丫啶橙荧光染色法在微核试验中的应用
细胞凋亡的形态学检测1
荧光显微镜下检测细胞凋亡作者：2010级生物技术许春燕摘要：细胞凋亡是生命科学目前的一个研究热点．检测细胞凋亡的方法和技术取得了很大的进步．从早期细胞内某些基因转录表达的变化、代谢生理的变化，到晚期细胞形态的确诊、细胞内代谢物质的转变，从定性、定量到原位定性定量等，都发展了相对成熟的检测技术．相比于其他检测方法，荧光染色法检测细胞凋亡具有经济、快速、敏感等特点。
关键词：细胞凋亡荧光显微镜观察法正文：下面是荧光显微镜下检测细胞凋亡的四种方法：1、吖啶橙染色法用吖啶橙溴化乙锭混合染色法。
吖啶橙对DNA有特异的亲和力。
结果判定。
荧光显微镜下，可见到活细胞核染色质呈现均匀分布的黄绿色荧光，胞质呈橘黄色或者橘红色荧光，出现凋亡细胞时，核染色质的黄绿色荧光浓聚在核膜内侧，凋亡细胞核的特征性形态可被清晰地辨认。
坏死细胞的细胞质内黄绿色或者橘黄色荧光减弱，有的甚至消失。
具体方法如下：（1）．制备活细胞悬液，浓度约为107/ml。
（2）．取95μl的细胞悬液，加5μl的吖啶橙贮存液混匀。
（3）．吸一滴混合液点洁净玻片上，直接用盖玻片封片。
（4）．荧光显微镜选用激发滤片BG 12或BV等，阻断滤片用515nm 或。
对体外培养的活细胞经荧光素处理后，可在荧光显微镜下直接观察细胞形态的改变．结果；用吖啶橙染色后正常细胞核DNA呈黄色或黄绿色的均匀荧光，细胞质和核仁的RNA呈桔黄或桔红色荧光；凋亡细胞的细胞核或细胞质内有致密浓染的黄绿色荧光，甚至有黄绿色碎片；坏死细胞的细胞质内的荧光较弱或无。
2、Hoechst33258染色法Hoechst33258能够穿过完整的细胞膜，所以可以用来染活细胞，在活细胞中DNA聚AT序列富集区域的小沟处与DNA结合。
在荧光显微镜紫外光激发时，Hoechst-DNA发出亮蓝色荧光。
具体方法如下：（1）．原代细胞培养，细胞学涂片或细胞甩片机制备的单细胞片。
（2）．细胞固定液4℃固定5min。
（3）．蒸馏水稍洗后，点加Hoechst33258染色液，10min。
吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染色法
吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染⾊法吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染⾊法吖啶橙《acridine oran。
AO)属于三环杂芳⾹类异嗜性阳离⼦荧光染料，主要以两种⽅式与核酸结合，⼀是嵌⼊核酸双链的碱基对之间；⼆是与单链核酸的磷酸发⽣静电相互作⽤。
当吖啶橙与DNA或RNA结合时，最⼤发射波长分别为525nm或650nm，产⽣绿⾊荧光或橙红⾊荧光，因此，吖啶橙是研究核酸的⼀种常⽤荧光组织化学染料。
下⾯介绍应⽤吖啶橙区分活细胞和原位组织细胞DNA和RNA荧光组织化学染⾊法。
1．溶液配制(1)吖啶橙浓缩液(4℃、避光，可保存数⽉)双蒸⽔ 50ml吖啶橙 50mg(2)甲液双蒸⽔ 200mlHCl 16mlNaCl 1．74gTriton X-100 0．2ml(3)⼄液0．2mol／LNa2HP04／0．1mol／L枸橼酸缓冲液(pH 6．0)双蒸⽔ 100mlNa2 HP04?12H20 4．51g枸橼酸(⽆⽔柠檬酸) 0．71g溶解后，依次加⼊以下试剂和吖啶橙浓缩液NaCl(0．15mol／L) 0．87gEDTA-Na(1mmol／1) 0．037g吖啶橙浓缩液 0．6ml加⼊吖啶橙浓缩液后，应尽早使⽤。
2．操作程序(1)取0．2ml含10％⼩⽜⾎清的细胞悬液，再与0．4ml冷“甲液”混合，振荡15秒；(2)加⼊l.2ml"⼄液”，充分混匀；(3)于10分钟内，荧光显微镜观察，激发波长为488nm。
结果：DNA为黄绿⾊荧光，⽽RNA为橘红⾊荧光。
如果同时进⾏DNA和RNA染⾊时，需⽤鳌合剂处理，使双链RNA变性，确保所有的RNA均为单链，⽽双链DNA不受影响，增加结果的可信性。
鳌合剂以⼄⼆胺四⼄酸(EDTA)为佳。
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吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙是一种双碱性染料，具有两个氨基和两个芳香环结构。
它可以与DNA
和RNA结合，通过静电作用和氢键作用，与核酸中的腺嘌呤和胞嘧啶基团结合，
从而实现对核酸的染色。
吖啶橙的结构中含有芳香环和氨基，使其具有较强的荧光性能，能够在紫外光下产生橙色荧光。
在细胞或组织染色实验中，吖啶橙可以通过渗透染色或者固定染色的方式，将
其加入到待染细胞或组织中，与核酸结合形成吖啶橙-核酸复合物。
当使用荧光显
微镜观察时，激发波长为紫外光，吖啶橙-核酸复合物会发出橙色荧光信号，从而
实现对核酸的观察和检测。
吖啶橙染色的原理基于其与核酸的结合特性，通过与核酸的特异性结合，实现
对核酸的染色和检测。
由于吖啶橙具有较强的荧光性能，能够产生明亮的橙色荧光信号，因此在细胞生物学和分子生物学研究中得到了广泛的应用。
吖啶橙染色原理的了解对于科研工作者在实验设计和数据解读中具有重要意义。
在细胞和组织的荧光染色实验中，科研人员需要根据样本的特点和实验要求，选择合适的染色方法和条件，合理设计实验方案，以确保获得准确可靠的实验结果。
总之，吖啶橙作为一种重要的荧光染料，在生物学和医学领域发挥着重要作用。
了解其染色原理，可以帮助科研人员更好地应用吖啶橙进行细胞和组织的荧光染色实验，为科研工作提供有力支持。
希望本文对吖啶橙染色原理有所帮助，同时也希望科研人员能够在实验中充分
发挥吖啶橙的优势，取得更多有意义的研究成果。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙是一种有机化合物，化学式为C17H19N3，是一种荧光色素，主要用作荧光指示剂，可发出不同颜色的荧光。
其染色原理主要基于它能够与细胞中的DNA和RNA结合，并且具有膜通透性，能够透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。
在应用方面，吖啶橙可以用于检测凋亡细胞。
在凋亡过程中，染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体，使得吖啶橙能够染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒。
此外，吖啶橙还可以用于检测坏死细胞，因为坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
此外，吖啶橙还可以用作移码突变的诱变剂。
在DNA复制过程中，吖啶橙能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，导致DNA链增加或缺失一个碱基，从而造成移码突变。
需要注意的是，虽然吖啶橙是一种非常有用的荧光指示剂和细胞染色剂，但在使用过程中也需要遵守相应的安全操作规范，避免直接接触皮肤和眼睛，并确保在通风良好的环境中使用。
2种染色方法在微核试验中的比较
浸于染色缸中， 染色 １ ｉ 后晾干。Ｐ Ｓ ０ ｎ ｍ Ｂ 液起到稀释的作用 ， 吉姆萨染液须现用现配 。 吖啶橙 荧光染 色法 ： 涂有 蜘蛛细胞 涂 片的载 玻片用 甲醇 固定 １ ｎ 待 甲醇 挥发 干净后 ， 将 ５ ｍｉ， 现配 １ ｍＬ 母 液加 １１ 磷 酸缓 冲液 （Ｈ＝４８ ９ ／５ Ｍ ｐ ．） 将 玻 片浸 于染 色缸 中 ， 色 １ ｎ 晾 干 。 ｍＬ， 染 ０ｍｉ， 吖啶橙 是一 种荧 光
２１ 对 照组 ２种染 色方 法 的比较 ．
图 １吉姆萨染色法观察对照组蜘蛛血细胞结构
１ 实验方 法 ． ２
ｌ ． 单 细胞悬 液 的制备 －１ ２
将活体蜘蛛用 ７％的酒精 冲洗 ３ ， ５ 次 再用不锈钢剪刀将其剪碎 ， １０ 加 ０ Ｌ生理盐水到玻璃匀浆器 研磨并过 ２ ０目筛得单细胞悬液 ， ０ 用苔盼蓝排斥法镜检细胞存活率达 ９ ％以上。 ５
１２ 阿维 菌素致 Ｄ ．． ２ ＮＡ断裂 作用 的研 究
通迅作者（ ｏｒｓｏ ｄａｔｅ）Ｅ ｍａ ：ｘｕｉ ＠１ ６ ｏ Ｃ ｒ ｐ ｎ ｈ ｒ， — ｉ ｓａｌ ｃ ２ ． ｍ ｅ ｕ ｌ ｓ ｔ 收稿 日期（ ｅｅ ｅ ） ｏ８０ ．８ Ｒ ｃｉ ｄ ： ０ ．８０ ｖ ２ 山西省青年基金 （０ ８２ ０ １ 、 ２ ０ ０ １４ ） 山西省科技攻关项 目（０ ８ ３ １２ ，０ ６３ ０ ８ 资助 ２０ ０ １０ ３ ２ ０ ０ １４ ）
吖 啶橙 （ ｃｉｉｅ ａｇ ， Ｏ） １ 荧 光 色 素 ， 检 测 激 发 滤 光 片 波 长 ４８ｎ 阻 断 滤 光 片 波 长 Ａ ｒ ｎ ｎｅＡ 是 种 ｄ Ｏｒ 其 ８ ｍ， ５５ｎ １ ｍ。它 与细 胞 中 Ｄ ＮＡ 和 Ｒ ＮＡ结 合量 存在 差别 ， 发 出不 同颜 色 的荧光 ， Ｄ 可 与 ＮＡ结合 量 少 发绿 色
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色是一种常用于核酸和蛋白质检测的荧光染料，其原理基于荧光共振能量转移（FRET）和DNA或蛋白质的特定
亲和性。
在实验中，通常将吖啶橙与目标分子（如DNA或蛋
白质）结合，通过观察荧光信号的强度和变化来进行检测。
吖啶橙具有两个荧光基团：供体荧光基团（通常为吖啶基团）和受体荧光基团（通常为橙色基团）。
当吖啶橙与目标分子结合时，两个基团之间的距离和相对位置可能会发生改变。
如果供体荧光基团与受体荧光基团的距离在合适的范围内，并且相对位置适当，FRET就会发生。
在FRET过程中，供体荧光基团受到激发光刺激并产生激发态，在受体荧光基团的作用下，供体荧光信号以非辐射方式传递给受体荧光基团。
作为结果，亮一些的橙色荧光发生。
通过观察橙色荧光信号的强度和变化，可以确定目标分子的存在和特定的相互作用。
吖啶橙染色的原理基于荧光共振能量转移和目标分子的亲和性，是一种有效的分析方法。
它常用于实验室研究、生物学检测和医学诊断等领域，具有高灵敏度和广泛的应用前景。
荧光染色检测细胞凋亡
荧光染色检测细胞凋亡1、吖啶橙AO/溴乙锭EB双染色吖啶橙（acridine orange，简称AO）：3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3 · HCl · ZnCl2, 分子量438.12g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。
它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。
因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞.它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间，这样在DNA复制过程中，会使DNA链增加或缺失一个碱基，造成移码突变。
吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。
吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡（acridineorange/ethidium bromide, AO/EB）悬浮细胞AO/EB双染步骤1.调整细胞密度为106/ml，将细胞种至6孔板，每孔2ml细胞；2.向每孔加入相应浓度药物，培养至不同时间点；3.1000转/min离心5min收集细胞，PBS洗涤1次；4.PBS重悬细胞，使悬浮细胞浓度达106/ml左右；5.取100μl受检细胞悬液，各加2μl AO和EB(AO/EB染料配制：AO、EB各1mg，分别溶于10ml pH7.2 PBS中，使之配成100μg/ml的储备液，4℃保存，用前等量混合)；6.取上述染色液一滴，滴在洁净玻片上，加盖玻片后立即置荧光显微镜下观察，计取5个视野，共100个细胞中凋亡细胞百分数。
流式细胞仪筛选环磷酰胺诱导骨髓嗜多染红细胞微核的技术方法
流式细胞仪筛选环磷酰胺诱导骨髓嗜多染红细胞微核的技术方法刘仕杰;方展强【摘要】Objective To discriminate whether chemical compounds are micronuclei-inducing by counting the ratio of bone marrow micronucleus polychromatic erythrocytes ( MNPCE) dyed with a single fluorescence reagent ( acriding organe, AO) by single-laser flow cytometry.Methods Treating male KM mice and SD rat with cyclophosphamide ( CP) respectively, and counting their frequencies of micronucleated polychromatic erythrocytes ( MNPCE) as well as frequencies of micronucleated normochromatic erythrocytes ( MNNCE ) in bone marrow by AO and a single_laser flow cytometer (FCM), comparing and analyzing the results from different methods.Results The results showed that, along with increasing dose of CP, the ratio of MNPCE also corresponding increase, suggesting significant quantative-efficiency correlation.MNPCE were also counted manually by fluorescence microscopy, and the results showed no significant difference with that by flow cytometry.Conclusions AO_FCM fully automated detection method for the detection of MNPCE and MNNCE in mice and rat bone marrow micronucleus rate is reliable.%目的：利用单一荧光试剂吖啶橙（ acridine orange， AO）和简单的单激光流式细胞仪（ FCM）计数骨髓嗜多染红细胞的微核率，达到了解化合物诱导微核作用的目的。
吖啶橙荧光染色原理
吖啶橙荧光染色原理吖啶橙荧光染色原理一、前言吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，其原理基于吖啶橙能够与DNA结合形成复合物，并且在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射。
本文将详细介绍吖啶橙荧光染色的原理。
二、吖啶橙的结构和性质吖啶橙是一种双氮杂环化合物，其分子式为C17H19N4Cl。
它是一种黄色晶体，可以通过溶解在水中形成黄色溶液。
吖啶橙分子中含有两个氮原子和两个苯环，这些结构使得它具有与DNA结合的能力。
三、DNA与吖啶橙的相互作用DNA是由四种碱基组成的双链螺旋结构，其中腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）之间形成两个氢键，鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）之间形成三个氢键。
这些氢键使得DNA分子具有稳定的结构，并且能够与吖啶橙形成复合物。
当吖啶橙溶液与DNA接触时，它能够通过静电作用结合到DNA的磷酸基团上。
此外，吖啶橙的分子中含有苯环，这些苯环可以穿过DNA 的双链螺旋，与碱基形成π-π堆积作用。
这些相互作用使得吖啶橙能够与DNA形成稳定的复合物。
四、吖啶橙荧光发射原理在紫外线或蓝光的激发下，吖啶橙分子会从基态跃迁到第一激发态。
在回到基态时，它会通过荧光发射释放出能量。
这种荧光发射是一种特殊的电子跃迁过程，其波长通常在500-600nm之间。
由于DNA和吖啶橙形成了稳定的复合物，并且吖啶橙分子在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射，因此在细胞核染色中加入吖啶橙可以使得细胞核产生荧光信号。
五、吖啶橙荧光染色的实验步骤1. 取一定量的细胞样品，离心沉淀后用PBS洗涤。
2. 加入适量的吖啶橙溶液，静置15-30分钟。
3. 用PBS洗涤样品，去除未结合的吖啶橙。
4. 在荧光显微镜下观察细胞核荧光信号。
六、吖啶橙荧光染色的应用吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，它可以被广泛应用于生物学和医学研究中。
例如，在癌症诊断中可以利用吖啶橙染色技术对肿瘤组织进行检测；在细胞分裂和凋亡等过程中也可以利用吖啶橙技术进行观察和分析。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理的核心是吖啶橙与细胞或组织中的核酸结合。
吖啶橙是一种双
碱基染料，它能够与DNA和RNA中的腺嘌呤发生特异性的结合，形成荧光复合物。
在细胞或组织染色实验中，通过将样本与含有吖啶橙的染色液接触，吖啶橙能够与细胞核中的DNA结合，或者与细胞质中的RNA结合，从而使得这些结构在
荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号。
通过观察这些荧光信号的强度、分布和形态，可以对细胞或组织的结构和功能进行研究和分析。
除了与核酸结合外，吖啶橙还可以与细胞膜中的脂质结合，或者与特定蛋白质
发生相互作用。
这些特异性的结合使得吖啶橙在细胞和组织染色实验中具有多样化的应用。
例如，可以利用吖啶橙染色来观察细胞膜的形态和分布，或者检测特定蛋白质的表达和定位。
这些信息对于研究细胞的生理功能和病理变化具有重要意义。
在实际的实验操作中，吖啶橙染色通常需要配合荧光显微镜或流式细胞仪等设
备来进行观察和分析。
荧光显微镜能够通过激发吖啶橙荧光复合物产生荧光信号，并通过特定的滤光片来捕获和记录这些信号，从而实现对细胞和组织的荧光成像。
而流式细胞仪则可以通过检测吖啶橙的荧光信号来实现对细胞的数量、大小和荧光强度等参数的快速测定和分析。
总的来说，吖啶橙染色原理是基于吖啶橙与细胞或组织中特定结构的特异性结
合而实现的。
通过这种染色方法，可以对细胞和组织的结构、功能和代谢进行研究和分析。
在生物医学研究领域中，吖啶橙染色已经成为一种常用的实验技术，为科学家们深入探索生命的奥秘提供了重要的工具和手段。
吖啶橙_罗丹明B荧光共振能量转移猝灭法测定砷
第26卷,第2期 光谱学与光谱分析Vol 126,No 12,pp306-3082006年2月 Spectro sco py and Spectr al AnalysisFebruary ,2006吖啶橙-罗丹明B 荧光共振能量转移猝灭法测定砷刘保生,高 静,刘智超,于丽娜,杨大成,杨更亮河北大学理化分析中心,河北省分析科学技术重点实验室,河北保定 071002摘 要 研究了利用吖啶橙(AO )-罗丹明B(R B)共振能量转移荧光猝灭法测定痕量砷的方法。
在K ex /K em =470/580nm,01016mo l #L -1H 2SO 4溶液中,十二烷基苯磺酸钠(DBS)存在下,吖啶橙-罗丹明B 能够发生有效的能量转移,使罗丹明B 的荧光强度大大增强;在酸性条件下,砷与钼酸铵生成砷钼杂多酸使能量转移体系罗丹明B 的荧光猝灭。
利用吖啶橙-罗丹明B 能量转移荧光猝灭法测定痕量砷,砷在0101~0125mg #L -1范围内与罗丹明B 荧光猝灭程度呈良好的线形关系,方法检出限为2156L g #L -1。
该方法用于茶叶中痕量砷的测定,相对标准偏差为0148%~0164%,回收率为98%~103%,结果满意。
主题词 吖啶橙;罗丹明B;荧光共振能量转移;猝灭法;茶叶中砷中图分类号:O 65713 文献标识码:A 文章编号:1000-0593(2006)02-0306-03收稿日期:2004-09-16,修订日期:2005-01-31基金项目:国家自然科学基金(20075005)资助项目作者简介:刘保生,1963年生,河北大学理化分析中心研究员引 言荧光共振能量转移指电子激发能在适当的能量给予体和能量接受体之间的传递。
荧光染料间的荧光共振能量转移,即能量接受体吸收能量给予体所发荧光,使能量接受体荧光增强的过程。
罗丹明是一类具有强荧光的碱性染料,但其最佳激发、最佳发射波长差都小于20nm,因此用作荧光分析时,为了减小散射光的影响,一般不选其最佳激发波长,造成方法灵敏度降低。
微核实验方法的比较研究
微核实验方法的比较研究摘要微核实验作为快速检测体内染色体畸变的方法,以其简便、迅速,敏感为优点广泛应用于遗传、食品,药物,环境等很多领域,为此,我们对微核实验染色方法、基本实验方法与自动化检测方法进行比较,以提供在不同实验条件和实验目的下应选用的方法。
关键词微核;染色方法;实验方法;比较研究1基本染色方法的比较1.1基本染色方法吉姆萨染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成。
与嗜酸性颗粒结合,染粉红色;与嗜碱性物质结合,染紫蓝色;中性物质,染淡紫色。
吖啶橙荧光染色法:荧光色素吖啶橙透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。
在荧光镜下吖啶橙使细胞核呈绿色或黄绿色荧光;凋亡细胞中,吖啶橙使凋亡小体呈黄绿色荧光;坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
1.2染色时间的比较染色时间对吉姆萨染色效果有影响,时间太短如染色5min～7min,整个细胞染成浅紫色,效果不明显,发生微核的细胞区分不明显;染色时间太长,则染色太深,会使整个细胞都成深紫色,观察不出细胞膜和细胞核的边界和细胞核分成的小核;染色10min效果较好,孙华明等在2个不同时间进行Giemsa染色,比较了不同时间染色对结果的影响,结果差异并不显著。
吖啶橙染色的荧光会在短时间内发生淬灭,淬灭会在短时间内对实验结果有一定影响,所以吴娣等实验观测时采用先在镜下对选定视野进行拍照,再在图像上进行细胞计数的方法,能够减少淬灭对结果造成的影响。
1.3染色方法改进比较胡冰冰等将丫啶橙显微镜法改进,在干净玻片上滴加AO染液10μL,取骨髓细胞悬液5 μL直接滴在染液内,混匀后盖片,在室温(11℃33℃)下可立即计数,效果较好。
王襄等Ⅲ通过人外周血淋巴细胞的毛细管法,用瑞氏和染色姬姆萨联合染色(姬姆萨1mL加蒸馏水20mL),瑞氏染色1min,姬姆萨染10min,效果较好。
姚沈明等改进传统的姬一瑞氏混合染色法,(按姬氏、瑞氏、蒸馏水1:3:10混合均匀)染色5min,镜下可见淋巴细胞浆染成淡天蓝色,胞核微核清晰可辨。
微核试验实验报告
一、实验背景微核试验是一种常用的遗传毒理学检测方法，用于评估化学物质、药物或其他环境因素对生物体的遗传毒性。
本实验采用小鼠骨髓细胞微核试验，旨在检测某化学物质对小鼠骨髓细胞的遗传毒性。
二、实验目的1. 观察某化学物质对小鼠骨髓细胞微核形成的影响。
2. 评估该化学物质的遗传毒性。
3. 探讨该化学物质对小鼠骨髓细胞DNA损伤的机制。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：清洁级雄性昆明小鼠，体重18-22g。
2. 实验试剂：某化学物质、生理盐水、小牛血清、RPMI-1640培养基、吖啶橙染液等。
3. 实验仪器：显微镜、细胞培养箱、细胞培养板、电子天平等。
四、实验方法1. 实验分组：将小鼠随机分为对照组和实验组，每组10只。
2. 给药：实验组小鼠按0.5ml/只的剂量给予某化学物质，对照组小鼠给予等体积的生理盐水。
3. 采样：给药后24小时，处死小鼠，取骨髓细胞。
4. 细胞培养：将骨髓细胞接种于细胞培养板，置于细胞培养箱中培养。
5. 染色：细胞培养至适宜时期，用吖啶橙染液染色。
6. 观察与计数：显微镜下观察骨髓细胞，记录微核细胞数。
7. 数据处理：采用SPSS软件进行统计学分析，比较各组间微核率差异。
五、实验结果1. 对照组小鼠骨髓细胞微核率为（5.6±1.2）%，实验组小鼠骨髓细胞微核率为（10.8±2.5）%。
2. 实验组小鼠骨髓细胞微核率显著高于对照组（P<0.05）。
六、实验结论1. 某化学物质对小鼠骨髓细胞具有遗传毒性。
2. 该化学物质可能导致小鼠骨髓细胞DNA损伤，进而引发微核形成。
七、实验讨论1. 微核试验是一种简单、快速、灵敏的遗传毒理学检测方法，可用于评估化学物质、药物等对生物体的遗传毒性。
2. 本实验结果表明，某化学物质对小鼠骨髓细胞具有遗传毒性，可能与DNA损伤有关。
3. 进一步研究应探讨该化学物质对小鼠骨髓细胞DNA损伤的机制，为该化学物质的安全性评价提供依据。
微核实验方法的比较研究
微核实验方法的比较研究作者：王宗霞刘菏月杨美霞查娜娜布其阿拉坦其其格来源：《科技传播》2010年第19期摘要微核实验作为快速检测体内染色体畸变的方法,以其简便、迅速,敏感为优点广泛应用于遗传、食品,药物,环境等很多领域,为此,我们对微核实验染色方法、基本实验方法与自动化检测方法进行比较,以提供在不同实验条件和实验目的下应选用的方法。
关键词微核;染色方法;实验方法;比较研究中图分类号Q93文献标识码A文章编号1674-6708(2010)28-0110-021基本染色方法的比较1.1基本染色方法吉姆萨染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成。
与嗜酸性颗粒结合,染粉红色;与嗜碱性物质结合,染紫蓝色;中性物质,染淡紫色。
吖啶橙荧光染色法:荧光色素吖啶橙透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。
在荧光镜下吖啶橙使细胞核呈绿色或黄绿色荧光;凋亡细胞中,吖啶橙使凋亡小体呈黄绿色荧光;坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
1.2染色时间的比较染色时间对吉姆萨染色效果有影响,时间太短如染色5min～7min,整个细胞染成浅紫色,效果不明显,发生微核的细胞区分不明显;染色时间太长,则染色太深,会使整个细胞都成深紫色,观察不出细胞膜和细胞核的边界和细胞核分成的小核;染色10min效果较好,孙华明等在2个不同时间进行Giemsa染色,比较了不同时间染色对结果的影响,结果差异并不显著。
吖啶橙染色的荧光会在短时间内发生淬灭,淬灭会在短时间内对实验结果有一定影响,所以吴娣等实验观测时采用先在镜下对选定视野进行拍照,再在图像上进行细胞计数的方法,能够减少淬灭对结果造成的影响。
1.3染色方法改进比较胡冰冰等将丫啶橙显微镜法改进,在干净玻片上滴加AO染液10μL,取骨髓细胞悬液5 μL直接滴在染液内,混匀后盖片,在室温(11℃33℃)下可立即计数,效果较好。
王襄等Ⅲ通过人外周血淋巴细胞的毛细管法,用瑞氏和染色姬姆萨联合染色(姬姆萨1mL加蒸馏水20mL),瑞氏染色1min,姬姆萨染10min,效果较好。
微核实验方法的比较研究
微核实验方法的比较研究摘要微核实验作为快速检测体内染色体畸变的方法,以其简便、迅速,敏感为优点广泛应用于遗传、食品,药物,环境等很多领域,为此,我们对微核实验染色方法、基本实验方法与自动化检测方法进行比较,以提供在不同实验条件和实验目的下应选用的方法。
关键词微核;染色方法;实验方法;比较研究1基本染色方法的比较1.1基本染色方法吉姆萨染色法:吉姆萨染液由天青,伊红组成。
与嗜酸性颗粒结合,染粉红色;与嗜碱性物质结合,染紫蓝色;中性物质,染淡紫色。
吖啶橙荧光染色法:荧光色素吖啶橙透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。
在荧光镜下吖啶橙使细胞核呈绿色或黄绿色荧光;凋亡细胞中,吖啶橙使凋亡小体呈黄绿色荧光;坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
1.2染色时间的比较染色时间对吉姆萨染色效果有影响,时间太短如染色5min～7min,整个细胞染成浅紫色,效果不明显,发生微核的细胞区分不明显;染色时间太长,则染色太深,会使整个细胞都成深紫色,观察不出细胞膜和细胞核的边界和细胞核分成的小核;染色10min效果较好,孙华明等在2个不同时间进行Giemsa染色,比较了不同时间染色对结果的影响,结果差异并不显著。
吖啶橙染色的荧光会在短时间内发生淬灭,淬灭会在短时间内对实验结果有一定影响,所以吴娣等实验观测时采用先在镜下对选定视野进行拍照,再在图像上进行细胞计数的方法,能够减少淬灭对结果造成的影响。
1.3染色方法改进比较胡冰冰等将丫啶橙显微镜法改进,在干净玻片上滴加AO染液10μL,取骨髓细胞悬液5 μL直接滴在染液内,混匀后盖片,在室温(11℃33℃)下可立即计数,效果较好。
王襄等Ⅲ通过人外周血淋巴细胞的毛细管法,用瑞氏和染色姬姆萨联合染色(姬姆萨1mL加蒸馏水20mL),瑞氏染色1min,姬姆萨染10min,效果较好。
姚沈明等改进传统的姬一瑞氏混合染色法,(按姬氏、瑞氏、蒸馏水1:3:10混合均匀)染色5min,镜下可见淋巴细胞浆染成淡天蓝色,胞核微核清晰可辨。
用萤光显微镜和吖啶橙染色的方法检查疟原虫
用萤光显微镜和吖啶橙染色的方法检查疟原虫
丁绍铎
【期刊名称】《国际医学寄生虫病杂志》
【年(卷),期】1974(000)006
【摘要】当厚滴血膜中原虫较少时,很需要有一种比罗氏染色法更为敏感的检查疟原虫的方法。
吖啶橙染色法是比较有希望的方法。
本法染色手续简单、快速,一般实验室工作人员都可以操作。
但是,关于用这种方法染色效果的报道,并不一致。
一般认为,当疟原虫的虫体较大时,吖啶橙染色的效果较好,观察幼稚滋养体时则不如常规罗氏染色法,特别是当原虫密度低时,效果更差。
【总页数】2页(P269-270)
【作者】丁绍铎
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.脱落细胞吖啶橙染色荧光显微镜检查在肺癌... [J], 陈天铎;段国兰
2.新型荧光光源吖啶橙梯度染色法检测伯氏疟原虫的研究 [J], 姜素华;刘佩娜;付云朝;廖琳;刘庆
3.吖啶橙与瑞氏染色法检测伯氏疟原虫的初步研究 [J], 姜素华;刘佩娜;付云朝;廖琳;唐慧;刘振忠
4.吖啶橙染色法检测间日疟原虫的现场应用 [J], 朱声华;刘庆;王兴振;雷天;李荣和
5.吖啶橙染色方法检查线索细胞 [J], 李沂轩;纪岩文
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精子受精力的一种简易评价方法——吖啶橙荧光染色法
精子受精力的一种简易评价方法——吖啶橙荧光染色法庄恭南;黄宇烽;颜建华;武建国
【期刊名称】《中国男科学杂志》
【年(卷),期】1989(000)004
【摘要】某些精子数量、活力、活动率均正常的男性也可发生不育,其原因与精液中所含有受精力的精子数量不足有关。
精子受精力决定于其头部DNA的结构与含量。
正常有受精力的精子DNA呈双链结构,与啶橙(acridine orange)结合发出绿色荧光。
据此,我们建立了啶橙荧光染色法,检测精子的受精力。
现将方法与结果报告如下。
一、检测对象:生育组为妻子正在怀孕6个月的男性;不孕组为性生活正常,婚后2年以上不育(排除女方原因)
【总页数】1页(P241-241)
【作者】庄恭南;黄宇烽;颜建华;武建国
【作者单位】南京军区南京总医院临床免疫科;南京军区南京总医院临床免疫科【正文语种】中文
【中图分类】R697
【相关文献】
1.吖啶橙荧光染色法在消化系肿瘤诊断中的临床意义 [J], 黄玲莎;王英;刘立义;黄文成;陈桂言
2.吖啶橙荧光染色法在胃癌诊断中的临床意义 [J], 黄玲莎;王英;刘立义;黄文成;陈桂言
3.吖啶橙荧光染色法在循环肿瘤细胞筛查中的应用 [J], 刘敏;马富玲;韩荣;李美;刘
淑芬;张淑敏
4.精子染色质扩散实验及吖啶橙染色检测精子DNA完整性研究 [J], 房振亚;张美华;李安娜;邱毅;;;;
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（ 三）叮嚏橙荧光染色法影响因素的探讨
改变 ｐ 值可引起荧光色素光谱的变 化， Ｈ 并明显影响荧光色素吸收光能的能力和荧光效
日 本的 Ｈｙｈ （９１＇ ａｓ １８）， ａｉ ｔ首先将叮吃橙荧
光染色法应用微核试验。哺乳动物骨髓从原红
细抱发展到成熟红细胞经历了不同的阶段，其 但 无细胞核，二者因血色素含量等不同因而染 色不一，故容易区 分。微核试验的主要观察指 标是多色性红细胞中的微核。在 Ａ． Ｕ 染色中 多染红细胞染成紫红或桔红色， 微核呈绿色， 色
锭橙贮存液，放人 ４ ℃冰箱中备用。临用时 １
份贮存液加 １ 份 ｐ ． ５ Ｈ６８的磷酸缓冲液。染色 液按常规配制。
细胞 （ｌ ｃ ｏ ａｃ ｔｏｙｓ 红色或橙 ｐ ｙ ｒ ｔ ｅ ｈ ｃｅ ｏ ｈ ｍ ｉ ｒ ｒ ｔ ）呈 ｙ
色 但无 的 式色 胞（ ｒｏ ｒ ａ ｅ ， 核 正 红细 ｎｍｃｏ ｔ ｒ ｏ ｈｍ ｉ － ｃ
］二 １ ２ ・ ・ ２ ， ・ 一ｎ ・
复合染料中的嗜天青颗粒很难与微核相鉴别， 影响观察；浓度太低则需延长染色时间，或着 影响结果的判断。本文对来自同一小鼠的骨髓 色效果不佳。 温度对荧光效应亦有一定影响，
涂片进行了 ２种不同染色方法的对比研究，发 在恒温下迸行实验能获得稳定 的结 果。 如室 现在溶媒对照或给药的 阴 性微核 试验组，２ 温下，必需根据温度的改变，适 当调整染色时 ・
盐水
６０ ０ ０
８
ＰＣＦ
６０ ０ ０ １０ ６
６０ ００ １７ １ １ ５ ９．
６０ ００ ７６ １５ ．
６ Ｏ ００
ｊ
Ｍ Ｎ ＰＣＥ
人． Ｏ
％ ｏ Ｐ值
ＦＣ Ｅ Ｍ ＰＣ Ｅ Ｎ
２ ．７ ６６ ＜００ ．１ ６０ ００
１７ ４ ２ ５ ４． ＜ ０． ０１
１７ ．５
ｙ ｒ ｙｓ ｔ ｏ ｔ）不着色。Ｇｅ ｓ ｈ ｃｅ ｉ 。染色的骨髓涂片和 ｍ Ａ Ｏ 染色完全不同， ． 细胞核及微核呈青紫色，
微核呈圆形或卵圆形 ， 也有呈不规则形， 边 缘整齐平滑， 染色与主核结构完全一致， 存在于 胞浆中。微核直径 １ ｐ不等，一般不超过主 －３
丝裂霉素Ｃ ｉｍ ｃ Ｃ ，日 （ ｔ ｙｉ ） 本产， Ｍ ｏ ｎ 溶于 ｒ ｕ ） 瑞典产，混悬于玉米油中。 色经丙钠 ｉｍ ｄ （ｓｒ ｏｌａｓ， Ｉｃ ｍ ｇ ｃｉ 中国医学科学院药物研究所 ｏ ｏ ｙ ｔ）
细胞成份结合后，可以发射红、 黄、 、 橙、 绿 蓝各 色荧光〔 ， ， 。叮咤橙荧光染色对 Ｄ ＮＡ， Ｒ ＮＡ 和 酸性粘多糖染色的特异性问题，很多学者进行 了较深人的探讨。实验证明，经脱氧核糖核酸 酶处理的标本， 细胞核的黄一黄绿色荧光消失； 经核糖核酸酶处理的标本，细胞内的桔黄一桔 红色荧光消失。肥大细胞的红色荧光对两种酶 的处理无影响。荧光色素叮咙橙是一种良好的 细胞化学染料， ２种核酸有稳定的分色性能， 对
２种核酸含量的变化。在化学和辐射等诱变剂
作用下， 可引起 ＤＮＡ 双链的解开和大分子的
胞所含的铁离子有熄灭荧光的作用， 因此 Ａ Ｏ
染色不着色，如若观察正式性红细胞仍需进行 Ｇｅ ａ染色， ｉ ｍｓ 此外还需一定荧光设备，在普及 上有一定困难。
解聚， Ｎ 结构和含量的变化， Ｄ Ａ 可以从细胞的 形态和细胞化学等方面观察。 （ 二）ｏ咤橙荧光染色法在徽核试验 中的 ｆ 应用价值
率，所以荧光染色时必需选用各种荧光染料最
影响， 认为 ｐ Ｈ为 ６８ ．的磷酸缓冲液对叮陡橙荧 光色素是合适的， ｐ 高于 ７ｄ ．或低于 而 Ｈ ．－７ － ４
中多色性和正式性红细胞均为未成熟 红细胞， 适的 ｐ 值。我们摸索了各种 ｐ 对染色的 Ｈ Ｈ值
６ －６ 染色效果均不佳。 溶液中荧光的强度 ． ． ０ ４
（次 ） 锌 娜 狠
性致突／ 致癌剂特点。
２种不同染色方法均显示色轻丙钠对小鼠
骨髓细胞无明显作用，实验与对照组含微核的
多色性红细胞无明显差异’Ｐ ０ ５ ， （ ＞ ０） 色经丙 ．
钠微核试验结果为阴性。
从表 ２ 对比资料中发现，在玉米油对照组
中，Ｇｉ ｓ ｅ ａ染色法计数的微核率高于 Ａ． 染 ｍ Ｏ
核的 １５ ／， ／－１３ 以单个为多见，有时也见２ 个
或 ２个以上者。 ２种不同染色法所观察到的微 核在形态学上无明显差异。丝裂霉素 Ｃ和甲基
Ｈ ａ ｇ ｏ ｊｎ ａ． ＇ ｅ ｐ ｌ ａｉｎ Ａ ｒ ｕ ｎ Ｎｉｎｕ ｅ ｌ ｒ Ａ ｐｉ ｔ ｏ ｅｉ ｔ ： ｈ ｃ ｏ ｆ －
ｄｎ Ｏ ａｇ Ｆｕｒ ｃ ｔ ｉｉ ｉ Ｍｉｏ ｕｌ ｓ ｉ ｒ ｅ ｏｅ ｅ Ｓ ｎ ｇ ｅ ｎ ｌ ｓ ｎ ｔ ｎ ｎ ｃ ｎｃ ｕ ａ ｒ ｅ
工。 夕 １
１１ 。７
１． ３ ３
＜００ ．１
６０ ０ ０ ９２ １ ３ ５． ３
＜０ ０ ．１
６０ ０ ０ ５２ ８． ７ ６ ＜ ０． ０１ ４０ ００ １ ４ ３． ２５
＞０ ０ ．５
６０ ０ ０ １ ４ ２． ３
＞０ ０ ．５
６０ ００ １ ４ ２． ３ ＞ ０． ５ ０
＞ ０．５ ０
６０ ００ ９ １５ ． ＞ ０． ０５ ６ ００ ０
不 着色
橙 红色 荧 光 青紫 色
绿色 荧光 紫红 色
菊红 色
茉麟所诱发的微核在形态学上也无明显差异。 （ 二）三种化学药品微核试验的结果 丝裂霉素 Ｃ和 甲基茉脐对小鼠骨髓细胞有
明显诱变作用，诱发多色性红细胞中微核的增 加，且有明显的剂量效应关系（ ２ 表 ，图 １３０ －） Ａ Ｏ和 Ｇｅｓ ． ｉ ａ染色的结果是一致的， ｍ 符合阳
讨
论
（ 一）Ｐ吮橙荧光染色法的特异性 ｆ 叮绽橙是一种常用的荧光色素，它和不同
． ２８ 一
，一 ～ 一 ～
一决 ）铃 娜 拟 拦 坦 ～锌
（次
（ ｇｋ ） ｍ ／ｇ
图 ２ 两种 不 同 染色 方法 对 甲基节 阱 微 核 率的 影响 ・ 一 Ａ， 染 色 ０ － 一 Ｇｉｕａ 染 色 － ｅｓ ｒ
（ ｇｋ ） ｍ ／ｇ
图 ３ 两种不同染色方法对色经 丙钠微核率的影响
・ 一 Ａ． 染 色 ０ － 一 Ｇｉ ａ 染色 － ｅ ｍｓ
并与含有硫酸基的酸性粘多糖结合呈现红 色。 色中的假阳性确实是存在的。而叮ｐ橙荧光染
叮淀橙荧光染色法能反映出细胞的清晰结构和 色， 由于着色是特异的，因此避免了以上缺点。 但荧光染色也有它的局限性，由于正式性红细
遗传
１ Ｒ ＤＴ Ｓ ｅｉ ） （） ７ ｓ ８ １ Ｅ ＩＡ （ ｉ ｇ ８ ：２ 一ｉ １ ６ Ｆ Ｓｉ ｎ ４ ９
ｎ咤橙荧光染色法在微核试验中的应用 丫
黄念 君 陈 世明 应 平 贤
（ 卫住 部药品 生物 制 品检 定所 ， 京 ） 北
染色体或染色单体断裂后所遗留下来的断
酸缓冲液分色 １ 分钟。 荧光显微镜 （ －３ 日本
＋ ｎ谷Ｆ一 谷Ｆ （， 护２ ， 打 ｎ ； ， “
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Ｎｉｏ Ｂ 激发滤片和 ５５ 阻断滤片） ｋｎ Ｖ １． Ｗ 镜检，
片可通过细胞分裂在一定时期内保留于子细胞
中； 纺锤体细胞器功能失调也可形成断片； 这些 断片称为微核。小鼠体内的微核试验就是利用 微核来观察染色体畸变的另一种表现形式。由
激发光源为 Ｈ Ｏ ｆ瓦高 Ｂ １ｌ 压汞灯 （ ０ 西德奥斯
２
２２ ， ＝ ｎ一 Ｖ。 ｔ ｉ一
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（ 三）观察与判断 在油镜下， 每只动物计数一００ １ ０ 个多色性红 ， 细胞及其带微核的细胞数， 以千分率表示之。 最
后经统计 处理 ， 判断结 果。
于 Ｇｅ ｓ ｉ ａ染色法简单， ｍ 快速、经济、 因而被广
泛采用。 但 Ｇｅ ｓ ｉ ａ染色法特异性较差，非特 ｍ 异着色颗粒有时很难与微核相区别，影响结果 的判断 ，为此有必要建立一种更加特异的观察 方法。近年来荧光显微技术在细胞学、 免疫学 、 微生物学等多个领域中得到广泛应用，我们参 照有关文献〔 ４ ｙ １ ， 咤橙 （ ｃｄｎ Ｏ ａｇ）荧 －将ｐ Ａ ｒ ｉｅ ｎｅ ｉ ｒ 光染色法应用于微核试验 ，并获满意的结果。
Ｔ ｅｓ ｔ
本文 于 １ ８ 年 １月 ２ ９， ９日收 到。
２７
表 １ 不同染色方法对小鼠骨翻涂片的染色 结绷
有核 细 胞 染色 方法
核
Ａ ，？ （ Ｇ ｉｍ ｃ ｃ ａ
一 多性 染
浆 红 细胞
正式性 红
细 胞
Ｍｌ 内 胞
微
ＲＮ Ａ
核
绿 色荧光 紫 蓝色
橙红色荧光
不 同蓝色
紫红 色荧 光 灰 色
衰 ２ 不 同 染色 方法 对 徽核 试验 结果 的影 响 甲基羊 阱（ ／ ｇ 川９ ｋ ）
染 色方法
（ ／ｇ ｍｇｋ ）
图 １ ＭＭＣ 所诱 发的 微核 效应 曲线 （ Ｏ 染 色） Ａ．