实验胶体金、免疫荧光
医学检验领域中免疫胶体金技术应用研究进展
医学检验领域中免疫胶体金技术应用研究进展摘要：免疫胶体金技术作为一种固相标记免疫检测技术，是继免疫荧光、放射性免疫和酶联免疫吸附法以后出现的新型技术，具有操作便捷、成本低廉、诊断快速等多个显著的优点，尤其适宜应用于快速检验和现场检验中，目前已经在医学检验的定性以及定量检验中得到了广泛的应用，但其还存在一定的不足，使得免疫金胶体的实际应用仍存在一定的局限性，还需进行进一步的研究以提高其安全性和敏感度，本文现就医学检验领域中免疫胶体金技术的应用进展展开如下综述。
关键词：医学检验；免疫胶体金；应用进展氯金酸在枸橼酸、抗坏血酸、白磷等多类还原剂的还原作用下可聚合成为大小特定的金颗粒，通过静电作用后的金颗粒会呈现成状态稳定的胶体，即称之为胶体金[1]。
免疫胶体金快速诊断技术是近年来新兴的技术，主要基于新材料技术、免疫胶体金技术、单克隆抗体技术、乳胶凝集试验、酶联免疫吸附试验等技术，同时免疫胶体金快速诊断技术也具有应用便捷、成本低廉和安全性高等显著的优势，在近年来的诊断领域中应用广泛。
1.胶体金的检测原理胶体金于弱碱性带负电荷，可稳定结合携带正电荷的蛋白质分子，二者基于静电的正负电荷结合，不会对蛋白质的正常生物特性产生影响[2]。
除了蛋白质以外，胶体金还可以与ConA、PHA、SPA等多类生物大分子相结合[3]。
上述多种结合物的生物学和免疫特性可与胶体金所特有的物理性状相结合，进而使胶体金在细胞生物学、免疫学、病理学、组织学等多个领域中得到了广泛的应用[4]。
胶体金作为免疫胶体金技术的标志物，广泛的应用于免疫分析和免疫组织化学中，可定性检测或定位核酸、激素、多肽、蛋白质、糖蛋白、多糖等生物大分子。
近年来新发展起来的胶体金免疫层析法与以往的酶联免疫相比，具有更灵敏特异、简单快捷的优点，也更适宜现场应用，因而应用也更加广泛[5]。
根据胶体金制备需要的大小不同，其颗粒的直径可为1~150nm，颜色可为桔红色或紫红色，高密度高电子是其主要的特性之一[6]。
荧光免疫标记技术
适用于标记样品量少、蛋白含量低的抗体溶液，此法标记抗体比较 均匀，非特异性染色也比较少。
【主要试剂与器材】 1．器材 （1）铁立架、蝴蝶夹、层析柱、洗脱瓶、搅拌器、磁棒、
紫外分光光度计 （2）烧杯、试管、滴管、吸管、洗耳球、pH试纸、黑纸 2．试剂 （1）抗体 （2）异硫氰基荧光黄（FITC） （3）葡聚糖凝胶（Sephadex G-25） （4）pH9.5，0. 5M 碳酸缓冲液 （5）pH7.0，0.005M 磷酸缓冲液
免疫标记技术的应用 标记物与抗原、抗体的连接技术； 标记后的抗原、抗体进行特异性检测的实验设计原理 以及相应的检测仪器的使用方法。
免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）
是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应 的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量 的荧光素，在荧光显微镜下就可以看见发出荧光的抗原抗 体结合部位，检测出抗原或抗体。
荧光免疫标记技术
免疫标记（immunolabelling technic）
是指用一些易测定的、具有高度敏感性的标记物质：荧光素、放射 性核素、酶、胶体金、生物素、铁蛋白及化学（或生物）发光剂等作为 追踪物，标记特异性的抗原、抗体分子进行的抗原、抗体反应。
通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原、抗体的性 质与含量。并借助于荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微 镜和发光免疫测定仪等精密仪器对试验结果直接镜检观察或进行自动化 测定。
免疫荧光技术- 基本原理
免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微 示踪的精确性相结合。
以荧光素作为标记物，与已知的抗体(或抗原)结合、但不 影响其免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试 剂，用于检测和鉴定未知的抗原。
免疫胶体金技术的基本原理
免疫胶体金技术的基本原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。
胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。
根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。
用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。
这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。
免疫金标记技术(Immunogold labelling technique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。
2功能编辑本段常用的免疫胶体金检测技术：（1）免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。
（2）免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。
比较几种免疫检测的异同
免疫学课后作业比较几种免疫标记技术的异同。
答：根据标记物种类的不同，免疫标记技术可以分为放射免疫分析、酶标记免疫分析、荧光标记免疫分析、化学发光标记免疫分析、胶体金标记免疫分析技术，它们之间具有相同点，也有不同之处，现将其归纳如下。
一、相同点主要包括以下几个方面：1、均具有高特异性。
五种免疫标记技术的免疫技术都是采用抗原抗体反应，而抗原与抗体的结合是一一对应、特异性结合的，故它们都具有非常高的特异性。
2、均具有高灵敏性。
由于五种免疫标记技术的标记技术均采用示踪物标记，例如酶、放色性核素、荧光素、胶体金以及致密物质等，当与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体复合物本身，只需测定复合物中的标记物，通过化学或物理的手段使不见的反应放大，转化为可见的、可测知的光、色、电、脉冲等信号，并可借助仪器精密测定，从而间接测出微量的抗原或抗体。
3、检测对象相同。
除了放射免疫技术只能检测抗原外，其他四种免疫标记技术均可检测抗原或者抗体，即通过已知抗原(或抗体)特异性结合待测抗体（或抗原），从而定性或定量地测出抗体或抗原。
4、免疫标记的程序基本相同。
其包括纯化抗原或抗体、确定标记物质（即决定了最终的检测方式）、进行标记、对标记产物分离纯化和分析鉴定等一系列程序。
二、不同点主要包括以下几个方面：1、检测原理不一样。
首先，酶免疫技术是以酶标记的抗体（或抗原）作为主要试剂，将抗原-抗体反应的特异性和酶催化底物反应高效性和专一性结合起来的一种免疫方法，其对作为标记用的酶具有特定的要求，如活性高、纯度高等；放射免疫标记技术是以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法；免疫荧光技术是以荧光素作为标记物与已知的抗体或抗原结合，然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂，用于检测和坚定未知的抗原，其对用于标记的荧光素也有特定的要求，如荧光效率高，与蛋白质结合稳定，易于保存等；发光免疫分析技术是将发光分析与免疫反应相结合而建立的一种新型超微量分析技术，它是使用发光剂标记抗体（或抗原），通过发光检测抗原（或抗体）反应的免疫分析方法；免疫胶体金标记技术则是以胶体金作为示踪标记物，而胶体金在碱性环境中带负电荷，与抗体蛋白质分子的正电荷基团因静电而形成牢固结合应用于抗原抗体反应的一种新型免疫检测方法。
被动凝集法、间接免疫荧光法和胶体金法联合检测肺炎支原体抗体对儿童肺炎支原体感染的诊断价值
应用研究被动凝集法、间接免疫荧光法和胶体金法联合检测肺炎支原体抗体对儿童肺炎支原体感染的诊断价值王居鹏1，2，朱黎娜2，马明坤2，陈慧3，郭素香3，任丽1△摘要：目的分析被动凝集法（PA）、间接免疫荧光法（IFA）和胶体金法（GICT）联合检测对儿童肺炎支原体（MP）感染的诊断价值。
方法选取进行MP抗体检测的患儿617例，以临床诊断为判断标准，分为MP感染组（345例）和非MP感染组（272例）。
所有患儿均经PA检测MP总抗体，经IFA和GICT检测MP-IgM抗体。
分析PA、IFA和GICT 这3种方法单独检测及两两联合检测与临床诊断的一致性，受试者工作特征（ROC）曲线评价其对MP感染的诊断价值，分析PA联合IFA检测2组患儿抗体情况。
结果MP感染组PA检测MP总抗体、IFA和GICT检测MP-IgM抗体的阳性率较非MP感染组高（P＜0.01）。
PA检测MP总抗体的阳性检出率高于IFA和GICT检测MP-IgM抗体的阳性检出率（P＜0.01）。
PA联合IFA与临床诊断为中度一致（Kappa值=0.41，P＜0.05）。
3种方法单独检测和两两组合检测中PA联合IFA的曲线下面积、敏感度、总符合率、阴性预测值最高，阴性似然比最低。
GICT单独检测特异度最高。
IFA单独检测阳性预测值和阳性似然比最高。
当MP-IgM抗体阳性时，MP感染组23.44%的患儿总抗体滴度＜1︰160，非MP感染组47.22%的患儿总抗体滴度≥1︰160。
当MP-IgM抗体阴性时，MP感染组91.91%的患儿MP总抗体滴度≥1︰160，非MP感染组有73.50%的患儿总抗体滴度＜1︰160。
结论PA和IFA联合检测可为临床诊断儿童MP 感染提供更客观、准确的检测结果。
关键词：肺炎支原体；儿童；胶体金；免疫球蛋白M；荧光抗体技术，间接；被动凝集法；间接免疫荧光法中图分类号：R446文献标志码：A DOI：10.11958/20212561Diagnostic value of particle agglutination,indirect immunofluorescence assay and immunecolloidal gold technique combined detection for Mycoplasma pneumoniae antibody inchildren with Mycoplasma pneumoniae infectionWANG Jupeng1,2,ZHU Lina2,MA Mingkun2,CHEN Hui3,GUO Suxiang3,REN Li1△1Department of Clinical Laboratory,Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,National Clinical ResearchCenter for Cancer;Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy,Tianjin;Tianjin's Clinical Research Center for Cancer, Tianjin300060,China;2Department of Clinical Laboratory,3Department of Pediatrics,Second TeachingHospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine△Corresponding Author E-mail:*************.cnAbstract:Objective To analyze the diagnostic value of particle agglutination(PA),indirect immunofluorescence assay(IFA)and immune colloidal gold technique(GICT)combined detection for Mycoplasma pneumoniae(MP)infection in children.Methods A total of617children were selected for MP antibody detection,and children were divided into the MP infection group(345cases)and the non-MP infection group(272cases)based on clinical diagnosis.All the children were detected MP total antibody by PA,and MP-IgM antibody by IFA and GICT.The consistency of PA,IFA and GICT detection alone or in combination with clinical diagnosis was analyzed.The diagnostic value of receiver operating characteristic(ROC) curve in the diagnosis of MP infection was evaluated,and the antibody detection of PA combined with IFA was analyzed.Results The positive rate of total MP antibody detected by PA and MP-IgM antibody detected by IFA and GICT was higher in the MP infected group than those in the non-MP infected group(P＜0.01).The positive rate of total MP antibody detected by PA was significantly higher than MP-IgM antibody detected by IFA and GICT(P＜0.01).PA combined with IFA was moderately consistent with clinical diagnosis(Kappa=0.41,P＜0.05).The area under the curve of the diagnostic value,基金项目：国家自然科学基金资助项目（81904250）；天津市教委科研计划项目（2019KJ045）作者单位：1天津医科大学肿瘤医院检验科（邮编300060），国家肿瘤临床医学研究中心；天津市“肿瘤防治”重点实验室；天津市恶性肿瘤临床医学研究中心；2天津中医药大学第二附属医院检验科，3儿科作者简介：王居鹏（1990），男，主管技师，主要从事临床免疫学相关研究。
免疫标记技术
常用的酶及其底物 酶 辣根过 氧化物 酶 (HRP) 底物
邻苯二胺 (OPD) 四甲替联苯胺 (TMB) 5氨基水杨酸 (5AS) 邻联苯甲胺 (OT) 2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并噻 唑啉磺酸-6)铵盐 (ABTS )
显色反应 测定波长
橙红色 蓝绿色 棕色 蓝绿色
蓝绿色
492 450 449 425 642
酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可导致大 量的催化过程，所以极为敏感。它的催化过程 有两种基本形式： (1)E十S →(ES)→E十P (2)E十S →＝(ES) (ES)十D1 →E十P十D2 E为酶，S为酶作用的底物，P为底物分解 后的产物，D，为供氢体，D：为D1的氧化型。 如P或D：为有色化合物，即可用呈色反应显示 酶的存在。
HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2) 和供氢体(DH2)。供氢体多为无色的还原型 染料，通过反应可生成有色的氧化型染料 (D)。酶促反应的过程如下: HRP DH2＋H2O2────→D＋2H2O
供氢体的种类很多，形成的产物特点不一。如 DAB(3.3－二氨基联苯胺)的反应产物为不溶性沉 淀物，并有电子密度，故适宜于做免疫酶染色或 电镜观察。5AS(5-氨基水杨酸)早期曾用于ELISA， 但其溶解度不够大，且空白孔不易控制到无色， 现已很少应用。OT(邻联甲苯胺)的特点是能产生 鲜艳的蓝绿色产物且灵敏度较高，但反应中受温 度影响较大，而且由于产物不稳定，需要在短时 间内进行测定。
荧光是指一个分子或原子吸收了给 予的能量后，即刻引起发光；停 止能量供给，发光亦瞬即停止。 荧光素是一种能吸收激发光的光能 产生荧光，并能作为染料使用的 有机化合物。目前用于标记抗体 的荧光素主要有异硫氰酸荧光黄 (FITC)、四乙基罗丹明及四甲基 异硫氰酸罗丹明。
胶体金免疫层析技术
金 1971年胶体金被 第一次用于电镜免疫胶体金染色法(IGS)
观察沙门氏菌 1974年Romano将胶体金标记在第二抗体（马抗人IgG）上， 建立了间接免疫胶体金染色法
1978年geoghega发现了胶体金标记物在光镜水平的应用
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
什么叫胶体金免疫层析技术
胶体金免疫层析技术就是以胶体金 为显色媒介，利用免疫学中抗原抗 体能够特异性结合原理，在层析过 程中完成这一反应，从而达到检测 的目的。
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胶体金免疫层析中的三大技术
+ 胶体金技术： 为诊断提供肉眼可见的显色媒介
◊ 20世纪90年代初，第一个免疫层析产品诞 生——用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)的测 定。
◊ 在其后的20年中，免疫层析产品得到了快 速的发展：
项目 早孕检测 毒品检测 疾病检测
所占百分比 90%以上 80-90% 30-40%
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胶体金免疫层析技术的特点
◊ 快速，定性 10分钟以内就可得到检测结果。
+ 膜技术 原料的固化载体，层析的动力来源
+ 免疫学技术 特异性的检测样本中需要检测物质
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胶体金技术
什么叫胶体金： 胶体金是一群以
胶体状态，粒径在 微米级以下的悬浮 于水溶液中的金的 颗粒。
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胶体金发展历史
古代： 用于提炼长生不老药物； 玻璃染色。
◊ 无需设备 一根检测条就能完成检测
◊ 准确、灵敏 灵敏度可以达到10-9数量级
胶体金法和免疫荧光法检测血浆肌钙蛋白I的比较
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胶 体 金 法 和 免 疫 荧 光 法 检 测 血 浆肌 钙 蛋 白 Ｉ 比较 的
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胶体金制备注意事项及应用
胶体金制备注意事项及应用一、胶体金的稳定性及免疫胶体金的贮存胶体金具有很高的动力学稳定性，在稳定因素不受破坏时自身凝聚极慢，可放置数年不发生凝聚。
影响稳定的因素主要有电解质、溶胶浓度、温度、非电解质等。
金溶胶必须有少量电解质作稳定剂，但浓度不宜过高。
高浓度亲水性非电解质能剥去胶粒外面的水化膜使其凝聚。
少量的高分子物质促使溶胶凝聚，但一定量的高分子物质反而可增加溶胶稳定性，如蛋白质、葡萄糖、PEG20000等的加入有良好的稳定效果。
当金溶胶吸附蛋白质后，溶胶的稳定性随溶液pH而变化，而这种变化又取决于吸附蛋白质的等电点，如ConA，过氧化物酶等，当pH较低时保持稳定，提高pH则显得不稳定，接近等电点或略高时又变得稳定了。
标记后的胶体金溶液可用0.2～0.5mg/m l PEG20000 作为稳定剂。
在4～10℃ 贮存数月有效，不宜冰冻。
贮存中可能会发生程度不同的凝聚，可离心除去。
二、制备高质量胶体金的注意事项（1）玻璃器皿必须彻底清洗，最好是经过硅化处理的玻璃器皿，或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿，再用双馏水冲洗后使用。
否则影响生物大分子与金颗粒结合和活化后金颗粒的稳定性，不能获得预期大小的金颗粒。
（2）试剂、水质和环境：剂配制必须保持严格的纯净，所有试剂都必须使用双馏水或三馏水并去离子后配制，或者在临用前将配好的试剂经超滤或微孔滤膜（0.45µm）过滤，以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。
氯金酸极易吸潮，对金属有强烈的腐蚀性，不能使用金属药匙，避免接触天平称盘。
其１％水溶液在４℃可稳定数月不变。
实验用水一般用双蒸馏水。
实验室中的尘粒要尽量减少，否则实验的结果将缺乏重复性。
金颗粒容易吸附于电极上使之堵塞，故不能用pH电极测定金溶液的pH值。
为了使溶液pH值不发生改变，应选用缓冲容量足够大的缓冲系统，一般采用柠檬酸磷酸盐(p H3～5.8)、Tris-HCL (pH5.8～8.3)和硼酸氢氧化钠(pH8.5～10.3)等缓冲系统。
临床免疫学检验(名解及答题)
临床免疫学检验【名词解释】1、enzyme immunoassay（EIA）酶免疫分析技术，是以酶标记的抗体（抗原）作为主要试剂，将酶高效催化反应的专一性和抗原抗体反应的特异性相结合的一种免疫标记检测技术。
2、colloidal gold immunoassay胶体金免疫技术，是以胶体金作为示踪标记物或显色剂，应用于抗原抗体反应的一种标记免疫测定技术。
3、immunoblot test（IBT）免疫印迹试验，是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的技术。
4、precipitation reaction沉淀反应，指可溶性抗原与相应抗体在适当的条件下发生特异性结合而出现可见的沉淀现象。
5、agglutination reaction凝集反应，指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。
6、immunogen免疫原，指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。
7、adjuvant （immunoadjuvant）佐剂（免疫佐剂），指预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答的类型的物质。
8、hapten半抗原，指仅有抗原性而无免疫原性的物质。
如多糖、多肽、类脂和核酸等物质。
9、monoclonal antibody（McAb）单克隆抗体，设法将单个B细胞分离出来加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生出针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，称为单克隆抗体。
10、Polyclonal antibody（PcAb）多克隆抗体，亦称免疫血清，用抗原以不同途径免疫动物，从动物血清中获取抗体，该类含有抗体的血清称为抗血清。
由于免疫动物的抗原往往具有多种抗原表位，可激活体内多个B细胞克隆产生针对抗原多种表位的混合抗体，因而抗血清也称为多克隆抗体。
11、tumor antigen肿瘤抗原，指细胞癌变过程中新出现的或异常表达的抗原物质。
免疫学实验 胶体金、免疫荧光
结果判断
TC
阳性 阴性 无效
实验结果
结果报告
待测标本HCG检测
性
阳性：两条紫红色条带出现。一条 位于测试区（T）内，另一条位于质 控区（C）。表明已怀孕
阴性：仅质控区（C）出现一条紫红 色条带，在测试区（T）内无紫红色 条带出现。表明未怀孕。
实验七、胶体金、免疫荧光
实验内容
一步金法早早孕妊娠诊断
一步金法早早孕妊娠诊断
实验原理 实验方法 实验结果与讨论 思考题
胶体金免疫层析
胶体金纸条诊断是采用胶体金免 疫层析技术研制而成。该技术是 90年代初在免疫渗滤技术的基础 上建立的一种简易快速的免疫学 检测技术，最先用于人绒毛膜促 性腺激素（HCG）的测定和乙型 肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等 的测定。
子宫肿瘤、葡萄胎或更年期病人，因 尿中HCG含量较高，可能会出现阳性 结果。
注意事项
（1）打开层析条包装后应在1h 内应用。
（2）将层析条插入样品中，样 品的液面不能超过试剂条的标记 线。
思考题
1、试述一步金法早早孕妊娠 诊断实验原理
2、金标法的优缺点？
胶体金标记原理
胶体金在碱性条件下带负电荷， 与蛋白质分子正电荷基团籍静电 吸引而形成牢固结合，
胶体金免疫层析
胶体金纸条诊断是采用胶体金免 疫层析技术研制而成。该技术是 90年代初在免疫渗滤技术的基础 上建立的一种简易快速的免疫学 检测技术，最先用于人绒毛膜促 性腺激素（HCG）的测定和乙型 肝炎病毒表面抗原（HBsAg）等 的测定。
实验结果
弱阳性：5min内测试区（T）出现的 红色条带颜色浅于质控区的条带。表 示可疑，2天后重新检查，以免漏检
免疫胶体金技术在医学检验领域的运用
免疫胶体金技术在医学检验领域的运用摘要：免疫胶体金技术在医学领域中，具有广泛的运用前景。
文章对免疫胶体金技术进行介绍，同时探究了该项技术在医学检验领域的运用开展简单分析，对免疫胶体金技术的定性、定量的检测进行分析，并对该技术医学方面开展详细阐述。
关键词：免疫胶体金技术；医学检验；领域免疫胶体金技术是将胶体金作为示踪物，并放于硝酸纤维素载体中行过滤（滤膜），毛细血管作用下标记抗体（抗原），可在滤膜上特异性与配体结合，以此产生了显色（阳性）。
所以采用这种方法可进行抗原、抗体的定性、定量、半定量的检测[1]。
1 免疫胶体金技术检测分析1.1 定性检测免疫胶体金技术运用成熟，主要包括斑点免疫金渗滤-DIGFA、胶体金免疫层析-GICA这两种方法。
在医学领域中，这两种方法运用都比较成熟，主要优势在于有着较高的灵敏度，且检验时间不长，同时操作简单，在医学领域中常用[2]。
1.2 定量及半定量检测胶体金本身颜色为粉红或红色，可以通过肉眼及光学传感器，对检测色彩深浅度判断，达到定量以及半定量检测目的[3]。
2 免疫胶体金技术在医学领域中的运用2.1 DIGFADIGFA称之为斑点免疫金渗滤-DIGFA。
初次的筛选实验过程中，斑点免疫金渗滤-DIGFA是一种有效的方法。
在症状诊断中运用较好，且效果得到了肯定，目前运用前景好。
有研究人员在血清梅毒抗体检验方法选择时，运用斑点免疫金渗滤-DIGFA的特异度达到了百分百，灵敏度也高达94%。
效果明显。
同时，在粪便隐血检验运用中，与常用的邻苯胺法相比，斑点免疫金渗滤-DIGFA灵敏度以及抗干扰力更理想[4]。
2.2 GICAGICA称之为胶体金免疫层析-GICA。
在免疫层析检验法兴起的时代下，该方法起源上个世纪90年代末，使用者运用该技术进行阴道的念珠菌检测，具有极高的灵敏度以及特异性，这表现出的检验性质与传统的技术相比，效果更优。
该方法的现场检测可快速开展，效果好。
有研究者在诊断急性心肌梗死时，运用心肌三联胶体金法、心肌酶谱检测法，肌酸激酶同工酶灵敏度96.3%、肌钙蛋白灵敏度85.2%、肌红蛋白灵敏度100%，这说明了胶体金免疫层析技术联合运用法，在临床上诊断心肌梗死价值更实用，效果更好。
扫描电镜胶体金实验步骤
扫描电镜胶体金实验步骤扫描电镜（Scanning Electron Microscope, SEM）是一种常用的高分辨率显微镜，可用于观察样品表面的形貌和微观结构。
胶体金是一种常用的探针，可用于增强扫描电镜中的样品表面信号。
下面是一种扫描电镜胶体金实验的步骤：1. 准备样品：选择所需观察的样品，并进行固定和制备。
固定样品的方法因样品的性质而异，可以使用化学固定（如用福尔马林固定生物样品）或物理固定（如用冷冻固定保留样品中的结构）等方法。
制备样品包括将样品切割成适当尺寸，通常在1x1 cm的方形抛光样品盘上固定。
2.抛光样品：使用一系列研磨纸（从较粗砂纸到较细砂纸）和抛光嵌脂片，将样品抛光至光滑平整。
抛光的目的是去除样品表面的凹凸和粗糙部分，以便获得更清晰的图像。
3.制备胶体金：取一小量胶体金溶液，并进行适当的稀释。
稀释的目的是使胶体金颗粒分散均匀，并降低胶体金对样品表面的覆盖程度，以便获得更高的图像对比度。
4.涂覆胶体金：将制备好的胶体金溶液滴于样品表面，并等待一段时间，通常为5-10分钟。
胶体金颗粒会在样品表面吸附，并形成一层较为均匀的覆盖层。
过长或过短的时间都可能导致胶体金覆盖量的不均匀。
5.冲洗样品：将涂覆了胶体金的样品轻轻地冲洗干净，以去除未被吸附的胶体金颗粒。
此步骤旨在使胶体金颗粒仅留在样品表面，增加信号对比度。
6.干燥样品：将样品在环境温度下静置，使其自然干燥。
可以使用氮气吹干或真空冷冻干燥器加速干燥过程。
注意尽量避免过渡干燥的情况，以免导致胶体金颗粒脱落。
7.导入扫描电镜：将干燥的样品安置在扫描电镜的样品台上，并通过样品台的固定装置将其固定。
确保样品与电子束的对准正确，以获得清晰的图像。
8.调整参数：根据样品的特性和所需的分辨率，调整扫描电镜的参数，如加速电压和探针电流等。
一般来说，加速电压越高，分辨率越好，但也容易导致样品损伤。
探针电流的选择要根据样品的性质和信号强度等因素来确定。
免疫荧光法在肺炎支原体感染中的检验价值分析
免疫荧光法在肺炎支原体感染中的检验价值分析摘要：目的：探讨免疫荧光法在肺炎支原体感染中的检验价值。
方法：研究对象为2021.9月-2022.9月我院收治的75例呼吸道感染患者，全部患者均接受免疫荧光法、被动凝集法、化学发光法测定，将聚合酶链反应（PCR）联合测序法、X线诊断、血清学指标等综合诊断结果作为金标准，比较不同检测方法诊断肺炎支原体感染的效果。
结果：免疫荧光法与临床综合诊断结果具有较好的一致性（Kappa=0.760，P＜0.001）；被动凝集法与临床综合诊断结果的一致性一般（Kappa=0.425，P＜0.001）；化学发光法与临床综合诊断结果的一致性较差（Kappa=0.325，P＜0.001）。
结论：与其他方法相比，免疫荧光法在肺炎支原体感染中具有较高的检验价值，能够提高诊断准确性，为临床诊治提供重要依据。
关键词：肺炎支原体感染；免疫荧光法；检验价值肺炎支原体感染患者多伴有头痛、发热、乏力、肌肉酸痛等症状，随着病情持续进展，可导致多系统、多器官损害，对患者的健康造成严重威胁。
早发现、早诊断、早治疗对于改善患者预后具有重要意义。
目前临床对该疾病的诊断主要采用实验室诊断方法，常用的方法有免疫荧光法、被动凝集法、化学发光法等[1]。
免疫荧光法主要指间接免疫荧光法，能够用于自身抗体检测，快速检出及鉴定病原体；被动凝集法操作便捷，对设备要求较低，能够有效鉴定病原体；化学发光法能够区分免疫球蛋白G（igG）和免疫球蛋白M（IgM），上述几种方法在肺炎支原体感染诊断中均具有一定的价值[2]。
但是目前临床关于不同诊断方式的差异性存在一定的差异，本研究对不同方法诊断肺炎支原体感染的价值进行分析。
详细内容如下。
1.资料与方法1.1 一般资料研究对象为2021.9月-2022.9月我院收治的75例呼吸道感染患者。
男、女例数分别为41例和34例，年龄区间22-65岁，平均（40.27±5.09）是。
荧光胶体金法
荧光胶体金法1.抗体的荧光标记法荧光抗体标记技术是将荧光素以化学方法与特异性抗体共价结合，形成荧光素-蛋白质结合物（即荧光标记抗体），此结合物仍保留着抗体活性，同时具有荧光素的示踪作用。
当它与相应的抗原特异结合后，借助于荧光显微镜观察呈现明亮的特异荧光。
实验中常用异硫氰基荧光黄（fluorescein isothiocyanate, FITC）作为标记物，在碱性溶液中，FITC上的化学基团异硫氰基（-N=C=S）与抗体蛋白自由氨基（主要是赖氨酸的ε-氨基）结合，形成荧光抗体，以测定细胞相应抗原的存在。
FITC具有很高的量子产量（发射光与吸收光的比值,0 .85），而且形成的偶联物的稳定性很好。
FITC是应用最广的荧光染料，流式细胞仪就按FITC 的特性，设计了激光波长为488 nm,很接近于FITC的最大激发波长492nm）。
作为标记的荧光素应符合以下要求：应具有能与蛋白质分子形成共价健的化学基团，与蛋白质结合后不易解离，而未结合的色素及其降解产物易于清除。
荧光效率高,与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率。
荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。
与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质，与蛋白质的结合物稳定，易于保存。
标记方法简单、安全无毒。
操作步骤：用碳酸氢钠缓冲液pH9.8稀释抗体为1-5mg/ml，或抗体对该缓冲液充分透析，以足以使赖氨酸不解离（去其正电荷），但注意保持大部分蛋白质仍未变性；将透析袋放入100ml 含0 .1 mg/ml 的pH9.8碳酸氢钠缓冲液（新配制）的烧杯中，用铝铂包烧杯以避光，4℃搅拌过夜；上述抗体液对PBS在4℃透析以终止反应。
其间至少更换PBS液三次，直致480nm 的吸收为零；加入0.5g/L 的叠氮钠。
此后，结合物在4℃避光保存，或分装后在－20℃冻存。
荧光偶联质量的检测：用标准免疫荧光染色试验以测定偶联率。
或用F/P值测定对其FITC标记质量进行鉴定。
带你了解免疫荧光微生物检测
带你了解免疫荧光微生物检测免疫荧光法是生物医学领域里至关重要的检测技术之一，它能迅速地检测到各种样品中所存在的微生物，其中包括但不仅限于血液，体液，食物及环境。
用特异性抗体鉴定细胞表面特征以达到检测微生物目的，是高灵敏，高精度和快速检测手段。
它将免疫学方法与荧光标记技术相结合，探索特异性蛋白抗原的细胞分布规律，能对对细胞抗原的高精度定位，为疾病预防提供了一种新手段，被广泛应用于检测和鉴定食品、药品、化妆品等产品中的病原微生物。
不仅具有快速检验的特点，而且在敏感度和特异度方面均表现出较高的水平，因此已成为诊断学中最为常用的方法之一，那你知道免疫荧光法的基本原理是什么吗？检测范围以及有点有哪些吗？免疫荧光检测微生物的价值是什么吗？下面我们一起了解一下。
一、免疫荧光法的基本原理免疫荧光法是一种分子生物学的检测技术，其基本原理在于将已知的抗原或抗体标记上的荧光素制成荧光标记物标记的抗体与微生物的表面抗原结合，然后利用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体），从而生成荧光标记的免疫复合物。
该原抗体复合物含有荧光素，当荧光素受到激发光的照射时，会发出明亮的荧光（黄绿色或桔红色），从而可以清晰地看到荧光所在的细胞或组织，进而确定抗原或抗体的性质和位置。
随着生物分析和分子生物学研究的发展，免疫分析法已经成为了现代临床医学检验的一个非常有前景的手段之一。
二、检测范围及优点1.检测范围（1）血清学检测。
可以采用免疫荧光技术来检测血液中的微生物。
血液样本可用于检测多种血清反应，包括但不限于肝炎病毒、艾滋病病毒、莱姆病等疾病的检测。
（2）微生物特异性抗原的检测。
利用酶联免疫技术，以大肠杆菌为指示菌制备了一种可用于生物传感器的快速检测方法，并对影响灵敏度的各种因素进行了研究。
微生物特异性抗原的探测是免疫荧光技术领域中备受瞩目的另一项重要研究。
在本研究中我们采用了一种简单而又实用的方法对这些菌进行定性检测。
poct检测原理
poct检测原理
POCT具有空间小、使用方便、高效以及准确度高等多项优势，并且价格普遍偏低，对于疾病预防、确定病因和预后效果、提高治疗有效性和减少医疗成本有重大意义，能满足各级各类医疗机构临床检测需要，尤其是在国家大力推进分级诊疗和第三方检测的时候，成本低、效率高的POCT产品对基层医疗卫生机构和第三方检测机构更具吸引力。
POCT作为传统检验实验室检验方法的补充，具备检测时间短、空间不受限制和操作简单三大特色。
随着科学发展和检测技术的不断革新，POCT产品大致经历了定性、半定量、全定量和自动化共四代产品。
POCT的技术原理主要有：干化学、胶体金、免疫荧光、微流控芯片、化学发光、生物传感器、生物芯片等。
其中，干化学逐步被替代，胶体金和免疫荧光成为市场主流技术，而微流控则为未来发展的方向。
POCT技术的基本原理大致可分为四类：
（1）把传统方法中的相关液体试剂浸润于滤纸和各种微孔膜的吸水材料内，成为整合的干燥试剂块，然后将其固定于硬质型基质上，成为各种形式的诊断试剂条。
（2）把传统分析仪器微型化，操作方法简单化，使之成为便携式和手掌式的设备。
（3）把上述二者整合为统一的系统。
（4）应用生物感应技术，利用生物感应器检测待测物。
POCT（即时检验）近年来发展迅速快，主要得益于一些新技术的应用。
POCT产品的发展经历了第一代定性检测（试条试纸）；第二代半定量（色板卡比色或半定量仪器阅读）；第三代全定量系统（手工操作）；第四代技术平台（自动化信息化智能化）。
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注意事项
（1）打开层析条包装后应在1h 内应用。
（2）将层析条插入样品中，样 品的液面不能超过试剂条的标记 线。
思考题
1、试述一步金法早早孕妊娠 诊断实验原理
2、金标法的优缺点？
实验七、胶体金、免疫荧光
实验内容
一步金法早早孕妊娠诊断
一步金法早早孕妊娠诊断
实验原理 实验方法 实验结果与讨论 思考题
胶体金免疫层析
实验所用试剂全为干试剂，多个 试剂被结合在一个约 6mm*70mm的塑料板条上，试 纸条两端附有吸水材料，成为单 一试条，实验过程短，是“床边 检验”的主要方法之一。
实验原理
早早孕检测试剂采用双抗体夹心一步法 技术，以胶体金为指示标记，检测尿液 中HCG浓度。
原理
A
B
A
B
A
B
实验方法
将试纸条从冰箱中取出，置室温 下放置一定时间，让其充分复温。
取出试纸条，将有箭头的一端插 入尿液中，其深度不得超过标志 线，约5s后取出平放，5min内 观察结果。
结果判断
TC
阳性 阴性 无效
实验结果
结果报告
待测标本HCG检测
性
阳性：两条紫红色条带出现。一条 位于测试区（T）内，另一条位于质 控区（C）。表明已怀孕
阴性：仅质控区（C）出现一条紫红 色条带，在测试区（T）内无紫红色 条带出现。表明未怀孕。
实验ห้องสมุดไป่ตู้果
弱阳性：5min内测试区（T）出现的 红色条带颜色浅于质控区的条带。表 示可疑，2天后重新检查，以免漏检
无效：测试区，质控区均无红色条带 标明试验失败或者试条失效。
实验结果讨论
试剂条质控线与测试线的色带可因 尿中hCG含量多少而显现出颜色深 浅，结果判定按上述标准进行。
对照线与检测线均不出现色带，表明 发生检测错误应重试；当HCG浓度很 高时检测线很明显，对照线可能变得 很弱，为正常结果；
子宫肿瘤、葡萄胎或更年期病人，因 尿中HCG含量较高，可能会出现阳性 结果。