吖啶橙染色试剂盒

吖啶橙染色试剂盒

简介：

吖啶橙(Acridine Orange, AO)属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA 、RNA ，属于异染性荧光染料。该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA 和RNA 染色。因此AO 常用于细胞内DNA 和RNA 进行检测。AO 与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO 嵌入核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO 与DNA 的结合，其荧光发射峰为530nm ，激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO 与单链核酸的磷酸根(带负电荷)产生静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO 与RNA 的结合，其荧光发射峰为640nm ，激发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光。因此，吖啶橙嵌合到双链DNA 分子中显绿色，与DNA 单链或RNA 结合时发桔黄色或橙红色荧光。

Leagene 吖啶橙染色试剂盒(Acridine Orange Detection Kit)主要由AO Stain 、AO Stain Buffer 组成，常用于细胞凋亡的检测。染色后在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙染色常与EB 染色合用双染， EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

组成：

自备材料：

1、 荧光显微镜

2、 低速离心机

3、 PBS

4、 细胞计数板

5、 载玻片、盖玻片

操作步骤(仅供参考)：

(一) AO 单独染色

1、 收集细胞(采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞)，用AO Stain Buffer(1×)清洗细胞， 编号 名称 DA0037 100T Storage 试剂(A): AO Stain 500μl 4℃ 避光 试剂(B): AO Stain Buffer(10×) 10ml 4℃ 使用说明书 1份

加入适量的AO Stain Buffer(1×)重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。

2、取适量的细胞悬液和AO Stain，细胞悬液:AO Stain按照一定的比例混合，轻轻混匀。

如果采用荧光显微镜下观察，取l细胞悬液和5μlAO Stain混合即可。

3、室温避光染色，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析。

4、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长，阻断滤光片波长)，计数并拍照。

染色结果

正常细胞细胞被均匀染成黄绿色荧光

凋亡细胞染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被

染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒

(二) AO/EB双染色

1、收集细胞，用AO Stain Buffer(1×)清洗细胞，加入适量的AO Stain Buffer(1×)重悬

细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。

2、取适量的细胞悬液和AO Stain，细胞悬液:AO Stain按照一定的比例混合，并加入适量

EB染色液，轻轻混匀。如果采用荧光显微镜下观察，取细胞悬液和5μl AO Stain混合即可。

3、室温避光染色，滴加于载玻片上并加盖玻片

4、荧光显微镜滤光片观察，计数并拍照。

染色结果

正常细胞均匀染成绿色荧光

坏死细胞细胞桔黄色荧光

凋亡细胞染色质浓缩，细胞核碎裂，被染成大小不一、

致密浓染的黄绿色颗粒或见胞质芽状突起。

计算细胞凋亡率和死亡率:

注意事项：

1、吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

2、如有低温离心机进行离心效果更佳，同时应注意减少试剂暴露于强光下的时间。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。