光保存，储存温度不宜过高。
4. 配制工作溶液时，应尽量减少EB试剂的暴露时间，避免分解。
5. 操作过程中避免交叉污染，使用后彻底清洗实验器材。
溴化乙锭鉴定DNA的原理
溴化乙锭鉴定DNA的原理
溴化乙锭是一种DNA染色剂，可以通过与DNA分子中的碱基相互作用来染色。
其原理是溴化乙锭可以通过氢键与DNA中的腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）碱基结合，形成溴化乙锭-DNA复合物。
溴化乙锭通过与DNA结合后，可以通过非辐射猝灭作用将吸收到的紫外线能量释放出来，表现为荧光信号。
这种荧光信号的强度与DNA的含量成正比。
所以通过测量溴化乙锭荧光信号的强度，可以间接推测出待测样品中DNA的含量。
在实验室中，溴化乙锭可以用于凝胶电泳分析和荧光标记DNA。
在凝胶电泳分析中，溴化乙锭可以与DNA分子结合，使其带负电的DNA片段在电场中向阳极方向迁移，通过观察DNA的迁移距离和荧光强度，可以获得DNA分子的大小和含量信息。
在荧光标记DNA中，溴化乙锭可以通过标记荧光染料，使DNA 质体产生荧光信号，从而进行荧光定量分析等。
需要注意的是，溴化乙锭在高浓度下有毒性，并且可以嵌入到DNA双螺旋结构中，可能导致DNA突变和突变的检测结果。
因此，在使用溴化乙锭进行DNA 鉴定时需要注意控制荧光染料的浓度和操作条件，以确保准确和可靠的实验结果。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色是一种常用于核酸和蛋白质检测的荧光染料，其原理基于荧光共振能量转移（FRET）和DNA或蛋白质的特定
亲和性。
在实验中，通常将吖啶橙与目标分子（如DNA或蛋
白质）结合，通过观察荧光信号的强度和变化来进行检测。
吖啶橙具有两个荧光基团：供体荧光基团（通常为吖啶基团）和受体荧光基团（通常为橙色基团）。
当吖啶橙与目标分子结合时，两个基团之间的距离和相对位置可能会发生改变。
如果供体荧光基团与受体荧光基团的距离在合适的范围内，并且相对位置适当，FRET就会发生。
在FRET过程中，供体荧光基团受到激发光刺激并产生激发态，在受体荧光基团的作用下，供体荧光信号以非辐射方式传递给受体荧光基团。
作为结果，亮一些的橙色荧光发生。
通过观察橙色荧光信号的强度和变化，可以确定目标分子的存在和特定的相互作用。
吖啶橙染色的原理基于荧光共振能量转移和目标分子的亲和性，是一种有效的分析方法。
它常用于实验室研究、生物学检测和医学诊断等领域，具有高灵敏度和广泛的应用前景。
活体细胞溶酶体膜通透性(LMP)完整性吖啶橙荧光检测试
活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途活体细胞溶酶体膜通透性（LMP）/完整性吖啶橙荧光检测试剂是一种旨在通过吖啶橙吸收和细胞内再分布检测技术，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，即存在于或由溶酶体释放到细胞浆的荧光染料的不同荧光强度变化，来分析和观察溶酶体膜通透性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种活体细胞溶酶体（动物、人体、昆虫等）膜通透性的检测。
产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。
技术背景溶酶体（lysosome）是一种动态性的、多态性的、含有水解酶的细胞器，具有接受和降解来自于分泌性、内吞性（endocytic）、自噬性（autophagic）、吞噬性（phagocytic）膜运转通路中的大分子。
其功能是膜依赖性，具有解毒和防御作用。
溶酶体膜是溶酶体内基质和胞浆之间的生理屏障，为整合性糖蛋白，防止细胞自我降解。
一旦溶酶体膜去稳定（destabilization），例如碱性化或内容物移位（translocation），将导致质子和水解酶外漏，而造成细胞器功能异常，进而产生细胞坏死、凋亡，以及病理症状，例如朊病毒脑病（prion encephalopathies）、阿茨罕默病、心肌缺血、脊髓灰质炎病毒感染、补体激活型肺损伤（complement activation-produced lung injury）、急性组织损伤等疾病。
其中膜通透性增加，是溶酶体膜去稳定性或去完整性的标志之一，溶酶体内容物大量释放到胞浆中，直接影响细胞的存活。
吖啶橙（acridine orange；AO）是一种亲溶酶体（lysomotropic）异染性（metachromatic）的荧光染料，在完整的溶酶体内，为质子化（protonated）寡聚体（oligomeric）形式，呈现红色荧光（激发波长555nm，散发波长617nm），而在胞浆内，为单体去质子化形式，呈现绿色荧光（激发波长490nm，散发波长528nm）。
吖啶橙荧光染色原理
吖啶橙荧光染色原理吖啶橙荧光染色原理一、前言吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，其原理基于吖啶橙能够与DNA结合形成复合物，并且在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射。
本文将详细介绍吖啶橙荧光染色的原理。
二、吖啶橙的结构和性质吖啶橙是一种双氮杂环化合物，其分子式为C17H19N4Cl。
它是一种黄色晶体，可以通过溶解在水中形成黄色溶液。
吖啶橙分子中含有两个氮原子和两个苯环，这些结构使得它具有与DNA结合的能力。
三、DNA与吖啶橙的相互作用DNA是由四种碱基组成的双链螺旋结构，其中腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）之间形成两个氢键，鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）之间形成三个氢键。
这些氢键使得DNA分子具有稳定的结构，并且能够与吖啶橙形成复合物。
当吖啶橙溶液与DNA接触时，它能够通过静电作用结合到DNA的磷酸基团上。
此外，吖啶橙的分子中含有苯环，这些苯环可以穿过DNA 的双链螺旋，与碱基形成π-π堆积作用。
这些相互作用使得吖啶橙能够与DNA形成稳定的复合物。
四、吖啶橙荧光发射原理在紫外线或蓝光的激发下，吖啶橙分子会从基态跃迁到第一激发态。
在回到基态时，它会通过荧光发射释放出能量。
这种荧光发射是一种特殊的电子跃迁过程，其波长通常在500-600nm之间。
由于DNA和吖啶橙形成了稳定的复合物，并且吖啶橙分子在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射，因此在细胞核染色中加入吖啶橙可以使得细胞核产生荧光信号。
五、吖啶橙荧光染色的实验步骤1. 取一定量的细胞样品，离心沉淀后用PBS洗涤。
2. 加入适量的吖啶橙溶液，静置15-30分钟。
3. 用PBS洗涤样品，去除未结合的吖啶橙。
4. 在荧光显微镜下观察细胞核荧光信号。
六、吖啶橙荧光染色的应用吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，它可以被广泛应用于生物学和医学研究中。
例如，在癌症诊断中可以利用吖啶橙染色技术对肿瘤组织进行检测；在细胞分裂和凋亡等过程中也可以利用吖啶橙技术进行观察和分析。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理的核心是吖啶橙与细胞或组织中的核酸结合。
吖啶橙是一种双
碱基染料，它能够与DNA和RNA中的腺嘌呤发生特异性的结合，形成荧光复合物。
在细胞或组织染色实验中，通过将样本与含有吖啶橙的染色液接触，吖啶橙能够与细胞核中的DNA结合，或者与细胞质中的RNA结合，从而使得这些结构在
荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号。
通过观察这些荧光信号的强度、分布和形态，可以对细胞或组织的结构和功能进行研究和分析。
除了与核酸结合外，吖啶橙还可以与细胞膜中的脂质结合，或者与特定蛋白质
发生相互作用。
这些特异性的结合使得吖啶橙在细胞和组织染色实验中具有多样化的应用。
例如，可以利用吖啶橙染色来观察细胞膜的形态和分布，或者检测特定蛋白质的表达和定位。
这些信息对于研究细胞的生理功能和病理变化具有重要意义。
在实际的实验操作中，吖啶橙染色通常需要配合荧光显微镜或流式细胞仪等设
备来进行观察和分析。
荧光显微镜能够通过激发吖啶橙荧光复合物产生荧光信号，并通过特定的滤光片来捕获和记录这些信号，从而实现对细胞和组织的荧光成像。
而流式细胞仪则可以通过检测吖啶橙的荧光信号来实现对细胞的数量、大小和荧光强度等参数的快速测定和分析。
总的来说，吖啶橙染色原理是基于吖啶橙与细胞或组织中特定结构的特异性结
合而实现的。
通过这种染色方法，可以对细胞和组织的结构、功能和代谢进行研究和分析。
在生物医学研究领域中，吖啶橙染色已经成为一种常用的实验技术，为科学家们深入探索生命的奥秘提供了重要的工具和手段。
荧光染色检测细胞凋亡
荧光染色检测细胞凋亡1、吖啶橙AO/溴乙锭EB双染色吖啶橙（acridine orange，简称AO）：3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3 · HCl · ZnCl2, 分子量438.12g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。
它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。
因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。
吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。
吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡（acridineorange/ethidium bromide, AO/EB）悬浮细胞AO/EB双染步骤1.调整细胞密度为106/ml，将细胞种至6孔板，每孔2ml细胞；2.向每孔加入相应浓度药物，培养至不同时间点；3.1000转/min离心5min收集细胞，PBS洗涤1次；4.PBS重悬细胞，使悬浮细胞浓度达106/ml左右；5.取100μl受检细胞悬液，各加2μl AO和EB(AO/EB染料配制：AO、EB各1mg，分别溶于10ml pH7.2 PBS中，使之配成100μg/ml的储备液，4℃保存，用前等量混合)；6.取上述染色液一滴，滴在洁净玻片上，加盖玻片后立即置荧光显微镜下观察，计取5个视野，共100个细胞中凋亡细胞百分数。
用吖啶橙荧光染色对喉癌细胞DNA和RNA的观察
用吖啶橙荧光染色对喉癌细胞DNA和RNA的观察
董学武;王强
【期刊名称】《中华耳鼻咽喉科杂志》
【年(卷),期】1993(028)006
【摘要】采用吖啶橙荧光染色方法对７例喉正常粘膜上皮（ＮＥ）、２５例喉粘膜上皮非典型增生（ＡＨＥ）和４４例喉鳞状细胞癌细胞形态和ＤＮＡ、ＲＮＡ进行观察。
结果证明吖啶橙荧光染色是一种可显示细胞分化程度的染色方法，对细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ具有很强的特异性，可以显示细胞的形态、结构和两种核酸的含量变化。
方法简便、迅速、图像清晰，显示了喉粘膜上皮不典型增生和喉癌ＤＮＡ、ＲＮＡ的变化特点，对喉癌早期诊断具有应用价值。
【总页数】3页(P360-361,T038)
【作者】董学武;王强
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R739.650.3
【相关文献】
1.吖啶橙/溴乙锭双荧光染色检测细胞凋亡的形态学方法 [J], 汪承亚
2.吖啶橙荧光染色诊断附红细胞体病研究进展及评价 [J], 蔡淑梅;安淑娟
3.吖啶橙-细胞DNA荧光抑制法筛选抗癌药物 [J], 唐宏武
4.脱落细胞吖啶橙染色荧光显微镜检查在肺癌... [J], 陈天铎;段国兰
5.吖啶橙荧光染色法在循环肿瘤细胞筛查中的应用 [J], 刘敏;马富玲;韩荣;李美;刘淑芬;张淑敏
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色试剂盒
简介：
吖啶橙(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA 、RNA,属于异染性荧光染料， AO 常用于细胞内DNA 和RNA 进行检测。
吖啶橙嵌合到双链DNA 分子中显绿色，与DNA 单链或RNA 结合时发橙红色荧光。
溴化乙锭(Ethidium Bromide,EB)嵌合到双链DNA 或RNA 的碱基对中，无碱基特异性，发红色荧光。
吖啶橙可透过活细胞膜，EB 不能通过与活细胞膜具有相同通透性的细胞膜。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 AO/EB 工作液的配制：取试剂(A)、试剂(B)、试剂(C)， 按照试剂(A):试剂(B):试剂
(C)=1:1:8的比例稀释成AO/EB 工作液。
2、 每份细胞样品中加入AO/EB 工作液2μl ，混合均匀。
3、 低速离心，弃上清。
4、 用AO/EB Dilution Buffer 重悬细胞，细胞计数，将细胞密度调整为0.5~5×106个/ml 。
5、 加入1μl AO/EB 工作液，充分混匀。
6、 取洁净载玻片，滴加上5μl 细胞悬液，轻轻盖上盖玻片。
7、 在荧光显微镜B 域进行观察。
染色结果：
注意事项：
1、用能通过活细胞膜与DNA 结合后发蓝色荧光的Hoechist 33342和只能通过死细胞与DNA 结合后发红色荧光的碘化吡啶( propidium iodide ，PI)对细胞进行双染的方法也比较常用。
编号 名称
DA0039 100T Storage
试剂(A): AO solution 200μl 4℃ 避光 试剂(B): EB solution
200μl RT 试剂(C): AO/EB Dilution Buffer 50ml
4℃ 避光 使用说明书
1份
活细胞 绿色荧光 死细胞
橙色荧光
1、EB solution有一定毒性，请小心操作。
相关：
编号名称
CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CC0130 胰蛋白酶-EDTA溶液(0.25%:0.02%)
DA0001 DAPI染色液(5ug/ml)
DA0020 Hoechst33342/PI细胞凋亡染色试剂盒
DA0065 台盼蓝染色液(0.4%)
DC0035 Pollak三色染色液
NH0043 SSC缓冲液(20×,pH7.0)
TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)。