吖啶橙荧光染色试剂盒
精子DNA检测系列简介
包装规格：10人份/盒、20人份/盒 、 40人份/盒
存储条件及有效期： 试剂盒于2-8℃避光保存，有效期为12个月。
（三）
精子活体染色试剂盒 （拒染法）
检测原理：
利用荧光络黄染料（吖啶橙）具有高度的异 染性的特性，以插入的方式与双螺旋的DNA分子
结合，染色后断裂的单DNA精子呈绿色荧光。
医生可通过计算红色和黄色荧光精子即单链DNA
精子的百分率评估精子受精几率。
3、检测操作过程
检测样本：液化后的新鲜精液标本 精子洗涤 涂片 固定
三明市和众生物技术有限公司内部培训资料
生殖医学检测试剂盒系列
精子五联检
1、精子DNA检测试剂盒 2、精子DNA碎片检测试剂盒 3、精子活性检测试剂盒 4、精子形态学检测试剂盒 5、精子核蛋白检测试剂盒
影响精子受精或男性不育的因素
精子死亡率过高 精子畸形率过高 精子成熟率过低 精子染色体异常 精子数量过少 精子活动力过低 精子液化能力过低
完
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
结果： 核蛋白不成熟的精子（IM）染紫蓝色或紫色 核蛋白成熟的精子（M）染红色。
操作方法
精子液化 精子洗涤 精子洗涤
涂片
复染 洗脱 染色 固定
镜检
染色效果
不成熟精子
成熟精子
正常参考值：核蛋白不成熟精子≤30%
产品基本信息
产品注册证号：闽明食药监械（准）字2013第1400022号 执行标准号：YZB/闽明0033-2013 生产许可证号：闽食药管械生产许第20110297号
常用核酸染料
特别的“染料”给特别的你：Invitrogen独家的SYBR GreenER【字体：大中小】 时间：2006年05月23日来源：生物通------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------摘要：要解决SYBR Green的非特异问题，当然不是只有一条途径。
所谓条条道路通罗马，不同于Qiagen或者ABI利用的是提高DNA聚合酶的特异性，“曲线救国”，Invitrogen公司采用直接改造SYBR Green的方法，发展出更特异更灵敏的荧光染料——SYBR® GreenER™ qPCR Reagent System。
SYBR Green系列荧光染料由于低毒、灵敏度度优于EB而日渐受到科研用户的欢迎，这个原属于Molecular Probes公司的专利随着Probes被并购进入Invitrogen 的大家庭，Invitrogen要优化它自然更方便啦。
SYBR® GreenER™被Invitrogen称为新一代定量PCR荧光检测方法的核心技术之一，相比原有的SYBR Green，最大的优势的发光强度更强更明亮，使得原来检测不到的低丰度DNA 的信号更容易被检测到——这也就意味着荧光染料的检测灵敏度提高了，从原来的0.1ng左右提高到6pg，应用在定量PCR检测中就使得基因表达数据分析更为可靠。
此外，对荧光染料构造的修饰使得减少了染料分子对PCR反应的抑制作用。
SYBR GreenER和原有的SYBR Green一样适用相同的滤光片，并不需要增加新的仪器或者新滤光片(filters)。
SYBR GreenER可以看作是SYBR Green的兼容升级版了，具体的升级优化如下：RealTime ready 智力大冲浪！答对5题，即获赠美国傲仕优质保温杯！升级step one：快速反应与高灵敏度增加结果可靠性SYBR GreenER这种新颖的DNA结合染料的一个显著特点就是在检测信号上有了大幅度提高，同时也由于SYBR GreenER消除了一些原有SYBR Green对PCR反应的影响（荧光染料结合入DNA小沟，阻碍扩增反应），因此反应时间得到了提升。
BRB80溶液(5×)pH6.8)
分类：细胞其他
储存条件：4℃,过滤除菌,12个月
产品用途：
产品说明：主要由PIPES、氯化镁、EGTA、双蒸水等组成,用氢氧化钾调PH值至6.5。
产品编号： YM-S1340 ,
供货能力：现货 作为实验用品，供研究用，不能直接用于人体。
说明书请致电我公司销售人员，（BRB80溶液(5×）pH6.8)）其他相关产品信息：
上海远慕科技专业供应：BRB80溶液(5×）pH6.8) 100ml 上海远慕生物科技有限公司生产的: BRB80溶液(5×,pH6.8) 主要用于： 产品组成及特殊说明：主要由PIPES、氯化镁、EGTA、双蒸水等组成,用氢氧化钾调PH值至6.5。 "产品名称：BRB80溶液(5×,pH6.8)，
吖啶橙(AO)荧光染色试剂盒(两步法)
醋酸洋红染色液
醋酸洋红染色液
肥大细胞染色液
甲苯胺蓝染色液(0.1%）磷酸盐法)
氨苄青霉素溶液(Ampicillin）50mg/ml)
氨苄青霉素溶液(Ampicillin）100mg/ml)
羧甲基纤维素溶液(CMC）4%)
细胞冻存液(通用型)
细胞冻存液(1640)
Tris-马来酸溶液(50mmol/L）pH6.4)
巴比妥缓冲液(pH7.4)
改良Barth溶液(含钙)
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染色液相关产品信息：
吖啶橙染色溶酶体原理
吖啶橙（Acridine Orange）是一种荧光染料，常用于细胞和组织的染色。
它可以与DNA和RNA结合，并发出绿色和橙色的荧光信号。
溶酶体是细胞内的一种细胞器，主要参与细胞内物质的降解和消化。
吖啶橙染色溶酶体的原理是，吖啶橙可以穿过细胞膜进入细胞内，并与溶酶体内的DNA结合。
在酸性环境下，吖啶橙与DNA结合的荧光信号会发生变化。
在弱酸性条件下，吖啶橙发出绿色荧光；而在强酸性条件下，吖啶橙发出橙色荧光。
通过观察细胞或组织中溶酶体的荧光颜色，可以了解溶酶体的酸性程度和功能状态。
正常情况下，溶酶体处于弱酸性状态，吖啶橙发出绿色荧光；而当溶酶体功能异常或酸性增加时，吖啶橙发出橙色荧光。
这种染色方法可以用于研究溶酶体相关的疾病，如溶酶体贮积病和溶酶体功能障碍等。
需要注意的是，吖啶橙染色溶酶体的原理是基于荧光信号的变化，因此在观察时需要使用荧光显微镜或其他荧光检测设备。
吖啶橙染色检测
吖啶橙染色试剂盒产品组成：产品编号BB-4138规格100assaysAO染色液500ul试剂B 10ml说明书 1产品简介：吖啶橙（Acridine Orange，AO）为一种荧光染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。
其激发波长为488nm，吸收波长为515nm。
它与细胞中DNA 和RNA结合量存在差别，复合物可发出不同颜色的荧光，红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。
因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
使用方法：1、染色缓冲液的配制：根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。
取100μL试剂B加900μL无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。
2、收集样本细胞，细胞数量在10X105个以内。
3、用PBS洗涤细胞两次。
4、用500μL-1ml 染色缓冲液将细胞重悬，使细胞浓度约106个/ml。
5、取95ul细胞悬液，加入5ul AO染色液。
6、轻轻混匀后4℃避光孵育10-15分钟。
7、滴加至载玻片上，用盖玻片封片。
8、荧光显微镜检测结果。
最大激发波长为488nm。
结果分析 ：在荧光显微镜下，选用488nm激发光镜检：AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色。
当细胞凋亡时，染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒或黄绿色碎片。
相关产品：产品 产品号 产品 产品号 Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒 BB-4101 细胞周期检测试剂盒 BB-4104 Annexin V-EGFP/PI凋亡试剂盒 BB-4102 JC-1线粒体膜电位试剂盒 BB-4105 MTT细胞增殖及毒性检测试剂盒 BB-4201 Caspase 3 活性检测试剂盒 BB-4106 CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒 BB-4202 Caspase 8 活性检测试剂盒 BB-4107 WST-1细胞增殖毒性检测试剂盒 BB-4203 Caspase 9 活性检测试剂盒 BB-4108 MTS细胞增殖与毒性检测试剂盒 BB-4204 Caspase 10 活性检测试剂盒 BB-4112 Hoechst33342/PI双染试剂盒 BB-4131 细胞凋亡形态学检测试剂盒 BB-4123 DAPI染色试剂盒 BB-4133 Rhodamine 123染色试剂盒 BB-4137 细胞存活率检测试剂盒 BB-4122 AO/EB双染试剂盒 BB-4132。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙是一种有机化合物，化学式为C17H19N3，是一种荧光色素，主要用作荧光指示剂，可发出不同颜色的荧光。
其染色原理主要基于它能够与细胞中的DNA和RNA结合，并且具有膜通透性，能够透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。
在应用方面，吖啶橙可以用于检测凋亡细胞。
在凋亡过程中，染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体，使得吖啶橙能够染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒。
此外，吖啶橙还可以用于检测坏死细胞，因为坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
此外，吖啶橙还可以用作移码突变的诱变剂。
在DNA复制过程中，吖啶橙能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，导致DNA链增加或缺失一个碱基，从而造成移码突变。
需要注意的是，虽然吖啶橙是一种非常有用的荧光指示剂和细胞染色剂，但在使用过程中也需要遵守相应的安全操作规范，避免直接接触皮肤和眼睛，并确保在通风良好的环境中使用。
CRISPR
doi:10.3971/j.issn.1000-8578.2023.23.0611CRISPR/Cas9介导的KIFC 1基因敲除对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响范晓静1,2，魏雅岚2,3，叶洲杰2,3，朱丽萍2,3，王心睿1,2,3CRISPR/Cas9-mediated Knockout of KIFC 1 Inhibits Proliferation and In-duces Apoptosis of Cervical Cancer CellsFAN Xiaojing 1,2, WEI Yalan 2,3, YE Zhoujie 2,3, ZHU Liping 2,3, WANG Xinrui 1,2,31. Medical Research Center, Fu jian Children ’s Hospital (Fu jian Branch of Shanghai Children ’s Medical Center), Fuzhou 350011, China;2. NHC Key Laboratory of Technical Evaluation of Fertility Regulation for Non-human Primate (Fujian Maternity and Child Health Hospital), Fuzhou 350013, China;3. Medical Research Center, Fujian Maternity and Child Health Hos-pital, Fuzhou 350001, ChinaCorrespondingAuthor:WANGXinrui,E-mail:*****************.cnAbstract: Objective To investigate the functions of the KIFC 1 gene in tumor cells and its effect on the proliferation of cervical cancer cells. Methods We designed sgRNAs targeting the KIFC 1 gene and constructed a recombinant plasmid based on the pSpCas9 (BB)-2A-GFP vector, which was co-transfected into HeLa cells. We screened monoclonal knockout cell lines through flow cytometry sorting, limited dilution inoculation of cells, and sequencing. RT-qPCR, Western blot, and immunofluorescence were used to detect the transcription and protein expression levels of KIFC 1 in knockout cells. Cell phenotypes such as nucleus and microtubule cytoskeleton were observed using phase-contrast microscopy and fluorescence confocal microscopy. Cell proliferation, cell cycle, and apoptosis were analyzed by growth curve plotting, EdU labeling, and acridine orange staining. Results The deletion of the KIFC 1 gene resulted in the abnormal phenotypes of HeLa cells, with increased numbers of multinuclei, micronucleus, and disordered microtubules. The cell cycle was disrupted, accompanied with a significant increase in the ratio of late apoptotic cells and a decrease in cell proliferation (all P <0.05). Conclusion KIFC 1 gene deletion affects the assembly of microtubules and cell division in HeLa cells, leading to abnormal nuclear morphology, chromatin elimination, cell cycle arrest, and increased cell apoptosis.Key words: CRISPR/Cas9; KIFC 1; Cervical neoplasms; HeLa cells; Cell apoptosis; Cell division Funding: National Natural Science Foundation of China (No. 82101678); Joint Funds for the Innovation of Science and Technology, Fujian Province, China (No. 2021Y9160); Science and Technology Program of Fujian Health Commission (No. 2020QNA018); Natural Science Foundation of Fujian Province (No. 2020J05278) Competing interests: The authors declare that they have no competing interests.摘 要：目的 探讨KIFC 1基因在宫颈癌细胞中的功能及对宫颈癌HeLa 细胞增殖的影响。
ABTS试剂
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供货能力：现货 作为实验用品，供研究用，不能直接用于人体。
染色液相关产品信息：
G418溶液(geneticin）20mg/ml)
氨苄青霉素溶液(Ampicillin）50mg/ml)
氨苄青霉素溶液(Ampicillin）100mg/ml)
羧甲基纤维素溶液(CMC）4%)
细胞冻存液(通用型)
细胞冻存液(1640)
Tris-马来酸溶液(50mmol/L）pH6.4)
巴比妥缓冲液(pH7.4)
改良Barth溶液(含钙)
氯化钾-EDTA溶液(0.15mol/L)
阿氏液(2×Alsever液)
STM溶液(0.25M）pH7.4)
蔗糖-CaCl2溶液(0.25M:3mM)
蔗糖-CaCl2溶液(1M:1mM)
碘化丙啶PI溶液(20ug/ml）含RNase)
碘化丙啶PI溶液(50ug/ml)
吖啶橙荧光染色液(AO储存液）1mg/ml)
吖啶橙(AO)荧光染色试剂盒(两步法)
醋酸洋红染色液
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色是一种常用于核酸和蛋白质检测的荧光染料，其原理基于荧光共振能量转移（FRET）和DNA或蛋白质的特定
亲和性。
在实验中，通常将吖啶橙与目标分子（如DNA或蛋
白质）结合，通过观察荧光信号的强度和变化来进行检测。
吖啶橙具有两个荧光基团：供体荧光基团（通常为吖啶基团）和受体荧光基团（通常为橙色基团）。
当吖啶橙与目标分子结合时，两个基团之间的距离和相对位置可能会发生改变。
如果供体荧光基团与受体荧光基团的距离在合适的范围内，并且相对位置适当，FRET就会发生。
在FRET过程中，供体荧光基团受到激发光刺激并产生激发态，在受体荧光基团的作用下，供体荧光信号以非辐射方式传递给受体荧光基团。
作为结果，亮一些的橙色荧光发生。
通过观察橙色荧光信号的强度和变化，可以确定目标分子的存在和特定的相互作用。
吖啶橙染色的原理基于荧光共振能量转移和目标分子的亲和性，是一种有效的分析方法。
它常用于实验室研究、生物学检测和医学诊断等领域，具有高灵敏度和广泛的应用前景。
自固化磷酸钙骨水泥的制备及其性能评估
自固化磷酸钙骨水泥的制备及其性能评估王剑龙;何由;程哲;郑治;朱凯迪【摘要】背景:前期研究发现,乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)可改善磷酸钙骨水泥的抗压强度与降解性能.目的:在前期研究的基础上制备具有更好力学性能、生物相容性及降解性的自固化磷酸钙骨水泥.方法:采用液相沉淀法制备乳酸-羟基乙酸共聚物/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥,使复合骨水泥中β-磷酸三钙的含量分别为5%,10%,15%,20%,25%,30%,检测复合骨水泥及磷酸钙骨水泥的凝固时间、抗压强度、弹性模量及降解性能,筛选最佳β-磷酸三钙含量,进行细胞培养实验.分别以磷酸钙骨水泥浸提液(对照组)、PLGA/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥浸提液(实验组)、含有体积分数 10%胎牛血清及 1%青霉素-链霉素双抗的α-MEM培养基(阴性对照组)、含体积分数6.4%苯酚的液体(阳性对照组)培养MC3T3-E1细胞,培养1,3,5 d, MTT 法检测细胞增殖,同时观察细胞形态变化;培养1,3 d,检测培养液中乳酸脱氢酶活性.在PLGA/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥与磷酸钙骨水泥表面接种MC3T3-E1细胞,3 d后进行扫描电镜观察.结果与结论:①随着β-磷酸三钙含量的增加,复合骨水泥的初凝时间、终凝时间均有所增加,与磷酸钙骨水泥初凝时间、终凝时间比较无差异(P ＞ 0.05);②复合骨水泥的抗压强度及弹性模量均高于磷酸钙骨水泥,其中以β-磷酸三钙含量为 20%的复合骨水泥抗压强度最高,弹性模量也较好,因此实验选择β-磷酸三钙含量为 20%的PLGA/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥进行细胞实验;复合骨水泥的降解性能优于磷酸钙骨水泥;③随着培养时间的延长,实验组细胞吸光度、乳酸脱氢酶活性逐渐升高,不同时间点的吸光度值、乳酸脱氢酶活性与阴性对照组比较均无差异;实验组细胞生长良好;④在PLGA/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥表面的MC3T3-E1细胞生长正常,能充分伸展,在材料表面伸出伪足,能够与材料紧密贴附;⑤结果表明,含20%β-磷酸三钙的PLGA/β-磷酸三钙/磷酸钙骨水泥复合材料具有较普通磷酸钙骨水泥更佳的抗压强度、弹性模量及降解性能,且细胞相容性好,无明显细胞毒性.%BACKGROUND: Preliminary studies have found that poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) can improve the compressive strength and degradability of calcium phosphate cement. OBJECTIVE: To prepare a self-setting calcium phosphate cement which has better mechanical properties, biocompatibility and degradability on the basis of the previous findings. METHODS: Beta-tricalcium phosphate (β-TCP), pure calcium phosphate cement (CPC) and PLGA powder were mixed at different mixing ratios for preparation of PLGA/β-TCP/CPC. Setting time, compressive strength, elastic modulus and degradation properties of the composite bone cement were evaluated to screen the optimal level o f β-TCP. MC3T3-E1 cells were cultured in CPC extract (control), PLGA/β-TCP/CPC extract (experimental), α-MEM containing 10% fetal bovine serum and 1% penicillin-streptomycin double antibody (negative control), and 6.4% phenol liquid (positive control). MTT method was used to detect cell proliferation at 1, 3, 5 days after culture, and lactate dehydrogenase activity in culture media was detected at 1 and 3 days after culture.MC3T3-E1 cells were seeded on the surface of PLGA/β-TCP/CPC and pure CPC respectively, and were then observed by scanning electron microscopy after 3 days. RESULTS AND CONCLUSION: Initial setting time and final setting time among of the composite bone cement were increased with the increasing of β-TCP content, but had no significant difference from those of the CPC (P ＞ 0.05). The compressive strength and elastic modulus of the composite bone cement were higher than those ofthe CPC, and moreover, the composite bone cement with 20% β-TCP exhibited the highest compressive strength and higher elastic modulus as compared with the other groups. Therefore, PLGA/20% β-TCP/CPC was selected in the cell test. Moreover, the degradation properties of the composite bone cement were also better than those of the CPC. (3) With the growth of culture time, cell absorbance value and lactate dehydrogenase activity were gradually increased in the experimental group, and no difference existed between the experimental group and the negative control group. The cells in the experimental group also grew well.(4) MC3T3-E1 cells grew well and fully extended on the surface of PLGA/β-TCP/CPC, and cell pseudopodia on the material surface were tightly adhered to the material. To conclude, PLGA/20% β-TCP/CPC has better compressive strength, elastic modulus, degradation properties and cytocompatibility relative to the CPC, and moreover, the composite bone cement has no obvious cytotoxicity.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)018【总页数】7页(P2800-2806)【关键词】磷酸钙骨水泥;β-磷酸三钙;PLGA;生物材料;骨科材料;性能研究;国家自然科学基金【作者】王剑龙;何由;程哲;郑治;朱凯迪【作者单位】中南大学湘雅三医院骨科,湖南省长沙市 410000;中南大学湘雅医学院,湖南省长沙市 410000;中南大学湘雅医学院,湖南省长沙市 410000;中南大学湘雅三医院骨科,湖南省长沙市 410000;湖南航天医院,湖南省长沙市 410000【正文语种】中文【中图分类】R3180 引言 Introduction在临床工作中上，因为感染、创伤及病理性骨折等各种原因导致的骨缺损及骨不连日渐增多，临床处理上，特别是大面积的骨缺损修复尤为困难，临床上通常需要骨移植来治疗[1-4]。
斑马鱼胚胎吖啶橙
斑马鱼胚胎吖啶橙（Acridine Orange，AO）染色（from 黄春筱师姐）：
1.原理：
吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一种核酸选择性染料，它能够掺入DNA分子或者与RNA分子通过静电吸引作用相结合。
掺入了AO染料的DNA分子在525 nm的紫外光照射下，能够激发出绿色荧光。
利用这一原理，AO染料被广泛地用于细胞凋亡的检测。
我们实验中，利用AO染料分别处理24 hpf、48 hpf、72 hpf和96 hpf斑马鱼胚胎，检测注射miR-462/731 Morpholinos的胚胎（MO组）、共注射miR-462/731 Mopholinos和Duplex 的胚胎（挽救组）以及Uninjected Control的胚胎（对照组）的ICM区域（24 hpf）、AGM区域（48hpf）和CHT区域（72hpf-96hpf）的细胞凋亡情况。
2.操作步骤：
2.1 试剂配制：
1)AO染液工作液：
AO染液工作液浓度为5 μg/ml；
首先配制AO贮存液浓度为5 mg/ml，使用时1:1000稀释到工作浓度。
2.2 染色步骤：
1)将斑马鱼胚胎（24hpf，48 hpf，72 hpf，96 hpf）手动剥除卵膜，并用超纯水清洗2次。
2)将斑马鱼胚胎转移到含有5 μg/ml AO染料的培养皿中，28.5°C培养15-30 min（避光）。
3)用新鲜的暴气超纯水（超纯水在28.5°C培养箱中放置一会）替换AO染液，摇床轻摇10 min洗涤胚胎，重复2次。
4)胚胎用0.02% MS-222麻醉后，在荧光显微镜下观察、拍照。
疟疾诊断原则
疟疾诊断原则根据疟区住宿史，发病时有定期发冷发热出汗等临床症状，脾肿大等体征，以及病原学检查，血清免疫学检查等结果，予以诊断。
诊断标准1．曾于疟疾传播季节在疟疾流行区住宿，或有输血史。
2．间歇性定时发作，每天、隔天或隔两天发作一次，发作时有发冷、发热、出汗等临床症状。
发作多次可出现脾肿大和贫血。
重症病例出现昏迷等症状（详见重症疟疾）。
3．用抗疟药作假定性治疗，3天内症状得到控制者。
4．间接荧光抗体实验或酶联免疫吸附试验抗体阳性。
5．血涂片查见疟原虫。
其种类有间日疟原虫、恶性疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫。
疑似病例：具备1与2。
临床诊断：疑似病例加3或4。
确诊病例：疑似病例加5。
按查见的疟原虫种类，分为间日疟、恶性疟、三日疟和卵形疟。
按照以上标准，只有血检查见疟原虫，在诊断判定上才能写为确诊疟疾，不然，只能写为疑似疟疾或临床诊断疟疾。
诊断方法1．血涂片检查吉氏液染色--光学显微镜（油镜）检查：同时涂制薄血膜和圆形厚血膜，薄血膜须用甲醇固定，用吉氏染色液（Giemsa stain）进行染色。
吉氏染液用pH7.0-7.2的水配成3%的稀释液，可将血片插入染色缸内染色，或用滴管将稀释液滴在厚、薄血膜上，染色30min，若需快速染色，可在2ml水中加吉氏染液3滴，染色6min 。
对临床诊断为脑型疟者，宜用快速染色法，以便能尽快获得确诊依据。
现症患者至少检查100个厚血膜视野，带虫者应查完整个厚血膜，未发现疟原虫才判为阴性。
薄血膜可用于原虫形态鉴定。
以薄血膜中平均每100个红细胞中的原虫数，或厚血膜中平均每100个白细胞范围内的原虫数，推算每微升血中的原虫密度。
染色血片中的原虫核呈红色，胞浆呈兰色。
除环状体外，其他各期均可查见褐色的疟色素。
除恶性疟病例外，均可查见各期疟原虫。
一般恶性疟病例，仅查见环状体，或可见配子体。
但脑型疟病例，不仅原虫密度高，查见的环状体比一般的粗大，而且可查见大滋养体和裂殖体，疟色素呈黑褐色，这些特点对明确诊断很有帮助。
吖啶橙荧光染色原理
吖啶橙荧光染色原理吖啶橙荧光染色原理一、前言吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，其原理基于吖啶橙能够与DNA结合形成复合物，并且在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射。
本文将详细介绍吖啶橙荧光染色的原理。
二、吖啶橙的结构和性质吖啶橙是一种双氮杂环化合物，其分子式为C17H19N4Cl。
它是一种黄色晶体，可以通过溶解在水中形成黄色溶液。
吖啶橙分子中含有两个氮原子和两个苯环，这些结构使得它具有与DNA结合的能力。
三、DNA与吖啶橙的相互作用DNA是由四种碱基组成的双链螺旋结构，其中腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）之间形成两个氢键，鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）之间形成三个氢键。
这些氢键使得DNA分子具有稳定的结构，并且能够与吖啶橙形成复合物。
当吖啶橙溶液与DNA接触时，它能够通过静电作用结合到DNA的磷酸基团上。
此外，吖啶橙的分子中含有苯环，这些苯环可以穿过DNA 的双链螺旋，与碱基形成π-π堆积作用。
这些相互作用使得吖啶橙能够与DNA形成稳定的复合物。
四、吖啶橙荧光发射原理在紫外线或蓝光的激发下，吖啶橙分子会从基态跃迁到第一激发态。
在回到基态时，它会通过荧光发射释放出能量。
这种荧光发射是一种特殊的电子跃迁过程，其波长通常在500-600nm之间。
由于DNA和吖啶橙形成了稳定的复合物，并且吖啶橙分子在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射，因此在细胞核染色中加入吖啶橙可以使得细胞核产生荧光信号。
五、吖啶橙荧光染色的实验步骤1. 取一定量的细胞样品，离心沉淀后用PBS洗涤。
2. 加入适量的吖啶橙溶液，静置15-30分钟。
3. 用PBS洗涤样品，去除未结合的吖啶橙。
4. 在荧光显微镜下观察细胞核荧光信号。
六、吖啶橙荧光染色的应用吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，它可以被广泛应用于生物学和医学研究中。
例如，在癌症诊断中可以利用吖啶橙染色技术对肿瘤组织进行检测；在细胞分裂和凋亡等过程中也可以利用吖啶橙技术进行观察和分析。
AOEB染色及观察结果
AO/EB染料: 精确称取AO(吖啶橙)、EB各1mg，分别溶于10ml pH7.2 PBS中使之配成100μg/ml的储备液，用前等量混合，备用。
AO/EB染色及观察结果：取已经培养好并加样孵育后的预观察细胞悬液100μl，加入AO/EB 染料4μl混匀，置1滴于载玻片，上覆盖玻片，荧光显微镜下观察结果并计数200个细胞统计结果。
凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。
非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。
二者形态迥然相异，很易判别。
在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状。
凋亡比例=(VA+NVA)/(VN+VA+NVA+NVN)*100%正常细胞(核染色质结构正常，胞膜完整，着均匀的绿色);早期凋亡细胞(核染亮绿色呈致密斑块或碎片状);晚期凋亡细胞(核染橘红色呈致密斑块或碎片状);坏死细胞(胞膜破损、核膜完整，染色质染均匀的红色)取AO(100 μg/ml)和EB(100 μg/ml)等体积混匀制成AO-EB荧光染液。
将培养细胞用PBS离心洗涤两次,稀释至106/ml,取1ml细胞悬液(106细胞)离心收集细胞,加入25 μl PBS重新悬浮细胞,与1 μl AO-EB荧光染液混合,取10 μl点片,荧光显微镜下观察、照像。
AO/EB染色液怎么配？吖啶橙和溴乙锭分别溶于PBS(PH7.2)，浓度为100μg/mL。
临用前，按1∶1混合即可。
吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定细胞凋亡（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）：（细胞爬片），在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片，接种细胞悬液，干预后，予95%乙醇固定15分钟，微干，然后准备荧光染色。
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吖啶橙荧光染色试剂盒
产品简介：
吖啶橙(Acridine Orange,AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA 、RNA ，属于异染性荧光染料。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。
因此AO 常用于细胞内DNA 和RNA 进行检测。
AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO 与DNA 的结合，其荧光发射峰为530nm ，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO 与单链核酸的磷酸根（带负电荷）产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO 与RNA 的结合，其荧光发射峰为640 nm ，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。
因此，吖啶橙嵌合到双链DNA 分子中显绿色，与DNA 单链或RNA 结合时发桔黄色或橙红色荧光。
Jimei 吖啶橙染色试剂盒（Acridine Orange Detection Kit ）主要由AO Stain 、AO Stain Buffer 组成，常用于细胞凋亡的检测。
染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙染色常与EB 染色合用双染， EB 只染死细胞使之产生桔黄荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
自备材料：
1、 荧光显微镜
2、 低速离心机
3、 PBS
4、 细胞计数板
5、 载玻片、盖玻片
操作步骤（仅供参考）：
（一） AO 单独染色
1、 收集细胞（采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞），用AO Stain Buffer （1×）清
洗细胞1次，加入适量的AO Stain Buffer （1×）重悬细胞，计数并调节细胞浓度至
106/ml 。
2、 取适量的细胞悬液和AO Stain ，按照细胞悬液和5μl AO Stain=19：1的比例混合，
轻轻混匀。
3、 室温避光染色15 min ，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。
4、 荧光显微镜下观察（激发滤光片波长488nm ，阻断滤光片波长515 nm ），计数并拍
照。
编号 名称 JC2264 100T
storage 试剂（A ）：AO Stain 500μl
4。
C 避光 试剂（B ）：AO Stain Buffer （10×） 10ml 4。
C 使用说明书
1份
染色结果： 正常细胞
细胞被均匀染成黄绿色荧光 凋亡细胞
染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒
（二） AO/EB 双染色
1、 收集细胞，用AO Stain Buffer （1×）清洗细胞1次，加入适量的AO Stain Buffer
（1×）重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml 。
2、 取适量的细胞悬液和AO Stain ，按照细胞悬液和5μl AO Stain=19：1的比例混合，
并加入适量EB 染色液，轻轻混匀。
如果采用荧光显微镜下观察，一般取95μl 细胞悬液和5μl AO Stain 混合即可。
3、 室温避光染色15 min ，滴加于载玻片上并加盖玻片。
4、 荧光显微镜滤光片515 nm 观察，计数并拍照。
染色结果： 正常细胞
均匀染成绿色荧光 坏死细胞
细胞桔黄色荧光 凋亡细胞 染色质浓缩，细胞核碎裂，被染成大小不一、致
密浓染的黄绿色颗粒或见胞质芽状突起。
注意事项：
1、 吖啶橙染色常与EB 染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。
2、 如有低温离心机进行离心效果更佳，同时应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
细胞凋亡率= 凋亡细胞 ×100% 细胞总数 细胞坏死率= 坏死细胞 ×100%
细胞总数。