转 铁 蛋 白(Transferrin)测定标准操作程序SOP文件
转铁蛋白
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化验取材
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化验类别
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化验结果意 义
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化验方法
血清运铁蛋白,TF
ELISA法、RIA法： 成人：2.20～4.0g/L (220～400mg/dl) >60岁： 1.80～3.8g/L (180～380mg/dl)
(1)升高：缺铁时增高(缺铁性贫血)、铁蛋白释放增加(急性病毒性肝炎、肝细胞坏死)。
转铁蛋白
运铁蛋白
01 简介
03 相关疾病
目录
02 参考资料
转铁蛋白又名运铁蛋白 transferrin，TRF，siderophilin）是血浆中主要的含铁蛋白质，负责运载由消化 管吸收的铁和由红细胞降解释放的铁。以TRF-Fe3+的复合物形式进入骨髓中，供成熟红细胞的生成。
简介
01
别名
02
(2)降低：感染性疾病、风湿性关节炎、原发性肝癌、肾病、尿毒症、遗传性运铁蛋白缺乏症、流行性出血 热、血色病、再生障碍性贫血、慢性溶血性贫血、系统性红斑狼疮等。
血液
蛋白质测定
血液生化检查、蛋白质测定
参考资料
《新编临床检验与检查手册》、《新编化验员工作手册》
相关疾病Βιβλιοθήκη 发性肝癌感谢观看
转铁蛋白 沉淀
转铁蛋白沉淀
转铁蛋白（transferrin）本身不直接与“沉淀”这一概念关联，但在特定条件下可发生沉淀现象。
转铁蛋白是一种重要的血浆蛋白，负责运输铁离子到身体各部分。
转铁蛋白结合的铁不会催化羟基自由基形成，具有抗氧化和抗菌作用。
在某些情况下，如疾病或化疗过程中，转铁蛋白的铁结合能力可能超载，导致非转铁蛋白结合的铁离子在体内富集，这可能会影响细胞的正常功能。
在实验室研究中，转铁蛋白的测定可能涉及到使其沉淀的步骤，以便于检测和量化。
例如，在进行血浆蛋白电泳时，转铁蛋白可以作为样本的一部分被沉淀并分离出来。
此外，转铁蛋白受体在肿瘤细胞表面过度表达，且能在酸性微环境下释放包载药物，因此在肿瘤治疗中也有应用。
总的来说，转铁蛋白主要涉及铁的运输和相关生理功能，而其沉淀现象可能发生在特定的生物化学分析过程中，或者是由于病理状态下体内铁代谢的改变。
鸡蛋卵转铁蛋白铁结合能力及性质的研究
鸡蛋卵转铁蛋白铁结合能力及性质的研究杜华英，吴磊燕，朱丽琴，杨武英，蒋艳，徐明生（江西农业大学食品科学与工程学院，江西省高校天然产物研究与开发重点实验室，江西南昌 330045）摘要：本试验研究了鸡蛋卵转铁蛋白与不同浓度铁离子的结合能力，以及卵转铁蛋白在不同pH值和NaHCO3条件下与铁离子的结合能力；采用差示扫描量热仪(DSC)和圆二色性(CD)光谱分析卵转铁蛋白铁饱和度对其热变性温度和结构的影响。
结果表明，铁离子与卵转铁蛋白的摩尔比值在2.2左右时，卵转铁蛋白铁达到完全饱和；在中性和偏碱性的条件下，卵转铁蛋白对铁结合能力比较高；卵转铁蛋白铁结合能力随着NaHCO3浓度的增加而增强，当其浓度超过75 mmol/L以后，铁结合能力基本保持不变。
卵转铁蛋白铁饱和度越高，其热变性温度越高，由去铁卵转铁蛋白的63.41℃到饱和铁卵转铁蛋白的83.29 ℃；去铁卵转铁蛋白比饱和铁卵转铁蛋白的远紫外CD光谱带更加趋于负值，α-螺旋含量有微小的减少，减少量为4.40%，而β-折叠、β-转角和其它的含量均有所增加，增加量分别：2.80%、1.20%、12.90%；在近紫外CD光谱区，饱和铁卵转铁蛋白的三级结构发生了较为明显的变化。
关键词：卵转铁蛋白；铁结合能力；热变性温度；结构文章篇号：1673-9078(2015)4-109-114 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.4.018 Analysis of the Iron-binding Capacity and Characteristics of Hen Egg Ovotransferrin under Different ConditionsDU Hua-ying, WU Lei-yan, ZHU Li-qin, YANG Wu-ying, JIANG Y an, XU Ming-sheng(College of Food Sci-Eng, Jiangxi Agriculture University, Key Laboratory of Education in Natural Product Research andDevelopment, Nanchang 330045, China)Abstract: The binding capacity of hen egg ovotransferrin (OV T) to different concentrations of iron ions was studied under multiple pH conditions and NaHCO3concentrations. The effects of iron saturation on the thermal denaturation temperature and structure of OV T were analyzed by differential scanning calorimetry (DSC) and circular dichroism (CD) spectrum analysis. The results showed that complete iron saturation was obtained at an approximate iron ion to OV T molar ratio of 2.2. OV T exhibited higher iron-binding capacity under neutral or slightly alkaline pH conditions. The iron-binding capacity of OVT also increased with the increase in NaHCO3concentration; however, a steady-state level was reached at NaHCO3concentrations exceeding 75 mmol/L. The thermal denaturation temperature of OV T increased corresponding to the increase in iron saturation, and was observed to be 63.41 ℃and 83.29 ℃for apo-ovotransferrin (apo-OV T) and holo-ovotransferrin (holo-OV T), respectively. Apo-OVT showed a more negative band in the far-ultraviolet CD spectrum compared to holo-OV T; the α-helical content of apo-OVT decreased by 4.4%, while that of β-sheet strands, β-turns, and other structures increased by 2.80%, 1.20%, and 12.90%, respectively. The tertiary structure of holo-OV T displayed an obvious change in the near-ultraviolet region of the CD spectrum.Key words:ovotransferrin; iron-binding capacity; thermal denaturation temperature; structure转铁蛋白(Transferrin)是单一肽链的蛋白质，是人体内一种重要的铁元素载体，许多疾病都与人血清中转铁蛋白的含量变化有关，如缺铁性贫血、急性肝炎及蛋白质缺乏等。
检验科本周蛋白检测标准操作规程
检验科本周蛋白检测标准操作规程1.【检验目的】2.为了规范本周蛋白定性检测方法, 特制定本规程。
3.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP, 室负责人监督落实。
4. 2.2本SOP的改动, 可由任一使用本SOP的工作人员提出, 并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
5.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型: 新鲜尿液3.2患者准备: 患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型: 配套小便试管3.5实验试剂: 2g/L磺基水杨酸溶液。
2mol/L 醋酸盐缓冲溶液(PH4.9±0.1):取醋酸钠(CH3COONa-3H2O)17.5g,加冰醋酸4.1ml,再加蒸馏水至1ml,调PH至4.9.6.【测定原理】7.本-周氏蛋白又称凝溶蛋白, 是一种免疫球蛋白的轻链或其聚合体。
此种蛋白在一定的PH条件下加热至40-60P时沉淀发生, 温度升高至1P时, 沉淀消失, 再冷却时又可重现沉淀。
8.【操作步骤】5.1将尿液用磺基水杨酸法作蛋白定性检查, 如呈阴性反应, 也需对尿液标本中本-周氏蛋白进一步检测。
9. 5.2取透明尿液4 ml于试管中, 再加入乙酸缓冲液1 ml, 混匀后放置56P水浴中15分钟, 如有浑浊或出现沉淀, 再将试管放沸水中煮沸3分钟, 观察试管中浑浊或沉淀的变化。
如浑浊变清、减弱或沉淀减少均提示本-周氏蛋白阳性。
若煮沸后, 浑浊增加或沉淀增加, 表明此尿液中还有其他蛋白质, 此时应将试管从沸水中取出, 立即过滤, 如滤液开始透明, 温度下降后浑浊, 再煮沸时又透明, 提示本-周氏蛋白为阳性。
10.【结果计算与判断】如浑浊变清, 浑浊减弱或沉淀减少, 均提示本-周氏蛋白阳性。
11.若煮沸后, 浑浊增加或沉淀增多, 表明此尿液中还有其他蛋白质, 此时应将试管从沸水中取出, 立即过滤。
如过滤开始透明, 温度下降后浑浊, 再煮沸时透明, 提示本-周氏蛋白为阳性。
转铁蛋白检测操作方法
转铁蛋白检测操作方法
转铁蛋白检测是一种常用的实验方法，用于检测样品中的转铁蛋白含量。
以下是转铁蛋白检测的操作方法：
1. 准备试剂：
a. 细胞裂解液或组织液样品
b. 酸性显色试剂：通常使用巴比特酸或戊二酰亚胺溶液作为酸性显色试剂
2. 样品预处理：
a. 首先，对细胞裂解液或组织液样品进行蛋白质浓度测定，以确保样品在检测范围内。
b. 将样品稀释至合适的浓度，以避免过高的浓度影响检测结果。
3. 进行转铁蛋白检测：
a. 取一部分样品，加入相应的试管或微孔板中。
b. 加入酸性显色试剂，将样品与显色试剂混合。
c. 在适当的温度下孵育反应混合物一段时间，使其发生显色反应。
d. 制备一个空白对照组，其中只包含显色试剂。
e. 使用分光光度计测量每个样品的吸光度，并记录吸光度值。
4. 数据分析：
a. 根据测量的吸光度值绘制标准曲线，曲线上吸光度值与已知转铁蛋白浓度
之间的关系。
b. 将样品的吸光度值与标准曲线进行比较，从而确定样品中转铁蛋白的浓度。
需要注意的是，转铁蛋白检测方法会因实验室和试剂的差异而有所不同。
因此，具体的操作步骤可能会有所不同，建议参考所使用试剂盒的说明书或咨询相关专业人士进行操作。
转铁蛋白应用
转铁蛋白（Transferrin）Cas；11096-37-0转铁蛋白是血液中一种主要的糖蛋白, 负责将肝组织(是铁贮藏的主要场所)的铁向其它组织的细胞运输。
没有结合铁的转铁蛋白称作脱铁转铁蛋白(apotransferrin), 它能够紧紧结合两个Fe3 , 此时称为铁结合转铁蛋白(ferrotransferrin)。
所有生长中的细胞表面都有铁结合转铁蛋白的受体,在中性pH条件下转铁蛋白与铁结合, 然后通过内吞作用进入细胞。
在细胞内,在内体的酸性环境下, 转铁蛋白释放出铁, 但是仍与膜受体结合在一起, 并与受体一同回到质膜。
当细胞外环境变成中性时, 转铁蛋白同受体脱离,并自由地结合铁, 然后又开始新一轮循环。
实际上, 转铁蛋白穿梭于细胞外液体和内体之间, 避开了溶酶体, 快速传递细胞生长所需的铁。
基本简介转铁蛋白（transferrin，TRF，siderophilin）是血浆中主要的含铁蛋白质，负责运载由消化管吸收的铁和由红细胞降解释放的铁。
以TRF-Fe3+的复合物形式进入骨髓中，供成熟红细胞的生成。
TRF分子量约7.7万，为单链糖蛋白，含糖量约6%。
TRF可逆地结合多价离子，包括铁、铜、锌、钴等。
每一分子TRF可结合两个三价铁原子。
TRF主要由肝细胞合成，半寿期为7天。
血浆中TRF的浓度受铁供应的调节，在缺铁状态时，血浆TRF浓度上升，铁有效治疗后恢复到正常水平。
血浆中TRF水平可用于贫血的诊断和对治疗的监测。
在缺铁性的低血色素贫血中TRF的水平增高（由于其合成增加），但其铁的饱和度很低（正常值在30%-38%）。
相反，如果贫血是由于红细胞对铁的利用障碍（如再生障碍性贫血），则血浆中TRF正常或低下，但铁的饱和度增高。
在铁负荷过量时，TRF水平正常，但饱和度可超过50%，甚至达90%。
TRF在急性时相反应中往往降低。
因此在炎症、恶性病变时常随着白蛋白、前白蛋白同时下降。
在慢性肝疾病及营养不良时亦下降，因此可以作为营养状态的一项指标。
生化室操作规程
(4)对稳定性较短的质控品，均值的建立可在3至4天内，每天分析每水平质控品3至4瓶，每瓶进行2至3次重复。收集数据后，计算平均数、标准差和变异系数。对数据进行离群值检验(剔除超过3s的数据)。如果发现离群值，需重新计算余下数据的平均数和标准差。以此均值作为质控图的均值。至于标准差，可采用以前变异系数(CV)来估计新的标准差。以前的标淮差是几个月数据的简单平均或甚至是累积的标准差。这就考虑了检测过程中更多的变异。标准差等于平均数乘以以前变异系数(CV％)。
纤维蛋白原(Fib)测定操作规程
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NYEY-JYK-SOP-SH-08
粘蛋白(mPr)测定操作规程
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NYEY-JYK-SOP-SH-09
尿、脑脊液蛋白(Pro)测定操作规程
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NYEY-JYK-SOP-SH-10
钾(K+)测定操作规程
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钠（Na+）测定操作规程
4.1室内质控出控时，应填写失控报告单，并上交专业主管，由专业主管做出是否发出与测定质控品相关的那批患者标本检验报告并分析及登记失控原因。 失控信号的出现受多种因素的影响，这些因素包括操作上的失误、试剂、校准物、质控品的失效，仪器维护不良以及采用的质控规则、质控限范围、一次测定的质控标本数等等。
4.2失控信号一旦出现就意味着与测定质控品相关的那批患者标本报告可能作废。此时，首先要尽量查明导致的原因，然后再随机挑选出一定比例(例如5％或10％)的患者标本进行重新测定，最后根据既定标准判断先前测定结果是否可接受，对失控做出恰当的判断。对判断为真失控的情况，应该在重做质控结果在控以后，对相应的所有失控患者标本进行重新测定。如失控信号被判断为假失控时，常规测定报告可以按原先测定结果发出，不必重做。当得到失控信号时，可以采用如下步骤去寻找原因：
生化检测-血清铁测定(SOP)
生化检测-血清铁测定（SOP）1.目的：检测人体血清铁测定。
2.原理：2.1.方法学：络合显色比色法。
2.2.方法原理：2.2.1.本试剂与铁试剂盒配套使用，用于测定人血清中未饱和，过剩的铁用碱性碳酸镁吸附，沉淀除去，然后按测定铁同样的方法测定铁的含量及末饱和铁结合力。
2.2.2. 铁-转铁蛋白去污剂Fe3++转铁蛋白Fe3+原污剂Fe2.2.3.反应方程式：Fe3++亚铁嗪→红色络合物3.样本采集和处理：3.1.病人准备：病人应处于安静、呼吸稳定的状态，穿刺时应尽量减少病人的疼痛感。
坐位与卧位、睡眠后与清醒时、运动后与进餐后都会产生不同的结果。
3.2.样本种类：生物学的体液样本应该以同样的方式来收集，以便用来测试任何实验室中的试验。
新鲜的、刚被抽出的血清、血浆或脑脊液是最佳的样本选择。
如果用血浆作样本，最好使用草酸钾/ 氟化钠抗凝剂，因为草酸钾/氟化钠抗凝剂可制葡萄糖的酵解。
全血是不被推荐的样本。
3.3.样本采集：除非是卧床的病人，一般在静脉采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。
故在采血前至少应静坐5min 。
一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1m i n ，穿刺成功后立即松开止血带。
采3.4.样本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求（要求封密、无溶血、无杂物）所用试管是否正确、试管标签是否填写完整、并询问采血时间，对不合格标本应退回重采，并填写记录。
3.5.样本保存：3.5.1.采血管应该一直保持垂直、塞住的姿势。
血清或血浆应该立即被分离，防止溶血，避免接触到血球部分。
从采血到上机的最长时间限制是 2 小时。
3.5.2.分离的血清或血浆在 15℃～30℃的环境下不应该保存超过 8 小时。
假如测试无法在 8小时内完成时，血清或血浆应该被保存在 2℃～8℃的环境中；假如测试无法在 48小时内完成，或分离的样本无法储存超过 48 小时，样本应该冰冻在零下 15℃～20℃的环境中。
铁蛋白检测标准操作程序
铁蛋白检测标准操作程序1检验目的本试剂盒用于体外定量测定人血清和（或）血浆中的铁蛋白(FERRITIN)。
2检验原理及方法3性能特征3.1线性范围：1.0 ng/mL-1500 ng/mL；3.2最低检测限：不大于0.5 ng/mL；3.3准确度：相对偏差在±10.0%范围内；3.4重复性:重复性检测的变异系数（CV）不大于10.0%；3.5批间差:3个批号试剂批间变异系数（CV）不大于15.0%4标本4.1检测标本：血清和血浆（肝素锂、肝素钠、EDTA和柠檬酸钠抗凝）是推荐使用的样本类型。
尚未验证其他抗凝剂能否适用。
4.2采集及处理：在进行离心操作前需让血清样本完全凝结（凝结时间不小于1小时）。
所有的待测样本在测试前均应进行离心操作。
顶部含脂质的离心样本，需转移澄清、无脂质的部分到新的样本管中。
在测试前，确保已去除了残余的纤维蛋白和细胞类物质。
应小心处理患者样本，避免交叉污染。
在测试前，确保患者样本、校准品、质控品均已平衡至环境温度（20-25°C）。
为避免蒸发可能带来的影响，样本和校准品应在上机后2小时内完成测试。
4.3样品储存：在室温（20-25°C）下，样本保存时间不得超过8小时。
在室温（20-25°C）下，样本保存时间不得超过8小时。
冷冻样本在融化后必须进行充分混匀。
样本冷冻次数不得超过3次。
5设备仪器：iFlash 3000化学发光免疫分析仪。
6试剂6.1试剂：铁蛋白测定试剂盒（化学发光法）；包装量：2×50人份/盒；6.2储存要求：（1）储存：存放在2-8°C，保持竖直向上。
（2）有效期：试剂瓶及校准品未开封存放于2-8°C：可稳定365天；试剂瓶使用后存放于2-8°C或在机储存：可稳定28天。
7环境和安全7.1激发液中含有氢氧化钠，应避免接触到眼睛。
7.2在处理所有的实验室试剂时应进行常规的预防措施。
检验科生化白蛋白测定的标准程序
白蛋白测定的标准程序【目的】体外检测血清白蛋白（ALB ）的含量。
【职责】1.实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
【标本类型及实验前准备】1.受检者的准备病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况。
孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。
此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。
2.静脉采血除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
【仪器设备】东芝TBA-FX8全自动生化分析仪，低速离心机一、检测原理本试剂采用澳甲酚绿染料结合法，即在PH4.2条件下，白蛋白与澳甲酚绿结合形成蓝绿色络合物。
反应形成的蓝绿色络合物与样本中白蛋白浓度成正比。
通过在630nm处测定吸光度值的变化值，即可测得样本中白蛋白的浓度。
二、试剂1.试剂本科使用上海复星长征医学科学有限公司ALB试剂盒，为液体单试剂，其各组分如下：试剂组分澳甲酚绿0.35 mmol/L丁二酸缓冲液50 mmol/L2.校准要求2.1校准品：使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清（货号:449 5 0/4 5 9 5 0对测定进行校准。
2. 2校准间隔2. 2. 1试剂批号变更时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准后再对临床病人样本进行测定。
2. 2. 2室内质量控制出现问题时使用与试剂配套使用的复星长征临床化学校准血清对测定进行校准并确认问题得到解决后方可对临床病人样本进行测定。
三、操作按生化分析仪操作要求结合长征试剂说明书输入测定参数，并按校准、质量控制、样本测定的顺序进行常规测定。
四、计算白蛋白浓度（g/L ） 五、质控程序1. 建议采用朗道水平2（正常范围质控）和 水平3 （病理范围质控）两个水平的血清进行室内质控。
转铁蛋白 3.75
转铁蛋白 3.75转铁蛋白（Transferrin）是一种主要由肝脏合成的血浆蛋白，它在人体内起着重要的铁运输和调节作用。
转铁蛋白的分子量约为70-75 kDa，是一种急性期蛋白质，具有较高的稳定性和亲和力。
成人的转铁蛋白参考值为15-400 mg/L，转铁蛋白为3.75则有点低。
在人体内，转铁蛋白主要负责运输由消化道吸收的铁和由红细胞降解释放的铁，并将铁运送至需要铁的细胞和器官，如骨髓中的干细胞和幼红细胞。
转铁蛋白的合成主要在肝脏中进行，占全身合成量的70-80%，其余部分在骨髓、小肠和肾脏中合成。
在血液循环中，转铁蛋白以两种形式存在：与铁结合的转铁蛋白（转铁蛋白-铁复合物）和未结合铁的转铁蛋白。
转铁蛋白-铁复合物的形成和分解是维持人体铁平衡的关键过程。
铁是人体必需的微量元素，对于细胞的能量代谢、DNA合成和免疫系统功能等方面都至关重要。
然而，铁的过量积累也可能对人体造成毒害。
因此，人体需要精确地控制铁的代谢和分布。
转铁蛋白正是通过与铁的结合，帮助实现这一平衡。
当体内铁含量过多时，转铁蛋白可以结合多余的铁，防止铁的过量积累；当体内铁含量不足时，转铁蛋白可以释放铁，以满足身体对铁的需求。
在临床检验中，转铁蛋白的测定常常用于评估人体的铁代谢状况。
转铁蛋白水平的异常可能与多种疾病有关，如铁过载、贫血、肝脏疾病、恶性肿瘤等。
例如，转铁蛋白水平的升高可能表明铁负荷过重，而水平的降低可能提示铁缺乏。
对于健康成人和孕妇，转铁蛋白的正常参考范围略有不同。
一般来说，成人的转铁蛋白参考值为15-400 mg/L，转铁蛋白为3.75则有点低，而孕妇的参考值为15-300 mg/L。
转铁蛋白的测定方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、电泳、免疫扩散等。
当检测结果显示转铁蛋白水平异常时，医生可能会建议进一步的检查和评估，以确定铁代谢的具体问题，并制定相应的治疗方案。
治疗措施可能包括铁剂补充、药物治疗、饮食调整等。
总之，转铁蛋白在人体内起着重要的铁运输和调节作用。
转铁蛋白分子量
转铁蛋白分子量转铁蛋白分子量是指转铁蛋白分子中所含有的原子量总和。
转铁蛋白是一种血浆中的蛋白质，它能够结合铁离子并将其运输到身体的各个部位。
在人体内，铁是一种重要的营养元素，它参与了许多生命活动过程，如红细胞生成、氧气运输、免疫系统等。
因此，了解转铁蛋白分子量对于研究人体内铁代谢和相关疾病具有重要意义。
一、什么是转铁蛋白？转铁蛋白（Transferrin）是一种由肝脏合成并存在于血浆中的球形糖蛋白质。
它主要起到运输铁离子的作用，将从食物中吸收的铁离子或者从老化红细胞中释放出来的铁离子运输到身体需要它们的部位。
二、转铁蛋白分子量1. 转铁蛋白分子量大小转铁蛋白分子量大小约为76-80kDa（千道尔顿），其中“kDa”表示千道尔顿，是一种质量单位，相当于分子量为1的物质中含有的质量数。
转铁蛋白分子量大小因不同的基因型而异，具体范围在73-81kDa之间。
2. 转铁蛋白分子量的测定转铁蛋白分子量的测定可以通过凝胶电泳或者质谱等方法进行。
其中，凝胶电泳是一种常用的方法，具体操作步骤如下：（1）将待检测样品加入凝胶样品孔中；（2）进行电泳；（3）染色并观察。
在凝胶电泳过程中，根据不同大小和形状的蛋白质迁移速度不同，在电场作用下会向不同方向移动。
最终在电泳板上形成带状图案，通过比较标准品和待检测样品带状图案的差异来确定转铁蛋白分子量。
三、转铁蛋白与人体健康1. 转铁蛋白与缺铁性贫血缺铁性贫血是指由于身体缺乏足够的铁元素而导致红细胞生成障碍的一种贫血症。
转铁蛋白在人体内扮演着非常重要的角色，它能够将铁离子从肠道吸收到血液中，然后将其运输到身体需要的部位。
因此，转铁蛋白水平低下会导致缺铁性贫血。
2. 转铁蛋白与其他疾病除了缺铁性贫血外，一些疾病也与转铁蛋白水平异常相关。
例如：（1）遗传性黑色素沉着病：该疾病是由于转铁蛋白受损而导致的。
（2）肝功能异常：肝脏是合成转铁蛋白的主要器官，因此肝功能异常会影响转铁蛋白水平。
蛋白质测定 SOP
蛋白质含量的测定1 范围本文件适用于使用分光光度计对食品中蛋白质进行测定2原理食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解，分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵，在pH 4.8的乙酸钠-乙酸缓冲溶液中与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶化合物。
在波长400 nm下测定吸光度值，与标准系列比较定量，结果乘以换算系数，即为蛋白质含量。
3试剂和材料除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。
3.1硫酸铜（CuSO4²5H2O）。
10.2硫酸钾（K2SO4）。
3.3硫酸（H2SO4密度为1.84g/L）：优级纯。
3.4氢氧化钠（NaOH）。
3.5对硝基苯酚（C6H5NO3）。
3.6乙酸钠（CH3COONa²3H2O）。
3.7无水乙酸钠（CH3COONa）。
3.8乙酸（CH3COOH）：优级纯。
3.937% 甲醛（HCHO）。
3.10 乙酰丙酮（C5H8O2）。
3.11 氢氧化钠溶液（300 g/L）：称取30 g氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100 mL。
3.12 对硝基苯酚指示剂溶液（1 g/L）：称取0.1 g对硝基苯酚指示剂溶于20 mL 95%乙醇中，加水稀释至100 mL。
3.13 乙酸溶液（1 mol/L）：量取5.8 mL乙酸（3.8），加水稀释至100 mL。
3.14 乙酸钠溶液（1 mol/L）：称取41 g无水乙酸钠（3.7）或68 g乙酸钠（3.6），加水溶解后并稀释至500 mL。
3.15 乙酸钠-乙酸缓冲溶液：量取60 mL乙酸钠溶液（3.14）与40 mL乙酸溶液（3.13）混合，该溶液pH4.8。
3.16 显色剂：15 mL 甲醛（3.9）与7.8mL乙酰丙酮（3.10）混合，加水稀释至100 mL，剧烈振摇混匀（室温下放置稳定3d）。
3.17 氨氮标准储备溶液（以氮计）（1.0 g/L）：称取105 ℃干燥2 h的硫酸铵0.4720 g加水溶解后移于100 mL容量瓶中，并稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于1.0 mg氮。
注射用转移因子检验操作规程.概要
·目的规范注射用转移因子的检验标准程序。
·范围注射用转移因子。
·责任质量管理部、中心检验室、QC检验员。
·内容1、性状1.1取本品3支,擦净瓶外壁,目视观察,应为乳白色或微黄色。
1.2将安瓶打开,用干净针将内容物完全搅碎后倾倒在白纸板上,目视为乳白色或微黄色疏松体。
1.3取本品3支，每支用1ml注射用水溶解,然后置YB-3型澄明度检测仪的伞棚边缘处,目视观察应为无饴或微黄色澄明液体。
2、鉴别2.1鉴别用仪器紫外分光光度计2.2鉴别用试液茚三酮试液：取茚三酮2g，加乙醇使溶解成100ml，即得。
2.3鉴别步骤：2.3.1鉴别方法（一）2.3.1.1取本品5支，每支加1ml水使溶解后，移至试管中。
2.3.1.2取1ml至另一试管中,加茚三酮试液数滴，沸水浴上加热溶液应显蓝紫色。
2.3.2鉴别方法（二）2.3.2.1取本品1支，加水1.5ml溶解，再取1ml置100ml量瓶中。
2.3.2.2照UV-2401紫外分光光度计操作规程打开机器,选中扫描状态.2.3.2.3将样品放入石英比色皿中进行扫描,结果见图谱,在251±2nm(猪脾)的波长处有最大吸收, 261±2nm(猪脾)的波长处有最大吸收。
2.3.2.4取260 nm处测定吸收度,记录数值。
2.3.2.5取280 nm处测定吸收度,记录数值。
2.3.2.4取260 nm处测定吸收度与280 nm处测定吸收度比值,其比值不得低于1.9。
3、酸碱度3.1检验用仪器PHS－3C型酸度计及其复合电极。
3.2 PH标准缓冲液：将分装好的邻苯二甲酸氢钾和磷酸盐分别用新煮沸放冷的纯化水中溶解，并稀释至250ml备用。
3.3操作步骤3.3.1取本品3支，加水制成每1ml中含多肽1mg的溶液,作为供试品溶液，3.3.2打开PHS－3C型酸度计电源，将温控旋钮调至室温，稳定15分钟。
3.3.3用磷酸盐缓冲液定位，再用邻苯二甲酸氢钾缓冲液校正。
转铁蛋白测定
转铁蛋白测定转铁蛋白（Transferrin，TF）是人体中重要的铁运载蛋白之一，与铁离子安排进入红细胞前进最为关键。
转铁蛋白的生理作用是负责将铁异质质(即Fe3+)自十二指肠吸收后，从血液中转运到有铁需求的地方。
转铁蛋白在血浆中含量高达2.5mg/mL，转铁蛋白血浆浓度的升高与缺铁性贫血、阵发性夜间血红蛋白尿症、β-地中海贫血的诊断息息相关。
炎性疾病如溃疡性结肠炎、风湿性关节炎、肝炎、HIV感染等常常能导致转铁蛋白浓度增高。
由于转铁蛋白在人体内的作用非常重要，所以一个能够测定转铁蛋白水平的好的检测方法是非常重要的。
现实生活中，测定转铁蛋白浓度的最常用的方法是免疫测定法，其中包括酶联免疫吸附检测(ELISA)和放射免疫测定法(RIA)等。
免疫测定方法需要首先设计一个针对转铁蛋白的抗体。
这种抗体能够识别并结合对应的转铁蛋白分子。
在ELISA实验中，待检血清中的转铁蛋白，分别均匀地加入到钵中，然后再加入一定浓度的可吸附抗-转铁蛋白抗体，进行反应后，洗脱，加入一定浓度的标记抗-转铁蛋白抗体。
标记抗体通常是一种可以与酶反应，释放出物质让我们量化。
标记抗体结合于被分离出的转铁蛋白复合物上，然后酶检测仪可以检测到产生的光反应。
利用一些标准曲线，可以量化样品中的转铁蛋白含量。
免疫测定方法具有传统的优点，如早期问答的可靠性、操作性和准确性。
免疫方法非常适用于与转铁蛋白相关的疾病的筛查，尤其是在机器精确、过程自动化、操作简单的ELISA直读机的使用下。
然而，与传统的最佳实践一样，免疫方法确实存在一些问题。
可能会受到一些因素的影响，如样本预处理、间接测定法背景修正和具有交叉反应的其他蛋白的干扰。
熟练操作和标准规范化可以解决上述问题。
尽管免疫检测法已经被广泛使用，但这种方法的缺点是它无法进行快速定量的多个样品的测试。
转铁蛋白的飞秒超连实时荧光探针可以应用于转铁蛋白的快速检测。
这种方法非常灵敏、快速，只需要很少的样品即可完成测试。
总铁结合力铁转铁蛋白
总铁结合力铁转铁蛋白总铁结合力(Transferrin saturation，TSAT)是一个血液指标，它用于评估身体中铁的储备情况。
铁在体内的运输主要通过铁转运蛋白(Transferrin，TF)进行，因此，总铁结合力也被称为铁转铁蛋白(TF saturation)。
铁是身体必需的微量元素之一，它在体内的代谢过程中，参与血红蛋白和肌红蛋白的合成。
除此之外，铁还参与多种重要酶类的催化作用，例如维生素A和C的代谢、甲状腺素的合成、神经系统的功能维护等。
因此，铁缺乏或过多都会对人体健康造成不良影响。
铁主要以两种形式存在体内：血红蛋白中的血红素铁和肌肉蛋白中的肌肉铁。
大约70-80%的铁存储在血红蛋白中，10-20%的铁储存在肌肉蛋白中。
剩余的铁则以游离铁离子的形式存在于体内，这种形式下的铁很少，但是可以维持生理功能。
铁对身体的代谢和利用受到机体内铁调节的影响。
当身体需要铁的时候，铁的进口量增加，而当体内铁过多的时候，铁的进口量减少。
铁的进口主要受到铁转铁蛋白的调节。
铁转铁蛋白携带铁离子到身体需要铁的组织，例如骨髓中合成血红蛋白的红细胞前体、肝脏中合成铁蛋白的组织等。
在铁细胞内，铁被释放出来，转化为游离铁，然后参与到多种重要的代谢过程中。
总铁结合力(TSAT)反映身体中的铁负荷情况，它是血浆铁和铁转铁蛋白之比。
正常情况下，铁转铁蛋白几乎被铁饱和，血浆铁和铁转铁蛋白之比为20-50%。
当血浆铁增加或铁转铁蛋白减少时，总铁结合力会增加。
总铁结合力的测定可以帮助医生评估身体的铁储备情况，诊断贫血、肝病、炎症等疾病，指导铁剂量的调整和治疗效果的观察。
当总铁结合力过高时，可能意味着身体的铁储备过多，需要调整饮食或药物使用，以减轻身体对铁的吸收。
而当总铁结合力过低时，可能意味着身体缺乏铁，需要补充铁剂。
除了总铁结合力，医生还可以通过以下指标来评估身体的铁代谢情况：血清铁、铁结合力、血清铁蛋白等。
不同的指标可以提供不同的信息，医生需要综合考虑这些指标的结果，进行正确的诊断和治疗。
转铁蛋白饱和度正常值
转铁蛋白饱和度正常值
转铁蛋白（Transferrin）是一种由谷胱甘肽酸（cysteine）多肽
链组成的两性蛋白，其主要功能是运输血液中的铁离子（Fe2+）。
转
铁蛋白主要由肝细胞分泌到血液，它一般有两种形式：经过转化的铁
结合转铁蛋白（Tf-Fe）和未经转化的铁结合形式（Tf-Fe3+）。
转铁
蛋白饱和度(TSAT)是衡量转铁蛋白在血液中的能力吸收及转运铁离子
的指标，即用来测定转铁蛋白和血液中的铁离子的比例。
转铁蛋白饱和度正常值一般位于20%-50%之间，不同的定量方法会
有所差异。
正常情况下，转铁蛋白饱和度低于20%意味着铁缺乏症，超
过50%的转铁蛋白饱和度表明存在铁滞留或有慢性疾病的可能，病人可
能出现症状如乏力、新发性贫血等。
转铁蛋白饱和度评价不仅可以用于检测铁缺乏症，还可以帮助诊
断慢性肝疾病、肾病等疾病，对于血液中的铁离子的循环有重要的意义。
转铁蛋白的正常饱和度大约在600μmol/L左右，不同的定量方法
会有所不同。
并且，随着年龄的增加，转铁蛋白饱和度也会相应降低，成年人正常值较儿童小10%-20%。
鹅血中转铁蛋白质的分离纯化及其性质
第23卷第1期2004年1月 无锡轻工大学学报Journal of Wuxi U niversity of Light Industry Vol.23 No.1Jan. 2004 文章编号:10092038X (2004)0120094205 收稿日期:2003205213; 修回日期:2003207206.作者简介:冯敏杰(19782),男,江苏金坛人,粮食油脂与植物蛋白硕士研究生.鹅血中转铁蛋白质的分离纯化及其性质冯敏杰, 周惠明, 钱海峰(江南大学食品学院,江苏无锡214036)摘 要:以鹅血为原料,利用醋酸纤维膜电泳,分析鹅血中各球蛋白的质量浓度.采用DEAE 252离子交换和Sephdex G 2100凝胶层析等方法,对转铁蛋白(Transferrin ,Tf )进行了分离纯化及其性质的研究.结果表明,鹅血浆中含有较多的β球蛋白,质量浓度为34.89mg/dL ,每毫升血浆可纯化得到3.1mg 转铁蛋白.鹅血含铁转铁蛋白(holo 2Tf )的特征吸收峰为470nm ,相对分子质量为77000.鹅转铁蛋白对选用的革兰氏阴性菌2大肠杆菌有抑制作用,Fe 3+能够改变转铁蛋白的结构,并影响转铁蛋白的抑菌功能.关键词:鹅血;球蛋白;转铁蛋白中图分类号:Q 512.2文献标识码:APurif ication and Characterization of T ransferrin from G oose PlasmaFEN G Min 2jie , ZHOU Hui 2ming , Q IAN Hai 2feng(School of Food Science and Technology ,S outhern Y angtze University ,Wuxi 214036,China )Abstract :The content of globins was determined by cellulose acetate film electrophoresis.The goose plasma trasferrin was separated from goose blood by ion 2exchange on DEAE 252and sephadex gel on G 2100.The ability of apo 2Tf and holo 2Tf to damage the selected Gram 2negative bacteria and the influence of Fe 3+on antibacterial ability of transferring were studied.It was found that βglobulin was the major part of goose plasma globins and the content of βglobulin was 34.809mg/dL.The goose transferrin has antimicrobial activity against selected Gram 2negative bacteria.The molecular weight of transferrin was determined as 77000by SDS 2PA GE.The characteristic absorb peak of transferrin is 470nm.Experimental results predict that Fe 3+could change the structure of transferrin ,and this change reduce the antibacterial ability of transferrin.K ey w ords :goose plasma ;globulin ;transferrin 我国的地理位置独特,草地、湿地面积较多,很适合养鹅.由于鹅的养殖的数量很高,每年产大量的鹅血,除少部分加工成血粉和血豆腐外,大部分鹅血都没得到很好的利用.大量的鹅血直接排放到自然界中,不仅浪费了宝贵的资源,而且造成严重的环境问题.鹅血含丰富的蛋白质,有“液体肉”的美誉.近年来的研究表明,鹅血有增强机体的免疫力、抗癌[1]等功能.《本草纲目》载:“鹅血利五脏,止消渴”.鹅血中含有大量的球蛋白,其中转铁蛋白的研究引起关注.转铁蛋白是动物血清中一种传递铁的蛋白质,每个蛋白质分子能可逆地结合2个铁离子(Fe3+)[2].作者从鹅血中分离纯化出转铁蛋白,并对转铁蛋白的性质进行了研究.1 材料与方法1.1 实验材料鹅血:扬州馋神食品公司提供;DEAE252纤维素:Pharmacia进口分装;醋酸纤维膜:路桥四甲生化塑料厂生产;丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺:Sigma 进口分装;蛋白胨:中国医药集团上海生化试剂公司生产;酵母浸膏:中国医药集团上海生化试剂公司产品;低相对分子质量标样:上海生物化学研究所产品;Sephadex G2100Pharmacia进口分装;氨三乙酸(N TA):分析纯,上海金山化工厂产品.DH5αEscherichia coli由作者所在学院微生物实验室提供.1.2 实验仪器ZOPR252D冷冻离心机:Hitashi K okiCo,Ltd Toyko Japan制造;P YRIS21DSC:perkinElmer产品;7212分光光度计:上海精密科学仪器有限公司生产;p HS23C精密p H计:上海雷磁仪器厂产品;透析带及透析夹:上海华美生物工程公司产品;UV21100紫外分光光度计:北京瑞利分析仪器厂制造;BSZ2 100自动部分收集器:上海沪西分析仪器厂生产; DHL2A电脑恒流泵:上海沪西分析仪器厂生产;磁力搅拌器:上海司乐仪器厂制造;HP1250:HP USA产品.1.3 实验方法1.3.1 鹅血中球蛋白的成分分析 按文献[3]方法进行.1.3.2 鹅血中转铁蛋白的分离与纯化 实验在冯佑民等[4]方法的基础上,建立了一个分离纯化转铁蛋白的方法.新鲜鹅血中加入柠檬酸钠,防止其凝结.鹅血经离心(8000r/min,10min)得到鹅血浆,在40 mL鹅血浆中先加入10.7mL0.1mol/L的(N H4)2 CO3,然后加入1.07mL0.1mol/L的N TA2Fe3+ (0.2mol/L的FeCl3和N TA溶液等体积配制),使其被Fe3+完全饱和,在4℃下缓慢搅拌4h.在用过量的铁饱和的鹅血浆中加入(N H4)2SO4,使其饱和度达到40%,然后离心(10000r/min,20min,4℃),弃沉淀.在上清液中加入(N H4)2SO4,使其饱和度达到85%,然后离心(10000r/min,20min,4℃),弃上清液.沉淀溶于1.54mmol/L NaN3,在-20℃条件下存储备用.所得沉淀先经蒸馏水透析去离子,然后用20mmol/L的Tri2HCl缓冲液(p H=7.8)彻底透析后上DEAE252柱(2.0cm×50cm)(柱预先用20 mmol/L的Tri2HCl缓冲液平衡).用NaCl(0～0.4 mol/L)/20mmol/L p H7.8Tri2HCl梯度洗脱.分管收集并测定每管在波长280nm和465nm处的光吸收值.上述所得分离物经Sephadex G2100凝胶层析进一步分离.Sephadex G2100凝胶层析柱(1.6cm ×80cm)预先用20mmol/L Tris2HCL缓冲液(p H 8.0)平衡.上样量为2mL.体积流量为3.7mL/h,每45min收集一管.1.3.3 特征吸收峰的测定 配制约5mg/mL的鹅转铁蛋白溶液,在400～600nm波段内进行扫描,测定转铁蛋白的特征吸收峰.1.3.4 鹅转铁蛋白纯度的鉴定及相对分子质量测定 采用反相高压液相(RP2HPLC)法鉴定鹅转铁蛋白纯度.将Tf配制成10mg/mL的溶液进样.采用C18柱,流通相为体积分数0.05%三氟醋酸,柱温30℃,进样量为20μL,用体积分数3%～80%的乙晴梯度洗脱.鹅转铁蛋白相对分子质量的测定,采用SDS2 PA GE电泳.按Wyckoff等[6]和Barrett[7]等方法.实验用胶的体积分数为12.5%.1.3.5 脱铁转铁蛋白的制备 按参考文献[8]的方法制备.1.3.6 抑菌实验1)培养条件 测试的菌在斜面培养基(10g NaCl,10g酵母浸膏和5g蛋白胨/1000mL双蒸水,2mg/dL的琼脂)上4℃保存.从固体斜面培养基上取菌,接入液体培养基中,在37℃培养16h,用作抑菌实验的菌种.2)分析方法 在每个250mL锥形瓶中加入25mL培养基(10g NaCl,10g酵母浸膏和5g蛋白胨/1000mL双蒸水),并加入不同质量浓度Tf溶液40mL,使锥形瓶中Tf质量浓度分别为0,0.5, 1.0和3.0mg/mL.在每个锥形瓶中加5mL上述培养的菌.菌培养和测定的p H值是7.0.分别在0, 5,2和12h时,测定锥形瓶中吸光度A的变化,每个样品均作3次平行实验.Apo2Tf(脱铁转铁蛋白)和holo2Tf(含铁转铁蛋白)对菌的抑制实验皆采用上述方法.1.3.7 apo2Tf和holo2Tf变性温度的测定 使用差示扫描量热仪(DSC)测定apo2Tf和holo2Tf变性温度.测定温度的范围为35～160℃,升温速度为10℃/min.每次样品用量10mg,氮气的体积流量59 第1期冯敏杰等:鹅血中转铁蛋白质的分离纯化及其性质为60mL/min.2 结果与讨论2.1 鹅血中球蛋白的分析结果图1为醋酸纤维薄膜电泳图扫描的结果.对各种球蛋白质量浓度的分析结果表明,鹅血中β球蛋白的质量浓度为34.89mg/dL ,明显高于一般动物血中β球蛋白的质量浓度(7.80～14.00mg/dL ).Ⅰ:白蛋白;Ⅱ:α1-球蛋白;Ⅲ:α2-球蛋白;Ⅳ:β-球蛋白;Ⅴ:γ-球蛋白.图1 鹅血浆的醋酸电泳扫描图Fig.1 Scan f igure of cellulose acetate f ilm electrophore 2sis of goose plasma2.2 鹅血转铁蛋白的分离纯化及鉴定鹅血经DEAE -52离子交换后的洗脱曲线,有3个大峰(图2).3个峰在波长为280nm 与465nm 处的光吸收值的比分别为23.65,54.38和48.26(见表1).转铁蛋白的特异比值在23处[4].峰Ⅰ的特异比值也在23,且其洗脱液呈红色,说明峰Ⅰ对应的应该就是holo 2Tf.图2 85%饱和度(NH 4)2SO 4的沉淀物的DEAE 252离子交换Fig.2 Chromatography of precipitate from 85%(NH 4)2SO 4on DEAE 252表1 样品分别在280nm 和465nm 下的吸收值T ab.1 Optical density of peaksat 280nm and 465nm inFig.2吸收值吸收峰ⅠⅡⅢA 280 1.947 3.750 1.916A 4650.08230.0690.0397A 280/A 46523.6554.3848.26 图3是Tf 经Sephadex G 2100进一步纯化的洗脱曲线图.图中只出现单一的洗脱峰,收集28～35管洗脱液,冻干,得到Tf 冻干粉.图3 T f 的Sephadex G 2100柱层析Fig.3 Chromatography of T f on Sephadex G 21002.3 鹅转铁蛋白特征峰的测定含铁蛋白在465nm 处有特征吸收峰[2].上述纯化得到的样品经400～600nm 扫描,发现在470nm 左右处有特征吸收峰(见图4),表明所得样品为holo 2Tf.实验中每毫升血浆纯化得到的Tf ,经冷冻干燥得到3.1mg Tf ,高于相关的报道[8～10].图4 H olo 2T f 的400～600nm 扫描曲线Fig.4 Scan curve of holo 2T f from 400nm to 600nm2.4 相对分子质量确定及纯度鉴定预处理的鹅血经DEAE 252离子交换和Sephadex G 2100层析纯化所得的样品,经SDS 2PA GE 电泳,结果见图5.图中样品为单一带,表明纯化所得样品纯度很高,经计算Tf 的相对分子质量约为77000.69无 锡 轻 工 大 学 学 报 第23卷 图5 T f 的电泳图Fig.5 SDS 2PAGE of T f 对纯化所得的Tf 进行RP 2HPLC纯度鉴定的结果见图6.Tf 的纯度为98.83%,表明分离所得的样品是比较纯的Tf.图6 Apo 2T f 的HPLC 图谱Fig.6 RP 2HPLC chromatogram of apo 2T f2.5 apo 2T f 和holo 2T f 的抑菌性能以及Fe 3+的影响实验采用apo 2Tf 和holo 2Tf 2种转铁蛋白.考察了随着apo 2Tf 和holo 2Tf 2种转铁蛋白质量浓度的增加,其对所选革兰氏阴性菌生长的影响,结果见图7.从图中可以看出,2种转铁蛋白的质量浓度在0～0.5mg/mL 范围内时,它对菌的抑制不是很明显;当2种Tf 质量浓度超过0.5mg/mL 时,对菌的抑制作用明显增加;而当apo 2Tf 和holo 2Tf 的质量浓度超过1.0mg/mL 时,随着2种转铁蛋白质量浓度的增加对菌的抑制能力增加不明显.在37℃时,质量浓度为1.0mg/mL 的apo 2Tf 和holo 2Tf 对Escherichia coli 生长动力的影响见图8.由图8可以看出,在0～5h 时,apo 2Tf 和holo 2Tf 对菌生长的抑制较明显.菌生长5h 后,由于转铁蛋白的活力降低,对菌的抑制没有开始那么明显,所以5h 后菌的生长速度增加.图7 Apo 2T f 和holo 2T f 质量浓度对Escherichia colis生长的影响Fig.7 E ffect of apo 2T f and holo 2T f concentration on thegrow th of Escherichia coli strain图8 在37℃时1.0mg/mL T f 对Escherichia coli 生长的影响Fig.8 E ffect of 1.0mg/mL T ransferrin (T f )on thegrow th of Escherichia coli strains at 37℃ 在转铁蛋白抑制菌的原理中,有一种假设是转铁蛋白吸收环境的铁离子,由此来抑制易感染菌的生长[11].但是,许多实验结果表明,转铁蛋白的这种功能不能用此假设来解释.Ellisonet 的实验结果表明,转铁蛋白能够直接作用革兰氏阴性菌的细胞壁,导致脂多糖从细菌壁中释放出来,其作用方式和ED TA 相似[12].Ellison [12]和Richard T [13]也研究了转铁蛋白破坏革兰氏阴性菌细胞壁的能力.实验中的培养基不含铁,根据Richard T 和Ellison 的实验结果,可以解释实验鹅转铁蛋白抑制所选用的革兰氏阴性菌的生长.转铁蛋白和乳铁蛋白是存在动物体内不同部位的转铁蛋白,结构相似,具有相似的功能.Bellamy 等[14]发现乳铁蛋白具有抗菌功能的部位在N 端附近,不同于结合铁的位点.因此,乳铁蛋白被铁饱和后仍有抑制菌的能力.在实验中,holo 2Tf 具抑菌的功能,也表明了Fe 3+结合Tf 的位置不同于Tf 抑制菌的部位.从图7,8看出,apo 2Tf 和holo 2Tf 对所选择的菌的生长有抑制功能,apo 2Tf 对菌的抑制能力要高于holo 2Tf.从实验的结果可以看出,Fe 3+影响了Tf 的79 第1期冯敏杰等:鹅血中转铁蛋白质的分离纯化及其性质抑菌功能.图9是采用DSC 测定apo 2Tf 和holo 2Tf 的变性温度. 图9中A 为apo 2Tf DSC 差示扫描图,可以看出,apo 2Tf 在64.031℃处有吸热峰,在94.410℃处有放热峰,B 为holo 2Tf DSC 差示扫描图,仅在60.804℃处有一个放热峰.Bryan F.Anderson 等[15]研究了乳铁蛋白的物理性质,发现乳铁蛋白结合铁后发生了构象的改变.转铁蛋白与乳铁蛋白的结构相似.Apo 2Tf 和holo 2Tf 的变性温度有显著的区别,可能是由于转铁蛋白结合铁后发生了构象的变化,这个改变可能也影响转铁蛋白抗菌的能力.3 结 论实验结果表明,鹅血中含有较多的β球蛋白,每毫升血浆可纯化得到3.1mg Tf.鹅含铁转铁蛋白(holo 2Tf )的特征吸收峰为470nm ,相对分子质量为77000.鹅转铁蛋白对选用的革兰氏阴性菌———大肠杆菌有抑制作用.Fe 3+能够改变转铁蛋白的结构,并影响转铁蛋白的抑菌功能.图9 Apo 2T f 和holo 2T f 的DSC 扫描图Fig.9 A :DSC cu rves of apo 2T f B:DSC cu rves of holo 2T f参考文献:[1]余萍.鹅血对移植肝癌小鼠红细胞免疫功能的影响[J ].中国中医药科技,2001,8(6):361.[2]Masson P L ,Heremans J F ,Dive C.An iron 2binding protein xommon to many external secretions[J ].Clinica Chimica Acta ,1966,13:735-739.[3]郭勇.现代生化技术[M ].广州:华南理工大学出版社,1996.72-73.[4]冯佑民.转铁蛋白结构与功能的研究I.猪转铁蛋白的分离纯化及在无血清细胞培养中的应用[J ].生物化学与生物物理学报,1987,19(4):322-327.[5]Wyckoff M.Polyacrylamide gel electrophoresis in sodium dodecyl sulfate 2containing buffer using multiphasic buffer system :Properties of the stack.valid Rf 2measurement ,and optimized procedure[J ].Anal Biochem ,1977,78:459.[6]Barrett A J.The electrophoretically show ans fast forms of the α2-macroglobulin molecule[J ].Biochem J ,1979,181,401.[7]王革新.人血浆转铁蛋白的分离与纯制[J ].化学试剂,1991,13(4):244-247.[8]Aisen P.Iron trans port and storage proteins[J ].Ann R eu Biochem 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转铁蛋白(Transferrin)测定
标准操作程序SOP文件
1 测定方法
免疫比浊法。
2 测定原理
标本中的转铁蛋白（Transferrin）与试剂中的抗转铁蛋白抗体相遇，发生特异性的抗原-抗体反应，形成抗原-抗体复合物，使溶液的浊度发生改变。
该浊度的高低在一定抗体存在时与抗原的含量成正比，待反应完成后测定其浊度，从而使转铁蛋白得以测定。
另外加入PEG可以使浊度形成的较快并且很快达到终点，也可以增加反应的灵敏度同时避免由于抗原过剩造成的假阴性结果。
3 标本
血清及肝素-Li、Na/K-肝素或K-EDTA抗凝血浆,处理方法见标本处理程序。
稳定性：4 - 8℃ 8天
20 - 25℃ 8天
-20℃ 6个月
4 试剂
4.1 试剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末
R1：打开后机上稳定21天，冰冻保存90天。
R2：打开后机上稳定21天，冰冻保存90天。
准备：直接使用。
4.2 校准物
来源：ROCHE配套校准物，符合WHO CRM470标准，具体如下：
S1: 0.9%的NaCl
S2-6:C.f.a.s
将批特异的定标液的靶值乘以下面的系数，用于计算定标曲线：
S2:0.125 S3:0.250 S4:0.500 S5:1.000 S6:2.000
贮存条件：校准物在2-8℃保存至效期末。
准备: 直接使用。
定标频率：A 试剂批号更换 B 由质控结果决定
4.3 质控物
来源：Precinorm protein (罗氏蛋白正常值质控)
Precipath protein (罗氏蛋白病理值质控)
其它适合的质控品
贮存条件：置2-8℃冰箱至有效期。
准备：直接使用。
质控间隔时间及限制：应视不同地区及各自实验室情况而定。
质控结果应在限定的范围之内，如果超出范围，实验室应根据情况采取措施。
ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6 操作
见ROCHE MODULAR P生化分析仪作业指导书。
参数设置见附表。
7 参考范围
8
本法线性范围为80-500mg/dl，不准确度允许范围X±3SD，不精密度CV=3.0%，灵敏度为15mg/dl。
9 注意事项
9.1 TIBC是非特异的铁离子与不同蛋白的结合力，不仅仅是指转铁蛋白。
基于这个原因，转铁蛋白至TIBC的转换因子与转铁蛋白的分子量无关，而基于具体
的实践的测定。
1 mg Transferrtin 1.41ug Fe
mg Transferrtin × 1.27 = ug TIBC/dl
mg transferrtin /dl × 0.2275 = umol TIBC/l
9.2 血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.3 换算公式：mg/dl × 0.01 = g/l
mg/dl × 0.126 = umol/l
9.4 仅应用于体外诊断。
10抗干扰能力：
10.1 标准：回收率在90％－110％之间。
10.2 黄疸：黄胆指数达到60时不会有明显干扰。
（直接和间接胆红素浓度约为60mg/dl）。
10.3 溶血：溶血指数达到1000时不会有明显干扰。
（血红素浓度约为1000mg/dl）。
10.4 乳糜：甘油三酯的浓度在600mg/dl以下不会受到明显干扰。
10.5 RF < 500Iu/ml时不会受到明显干扰。
10.6 Transferrtin的浓度低于2000mg/dl时不会有HOOK效应。
10.7 病人服用IgM型单克隆球蛋白会造成结果的假性降低。
11 临床意义:
转铁蛋白是一种分子量为79570的糖蛋白。
它含有一条有两条联有寡糖链的N-葡萄糖苷的多肽链，并且存在有很多的同种形式。
其在肝脏中合成的速率依赖于体内铁的需求和铁的贮存情况而变动。
转铁蛋白是血清中的铁的转运蛋白。
如果铁缺乏，转铁蛋白的饱和程度将是功能性铁耗尽的极端敏感的指示物。
当铁存储缺乏时，铁蛋白的水平将降低。
在铁质缺乏时，如果血清转铁蛋白的浓度很低，将可以排除铁离子的缺乏，这种情况通常在炎症或者抗坏血酸缺乏时出现。
在筛查遗传性血色素沉着病时，转铁蛋白的饱和度比铁蛋白能够提供了一个更好的纯合基因型的指示。
当铁存储不足时，应用红细胞生成素治疗由于肾衰造成的贫血是唯一有效的方案。
在治疗的过程中检查转铁蛋白饱和度提供了一个很好的监视手段。
结合检测转铁蛋白饱和度和铁蛋白将能够排除由于慢性肝脏疾病造成的铁的过剩。