吖啶橙荧光染色法
吖啶橙荧光染色法
吖啶橙荧光染色法【实验原理】吖啶橙(acridine orange, A0)是最经典的极灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光。
其激发峰为492nm，荧光发射峰为530nm (DNA )、640 ( RNA )，它与双链DNA的结合方式是嵌入双链之间，而与单链DNA和RNA则由静电吸引堆积在其磷酸根上。
在蓝光( 502nm) 激发下，细胞核发亮绿色荧光(约530nm)，核仁和胞质RNA发橘红色荧光(>580nm)。
吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而主要显示DNA、RNA两种核酸。
【实验用品】1、器材荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸。
2、试剂(1)0.1mol/l pH7.0 PBS 液A 液：NaH2PO4・H2O 2.76g，加蒸馏水至100ml;B 液：Na2HPO4 • 7H2O 5.36g，加蒸馏水至100ml;取A 液16.5ml + B 液33.5ml + NaCl 8.5g，用蒸馏水稀释至100ml。
(2)1%吖啶橙原液取0.1g吖啶橙加蒸馏水稀释至100ml (临用时配制0.01%吖啶橙染液：将1%吖啶橙原液用pH7.0 PBS溶液稀释10倍)。
3、材料口腔黏膜上皮细胞临时制片或人肝癌BEL-7402细胞爬片。
(1 )取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上。
(2)95%乙醇溶液固定5min。
(3)滴加0.01%吖啶橙染液5min。
(4)盖上盖玻片，吸水纸吸去盖玻片周围多余液体，镜下观察。
【结果与观察】荧光显微镜下(选用蓝色激发滤片)，可见含DNA的细胞核显示黄绿色荧光，含RNA的细胞质及核仁显示橘红色荧光【注意事项】(1 )制片后一定要晾干玻片，在进行后续步骤，否则会导致细胞脱落。
(2)每种荧光染料，均有自己的最适pH,此时荧光最强。
当pH改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的pH缓冲液中进行。
吖啶橙 溴化乙锭双荧光染色
吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色AO / EB原理与流程zhongyisheng:1、原理：吖啶橙(AO)能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。
溴乙锭(E仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。
凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。
非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。
二者形态迥然相异，很易判别。
在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状。
2、AO/EB染色及观察结果：取 20-100μl的1：100稀释的染色剂置于载玻片的贴壁细胞上室温下静置20min，PBS洗涤2-3遍，上覆盖玻片，荧光显微镜下观察结果并计数20-200个细胞。
ym1051:1、能否提供具体实验步骤?2、您在文中所说的"1：100稀释的染色剂"是怎样稀释的?如何在载玻片上种上贴壁细胞?zhongyisheng:1、用1mlEP管稀释时，先取微量的染色剂，然后再取稀释剂（如BSA）加入EP 管吹打即可。
2、消毒灭菌处理后的盖玻片平放入培养皿或中即可实验。
ym1051:我好像已明白具体过程了:首先要进行细胞爬片,然后将染色剂滴加在已爬有细胞的盖玻片上,温育后洗涤,再盖上盖玻片则可进行观察了.是这样吗?如果不经过爬片处理而将细胞进行消化,再将细胞和染色剂滴加在盖玻片上进行观察,行吗?zhongyisheng: 的确，不经过爬片而是将贴壁细胞消化下来一样可以进行进一步的实验。
这是悬浮细胞的典型方法。
当然，由于进行免疫组化染色进行的形态学检查经常考虑到细胞的原貌，在国际上比较通用，尤其是在进行动态检查时。
医琳师妹：我将我所作的方法与大家共享：吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定PC12细胞凋亡（acridine orange/ethidium bromide, AO/EB）：（1）细胞爬片：在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片，接种细胞悬液，干预后，予95%乙醇固定15分钟，微干，然后准备荧光染色。
丫啶橙荧光染色法在微核试验中的应用
（ 三）叮嚏橙荧光染色法影响因素的探讨
改变 ｐ 值可引起荧光色素光谱的变 化， Ｈ 并明显影响荧光色素吸收光能的能力和荧光效
日 本的 Ｈｙｈ （９１＇ ａｓ １８）， ａｉ ｔ首先将叮吃橙荧
光染色法应用微核试验。哺乳动物骨髓从原红
细抱发展到成熟红细胞经历了不同的阶段，其 但 无细胞核，二者因血色素含量等不同因而染 色不一，故容易区 分。微核试验的主要观察指 标是多色性红细胞中的微核。在 Ａ． Ｕ 染色中 多染红细胞染成紫红或桔红色， 微核呈绿色， 色
锭橙贮存液，放人 ４ ℃冰箱中备用。临用时 １
份贮存液加 １ 份 ｐ ． ５ Ｈ６８的磷酸缓冲液。染色 液按常规配制。
细胞 （ｌ ｃ ｏ ａｃ ｔｏｙｓ 红色或橙 ｐ ｙ ｒ ｔ ｅ ｈ ｃｅ ｏ ｈ ｍ ｉ ｒ ｒ ｔ ）呈 ｙ
色 但无 的 式色 胞（ ｒｏ ｒ ａ ｅ ， 核 正 红细 ｎｍｃｏ ｔ ｒ ｏ ｈｍ ｉ － ｃ
］二 １ ２ ・ ・ ２ ， ・ 一ｎ ・
复合染料中的嗜天青颗粒很难与微核相鉴别， 影响观察；浓度太低则需延长染色时间，或着 影响结果的判断。本文对来自同一小鼠的骨髓 色效果不佳。 温度对荧光效应亦有一定影响，
涂片进行了 ２种不同染色方法的对比研究，发 在恒温下迸行实验能获得稳定 的结 果。 如室 现在溶媒对照或给药的 阴 性微核 试验组，２ 温下，必需根据温度的改变，适 当调整染色时 ・
盐水
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精子受精力的一种简易评价方法——吖啶橙荧光染色法
精子受精力的一种简易评价方法——吖啶橙荧光染色法庄恭南;黄宇烽;颜建华;武建国
【期刊名称】《中国男科学杂志》
【年(卷),期】1989(000)004
【摘要】某些精子数量、活力、活动率均正常的男性也可发生不育,其原因与精液中所含有受精力的精子数量不足有关。
精子受精力决定于其头部DNA的结构与含量。
正常有受精力的精子DNA呈双链结构,与啶橙(acridine orange)结合发出绿色荧光。
据此,我们建立了啶橙荧光染色法,检测精子的受精力。
现将方法与结果报告如下。
一、检测对象:生育组为妻子正在怀孕6个月的男性;不孕组为性生活正常,婚后2年以上不育(排除女方原因)
【总页数】1页(P241-241)
【作者】庄恭南;黄宇烽;颜建华;武建国
【作者单位】南京军区南京总医院临床免疫科;南京军区南京总医院临床免疫科【正文语种】中文
【中图分类】R697
【相关文献】
1.吖啶橙荧光染色法在消化系肿瘤诊断中的临床意义 [J], 黄玲莎;王英;刘立义;黄文成;陈桂言
2.吖啶橙荧光染色法在胃癌诊断中的临床意义 [J], 黄玲莎;王英;刘立义;黄文成;陈桂言
3.吖啶橙荧光染色法在循环肿瘤细胞筛查中的应用 [J], 刘敏;马富玲;韩荣;李美;刘
淑芬;张淑敏
4.精子染色质扩散实验及吖啶橙染色检测精子DNA完整性研究 [J], 房振亚;张美华;李安娜;邱毅;;;;
5.猪精子顶体素活性与其它精子功能参数相结合才能精确预测精子受精力 [J], 太男;金一;单世梁
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吖啶橙染色溶酶体原理
吖啶橙（Acridine Orange）是一种荧光染料，常用于细胞和组织的染色。
它可以与DNA和RNA结合，并发出绿色和橙色的荧光信号。
溶酶体是细胞内的一种细胞器，主要参与细胞内物质的降解和消化。
吖啶橙染色溶酶体的原理是，吖啶橙可以穿过细胞膜进入细胞内，并与溶酶体内的DNA结合。
在酸性环境下，吖啶橙与DNA结合的荧光信号会发生变化。
在弱酸性条件下，吖啶橙发出绿色荧光；而在强酸性条件下，吖啶橙发出橙色荧光。
通过观察细胞或组织中溶酶体的荧光颜色，可以了解溶酶体的酸性程度和功能状态。
正常情况下，溶酶体处于弱酸性状态，吖啶橙发出绿色荧光；而当溶酶体功能异常或酸性增加时，吖啶橙发出橙色荧光。
这种染色方法可以用于研究溶酶体相关的疾病，如溶酶体贮积病和溶酶体功能障碍等。
需要注意的是，吖啶橙染色溶酶体的原理是基于荧光信号的变化，因此在观察时需要使用荧光显微镜或其他荧光检测设备。
吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染色法
吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染⾊法吖啶橙区分活细胞DNA和RNA的荧光组织化学染⾊法吖啶橙《acridine oran。
AO)属于三环杂芳⾹类异嗜性阳离⼦荧光染料，主要以两种⽅式与核酸结合，⼀是嵌⼊核酸双链的碱基对之间；⼆是与单链核酸的磷酸发⽣静电相互作⽤。
当吖啶橙与DNA或RNA结合时，最⼤发射波长分别为525nm或650nm，产⽣绿⾊荧光或橙红⾊荧光，因此，吖啶橙是研究核酸的⼀种常⽤荧光组织化学染料。
下⾯介绍应⽤吖啶橙区分活细胞和原位组织细胞DNA和RNA荧光组织化学染⾊法。
1．溶液配制(1)吖啶橙浓缩液(4℃、避光，可保存数⽉)双蒸⽔ 50ml吖啶橙 50mg(2)甲液双蒸⽔ 200mlHCl 16mlNaCl 1．74gTriton X-100 0．2ml(3)⼄液0．2mol／LNa2HP04／0．1mol／L枸橼酸缓冲液(pH 6．0)双蒸⽔ 100mlNa2 HP04?12H20 4．51g枸橼酸(⽆⽔柠檬酸) 0．71g溶解后，依次加⼊以下试剂和吖啶橙浓缩液NaCl(0．15mol／L) 0．87gEDTA-Na(1mmol／1) 0．037g吖啶橙浓缩液 0．6ml加⼊吖啶橙浓缩液后，应尽早使⽤。
2．操作程序(1)取0．2ml含10％⼩⽜⾎清的细胞悬液，再与0．4ml冷“甲液”混合，振荡15秒；(2)加⼊l.2ml"⼄液”，充分混匀；(3)于10分钟内，荧光显微镜观察，激发波长为488nm。
结果：DNA为黄绿⾊荧光，⽽RNA为橘红⾊荧光。
如果同时进⾏DNA和RNA染⾊时，需⽤鳌合剂处理，使双链RNA变性，确保所有的RNA均为单链，⽽双链DNA不受影响，增加结果的可信性。
鳌合剂以⼄⼆胺四⼄酸(EDTA)为佳。
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1003吖啶橙_溴乙锭双荧光染色检测细胞凋亡的形态学方法
实验技术吖啶橙/溴乙锭双荧光染色检测细胞凋亡的形态学方法南京医科大学第一附属医院临床实验研究室(南京210029)汪承亚 盛瑞兰 汪 凡 丁小健 邱宁雷 细胞凋亡(apoptosis)是不同于细胞坏死的一种细胞主动性死亡,近年已引起人们广泛重视。
Kerr等[1]首先用电子显微镜检描述凋亡细胞核浓缩、密度增高,细胞膜、细胞器相对完整等形态特征。
之后Wyllie[2]等提取凋亡细胞的DNA作电泳分析,见到相差为180～200bp 整倍数的DNA梯状条带,成为鉴定细胞凋亡的经典方法。
近期文献报道应用流式细胞仪测定受检细胞群体中凋亡细胞的百分率。
然而,电子显微镜,流式细胞仪非一般实验所能装备,操作较为复杂。
DNA电泳分析则不能估计细胞凋亡的发生率。
最近,我们在研究人结肠肿瘤细胞的细胞凋亡时,采用吖啶橙(acridine orange,AO)/溴乙锭(ethidium bromide,E B)双荧光染色,在荧光显微镜下观察凋亡细胞核的形态学改变[3,4]。
结果表明这是一种简单可行的检测细胞凋亡的方法。
既可早期发现凋亡细胞,又可分析细胞凋亡的发生率。
结果可靠,适于一般实验室开展。
材 料 与 方 法 一、受检细胞的收集:人结肠肿瘤细胞株Vaco330等系贴壁培养细胞株。
培养条件同前[3,4]。
收集脱落在培养液中的悬浮细胞为受检细胞。
经1500r/min 离心5min,细胞再悬于适量培液中,使悬浮细胞浓度达109/L左右。
立即作荧光染色形态学检测。
抽提细胞DNA时,受检细胞用PBS洗涤3次,立即提取DNA,或保存细胞于-80℃,供以后提取DNA之用。
二、AO/E B双荧光染色及荧光显微镜观察: 用PBS配制AO(Sigma A-6014)/EB(Sigma E-8751)各为100mg/L的混合染液,避光保存于室温或4℃,可使用半年以上。
取100μL受检细胞悬液,加4μL上述荧光染色液,轻轻打匀后,取细胞悬液一滴滴在洁净玻片上,加盖玻片后立即置荧光显微镜下观察。
2015吖啶橙荧光染色法在循环肿瘤细胞筛查中的应用_刘敏_马富玲_韩荣_李美_刘淑芬_张
1.1 一般资料 选择 2013 年 7 月—2014 年 5 月我院收治 的转移性肾细胞癌患者 27 例（研究组），其中男 19 例，女 8 例；年龄 28~79 岁，平均（61.63±12.04）岁。患者均有明确病 理组织学诊断证实为肾细胞癌，且具有充分临床或影像学证 据确诊为转移性肾细胞癌，均未接受任何治疗。另择 10 例 健康体检者作对照组，其中男 6 例，女 4 例；年龄 26~79 岁， 平均（50.1±16.88）岁。本研究经我院医学伦理委员会批准， 且获研究对象知情同意。 1.2 主要试剂和仪器 769-P 细胞系购自中国科学院上海 生命科学研究院细胞资源中心，RPMI-1640 培养基、热灭活 胎牛血清、淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物科技有限公 司，胰蛋白酶、胶原酶Ⅱ、红细胞裂解液购自北京索莱宝科技 有限公司，荧光显微镜（Olympus BX51），离心机(BAIYANG B160A)，超净台(Labeier)，CO2 培养箱(Forma Scientific)。 1.3 方法 1.3.1 肿瘤细胞培养 新鲜肾癌组织经胶原酶Ⅱ消化，加淋 巴细胞分离液，离心获得原代肾癌细胞。加含 20%胎牛血清 的 RPMI-1640 培养基，置于 37 ℃、5%CO2 条件下传代培养。 同时将 769-P 细胞系加入含 10%胎牛血清的 RPMI-1640 培 养基中培养。待细胞覆盖瓶底 80%时，胰蛋白酶消化后按 1∶3 传代。每 5 d 传代 1 次。取对数生长期 769-P 细胞 备用。 1.3.2 AO-F 染色评估 AO-F 染料对肿瘤细胞的敏感性 分 别制备原代和 769-P 细胞涂片，涂片经 AO-F 染色：AO-F 染 液中浸泡 3 min，PBS 冲洗；HCl 溶液冲洗 5 s，PBS 冲洗；CaCl2 溶液浸泡 3 min，PBS 冲洗。加盖片于荧光显微镜下观察细 胞形态及着色情况。随机读取 5 个视野计算 AO-F 阳性（+） 细胞占 769-P 细胞的比例，评估 AO-F 染料对肿瘤细胞的敏 感性。 1.3.3 富集对照组外周血单个核细胞 对照组清晨空腹抽 取肘正中静脉血 5 mL，低张红细胞裂解液破红，乙二胺四乙 酸（EDTA）漂洗后固定 2 次，2 000 r/min 离心 10 min，获得单
吖啶橙荧光法测定牛血清白蛋白
Ｋｅ ｒ ｓ Ａｃｉｉ ｒｎ ｅ Ｂ ｖｎ ｅｕ Ａ ｂ ｍｉ ； ｕ ｒｓｅ ｃ ｔｏ ｙ ｗｏ ｄ ： ｒ ｎ Ｏ ａ ｇ ； ｏ ｉｅ Ｓ ｒｍ ｌｕ ｎ ｆ ｏ ｅｃ ｎ ｅ ｈ ｄ ｄ ｅ ｌ ｍｅ
蛋 白质 是一切 生物 体 的细 胞 和 组织 的主要 组 成成分 ， 是生命 活动的物 质基础 。 年来 ， 蛋 白质 近 对 分 离和 分析方 法 的 研 究引起 了科 学 工作 者 的兴趣 和 广泛关注 ； 同时 用于定 量测 定 蛋 白质 的一 些新 的 分析技 术 的出现 ， 又促进 了 生命 科 学 的不断发 展ｔ ｌ 】 。
Ｏ １ ｒｔｉ ｎ ａ ｃ ｒ ｉ ａ ｇ 。 ｗｈｃ ａ ｅ ａ ｐｉｄ ｔ ｈ ｅｅｍｉａｉｎ ｏ ｒｃ ｍｏ ｎ ｆ ｔｅ ｐ ｏ ｉ． ｆｌｅ ｐ ｏ ｎ ｉ ｅｔ ｎ ｒｎ ｅ １ ｅ ａ ｉｈ ｃ ｎ ｂ ｐ ｌ ｏ ｔｅ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｆｔａｅ ａ ｕ ｔｏ ｒ ｔ ｎ ｅ ｏ ｈ ｅ
ｌ ｒ ｃ ｎ ｅ ｉｔ ｓｔ ｆ ｏ ｓｅ ｃ ｎ ｎ ｉ ． Ｔ ｅ ｃ ａ ｇ ｆ ｆ ｏ ｓｅ ｃ ｍｅ ｔ ｈ ｗｓ ａ ｇ ｏ ｉｅ ｅａｉｎ ｗｉ ｅ ｃ ｎ ｅ ｔ ｔ ｎ ｕｅ ｅ ｙ ｈ ｈ ｎ ｅ ｏ ｕ ｒ ｃ ｎ ｅ ｉ ｍｉ ｓｏ ｏ ｄ ｌ ｒｒｌｔｏ ｔ ｔ ｏ ｃｎｒｉ ｌ ｅ ｙ ｎ ｈ ｈ ａｏ
Ａｃ ｉ ｉ ｅ Ｏｒ ｎ ｅｂ ｌ ｏ ｅ ｃ ｎ ｅ Ｔｅ ｈ ｉ ｕ ｒｄ ｎ ａ ｇ ｙ ａ Ｆ ｕ ｒ ｓ ｅ ｃ ｃ ｎ ｑ ｅ
ＨＵ ｅ －ｉ ｇ Ｉ Ｇｕ － ｉｇ Ｗ ｎｙｎ ，Ｌ ｏｐｎ
（ ｎｉ ｎ ｅｔ ｎ ｉ ｃ ｎｅＤ ｐｒ ｎ Ｐｔ ｎ ｅ ｉ， ｕ ａ ｕａ ５ １０ Ｃ ｉ ） Ｅ ｖ ｏｍ ｎ ｄＬｆ Ｓｉ ｃ ｅａ ｔ ｕａ Ｕ ｉ ｒｔ Ｐ ｔ Ｆｊ ３ １０， ｈ ａ ｒ ａ ｅ ｅ ｍｅ ， ｉ ｎ ｖ ｓｙ ｉ ｎ Ｊ ｎ ｎ
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙是一种双碱性染料，具有两个氨基和两个芳香环结构。
它可以与DNA
和RNA结合，通过静电作用和氢键作用，与核酸中的腺嘌呤和胞嘧啶基团结合，
从而实现对核酸的染色。
吖啶橙的结构中含有芳香环和氨基，使其具有较强的荧光性能，能够在紫外光下产生橙色荧光。
在细胞或组织染色实验中，吖啶橙可以通过渗透染色或者固定染色的方式，将
其加入到待染细胞或组织中，与核酸结合形成吖啶橙-核酸复合物。
当使用荧光显
微镜观察时，激发波长为紫外光，吖啶橙-核酸复合物会发出橙色荧光信号，从而
实现对核酸的观察和检测。
吖啶橙染色的原理基于其与核酸的结合特性，通过与核酸的特异性结合，实现
对核酸的染色和检测。
由于吖啶橙具有较强的荧光性能，能够产生明亮的橙色荧光信号，因此在细胞生物学和分子生物学研究中得到了广泛的应用。
吖啶橙染色原理的了解对于科研工作者在实验设计和数据解读中具有重要意义。
在细胞和组织的荧光染色实验中，科研人员需要根据样本的特点和实验要求，选择合适的染色方法和条件，合理设计实验方案，以确保获得准确可靠的实验结果。
总之，吖啶橙作为一种重要的荧光染料，在生物学和医学领域发挥着重要作用。
了解其染色原理，可以帮助科研人员更好地应用吖啶橙进行细胞和组织的荧光染色实验，为科研工作提供有力支持。
希望本文对吖啶橙染色原理有所帮助，同时也希望科研人员能够在实验中充分
发挥吖啶橙的优势，取得更多有意义的研究成果。
吖啶橙染色法
吖啶橙染色法检测细胞凋亡
实验试剂、仪器：
吖啶橙，稀释液PBS（磷酸缓冲液pH7.0～7.2），1％吖啶橙贮存液，细胞爬片，载玻片，盖玻片，荧光显微镜。
吖啶橙：3，6－（二甲胺基）吖啶盐酸盐，分子式C17H19N3·HCl ·ZnCl2, 分子量438.12g/mol,是一种荧光色素，其检测激发滤光片波长488nm,阻断滤光片波长515nm。
它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，可发出不同颜色的荧光，与DNA结合量少发绿色荧光，与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。
该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。
因此，在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。
吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
吖啶橙染液有毒，操作时要戴手套，需避光。
实验步骤：
1.配置吖啶橙贮存液（1%）：300mg吖啶橙溶解于30mlPBS缓冲液中，滤过，4
度避光保存。
2.染色时，稀释100倍至终浓度为0.01%。
取300微升的PBS缓冲液，加3微
升的吖啶橙贮存液混匀，室温避光染色5min。
3.在荧光显微镜下选520nm的激发光观察。
实验结果：
正常细胞核的DNA为黄色或黄绿色均匀荧光，细胞质和核仁的RNA为桔黄或桔红荧光。
出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见致密浓染的黄绿色荧光，甚至见黄绿色碎片。
细胞坏死时，细胞质内黄绿色或桔黄色荧光均减弱或消失。
实验六吖啶橙染色检测细胞凋亡
观察：用蓝紫光滤光片，可见经0.01％的 丫啶橙荧光染料染色的细胞，细胞核和 细胞质被激发产生两种不同颜色的荧光( 亮绿色或暗绿色、橙红色)
.
反射荧光显微镜的构造
优点： 由于物镜兼作聚光镜，不需要很多调节。 物镜数值孔径不受限制，在高放大被率时，也
可以获得高分辨率的像。 厚的或不透明的标本也能观察，厚的盖玻片
➢ 正常细胞核因含DNA显示黄绿色荧光，细胞质与 核仁都显示橘红色荧光，细胞体积较大且铺展。 凋亡细胞体积明显缩小，核呈黄绿色，断裂为多 个碎块状，无核仁，碎裂的核由膜包裹着凸起于 细胞表面呈黄绿色。
.
.
荧 光 显 微 镜
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荧光显微镜的成像原理
荧光显微镜是利用一定波长的激发光对样品进 行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于 对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观 察检测。
也能使用。 其它观察法也能与反射荧光结合使用，特别
和相差法和透射微分干涉差法相结合。 可以避免不必要的荧光色衰褪现象。
.
缺点： 在用低倍率物镜时，像比较暗，因此必
须用大数值孔径的物镜。 滤光镜系统必须有效地分离开激发光和
荧光。
.
激发荧光的方式： 按光的波长范围分为UV激发法(使用紫外
.
需要注意，即使像反差最佳的UV激 发暗场聚光器照明，由标本折射或散射 的部分紫外激发光也会进入物镜，这样 在光学系统中的加拿大胶胶合面和光学 玻璃因激发引起的自身荧光会使像的反 应变坏。因此，必须在目镜前面使用紫 外吸收滤光片作为截止滤光片（萤石或 氟石玻璃）。
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➢ 凋亡小体被吞噬：
.
.
吖啶橙染色原理
➢ 吖啶橙(Acridine Orange) 是一种荧光染料，它与双 链DNA的结合方式是嵌入双链之间，而与单链 DNA和RNA则由静电吸引堆积在其磷酸根上。在 蓝光(约502nm)激发下，细胞核发亮绿色荧光(约 530nm)，核仁和胞质RNA发桔红色荧光(＞580nm)。 吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜 上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而 主要显示DNA、RNA两种核酸。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色是一种常用于核酸和蛋白质检测的荧光染料，其原理基于荧光共振能量转移（FRET）和DNA或蛋白质的特定
亲和性。
在实验中，通常将吖啶橙与目标分子（如DNA或蛋
白质）结合，通过观察荧光信号的强度和变化来进行检测。
吖啶橙具有两个荧光基团：供体荧光基团（通常为吖啶基团）和受体荧光基团（通常为橙色基团）。
当吖啶橙与目标分子结合时，两个基团之间的距离和相对位置可能会发生改变。
如果供体荧光基团与受体荧光基团的距离在合适的范围内，并且相对位置适当，FRET就会发生。
在FRET过程中，供体荧光基团受到激发光刺激并产生激发态，在受体荧光基团的作用下，供体荧光信号以非辐射方式传递给受体荧光基团。
作为结果，亮一些的橙色荧光发生。
通过观察橙色荧光信号的强度和变化，可以确定目标分子的存在和特定的相互作用。
吖啶橙染色的原理基于荧光共振能量转移和目标分子的亲和性，是一种有效的分析方法。
它常用于实验室研究、生物学检测和医学诊断等领域，具有高灵敏度和广泛的应用前景。
斑马鱼胚胎吖啶橙
斑马鱼胚胎吖啶橙（Acridine Orange，AO）染色（from 黄春筱师姐）：
1.原理：
吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一种核酸选择性染料，它能够掺入DNA分子或者与RNA分子通过静电吸引作用相结合。
掺入了AO染料的DNA分子在525 nm的紫外光照射下，能够激发出绿色荧光。
利用这一原理，AO染料被广泛地用于细胞凋亡的检测。
我们实验中，利用AO染料分别处理24 hpf、48 hpf、72 hpf和96 hpf斑马鱼胚胎，检测注射miR-462/731 Morpholinos的胚胎（MO组）、共注射miR-462/731 Mopholinos和Duplex 的胚胎（挽救组）以及Uninjected Control的胚胎（对照组）的ICM区域（24 hpf）、AGM区域（48hpf）和CHT区域（72hpf-96hpf）的细胞凋亡情况。
2.操作步骤：
2.1 试剂配制：
1)AO染液工作液：
AO染液工作液浓度为5 μg/ml；
首先配制AO贮存液浓度为5 mg/ml，使用时1:1000稀释到工作浓度。
2.2 染色步骤：
1)将斑马鱼胚胎（24hpf，48 hpf，72 hpf，96 hpf）手动剥除卵膜，并用超纯水清洗2次。
2)将斑马鱼胚胎转移到含有5 μg/ml AO染料的培养皿中，28.5°C培养15-30 min（避光）。
3)用新鲜的暴气超纯水（超纯水在28.5°C培养箱中放置一会）替换AO染液，摇床轻摇10 min洗涤胚胎，重复2次。
4)胚胎用0.02% MS-222麻醉后，在荧光显微镜下观察、拍照。
吖啶橙荧光染色法在胃癌诊断中的临床意义
ＭＯＤ ＥＲＮ Ｏ ＮＣＯ ＯＧＹ。 ｅ ． ０ ７． Ｌ Ｄ ｃ ２ ０ ＶＯＩ １ ． ５．ＮＯ． ２ １
Ｏ Ｓ ８ 则 反 映 治疗 获 益 （ 状改 善 ， 吞 咽 困难 、 食 Ｅ１） 症 如 进 等） 。这一 结果 与 Ｂａｅｙ＿ 等 的研究相 似。Ｅ Ｒ Ｃ Ｑ Ｑ— ｌ ｂ ４ ｚ Ｏ Ｔ Ｌ
Ｓ ｒ ，９７，０ ５ ：５ ４ ９ ｕｇ１ ７ ２ （ ） ４４～ ５ ．
【 考文献】 参
［ ］ 全国肿瘤防治研究办公室 ， １ 卫生部卫 生统计信 息中心 ． 中国恶
性肿瘤危险因素研究 ［ ． 京 ： Ｍ］ 北 中国协 和 医科大学 出版 社 ，
２ ｏ ２ ５ ｏ ３． ３ ．
［ ］ ＢａｅｙＪ Ｎｃｌ ， ｒｏｅ Ｔ，ｔ １ ｅｓ ｉｔ ｆ ａｉ ｆ ８ ｌ ｂ Ｍ， ｉ ｉ Ｊ ＢｏｋｓＳ ｅ ａ．Ｆ ａｉ ｌｙｏ ｌ ｔ ｏ ｚ ｋｎ ｂｉ ｕ ｑ ｙ
一
［ ］ ＢａｅｙＪ Ａ ｄｒ ｎ Ｄ， ｎｔ ｅ Ｋ，ｔａ．Ｄ ｖｌｐ ｎ ｏ １ ３ ｌ ｂ Ｍ， ｌｅｓ Ｗｉｓ ｎ ｅ １ ｅｅ ｍｅｔ ｆ８ ｚ ｏ ｏ ｏ １
Ｅ Ｔ ｕ ｓｏｎｉ ｄ ｌ ｅｕｅ ｎＱ ａｉ ｆ ｉ ｓｅｓ ＯＲ ＣＱ ｅｔ ｎ ａｒ Ｍｏ ｕ ｔ ｂ ｓｄｉ ｕ ｌｙｏ ｆ ａｓｓ— ｉ ｅ ｅｏ ｔ Ｌｅ
ｔ ｉ ｏ ａ ｎ ｔ ｍｙ ｉ ｃ ｓ ｌ ｔ ａ ｄ ｐ ｔａ ｔｄ ｅ ｏ Ｉ ｒ ｃ ｍｐ ｒ ｇ ｍｉ ｌ ａ ｉ ｏ ｃｎ， ｉｐ ａｉ ｎ ｒ ｒ ｃ ｅ ｖ ｎ Ｙｓ— ｉ ｆ － ｎ， ｏ ｎｕ
需要开发 出适合测评我 国食管癌患 者 Ｑ Ｌ的量表 。实际操 Ｏ 作 中， 多数 患者 还可 能需 要 医务 人 员给 予一 定 帮 助才 能完
吖啶橙荧光染色法在消化系肿瘤诊断中的临床意义
中图分类号： ７５Ｒ ３．３ Ｒ ３ ； ７ ０ ４
文 献 标 识 码 ： Ｂ
文 章 编 号 ：６１８ ４ （０ ８ ０—７ ８０ １ ７—３ ８ ２ ０ ） ７０ ５—２
消 化 系肿 瘤 的发 病 率 及 死 亡 率 居 各 种 恶 性 肿 瘤 之 首 ， 目前
色为 ＋＋＋； 核荧 光强 ， 明 亮 黄 色 为 ＋ ＋ ＋ ＋ 。浆 较 暗 荧 光 ， 呈
系 。Ｄ ＮＡ 含 量 越 多 ， 光 越 黄 越 亮 ； ＮＡ 含 量 越 多 ， 光 越 红 荧 Ｒ 荧
越 鲜 艳 ＿ 。从 正 常 细 胞 转 变 为 癌 细 胞 ， 细 胞 的 Ｄ ４ ］ 其 ＮＡ、 Ｎ Ｒ Ａ 含 量 不 断 增 加 ， ＡＯ染 色 ， 荧光 显 微 镜 下 ， 过 单 个 细 胞 的 经 在 通
光 。荧 光 的强 度 与 核 内 ＤＮ 与 浆 内 Ｒ Ａ ＮＡ 的含 量 成 正 比例 关
１２ 方 法 胃 、 管 、 结 肠 标 本 通 过 内 窥 镜 取 材 ， 脏 标 本 ． 食 直 肝
通过 细针 穿 刺 取 材 ， 片 １ ２张 ，５ 酒 精 固定 ，５ ｉ 水 涂 ～ ９ １ｒ ｎ后 ａ
摘 要： 目的 探 讨 吖 啶 橙 荧光 染 色检 测 法 对 消 化 系肿 瘤 的诊 断 价值 。方 法 对 １０例 胃癌 、Ｏ例 肠 癌 、Ｏ例 食 管癌 、Ｏ例 ０ ５ ５ ３ 吖啶 橙 荧光 染 色检 测
肝 癌 患 者 ， 行 内窥 镜 及 细 针 肿 物 穿 刺 取 材 ， 标 本 同 时做 吖 啶 橙 荧光 进 将
洗 ， 加 ０ ０ Ｏ浓 度 的 吖 啶 橙 荧 光 染 液 染 色 ５ ｉ， ｐ ． 滴 ．１ ａ ｒ ｎ 用 Ｈ６ ０
吖啶橙荧光染色原理
吖啶橙荧光染色原理吖啶橙荧光染色原理一、前言吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，其原理基于吖啶橙能够与DNA结合形成复合物，并且在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射。
本文将详细介绍吖啶橙荧光染色的原理。
二、吖啶橙的结构和性质吖啶橙是一种双氮杂环化合物，其分子式为C17H19N4Cl。
它是一种黄色晶体，可以通过溶解在水中形成黄色溶液。
吖啶橙分子中含有两个氮原子和两个苯环，这些结构使得它具有与DNA结合的能力。
三、DNA与吖啶橙的相互作用DNA是由四种碱基组成的双链螺旋结构，其中腺嘌呤（A）和胸腺嘧啶（T）之间形成两个氢键，鸟嘌呤（G）和胞嘧啶（C）之间形成三个氢键。
这些氢键使得DNA分子具有稳定的结构，并且能够与吖啶橙形成复合物。
当吖啶橙溶液与DNA接触时，它能够通过静电作用结合到DNA的磷酸基团上。
此外，吖啶橙的分子中含有苯环，这些苯环可以穿过DNA 的双链螺旋，与碱基形成π-π堆积作用。
这些相互作用使得吖啶橙能够与DNA形成稳定的复合物。
四、吖啶橙荧光发射原理在紫外线或蓝光的激发下，吖啶橙分子会从基态跃迁到第一激发态。
在回到基态时，它会通过荧光发射释放出能量。
这种荧光发射是一种特殊的电子跃迁过程，其波长通常在500-600nm之间。
由于DNA和吖啶橙形成了稳定的复合物，并且吖啶橙分子在紫外线或蓝光的激发下能够发生荧光发射，因此在细胞核染色中加入吖啶橙可以使得细胞核产生荧光信号。
五、吖啶橙荧光染色的实验步骤1. 取一定量的细胞样品，离心沉淀后用PBS洗涤。
2. 加入适量的吖啶橙溶液，静置15-30分钟。
3. 用PBS洗涤样品，去除未结合的吖啶橙。
4. 在荧光显微镜下观察细胞核荧光信号。
六、吖啶橙荧光染色的应用吖啶橙荧光染色是一种常用的细胞核染色方法，它可以被广泛应用于生物学和医学研究中。
例如，在癌症诊断中可以利用吖啶橙染色技术对肿瘤组织进行检测；在细胞分裂和凋亡等过程中也可以利用吖啶橙技术进行观察和分析。
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理
吖啶橙染色原理的核心是吖啶橙与细胞或组织中的核酸结合。
吖啶橙是一种双
碱基染料，它能够与DNA和RNA中的腺嘌呤发生特异性的结合，形成荧光复合物。
在细胞或组织染色实验中，通过将样本与含有吖啶橙的染色液接触，吖啶橙能够与细胞核中的DNA结合，或者与细胞质中的RNA结合，从而使得这些结构在
荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号。
通过观察这些荧光信号的强度、分布和形态，可以对细胞或组织的结构和功能进行研究和分析。
除了与核酸结合外，吖啶橙还可以与细胞膜中的脂质结合，或者与特定蛋白质
发生相互作用。
这些特异性的结合使得吖啶橙在细胞和组织染色实验中具有多样化的应用。
例如，可以利用吖啶橙染色来观察细胞膜的形态和分布，或者检测特定蛋白质的表达和定位。
这些信息对于研究细胞的生理功能和病理变化具有重要意义。
在实际的实验操作中，吖啶橙染色通常需要配合荧光显微镜或流式细胞仪等设
备来进行观察和分析。
荧光显微镜能够通过激发吖啶橙荧光复合物产生荧光信号，并通过特定的滤光片来捕获和记录这些信号，从而实现对细胞和组织的荧光成像。
而流式细胞仪则可以通过检测吖啶橙的荧光信号来实现对细胞的数量、大小和荧光强度等参数的快速测定和分析。
总的来说，吖啶橙染色原理是基于吖啶橙与细胞或组织中特定结构的特异性结
合而实现的。
通过这种染色方法，可以对细胞和组织的结构、功能和代谢进行研究和分析。
在生物医学研究领域中，吖啶橙染色已经成为一种常用的实验技术，为科学家们深入探索生命的奥秘提供了重要的工具和手段。
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. ’. 吖啶橙荧光染色法
【实验原理】
吖啶橙（acridine orange ，AO ）是最经典的极灵敏的荧光染料，它可对细胞中的DNA 和RNA 同时染色而显示不同颜色的荧光。
其激发峰为492nm ，荧光发射峰为530nm
（DNA ）、640（RNA ），它与双链DNA 的结合方式是嵌入双链之间，而与单链DNA 和RNA 则由静电吸引堆积在其磷酸根上。
在蓝光（502nm ）激发下，细胞核发亮绿色荧光（约530nm ），核仁和胞质RNA 发橘红色荧光（>580nm ）。
吖啶橙的阳离子也可以结合在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但细胞固定阻抑了这种结合，从而主要显示DNA 、RNA 两种核酸。
【实验用品】
1、 器材
荧光显微镜、牙签、载玻片、盖玻片、滴管、吸水纸。
2、 试剂
（1）0.1mol/l pH7.0 PBS 液
A 液：NaH 2PO 4·H 2O 2.76g ，加蒸馏水至100ml ；
B 液：Na 2HPO 4·7H 2O 5.36g ，加蒸馏水至100ml ；
取A 液16.5ml ＋B 液33.5ml ＋NaCl 8.5g ，用蒸馏水稀释至100ml 。
（2）1%吖啶橙原液
取0.1g 吖啶橙加蒸馏水稀释至100ml （临用时配制0.01%吖啶橙染液：将1%吖啶橙原液用pH7.0 PBS 溶液稀释10倍）。
3、 材料
口腔黏膜上皮细胞临时制片或人肝癌BEL-7402细胞爬片。
（1）取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上。
（2）95%乙醇溶液固定5min 。
（3）滴加0.01%吖啶橙染液5min 。
（4）盖上盖玻片，吸水纸吸去盖玻片周围多余液体，镜下观察。
【结果与观察】
荧光显微镜下（选用蓝色激发滤片），可见含DNA 的细胞核显示黄绿色荧光，含RNA 的细胞质及核仁显示橘红色荧光
体外培养的肝癌细胞吖啶橙荧光染色
【注意事项】
（1）制片后一定要晾干玻片，在进行后续步骤，否则会导致细胞脱落。
（2）每种荧光染料，均有自己的最适pH ，此时荧光最强。
当pH 改变时，不仅荧光强度减弱，而且波长将有所改变，因此荧光检测时要在一定的pH 缓冲液中进行。