首乌藤饮片标准汤剂质量标准研究

首乌藤饮片标准汤剂质量标准研究作者：范帅帅高乐田伟甄亚钦来源：《中国中医药信息杂志》2019年第01期摘要：目的 ;制备首乌藤饮片标准汤剂，并进行质量标准研究。

方法 ;按照标准汤剂的制备要求，制备15批不同产地首乌藤饮片的标准汤剂，以2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作为定量检测指标，计算其转移率及出膏率，并建立超高液相色谱特征图谱分析方法。

结果 ;通过对15批首乌藤饮片标准汤剂进行测定，2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的转移率为3.94%～53.53%，大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的转移率为2.53%～37.06%，出膏率为1.46%～15.91%。

采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件进行特征图谱分析，标定了14个共有峰，指认了其中4个色谱峰。

15批首乌藤饮片标准汤剂相似度评价结果显示，其相似度均大于0.90。

结论 ;首乌藤饮片标准汤剂制备规范，测定方法精密度、稳定性和重复性良好，可为首乌藤配方颗粒的质量控制提供参考。

关键词：首乌藤;标准汤剂;转移率;出膏率;特征图谱中图分类号：R284.1;;; 文献标识码：A;;; 文章编号：1005-5304（2019）01-0090-05DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.01.021;首乌藤为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥藤茎，功效养血安神、祛风通络，用于失眠多梦、血虚身痛、风湿痹痛、皮肤瘙痒[1]。

首乌藤主要含有蒽醌类、二苯乙烯苷类、黄酮类等成分，含量较高的代表性化合物为大黄素、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷（emodin-8-O-β-D-glucopyranoside，EG）、2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（二苯乙烯苷）[2-4]。

二苯乙烯苷为何首乌中主要水溶性成分，有抗衰老、神经保护、抗血脂、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤及抗肿瘤转移作用[5-6]。

EG有神经保护、促智、改善睡眠、促成骨细胞增殖分化、降血脂、抗菌抗病毒和抗肿瘤等药理活性，具有重要研究和开发价值[7]。

中药饮片标准汤剂可以标化不同的临床用药形式，提高临床用药的准确性和剂量的一致性[8]。

中药配方颗粒的生产工艺参数、质量控制方法和有效指标成分的选择等药学研究均须与标准汤剂进行对比，以保证与标准汤剂质量的一致性。

本研究按照标准汤剂制备方法，选用首乌藤主产区的15批饮片制备标准汤剂，以二苯乙烯苷和EG为指标成分，测定其含量，计算转移率和出膏率范围，并进行特征图谱研究，为首乌藤饮片标准汤剂质量标准的制定提供基础数据，并为提高首乌藤配方颗粒的质量控制水平和规范其临床用药提供依据。

1; 仪器与试药ACQUITY UPLC H-Class系统（PDA检测器），美国沃特世公司;Empower3色谱工作站，美国沃特世公司;LC-15C高效液相色谱仪（SPD-15C型紫外检测器、SIL-10AF自动进样器、CTO-15C柱温箱），日本岛津公司;Pilot5-8L真空冷冻干燥机，北京博医康实验仪器有限公司;TB-215D、BSA224S-CW电子分析天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司;JY10001型电子天平，上海民桥精密科学仪器有限公司;KQ-250型超声波清洗器（功率250 W，频率40 kHz），昆山市超声仪器有限公司;RE-3000型旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂;BJH-W200F 型陶瓷自动中药煲（电源220 V、50 Hz，功率300 W，容量2.0 L），广东天际电器股份有限公司;DHG-9123A型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科技有限公司。

二苯乙烯苷对照品（批号MUST-16121311，纯度>98%），成都曼思特科技有限公司;EG 对照品（批號16110101，纯度≥98%）、没食子酸对照品（批号151009，纯度≥98%）、原儿茶酸对照品（批号151123，纯度≥98%），成都普菲德有限公司;甲醇、乙腈，Fisher化学试剂公司;磷酸为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

15批不同产地首乌藤药材均由神威药业集团有限公司提供，经河北省药品检验研究院孙宝惠鉴定为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥藤茎，样品来源信息见表1。

2; 方法与结果2.1; 首乌藤饮片检测按2015年版《中华人民共和国药典》（一部）首乌藤饮片项下有关规定进行检测。

15批首乌藤饮片的含水量为5.06%～9.46%，总灰分为5.52%～9.56%，浸出物为12.9%～21.2%，二苯乙烯苷含量为0.20%～2.51%，均符合规定。

2.2; 首乌藤标准汤剂制备称取首乌藤饮片100.0 g，煎煮2次。

一煎加水1000 mL，浸泡30 min，武火煮沸，文火保持微沸30 min;二煎加水800 mL，武火煮沸，文火保持微沸20 min。

用100目筛网趁热过滤，合并2次煎液，迅速水浴冷却，50 ℃真空减压浓缩至约200 mL流浸膏，测定流浸膏的密度和pH值，放入冰柜冷冻（-40 ℃）过夜，用冷冻干燥机干燥，即得标准汤剂干燥粉末，计算其出膏率及水分，结果见表2。

首乌藤饮片标准汤剂平均出膏率为（8.69±2.41）%，以均值±3SD规定出膏率范围，则出膏率范围为1.46%～15.91%。

2.3; 指标成分含量测定2.3.1; 色谱条件色谱柱：Wondasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流动相：A为0.1%甲酸，B为乙腈，梯度洗脱（0～15 min，18%→30%B;15～30 min，30%→65%B;30～31 min，65%→18%B;31～40 min，18%B）;流速：1.0 mL/min;检测波长：271 nm;进样量：10 μL;柱温：30 ℃。

理论塔板数按二苯乙烯苷峰计算应不低于2000。

色谱图见图1。

2.3.2; 对照品溶液的制备取二苯乙烯苷和EG对照品适量，精密称定，加稀乙醇溶液溶解并定容至刻度，配制成每1 mL含二苯乙烯苷500.0 µg、EG 11.4 µg的混合对照品溶液，即得。

2.3.3; 供试品溶液的制备取首乌藤标准汤剂冻干粉适量，约0.1 g，精密称定，置25 mL錐形瓶中，精密加入稀乙醇25 mL，超声处理（功率250 W，频率35 kHz）10 min，放冷，再称定质量，用稀乙醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.3.4; 线性关系考察精密吸取对照品溶液2、4、8、12、16、20 μL，按“2.3.1”项下色谱条件测定。

以二苯乙烯苷的进样量为横坐标，测定的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，二苯乙烯苷在1.000～10.000 μg范围内线性关系良好，回归方程为Y=773 607X+98 451，r=0.999 9;以EG的进样量为横坐标，测定的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，EG在0.022 8～0.228 μg 范围内线性关系良好，回归方程为Y=3 279 683.413 0X+766.400，r=0.999 8。

2.3.5; 精密度试验精密吸取对照品溶液10 μL，按“2.3.1”项下色谱条件连续进样6次，二苯乙烯苷和EG峰面积RSD分别为0.21%、0.89%，表明仪器精密度良好。

2.3.6; 稳定性试验精密称取首乌藤标准汤剂冻干粉约0.1 g，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL，按“2.3.1”项下色谱条件分别于0、2、4、8、12、18 h进样测定，二苯乙烯苷和EG峰面积RSD分别为1.09%、1.09%，表明供试品溶液在18 h内较稳定。

2.3.7; 重复性试验精密称取首乌藤标准汤剂冻干粉6份，每份约0.1 g，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10 μL，按“2.3.1”项下色谱条件进样，计算得供试品溶液二苯乙烯苷和EG总含量RSD=1.94%，表明本方法重复性良好。

2.3.8; 加样回收率试验取同一批首乌藤标准汤剂冻干粉9份，每份约0.05 g，精密称定，分别精密加入相当于80%、100%、120%的二苯乙烯苷和EG对照品各3份，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件测定，计算得二苯乙烯苷和EG的平均回收率分别为102.62%、101.47%，RSD分别为1.06%、2.03%，表明该方法准确度良好。

2.3.9; 样品含量测定按“2.3.1”项下色谱条件测定15批首乌藤标准汤剂和饮片中二苯乙烯苷和EG的含量，结果见表3。

以均值±3SD规定二苯乙烯苷和EG转移率范围，则二苯乙烯苷转移率为3.94%～53.53%，EG转移率为2.53%～37.06%。

2.4; 特征图谱建立与分析2.4.1; 色谱条件色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）;流动相为0.1%磷酸（A）-乙腈（B），梯度洗脱（0～3 min，90%～87%A;3～6 min，85%～80%A;6～8 min，80%～75%A;8～10 min，75%～70%A;10～13 min，70%A;13～14 min，70%～65%A;14～16 min，65%～60%A;16～17 min，60%～20%A;17～18 min，20%～10%A;18～19 min，10%A;20～25 min，90%A）;流速0.3 mL/min;检测波长271 nm;柱温30 ℃;进样量1 μL。

在此色谱条件下，各色谱峰与相邻峰的分离度良好，峰形对称。

色谱图见图2。

2.4.2; 对照品溶液的制備精密称取二苯乙烯苷、EG、没食子酸、原儿茶酸对照品适量，加稀乙醇稀释至浓度分别为70.0、26.0、30.0、36.0 µg/mL的混合对照品溶液，摇匀，即得。

2.4.3; 供试品溶液的制备取首乌藤标准汤剂冻干粉适量，研细，取约0.1 g，精密称定，置25 mL锥形瓶中，加入稀乙醇25 mL，超声处理（功率250 W，频率35 kHz）10 min，放冷，用稀乙醇补充减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.4.4; 方法学考察通过查阅文献并与对照品色谱图比对后，指认出1、2、4、10号峰分别为没食子酸、原儿茶酸、二苯乙烯苷、EG。

其中，二苯乙烯苷峰分离度好、含量高、稳定，且2015年版《中华人民共和国药典》（一部）首乌藤项下将其定为含量测定的指标成分，故选择该峰为参照峰（S），计算首乌藤标准汤剂指纹图谱主要特征峰的相对保留时间、相对峰面积RSD。