09年一样---siRNA逆转耐药--卵巢癌多药耐药基因的表达及其逆转
卵巢癌对化疗药物耐药机制的研究进展
・300・沈阳医学院学报Journal of Shenyang Medical College第23卷第3期2021年5月•综述•卵巢癌对化疗药物耐药机制的研究进展王永，杨军文*（皖南医学院弋矶山医院妇产科，安徽芜湖241001）［摘要］卵巢癌作为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，因其早期症状多不明显，出现相应症状时多已是疾病的晚期，使得卵巢癌治疗难度大、死亡率高。
一经确诊，多行手术治疗，术后再进行数个疗程的紫杉醇联合铂类（TP）方案化疗，以增加患者的生存率。
但化疗耐药的出现却制约了这种联合治疗的效果，甚至导致治疗的失败。
因此，对化疗耐药产生的相关机制探索，并给予对症处理，这对逆转化疗耐药性、增强治疗效果具有不可估量的意义。
本文将就卵巢癌化疗耐药相关基因及调控因子作用机制的研究及进展进行综述，为进一步研究提供新思路。
［关键词］卵巢癌；化疗耐药；基因；调控因子［中图分类号］R737.31［文献标识码］A［文章编号］1008-2344（2021）03-0300-04doi:10.16753/ki.1008-2344.2021.03.029Research progress of the mechanisms of ovarian cancer resistance to chemotherapyWANG Yong，YANG Junwen*(Department of Obstetrics and Gynecology，Yijishan Hospital，Wannan Medical College，Wuhu241001，China)[Abstract]Ovarian cancer is one of the three major malignant tumors of the female reproductive system,because its early symptoms are often not obvious，and when the corresponding symptoms appear，it is mostly in the late stage of the disease.Therefore，the treatment of ovarian cancer is difficult and the mortality rate is high.Surgery is often the initial treatment of ovarian cancer，followed by several courses of paclitaxel combined with platinum(TP)chemotherapy，which greatly increases the survival rate of patients. However，the emergence of chemotherapy resistance limits the effectiveness of this combination therapy，and even leads to the failure of the treatment.Therefore，exploring the relevant mechanisms of chemotherapy resistance and giving symptomatic treatment is of great significance for the reversing the chemotherapy resistance and enhancing the therapeutic effect.This article reviews the research progress of the mechanisms of ovarian cancer resistance to chemotherapy，in order to provide new ideas for further research.[Key words]ovarian cancer；chemotherapy resistance；gene；regulatory factor卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，致死率一直位于女性所患疾病的前列。
逆转卵巢癌化疗耐药性的研究进展
卵巢恶性肿瘤是女性生殖道最常见的三大恶性 肿瘤之一，恶性程 度 高，极 易 发 生 浸 润 和 远 处 转 移， 尽管进行肿瘤细胞减灭术和术后联合化疗等综合治 疗在一定 程 度 上 延 长 了 晚 期 卵 巢 癌 患 者 的 生 存 时 间，但其５年 生 存 率 仅 为 ３０％ 左 右，病 死 率 居 妇 科 癌症首位 。 ［１］ 随着宫颈癌以及子宫内膜癌的诊断 和 治疗取得的进展，卵 巢 癌 成 为 严 重 威 胁 妇 女 生 命 的 肿瘤。治疗的难点为卵巢癌细胞对化疗药物尤其是 一 线 化 疗 药 顺 铂 、紫 杉 醇 等 产 生 耐 药 性 ，严 重 阻 断 了 化 疗 药 物 的 抗 肿 瘤 效 应 ，从 而 导 致 综 合 治 疗 的 失 败 。 有 研 究 表 ［２］ 明，肿 瘤 细 胞 内 有 效 药 物 浓 度 的 降 低、 ＤＮＡ 分子损伤修复系统的改变、药物作用的靶点异 常、细胞凋 亡 调 控 的 异 常 等 均 可 引 起 卵 巢 癌 耐 药。 因此，寻求预防或逆 转 卵 巢 癌 化 疗 耐 药 的 治 疗 方 法 成为目前研究的热 点 之 一，本 文 对 近 几 年 国 内 外 的 研究成果进行综述。
收 稿 日 期 ：２０１２－０２－２１ 基 金 项 目 ：江 西 省 科 技 支 撑 计 划 （２００９ＪＸ０１０８１）；江 西 省 卫 生 厅 课 题 （２０１０１８１４６） 通 信 作 者 ：万 福 生 ，教 授 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｆｓ０１＠１６３．ｃｏｍ。
南 昌 大 学 学 报 （医 学 版 ）２０１２ 年 第 ５２ 卷 第 ５ 期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎａｎｃｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ）２０１２，Ｖｏｌ．５２ Ｎｏ．５
肿瘤的多药耐药及其逆转剂研究进展
肿瘤的多药耐药及其逆转剂研究进展综述安徽省肿瘤医院桂留中化疗仍是恶性肿瘤的重要治疗手段之一，然而肿瘤细胞的耐药常使化疗最终失败。
根据肿瘤细胞的耐药特点，耐药可分为原药耐药（Primary drug resistance,PDR）和多药耐药（Multidrug resistance ,MDR）。
PDR只对诱导药物产生耐药而对其他药物不产生交叉耐药性，如抗代谢药类；MDR则是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药产生抗药性的同时，对其他结构和作用机制不同的抗肿瘤药产生交叉耐药性。
MDR的表现十分复杂，既可有原发性（天然性）耐药，也可有诱导性（获得性）耐药；还有典型性和非典型性耐药之分。
由于MDR给化疗带来了困难，近年人们对其产生的机制以及试图寻找逆转剂做了大量的工作。
本文简介MDR产生的机制并着重介绍近年逆转剂的研究进展。
1.MDR产生的机制1.1膜糖蛋白介导的机制1.1.1 P-gp与MDR 1976年Ling等首先在抗秋水仙碱的中国仓鼠卵巢细胞株上发现了一种能调节细胞膜通透性的糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）,因其相对分子量为170kd，又称P-170。
P-gp主要分布在有分泌功能的上皮细胞的细胞膜中，在人类正常组织中有不同程度的表达，其中肾上腺、肺脏、胃肠、胰腺等组织中表达较高，而在骨髓中表达较低。
P-gp属于ATP结合盒家族的转运因子，其生理功能为在ATP供能下将细胞内的毒性产物泵出细胞，对组织细胞起保护作用。
P-gp由mdr1基因编码产生。
人类mdr1基因位于7号染色体长臂2区一带一亚带（7q21.1）。
1986年，Gros将编码P-gp的mdr1cDNA直接转染敏感细胞后，转染细胞表现出完全的MDR表型，从而提供了P-gp能够导致多药耐药的有力证据。
现已证明，许多肿瘤原发性或获得性耐药均与P-gp过量表达有关。
P-gp随mdr1基因扩增而增加。
P-gp有多个药物结合位点，因而具有多种药物泵出功能，不过其底物多为天然性抗癌药如长春碱类、蒽环类、紫杉醇类和鬼臼毒素类等。
姜黄素逆转卵巢癌多药耐药的研究进展
姜黄素逆转卵巢癌多药耐药的研究进展马珊珊(综述);马玲(审校)【摘要】卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤，多数卵巢癌患者就诊时已属晚期，丧失手术机会，化学治疗（化疗）是主要的治疗手段，然而对化疗药物的多药耐药是影响预后的主要因素。
姜黄素能够从多种途径逆转卵巢癌多药耐药（ MDR），而且不良反应小，近年来对其研究也越来越受到重视。
该文较为全面地综述了卵巢癌MDR发生的机制及姜黄素逆转MDR的机制。
%Ovarian cancer is a common gynecologic malignant tumor ,and the majority of ovarian cancer patients are at advanced stages when diagnosed,which means loss of the surgery opportunity.Chemotherapy is the main treatment for ovariancancer,however,multidrug resistance is the main factor influencing the progno-sis.Study found that curcumin can reverse multidrug resistance in ovarian cancer with small toxicity .In recent years the research on it has been paid more and more attention .Here is to make a comprehensive review of the mechanisms of multidrug resistance in ovarian cancer and the reversal mechanism of curcumin .【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2014(000)023【总页数】3页(P4272-4274)【关键词】姜黄素;卵巢癌;多药耐药【作者】马珊珊(综述);马玲(审校)【作者单位】蚌埠医学院研究生部，安徽蚌埠 233000;蚌埠医学院第一附属医院妇科肿瘤科，安徽蚌埠 233000【正文语种】中文【中图分类】R737.31卵巢癌是女性生殖系统较为常见的恶性肿瘤，病死率很高[1]。
卵巢癌多药耐药机制及其逆转药物的应用
涉及 Ａ Ｃ型膜 载体 蛋 白家 族 ， 家族 有 至少 ５ Ｂ 该 Ｏ种 蛋 白质 。Ａ Ｃ转 运 蛋 白能 够 将 包 括 紫 杉 烷 类 在 内 Ｂ 的多种抗 肿瘤药 物排 出细 胞 外 ， 而降 低 细 胞 内药 从 物浓度 ， 使细胞产生耐药性 。Ａ Ｃ家族成员 Ｐ糖蛋 Ｂ － 白（ － 、 药 耐 药 相 关 蛋 白 、 腺 癌 耐 药 蛋 白 Ｐｇ 多 Ｐ） 乳 （ Ｃ Ｐ 及 肺耐药 相 关蛋 白 （ Ｒ ） ＢＲ） Ｌ Ｐ 均参 与 了卵巢 癌 的 ＭＤ 【８。Ｐｇ Ｒ７ —Ｐ是 由 ＭＤ 一 ， Ｊ Ｒ１编码 的一 种 跨 膜 磷 酰化 糖蛋 白 ， 能上 是 一 种 细 胞 膜 Ａ Ｐ依 赖 泵 ， 功 Ｔ 其 运输 的底 物均 为大 的疏 水 性 分 子 ； 能够 转 运 多 种结
Ｍ Ｒ是指肿 瘤 细 胞 对 一种源自抗 肿 瘤 药 产 生 耐 药 Ｄ
或 部分恢 复耐 药细 胞 对 化疗 药 物 敏 感性 的功 能 ， 包
性后 ， 对结构 与作 用 机制 不 同 的抗 肿 瘤 药 产 生交 叉
耐药 的现 象 Ｊ Ｄ 的产 生 是 卵 巢 癌 化疗 失 败 的 。Ｍ Ｒ
括耐药修饰剂 ， ｃ 通道阻滞剂 （ 如 ａ 维拉帕米 ） 钙 、
理 论认 为 “ 阴寒 内盛 ， 血凝 滞 ” 恶 性肿 瘤 发病 的 气 是 重 要病 机之一 ， 为 耐药肿 瘤是放 、 疗及相 关治 并认 化 疗 后 阳气进 一步 亏 虚 、 血 进 一 步凝 滞 而 产 生 的必 气 然病理 结果 ＿ 气 虚 、 凝 和血 瘀 是 卵 巢 癌最 主要 ｌ ； 寒 的症候 要素 ， 因此 ， 益气 温通是 治疗 卵巢 癌重要 的方 法 。复方 附苓 丸 是 我 院肿 瘤 科根 据 多 年 临床 经 验 ， 结合 卵巢癌 以气 虚 、 凝及 血瘀 为症候要 素 的基础 ， 寒
肿瘤多药耐药性产生机制及其逆转的研究现状
肿瘤多药耐药性产生机制及其逆转的研究现状巫蒙;王梅【摘要】肿瘤严重威胁着人民群众的生命健康,它的防治一直是医学界研究的热点.在肿瘤治疗中,手术治疗、放疗、化疗是最传统的3种治疗方案,其中化疗占据着不可替代的重要地位.有些肿瘤在经历了最初有效化疗后,仍难免复发,这其中一个很重要的原因就是肿瘤细胞对化疗药物产生了多药耐药性.合理的联合化疗虽能最大限度发挥细胞毒作用,但都可因多药酎药(Multidrug Resistance,MDR)的出现而宣告失败.因此,逆转肿瘤多药耐药,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性已成为肿瘤研究领域的一大热点.本文就这肿瘤多药耐药机制及其逆转的研究现状做一综述.【期刊名称】《当代医学》【年(卷),期】2011(017)021【总页数】3页(P26-28)【关键词】肿瘤;多药耐药性【作者】巫蒙;王梅【作者单位】642357,四川省安岳县石羊镇中心卫生院外科;642357,四川省安岳县石羊镇中心卫生院外科【正文语种】中文肿瘤是机体遗传和环境致癌因素以协同序贯的方式使局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控，包括多个癌基因的活化与抑癌基因的二次失活，是正常细胞不断增生转化所形成的新生物。
肿瘤的发生是一个长期多阶段多基因改变累积的过程，具有基因控制和多因素调节的复杂性[1]。
在肿瘤治疗中，手术治疗、放疗、化疗是最传统的3种治疗方案，其中化疗占据着不可替代的重要地位。
有些肿瘤在经历了最初有效化疗后，仍难免复发，这其中一个很重要的原因就是肿瘤细胞对化疗药物产生了多药耐药性。
合理的联合化疗虽能最大限度发挥细胞毒作用，但都可因多药耐药(Multidrug Resistance,MDR)的出现而宣告失败。
MDR是指肿瘤细胞接触一种抗肿瘤药物后，产生对多种结构不同的、作用机制各异的其他抗肿瘤药的耐药性。
MDR是目前肿瘤细胞免受化疗药物攻击的最重要的细胞防御机制，涉及临床常用的多种抗肿瘤药物，是肿瘤成功化疗最严重的障碍之一，白血病、多发性骨髓瘤、食管癌、乳癌、小细胞肺癌、肝癌、结肠癌、肾癌、子宫癌、脑瘤、纤维肉瘤、神经母细胞瘤以及宫颈癌等面临严重的MDR问题。
叶酸受体-α在卵巢癌耐药细胞株中的表达及其介导的多药耐药的靶向逆转
叶酸受体-α在卵巢癌耐药细胞株中的表达及其介导的多药耐药的靶向逆转杨琰;卢实;钟俊;李敏芳;王泽华【期刊名称】《现代妇产科进展》【年(卷),期】2011(20)9【摘要】目的:研究叶酸受体-α(folic acid receptor-α,FR-α)在卵巢癌多药耐药细胞株中的表达水平,并探讨FR-α靶向的MDR1小干扰RNA(siRNA)纳米粒对卵巢癌多药耐药细胞的逆转效果。
方法:采用体外浓度梯度递增法建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3-ts,应用激光共聚焦法检测FR-α的表达水平。
复凝聚法将叶酸修饰壳聚糖载体包裹靶向MDR1的PGPU6/GFP/Neo/PshRNA真核表达质粒(PshRNA-MDR1),形成叶酸修饰壳聚糖PshRNA-MDR1纳米粒(FA-CS-PshRNA)。
采用RT-PCR、Western blot检测叶酸修饰前后,纳米粒转染细胞后MDR1 mRNA及蛋白的表达,MTT法检测SKOV3-ts半数抑制浓度(IC50)的变化。
结果:激光共聚焦法显示,耐药细胞株SKOV3-ts胞膜层有FR-α强表达,经叶酸修饰后,FA-CS-PshRNA纳米粒较CS-PshRNA能更有效降低靶细胞SK-OV3-ts的靶基因MDR1 mRNA和P-gp蛋白表达(P<0.01),并逆转SKOV3-ts细胞针对紫杉醇的IC50(0.3830±0.0096 vs 0.0353±0.0006,P<0.01)。
结论:经FR-α介导,FA-CS-PshRNA能更有效敲除MDR1的表达,靶向逆转卵巢癌多药耐药。
【总页数】5页(P675-679)【关键词】叶酸受体-α(FR-α);多药耐药基因1(MDR1);壳聚糖;卵巢肿瘤;多药耐药【作者】杨琰;卢实;钟俊;李敏芳;王泽华【作者单位】广东医学院第二临床学院妇产科;华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R737.33【相关文献】1.卵巢癌细胞株SKOV3/Adr多药耐药逆转前后HLA及B7表达的实验研究 [J], 李胜平;张健;王丽莉;张积仁2.多药耐药基因反义寡脱氧核苷酸对卵巢癌细胞株SKOV3多药耐药性逆转的作用[J], 童英;潘凌亚;周生3.阿霉素纳米粒对MRP介导的膀胱肿瘤多药耐药细胞株EJ/MRP多药耐药性的逆转作用 [J], 王磊;柯红;崔洁4.叶酸受体单抗Farletuzumab对卵巢癌细胞多药耐药逆转的机制 [J], 杨琰;严兆华;叶金艳;张凤兰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
卵巢癌多药耐药基因的表达及其逆转
Ｍ Ｒ Ｒ Ａ ａ ｉ ｉｃ ｎｌ ｄ ｃｅ ｓｄｉ ｅ ｅ ｉ Ｎ ａ Ｐ＜ ． ５ ， ｎ ｅｉ ｉｉｏ ｔ ｏ ｅ ３ ３ ， １ ３ ａ ｄ ８ ５ Ｄ １ ｍ Ｎ ｌｓ ｎｆ ａ ｔ ｅ ｒａｅ ｖ ｒ ｓ Ａ ｔ ｍ（ ０ ０ ） ａ ｄｔ ｈｂｔ ｎｒ ｉ ｓ ｗ ｄ ． ％ ４ ． ％ ｎ ． ％ ｌ ｇ ｉ ｙ ｎ ｙ Ｒ ｅ ｈ ｎ ｉ ａｏｈ ｓＲＮＡ ， ｎ ｆｅ ｘ ｒｍｅ ｔ ｌｅ ｉｅ ｅ ｆｒｔ ｅ ｓｂｌｔ ｆｔｅ ｏ ａｉ ｎ ｃ ｎ ｅ ｈｉ ｒ ｇ ｒ ｓｓａ ｃ ｅ ｅ ｓｌｂ ｉ ａ ｄ ｏ ｒｅ ｐｅ ｉ ｎ ａ ｖｄ ｎｃ ｏ ｈｅ ｆａ ｉ ｉｉｙｏ ｈ ｖ ｒａ ａ ｃ ｒｍｕ ｄ ｕ ｅ ｉｔｎ ｅ ｒ ｖ ｒａ ｙ ｓＲＮＡ． Ｍ ｅｈｏ Ｔｈ ｅ ＤＲ１ ａｇ ｔｄ ｉ ｔ ｄｓ ｒｅ Ｍ ｔｒ ｅｅ ｓＲＮＡｓ ｗｅ ｅ ｅ ｉ ｎ ｄ ａ ｓ ｎ ｈ ｓｚ ｄ ｅ ｒ ｔｌ ． Ａｆｅ ｒｎｓｅ ｔｄ ｎｔ ｒ ｄ ｓｇ ｅ ｎｄ ｙ ｔ ｅ ｉｅ ｓ ｐａａ ｅｙ ｔ ｒ ｔａ ｆｅｅ ｉ ｏ ＳＫＯＶ３ ／ＡＲ ａ ｄ ２ ４８ ｎ ７ ｈｏ ｒ ｕ ｓ，ｔｅ ＲＴ－ ｈ ＰＣＲ ｎｄ ｆｏ ｃ ｔ ｍｅｒ ｒ ｅ ｅｓ ｅ ｔ ｌ ｏ ｄ ｔｒ ｉｅ ｔｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｆｍＲＮＡ ｎ ｇ ｆＭＤＲ１． Ｍ ｒ ａ ｓ ｙ ａ ｗ ｙ ｏ ｔｙ ｗｅ ｅ ｕｓ ｄ ｒ ｐ ｃｉ ｙ ｔ ｅｅ ｍ ｎ ｈ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｏ ｌ ｖｅ ａ ｄ Ｐ— Ｐ ｏ Ｉ Ｔ ｓ ａ
Ｎ Ａ表达水平均有显著下降 （ ００ ）对 ＭＤ １ｍ Ｎ Ｐ＜ ．５ ， Ｒ Ｒ Ａ的抑制率分别为 ４． ％ 、１３ ３ ３ ４ ． ％和 ５． ％ ， ８５ 其中 ｓ Ｎ 一 ｉ Ａ３组对靶基 因的抑 Ｒ 制作用较强 ， 而空 白对照组 、 脂质体组和阴性对照 ｓ Ｎ ｉ Ａ组靶基因表达水平则无明显变化。将 ｓ Ｎ ／ Ｒ — Ｒ ｉ Ａ ＭＤ １３转染细胞 ７ Ｒ ２小时 后可观察到 Ｐｇ －ｐ阳性表达率显著降低（ ０ ０ ） 其抑制率为 ３．５ ， Ｐ＜ ．５ ， ７９ ％ 而空白对照组 、 脂质体组及阴性对照 ｓ Ｎ ｉ Ａ组 Ｐｇ Ｒ —Ｐ表达 无明显降低 （ ００ ） ｉＮ － Ｐ＞ ．５ 。ｓ Ａ３干扰 Ｓ Ｏ ３ Ａ Ｒ Ｋ Ｖ ／ Ｒ细胞后 ， 阿霉素和紫杉醇的 Ｉ ｃ 分别 下降为干扰前的 １３ ５ ／ ．６和 １３ ／ 。结论 Ｒ Ａ 在体外实验能有效逆转卵巢癌细胞的耐药 ， Ｎｉ 为其在实体瘤耐药逆转 的运用提供 了实验依据 ， 值得进一步研究 。
肿瘤化疗中多药耐药的诊断和逆转
综 述肿瘤化疗中多药耐药的诊断和逆转第四军医大学唐都医院普外科 李修彤综述 吴金生审校 (西安710038) 关键词 肿瘤化疗 多药耐药 诊断 逆转 肿瘤细胞耐药类型分为:(1)先天性耐药;(2)获得性耐药;(3)多药耐药(Multidrug re-sistance,MDR):肿瘤细胞对多种结构不同,作用方式也不同的抗肿瘤药物(或其它药物)产生交叉耐药性。
肿瘤细胞耐药性机制很复杂,目前研究最多的,与多药耐药有关的是人多药耐药MDR1基因(mdr1基因)以及由mdr1基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)。
其多药耐药机制包括:(1)由于糖蛋白P-170、P-150增加使药物排出增多;(2)谷胱甘肽和甘胱甘肽代谢酶增加;(3)DNA修复机制增强;(4)DNA拓扑异构酶减少;(5)O5-鸟嘌呤烷基转移酶途径。
1 P-gp与多药耐药MDR基因(mdr基因)1.1 P-gp与mdr基因 1976年Ling等首先在耐药的中国仓鼠卵巢CHO细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO细胞)中发现一种分子量约为170KD的膜糖蛋白,在敏感细胞中并不存在。
进一步研究发现:这种P-gp是一种膜通透性糖蛋白,分子量在150～180KD之间,它的含量与抗药水平相平行,它由多药耐药基因mdr编码。
据mdr cDNA序列推测,人和小鼠的P-gp分别由1,280和1,278个氨基酸残基组成,分子的N 段和C段呈分子内外对称结构,近N端的氨基酸残基接有糖链,P-gp有12个跨膜结构域,胞浆亲水基形成2个ATP结合位点,位于质膜的胞浆一侧[1]。
P-糖蛋白是一种能量依赖性药物排出泵,它既可以与一些抗肿瘤药物及其它药物结合,又有ATP结合位点。
P-糖蛋白一旦与抗肿瘤药结合,通过T提供能量,将药物从细胞内泵出细胞外,药物在细胞内浓度就不断下降,达不到有效药物浓度,其细胞毒作用因而减弱或完全消失,出现抗药现象。
靶向Twist基因逆转卵巢癌耐药细胞化疗敏感性的研究
靶向Twist基因逆转卵巢癌耐药细胞化疗敏感性的研究作者单位：266409 山东省胶南市泊里镇中心卫生院（臧泉红）；潍坊医学院附属医院（陈昭日，张丽芹，戴淼，王春一，吕秀萍）通讯作者：戴淼目的探讨载体表达的小干扰RNA（siRNA）影响卵巢癌耐药细胞株Twist 基因的表达、促进凋亡并逆转其阿霉素耐药的可行性。
方法体外构建Twist小发卡状RNA（shRNA）的表达质粒，脂质体法介导将其转染入SKOV3/ADM细胞。
采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Twist mRNA的表达；使用免疫细胞化学法（ICC）检测Twist蛋白的表达；使用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）测定各组细胞对阿霉素的半数抑制浓度（IC50）；流式细胞术检测其对卵巢癌细胞凋亡的影响。
结果Twist shRNA转染组细胞Twist mRNA 的表达与其他两组相比明显减弱，Twist蛋白表达明显下调，差异均有统计学意义（P＜0.01）；阿霉素敏感性比正常对照组提高了约2.5倍；流式细胞仪显示阿霉素作用24 h后，特异性转染组细胞周期分布发生明显改变，G0/G1期细胞比例增多，而S期细胞比例减少，凋亡率显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论针对TWIST合成的siRNA能够有效地抑制TWIST mRNA和蛋白的表达，促进卵巢癌耐药细胞凋亡并能恢复其对阿霉素的敏感性。
应用RNAi技术，能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的耐药性。
标签：卵巢癌肿瘤；Twist；RNA干扰；逆转耐药；凋亡化疗为卵巢癌主要的辅助治疗手段，以阿霉素为基础的联合化疗使卵巢癌患者的生存时间明显延长，但其五年生存率却无明显提高,主要原因是随着化疗时间的延长，肿瘤细胞逐渐对各种化疗药物尤其是阿霉素产生了耐药性。
因此,阿霉素化疗增敏剂的研究在临床上有重要意义。
Twist是转录因子家族中编码锌指蛋白的基因,与细胞凋亡、肿瘤转移和血管生成密切相关,并在多数恶性肿瘤中过度表达［1，2］。
癌细胞耐药机制及逆转方法评估
癌细胞耐药机制及逆转方法评估癌症是一种严重威胁人类生命健康的疾病，而抗癌药物在治疗癌症中发挥着重要的作用。
然而，长期使用抗癌药物容易导致癌细胞对药物产生耐药性，从而降低治疗效果。
为了更好地理解癌细胞耐药机制，并寻找相应的逆转方法，科学家们进行了大量的研究。
癌细胞耐药机制是一个复杂的过程，涉及到多种细胞信号通路的异常调节。
一种常见的耐药机制是通过细胞膜上的转运蛋白来排出药物，减少药物在细胞内的积累。
这是一种主动的药物外排机制，常见的转运蛋白包括ATP结合盒（ABC）转运家族和耐药相关蛋白（MRP）。
这些转运蛋白能够将药物从细胞内运出，从而降低药物对癌细胞的杀伤效果。
此外，癌细胞还可以通过改变药物的靶点来降低药物的效力。
这可能包括改变药物与靶蛋白之间的亲和力，使药物无法正常结合靶蛋白，或者通过产生突变使得靶蛋白对药物失去敏感性。
例如，EGFR突变是导致一些肺癌耐药的重要因素，这种突变会导致EGFR受体对抗癌药物不敏感。
除了这些细胞内的耐药机制，还有一些细胞外的因素也会对耐药性产生影响。
例如，肿瘤组织的内部环境可能阻碍药物的进入，从而减少药物对肿瘤的作用。
这种情况下，通过改善肿瘤血供或使用适合渗透肿瘤的药物输送系统，可以增加药物在肿瘤组织内的浓度，提高治疗效果。
为了逆转癌细胞的耐药性，科学家们提出了一系列的方法。
一种常见的方法是使用多药联合治疗。
由于癌细胞的耐药机制通常是多样化的，通过同时使用多种药物可以增加抗癌治疗的效果。
另一种方法是利用新的靶向药物。
靶向药物是指通过抑制特定癌细胞的生长信号通路而对癌细胞产生选择性毒性作用的药物。
与传统的细胞毒素类药物相比，靶向药物可以更准确地杀伤癌细胞而对正常细胞的损伤更小。
此外，还可以通过干预细胞内的耐药机制来逆转癌细胞的耐药性。
例如，使用抗耐药相关蛋白的药物（MRP1/ABCC1）可以阻止药物从细胞内排泄出去，增加药物在癌细胞内的积累。
另外，针对特定的癌细胞信号通路开发靶向药物，可以抑制癌细胞的生长和存活，以及减少其对抗癌药物的耐药性。
MDR1基因siRNA的筛选及其逆转乳腺癌多药耐药的研究的开题报告
MDR1基因siRNA的筛选及其逆转乳腺癌多药耐药的研究的开题报告一、课题背景乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，治疗乳腺癌通常包括手术、放疗、化疗等多种方式。
然而，由于多种因素的影响（如MDR1基因的存在），部分患者在接受多种药物治疗后会产生多药耐药现象，严重影响治疗效果。
因此，寻找针对性的治疗手段及逆转多药耐药成为乳腺癌治疗的热点和难点。
MDR1基因编码的P-glycoprotein是一种多药耐药蛋白，其过度表达是多药耐药的主要原因之一。
因此，抑制MDR1基因的表达可以逆转多药耐药现象，对乳腺癌的治疗具有重要意义。
siRNA技术可以高效、特异地靶向选定基因的mRNA，因此siRNA可以作为逆转多药耐药的有力工具。
二、研究目的本研究旨在筛选出适合于靶向MDR1基因的siRNA，探索其在逆转乳腺癌多药耐药方面的作用及机制。
三、研究内容和方法1. siRNA的设计和筛选本研究将使用生物信息学工具和实验方法共同筛选出能够有效降低MDR1基因表达的siRNA。
具体步骤包括：(1) 筛选目标序列；(2) 根据目标序列设计siRNA；(3) 选取有效的siRNA；(4) 对特异性、稳定性等指标进行评估。
2. siRNA的转染及效果评价将筛选出的siRNA转染到乳腺癌细胞中，通过Real-time PCR、Western Blot等方法检测MDR1基因的表达水平的变化，评价siRNA的效果。
3. 多药逆转实验通过MTT法检测siRNA对多药耐药乳腺癌细胞的药敏性变化，探索其逆转多药耐药的作用和机制。
四、预期结果通过筛选出高效、特异性强的siRNA，探索逆转乳腺癌多药耐药的机制，对于开发新的治疗手段和提高治疗效果将具有重要意义。
五、研究意义本研究将为乳腺癌多药耐药的治疗提供新的思路和方法，对于提高治疗效果、改善患者生存质量具有重要意义。
此外，研究过程中涉及生物信息学、分子生物学、细胞生物学等多方面的技术，也将为相关学科的发展提供理论和实践基础。
siRNA逆转肿瘤多药耐药性的体内外研究的开题报告
siRNA逆转肿瘤多药耐药性的体内外研究的开题报告一、研究背景与意义：肿瘤多药耐药性（MDR）是肿瘤治疗中常见的难题，它是指肿瘤细胞对多种化疗药物产生耐受，从而导致化疗失败和转移。
因此，寻找MDR的治疗方法对于提高肿瘤治疗成功率和生存率具有非常重要的意义。
小干扰RNA（siRNA）是一种短链RNA分子，它可以通过选择性地沉默与疾病相关的基因，从而达到治疗疾病的目的。
在肿瘤治疗中，siRNA已经成为一种新型的针对MDR的治疗方法，因为它可以通过抑制与化疗耐药相关的基因表达，从而增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。
目前，siRNA逆转肿瘤多药耐药性的体内外研究已经取得了一定的进展，但在临床应用中还面临着一些挑战，如如何有效地输送到肿瘤细胞内，如何减少不良反应等问题，因此有必要对siRNA逆转肿瘤多药耐药性的机制和临床应用进行进一步的研究。
二、研究内容和方法：1. 研究内容：（1）确定siRNA靶向多药耐药相关基因的效果。
（2）评估siRNA在肿瘤细胞及动物模型中的疗效。
（3）探究siRNA逆转肿瘤多药耐药性的作用机制。
（4）评估siRNA在临床应用中的安全性和有效性。
2. 研究方法：（1）在细胞培养基中评估siRNA靶向转运蛋白P-gp和多药耐药相关基因的疗效。
（2）使用裸鼠模型评估siRNA的疗效。
（3）利用Western blot、免疫荧光技术和实时荧光定量PCR技术等方法探究siRNA逆转肿瘤多药耐药性的作用机制。
（4）使用动物模型评估siRNA在临床应用中的安全性和有效性。
三、研究预期结果和意义：本研究将通过siRNA逆转多药耐药的体内外研究，探究siRNA逆转肿瘤多药耐药性的作用机制，为临床应用提供一定的理论和实践基础。
同时，本研究也将为针对肿瘤多药耐药性的治疗方法提供新的思路和方向，促进肿瘤治疗技术的快速进步，提高肿瘤治疗的成功率和生存率。
siRNA干扰与卵巢癌多药耐药的关系
siRNA干扰与卵巢癌多药耐药的关系刘福军;高国兰【摘要】化疗是综合治疗卵巢癌不可缺少的重要手段之一，但是临床上肿瘤所表现出来的耐药，却大大限制了化疗药物的疗效。
多药耐药是指肿瘤细胞对多种结构与作用机制或靶位不同的化疗药物的抵抗耐受。
目前，各种方法已用于逆转肿瘤的多药耐药，包括钙通道阻滞剂、环孢菌素A及其衍生物、反义核苷酸和合成转录因子，但效果不是很理想。
小分子RNA干扰（small—interference RNA，siRNA）是近几年发展起来的较新技术，已广泛用于卵巢癌等肿瘤耐药的研究。
【期刊名称】《实用癌症杂志》【年(卷),期】2009(024)002【总页数】2页(P216-217)【关键词】siRNA干扰;卵巢癌;耐药;多药耐药基因【作者】刘福军;高国兰【作者单位】330006,南昌大学第一附属医院;330006,南昌大学第一附属医院【正文语种】中文【中图分类】R737.1化疗是综合治疗卵巢癌不可缺少的重要手段之一，但是临床上肿瘤所表现出来的耐药，却大大限制了化疗药物的疗效。
多药耐药是指肿瘤细胞对多种结构与作用机制或靶位不同的化疗药物的抵抗耐受。
目前，各种方法已用于逆转肿瘤的多药耐药，包括钙通道阻滞剂、环孢菌素A及其衍生物、反义核苷酸和合成转录因子，但效果不是很理想。
小分子RNA干扰(small-interference RNA，siRNA)是近几年发展起来的较新技术，已广泛用于卵巢癌等肿瘤耐药的研究。
1 多药耐药基因(multidrug resistance gene,MDR)在卵巢癌组织中的表达及其与耐药的关系1968年Kessel等首次报道小鼠白血病细胞系中具有MDR现象后，大量研究已发现，MDR现象存在于人类的许多肿瘤细胞中，也存在于人卵巢癌细胞中。
1.1 MDR基因在卵巢癌组织中的表达许多文献报道，正常卵巢和良性肿瘤组织中MDR基因表达水平极低甚至无表达,而恶性肿瘤中未接受化疗者MDR基因阳性表达率较低,接受过化疗或复发者阳性表达率则明显增高[1～3]；而MDR基因的表达与病理类型、临床期别、手术方式等关系看法不一。
SiRNA沉默cdc2基因逆转卵巢癌顺铂耐药的实验研究
SiRNA沉默cdc2基因逆转卵巢癌顺铂耐药的实验研究任婕;彭芝兰;杨英捷;肖子文【摘要】目的:探讨利用RNAi沉默cdc2基因逆转人卵巢上皮性癌细胞顺铂耐药的可行性,为卵巢癌顺铂耐药逆转提供一个可选择的靶点.方法:针对cdc2基因的DNA设计具有特异性的SiRNA,经脂质体转染卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/DDP,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测转染组cdc2基因表达是否抑制;用MTT法测定转染前后A2780/DDP细胞对顺铂敏感性的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:(1)转染cdc2-SiRNA在RNA及蛋白水平均有效抑制A2780/DDP细胞中cdc2的表达,抑制率分别为78.2％、76.8％;(2)顺铂化疗IC50,A2780/DDP-S(0.66±0.02)较A2780/DDP(5.02±0.05)显著下降(P＜0.01);(3)5 mg/L顺铂作用后,A2780/DDP-S与A2780/DDP比较,各时间点细胞生长抑制率明显增加(P＜0.05),细胞凋亡率明显增多(P＜0.05).结论:在A2780/DDP 细胞中,SiRNA能有效抑制cdc2基因的表达,并能部分恢复其对顺铂化疗的敏感性.【期刊名称】《贵阳医学院学报》【年(卷),期】2015(040)012【总页数】6页(P1325-1330)【关键词】人卵巢癌;RNA干扰;cdc2;顺铂耐药;免疫印迹法;逆转录-聚合酶链式反应【作者】任婕;彭芝兰;杨英捷;肖子文【作者单位】贵州医科大学附院妇产科,贵州贵阳550004;四川大学华西第二医院妇产科,四川成都610041;贵州医科大学附院妇产科,贵州贵阳550004;贵州医科大学附院妇产科,贵州贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】R737.31;R34-33近年来, 恶性肿瘤治疗的新方法层出不穷, 但化疗仍是卵巢癌患者术后减少复发和预防转移不可缺少的治疗手段，肿瘤细胞对化疗药物的耐受性是导致化疗失败的重要原因。
浅谈SiRNA逆转肺耐药相关蛋白表达介导的白血病细胞多药耐药.
浅谈SiRNA逆转肺耐药相关蛋白表达介导的白血病细胞多药耐药【摘要】目的：研究双链短干扰RNA（siRNA）对白血病多药耐药细胞模型（K562/NaB）肺耐药相关蛋白（LRP）表达及功能的影响. 方法：针对LRP基因设计合成特异性siRNA，在脂质体介导下转染K562/NaB；采用半定量逆转录聚合酶链反应（）检测K562细胞LRP mRNA的水平；用流式细胞术检测K562/NaB细胞LRP蛋白表达的变化和细胞内柔红霉素（DNR）的蓄积；MTT法检测阿霉素（ADM）对K562/NaB细胞耐药的半数抑制浓度（IC50）. 结果： siRNA转染后：K562/NaB细胞的LRP mRMA水平明显降低；LRP蛋白表达由阳性转为阴性；细胞内DNR的蓄积明显增加，DNR平均荧光增强3.28倍；对ADM药物敏感相对逆转效率为78.18%. 结论： siRNA可逆转由LRP介导的白血病细胞多药耐药.【关键词】 RNA，小分子干扰；基因，肺耐药相关蛋白；K562细胞；抗药性，多药【Abstract】 AIM: To investigate the effect of shortinterfering RNA (siRNA) on expression and function of lungleukemia cells (K562/NaB). METHODS:with high level LRP expression treated with sodium butyrate (NaB), was used as an in vitro model system. LRP specific siRNA was synthesized and transfected into the K562/NaB cells. Expression ofellular daunorubicin (DNR) accumulation in K562/NaB cells were detected by flow cytometry. 50% inhibition concentration (IC50) of adriamycin (ADM) on K562/NaB cells was detected by MTT method. RESULTS: LRP mRNA level was decreased obviously; the protein expression was turned from positive result to negative result. Intracellular DNR accumulation was increased and the mean fluorescence of DNR was 3.28 times higher. The relative efficiency to ADM was 78.18％. CONCLUSION: The siRNA could effectively reverse theinduced by LRP.【Keywords】RNA, small interfering; gene, lungK562 cells; drug resistance, multiple0引言肺耐药相关蛋白（， LRP）是一种新型的与多药耐药（ance， MDR）相关的糖蛋白，主要导致细胞内药物聚集缺陷，而在多种肿瘤细胞内引起MDR. 在儿童白血病以及成人髓系白血病（AML）中，LRP表达是独立的预后决定因素之一，其过度表达造成患者对化疗不敏感，提示预后不良［1-2］. 双链短干扰RNA（shortinterfering RNA， siRNA）介导的RNA干扰（RNA interference， RNAi），是在特异性抑制哺乳动物细胞基因方面的最新突破［3-4］. 我们在建立了经丁酸钠（sodium butyrate， NaB）诱导人AML系 K562细胞，高表达LRP并介导多药耐药的细胞模型（K562/NaB）的基础上［5］，设计合成了LRP特异性，并转染上述细胞模型，观察抑制LRP基因和蛋白表达、消除LRP改变细胞内药物蓄积和分布作用的效果，以期为逆转LRP介导的肿瘤细胞MDR、提高儿童难治性和复发性白血病化疗效果探索新的方法，并探讨以siRNA介导的RNAi用于肿瘤细胞MDR治疗的可行性.1材料和方法1.1材料AML细胞系K562细胞购自中国科学院上海细胞生物研究所；单克隆抗体LRP56为Monosan公司产品；固定和破膜试剂盒、藻红蛋白（phycoerythrin，PE）荧光标记羊抗鼠IgG抗体为Caltolog Laboratories产品；NaB为Sigma公司产品.LRP特异性短干涉自行设计，由Dharmacon公司合成. 浓度20 μmmol/L，序列：5′ GCU CUU UUC AGU GCC AGA C dTdT（正义链），dTdT CGA GAA AAG UCA CGG UCU G 5′（反义链）.1.2方法1.2.1K562细胞培养和高表达LRP的K562多药耐药细胞模型（K562/N）［10］K562细胞在含100 mL/L 小牛血清的RPMI 1640培养基于37℃, 50 ml/L CO2条件下培养. K562细胞在含2 mmol/L NaB的培养液中处理3 d，制作K562细胞高表达LRP的多药耐药细胞模型，命名为K562/NaB. 阴性对照组不加NaB.1.2.2siRNA转染实验组：取K562/NaB细胞接种于24孔板内，每孔500 μL，浓度为3×108/ L. 分别以无血清RPMI 1640培养液 50 μL稀释Lipofectamine各1 μL，混匀静置后加入细胞悬液. 再加入NaB使终浓度为2 mmol/L，进行细胞培养. 每24 h以含2 mmol/L NaB的RPMI 1640培养基500 μL换液，连续3 d. 转染后24, 48, 72 h分别取细胞进行相关检测.组：取K562/NaB细胞，以无RNase水代替转染细胞，操作方法、实验条件同siRNA转染组. 取转染72 h细胞进行检测.对照组： K562/NaB细胞作为阳性对照；原始的K562细胞作为阴性对照.方法检测K562细胞LRP mRNA水平同时取实验和对照组细胞各1×106，以Trizol提取总RNA，以检测LRP mRNA水平. 反转录以Oligo(dt)15作为引物，37℃ 1 h. PCR引物：LRP上游引物：，下游引物：，扩增产物300 bp. 内对照GAPDH上游引物：，下游引物：，扩增产物590 bp. 扩增条件：95℃ 1 min，然后按94℃40 s, 58℃ 45 s, 70℃ 45 s，循环 30次，最后以72℃ 10 min结束反应产物电泳，LRP条带和GAPDH条带吸收峰比值LRP/GAPDH0.3，视为LRP mRNA表达阳性.1.2.4流式细胞术检测K562细胞LRP蛋白表达以LRP的单克隆抗体LRP56为一抗，PE标记的羊抗鼠IgG为二抗，标记各组K562细胞，在流式细胞仪上检测其LRP蛋白的表达情况. 同时取实验和对照组的细胞各1×106，依次加入前固定液、打孔剂和LRP56单抗混合物、PE标记羊抗鼠IgG，避光保存. 各步骤间以含1 ml/L 叠氮钠、100 ml/L 小牛血清的PBS 洗涤细胞2次. 标记4 h内上流式细胞仪检测LRP蛋白表达，LRP阳性细胞5%视为阳性结果.1.2.5流式细胞术检测细胞内柔红霉素（daunorubicin, DNR）蓄积同时取组转染72 h的细胞、组和阳性对照、阴性对照细胞各2×106，在含100 mL/L小牛血清的培养基中调整细胞浓度为1×109/L，加入DNR使终浓度为1 μmol/L，于37℃, 50 mL/L CO2,饱和湿度条件下培养2 h. 洗涤后立即以流式细胞仪FL 2通道在相同条件下随机检测10 000个细胞. 以不加DNR的K562细胞作为空白对照.1.2.6MTT法检测ADM的IC50同时取组转染72 h的细胞、组和阳性对照、阴性对照细胞，调整细胞浓度至1×108/L，在96孔板的各孔中加入180 μL细胞和不同浓度（0.1 μg ~100.0 μg）的ADM，培养72 h后每孔加入20 μL 5 g/L的MTT，继续孵育4 h，570 nm波长处测定吸光度（A）值. 按以下公式分别计算相对逆转效率. 相对逆转效率=（IC50A-IC50B）/（IC50A-IC50C）. 其中IC50A是K562/NaB细胞的IC50，IC50B是转染siRNA的K562/NaB细胞的IC50，IC50C是K562细胞的IC50.统计学处理：采用χ2检验和检验. P0.05认为具有统计学意义.2结果 1K562/NaB细胞LRP mRNA水平的变化组、阴性对照、阳性对照LRP mRNA表达阳性，其中阴性对照LRP/GAPDH 0.53，H2O转染组、阳性对照LRP/GAPDH分别为0.96, 0.98，较阴性对照明显升高组中，转染24, 48, 72 h, LRP mRNA检测均为阴性，较组、阳性对照、阴性对照明显减低（图1）.2K562/NaB细胞LRP蛋白表达的变化组转染48 h和72 h的细胞、阴性对照细胞LRP表达阴性；组转染24 h的细胞、H2O转染组、阳性对照LRP表达阳性. 当阴性对照LRP阳性率为1.77%时，组、阳性对照LRP阳性表达率分别为36.11%和35.10%，后二者LRP表达无明显差异（P0.05）；组中，转染24 h, 48 h, 72 h后，LRP阳性率分别为14.98%, 1.39%和1.55%，转染24 h后LRP表达较组、阳性对照明显减少（P0.01）；转染48, 72 h后， LRP阳性表达较转染24 h明显减少（P0.01）.2.3DNR在K562/NaB细胞内蓄积的变化加入DNR的实验组细胞出现明显的荧光，未加入DNR的空白对照K562细胞检测到微弱荧光（平均荧光强度为4）组和阳性对照细胞内DNR平均荧光强度分别为38和36；阴性对照K562细胞平均荧光强度为115；组转染72 h的K562细胞内DNR平均荧光强度为118，较组细胞内DNR平均荧光强度增强了3.28倍(图2). 4K562/NaB细胞药物敏感性的变化作用72 h后的K562/NaB细胞对ADM的敏感性增加，药物敏感相对逆转效率为78.6%（表1）. 表明可以恢复K562/NaB细胞对化疗药物的敏感性. 表1siRNAs对ADM作用于K562/NaB细胞的IC50的影响（略）3讨论在多种生物中，外源双链RNA（double stranded RNA, dsRNA）导入细胞中，与其同源的mRNA受到降解，其相应基因受到抑制，称为RNA干涉（RNA interference, RNAi）［6-8］. 研究表明［9-10］，体外合成的小分子dsRNA能直接触发RNAi，这些小分子dsRNA被称为小干涉RNA（small interfering RNA），即siRNA. siRNA介导RNAi的机制主要由RNAi核酸酶催化，该酶包括一个dsRNA结合区，一或多个RNA酶区域，以及一个RNA解旋酶区域. 首先dsRNA与RNA核酸酶结合，并被分解成为的的 siRNA，与该酶稳定结合形成360 kDa的蛋白质复合体. siRNA特异地与同源mRNA结合，解旋酶区域催化mRNA与siRNA的正义链交换. 最终mRNA被降解，并再生成siRNA与RNAi核酸酶的复合体. 目前，RNAi技术以其高效性、特异性，在基因沉默中得到广泛应用，对于肿瘤细胞多药耐药基因的消除是其应用的热点之一.我们设计合成了针对LRP的特异性siRNA，用以转染K562细胞高表达LRP的细胞模型，初步探讨特异性siRNA降解LRP的mRNA、降低LRP蛋白的表达的作用、消除LRP的药泵功能的效果. 本研究的发现，以转染NaB诱导3 d的K562细胞，转染24 h，LRP mRNA水平明显下降，转为阴性；LRP蛋白水平明显下降；转染48 h, 72 h, LRP LRP mRNA和LRP蛋白表达仍均为阴性. 在LRP改变细胞内化疗药物蓄积和对化疗药物耐药性方面，经转染72 h，K562/NaB细胞内DNR蓄积增加，恢复到原始的K562细胞水平，对ADM的耐药性明显降低.上述结果表明，能够有效降解K562细胞LRP mRNA，使LRP蛋白表达受到抑制，并因此消除了LRP介导的MDR作用，因此有望成为逆转LRP介导肿瘤细胞MDR的有效方法.【参考文献】［1］List AF, Spier CS, Grogan TM, et al. Overexpressionpredicts treatment outcome in acute myeloid leukemia［J］. Blood, 1996, 87: 2464-2469.［2］Volm M, Stammler G, Zintl F, et al. Expression of lungnd relapsed childhood acute lymphoblastic leukemia［J］. Anticancer Drugs, 1997, 8: 662-665.［3］Fire A, Xu S, Montgomery MK, et al. Potent and specificelegans［J］. Nature, 1998, 391: 806-811.［4］Zamore PD. RNA interference: listening to the sound of silence［J］. Nat Struct Biol, 2001, 8: 746-750.［5］李宁，钱新华，姚英民，等. 丁酸钠诱导人慢性髓系白血病K562细胞非耐药相关蛋白表达的研究［J］. 癌症，2003，22：821-825.［6］Elbashir SM, Harborth J, Lendeckel W, et al. Duplexes of ide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells［J］. Nature, 2001, 411: 494-498.［7］Caplen NJ, Parrish S, Imani F, et al. Specific inhibition ofvertebrate systems［J］. Proc Natl Acad Sci U S A, 2001, 98: 9742-9747.［8］Harborth J, Elbashir SM, Bechert K, et al. Identification of essential genes in cultured mammalian cells using small interfering RNAs［J］. J Cell Sci, 2001, 114: 4557-4565.［9］Scherr M, Battmer K, Winkler T, et al. Specific inhibition［J］. Blood, 2003, 101: 1566-1569.［10］彭智，肖志坚，王一，等. siRNA逆转K562/A02细胞多药耐药研究［J］. 中华血液学杂志，2004，25：5-7.。
靶向mdr1不同位点的siRNA对两种耐药细胞MDR的逆转效果
靶向mdr1不同位点的siRNA对两种耐药细胞MDR的逆转效果张敏;李勇莉;高建凯;王国栋;高福莲【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】2009()33【摘要】目的:探讨靶向mdr14个不同位点的siRNAs对胃癌耐药细胞SGC7901/VCR和人红白血病耐药细胞K562/A02的作用效果.方法:设计并体外转录合成4条靶向mdr1的siRNAs(mdr1si326、mdr1si1513、mdr1si2631及mdr1si3071),分别转染SGC7901/VCR细胞和K562/A02细胞,用RT-PCR和免疫组织化学检测mdr1mRNA与P-gp的表达,流式细胞仪检测细胞内阿霉素(ADR)的蓄积,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性.结果:4条siRNAs对人胃癌细胞SGC7901/VCRmdr1介导的MDR逆转效果由高到低依次为mdr1si326、mdr1si2631、mdr1si3071及mdr1si1513;对人红白血病细胞K562/A02mdr1介导的MDR逆转效果由高到低依次为mdr1si326、mdr1si2631、mdr1si3071及mdr1si1513.结论:4条siRNAs对SGC7901/VCR和K562/A02两种耐药细胞作用效果趋势相似.【总页数】7页(P3387-3393)【关键词】小干扰RNA;mdr1基因;SGC7901/VCR细胞;K56/A02细胞;靶位点【作者】张敏;李勇莉;高建凯;王国栋;高福莲【作者单位】新乡医学院组织胚胎学教研室【正文语种】中文【中图分类】R734.205;R735.2【相关文献】1.靶向siRNA沉默mdr1基因表达及对白血病耐药细胞系K562/ADM的耐药逆转作用 [J], 魏虎来;高丽萍;景涛;赵怀顺;易娟;孙静;韩俭2.siRNA抑制K562/ADM细胞mdr1基因表达并逆转其耐药性 [J], 高丽萍;魏虎来;景涛;吴勇杰;陈静;孙静;易娟;赵怀顺3.靶向MDR1基因siRNA逆转HepG2/ADM细胞耐药性的研究 [J], 贾如江;侯丽艳;刘;奇;冯运章;张贵堂4.siRNA逆转乳腺癌细胞MDR1及MDR3介导阿霉素耐药的研究 [J], 胡建莉;肖兰;崔文5.靶向stathmin和mdr1基因逆转卵巢癌细胞紫杉醇耐药的研究 [J], 肖玉洁;王红梅;韩正祥;高向阳;裴冬生;曾令宇;杜秀平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
逆转卵巢肿瘤多药耐药性的研究进展
逆转卵巢肿瘤多药耐药性的研究进展
熊丽丽;田晓予
【期刊名称】《中国实用医刊》
【年(卷),期】2005(032)020
【摘要】人体细胞都有自我保护机制,肿瘤细胞也不例外,所以它对杀死自己的各种化疗药物也有抑制作用,即防止其对自身的损害.虽然化疗已成为恶性肿瘤重要的治疗方法之一,但由于上述原因,肿瘤细胞可通过各种机制产生耐药导致化疗失败,疾病进展.耐药性产生的原因非常复杂,不同药物其耐药机制不同,同一种药物存在多种耐药机制.其中表现最突出、最常见的是多药耐药性（Multi-drug resistance,MDR）.
【总页数】3页(P42-44)
【作者】熊丽丽;田晓予
【作者单位】471003,洛阳市,河南科技大学第一附属医院妇产科;471003,洛阳市,河南科技大学第一附属医院妇产科
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.中药逆转肿瘤多药耐药性及其机制的研究进展 [J], 戴骁意;李婷;朱礼胜;单乐天
2.DNA 拓扑异构酶抑制剂在逆转肿瘤多药耐药性中的研究进展 [J], 张游华;顾牣赜;牛天力;张青川
3.P-糖蛋白及其逆转肿瘤细胞多药耐药性的研究进展 [J], 王清;刘倩;张学梅
4.五味子乙素逆转肿瘤细胞多药耐药性的研究进展 [J], 徐希妮;刘玉清;陶玉龙;侯晓节;吴海星
5.中药逆转肿瘤多药耐药性的研究进展 [J], 于海涛;付明娟
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MDR1siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的逆转作用的开题报告
MDR1siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的逆转作用的开题
报告
概述：
多药耐药性是结肠癌治疗失败的主要原因之一。
研究表明，MDR1基因编码的多药转运蛋白P-glycoprotein（P-gp）是结肠癌细胞多药耐药性的一个主要因素。
因此，通过下调MDR1基因可逆转结肠癌细胞的多药耐药性。
RNA干扰技术作为一种有效的基因靶向下调方法，能够抑制目标基因的表达并减轻多药耐药性。
本研究旨在探究MDR1siRNA对结肠癌细胞多药耐药性的逆转作用及其机制，为结肠癌治疗提供新的策略。
方法：
1. 分离培养结肠癌细胞株并测定细胞药物敏感性。
2. 构建shRNA表达载体并合成siRNA分子。
3. 转染结肠癌细胞株并检测多药耐药性的变化。
4. 利用Western blot和RT-PCR法检测MDR1基因表达水平的变化，探讨MDR1siRNA 逆转多药耐药性的机制。
预期结果：
1. MDR1siRNA可逆转结肠癌细胞的多药耐药性。
2. MDR1siRNA可下调MDR1基因的表达水平。
3. MDR1siRNA与P-gp蛋白的相互作用可能是逆转多药耐药性的主要机制之一。
4. MDR1siRNA可能成为治疗结肠癌的新策略。
结论：
MDR1siRNA能够逆转结肠癌细胞的多药耐药性，与P-gp蛋白的相互作用可能是其中一个关键机制。
这项研究有望拓宽结肠癌治疗的策略，提高治疗效果，为临床应用提供新的思路与措施。
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卵巢癌多药耐药基因的表达及其逆转** 江西省卫生厅重大招标计划资助项目(NO:200506)1 330008 江西省妇幼保健院产科100012 北京 中航工业中心医院妇产科 高国兰,涂开家1,刘福军摘 要 目的 探讨特异性靶向M DR1基因的si R NA 逆转耐药型卵巢癌细胞株多药耐药的可行性。
方法 设计靶向于M DR1基因的3条si R NA,用脂质体转染试剂分别转染P gp 阳性表达的卵巢癌S KOV3/AR 细胞,RT PCR 检测转染后48小时M DR1mRNA 的变化,流式细胞技术检测转染后72小时P gp 的表达情况;M TT 法检测转染前及转染后48小时S KOV3/AR 细胞对阿霉素、紫杉醇的敏感性。
结果 与空白对照组相比,含靶向M DR 1基因的si RNA 1组、si RNA 2组、si RNA 3组的M DR1mR NA 表达水平均有显著下降(P <0 05),对M DR 1mRNA 的抑制率分别为43 3%、41 3%和58 5%,其中si RNA 3组对靶基因的抑制作用较强,而空白对照组、脂质体组和阴性对照si R NA 组靶基因表达水平则无明显变化。
将si R NA /M DR 1 3转染细胞72小时后可观察到P gp 阳性表达率显著降低(P <0 05),其抑制率为37 95%,而空白对照组、脂质体组及阴性对照si R NA 组P gp 表达无明显降低(P >0 05)。
si R NA 3干扰S KOV 3/AR 细胞后,阿霉素和紫杉醇的IC 50分别下降为干扰前的1/3 56和1/3。
结论 RNA i 在体外实验能有效逆转卵巢癌细胞的耐药,为其在实体瘤耐药逆转的运用提供了实验依据,值得进一步研究。
关键词 干扰RNA; 多药耐药基因; P 糖蛋白; 卵巢癌; 耐药逆转中图分类号:R 737 31 文献标识码:A 文章编号:1009-0460(2010)10-0870-04Expression and reversal of m ulti d rug resist ance gene i n ovarian cancerGAO Guo lan,TU Ka i jia,LIU Fu jun.Depart m ent of Gynaecology and Obstetrics ,theAviation Industry C entral H os p ital of China,B eijing 100012,ChinaAbstract O b ject i ve T o study t he special i nh i b iti on e ffect of P pg expressed ov arian cancer ce lls on t he M DR 1gene byM DR 1targeted si R NA,and offer experi m ental ev i dence for the feas i bility of t he ovarian cancer m ulti drug resistance reversa l by si R NA.M ethods T hree M DR 1targeted si R NA s w ere designed and syn t hesized separate l y .A fter transfected i nto S KOV 3/AR 48and 72hours ,t he RT PCR and flo w cytom etry w ere used respectively to deter m i ne t he expression o f mRNA and P gp of M DR 1.M TT assay w as app lied t o check t he drug sensiti v ity o f adria m ycin and pac litaxe l be f o re and after transfection .R esults T he express i on l eve l of M DR 1mRNA a ll si gn ificantly decreased i n every s i R NA tea m (P <0 05),and the i nhibiti on rati o show ed 43 3%,41 3%and 58 5%respectively ,wh ile no d i sti nct change was found in t he li pofectem ine pared to the blank tea m,neg ti ve contro l tea m and lipo fecte m i ne tea m didn t show si gnificant dec line ,and P pg l eve l i n the si RNA 3tea m reduced 37 95%(P <0 05).T he I C 50o f adr i a m y ci n and pac li taxe l dec li ned 3 56and 3folds after s i R NA 3transfected into SKOV /AR cell s ,respecti ve l y .Conc l u sion RNA i can re verse the ovar i an cancer m ultidrug res i stance in vitro ,and m ay prov i de evidence for so lid t umo r drug resistance reversa l i n the fut ure .K eyW ords si RNA; M DR1; P gp ; O var ian cancer ; M ulti drug resistance reversa l 卵巢癌是威胁女性生命健康的常见妇科恶性肿瘤之一,其死亡率居生殖系统恶性肿瘤首位,且其发病率呈逐年上升趋势[1 2],欧洲一项包括23个国家在内的回顾性研究结果显示,卵巢癌平均5年生存率为37%(25 6%~51 4%)[3],而我国一直徘徊在30%左右。
卵巢癌的治疗方法主要为细胞减灭术和以铂类及紫杉醇为基础的化疗,但绝大多数的晚期卵巢癌容易复发并发展为耐药,所以卵巢癌的治疗效果一直不理想。
化疗药物引起肿瘤细胞耐药的原因很多,其中最主要的是多药耐药基因编码的P 糖蛋白(P gp)介导的多药耐药(mu ltidr ug resistance ,MDR ),它是目前制约肿瘤患者化疗效果的最重要因素[4]。
本实验使用化学合成的MDR1si R NA,通过阳离子脂质体转染P gp 阳性表达的卵巢癌细胞株SKOV3/AR,观察其对靶基因的特异性抑制作用,为RNA i逆转卵巢癌多药耐药的可行性提供实验基础。
1 材料与方法1 1 材料 P gp表达阳性的卵巢癌细胞株SK OV3/AR购自中国科学院上海细胞资源中心。
靶向MDR1的3条si R NA序列由广州锐博生物科技有限公司合成。
actin和MDR1引物购自上海生物工程技术服务有限公司,GAPDH引物购自广州锐博生物科技有限公司。
P gp抗体、P gp抗体同型对照购自北京奥博森生物公司。
见表1、表2。
表1 靶向MDR1的si R NA序列靶序列正义链(5 3 )反义链(5 3 )si R NA/M DR1 1GGAGGATTATGAAGCTAAA GGAGGAUUAUGAAGCUAAA d T d T dT d T CCUCCUAAUA C UU CGAUUU si R NA/M DR1 2GGCACAAACCAGATAATAT GGCACAAACC AGAUAAUAU dTdT d T d T CCGUGUUUGGU C UAUUAUA si R NA/M DR1 3G C A CTAAAGTAGGAGACAA GCACUAAAGUAGGAGA C AA dTdT dTdT CGUGAUUUCAUCC U C U GUU表2 PCR引物序列正义链(5 3 )反义链(5 3 )产物长度(bp) actin CTGT CCCTGTATG CCTCTG ATGTCACGCACGTAATCC218GA PDH CCCATGGCAAATTCCATGGCACCG GTCATGGATGACCTTGGCCAGGGG344M DR1ATATCAG CAG CCCACATCAT GAAGCA CTGGGATGT CCGGT1531 2 方法1 2 1 使用荧光标记的si R NA观察转染效果 将SKOV3/AR细胞接种于24孔板,24h后用不同浓度梯度(10、20、30和50nm ol/m l)含荧光标记的si R NA (5' FAM N Control si R NA)转染细胞,置于37 、5% CO2的培养箱中避光孵育16h[5],无菌PBS洗涤细胞2次,在荧光倒置显微镜下用波长为480nm蓝光激发,观察绿色荧光。
1 2 2 筛选干扰效率较高的si R NA片段 将SK OV3/AR细胞接种于6孔板,细胞密度为5 105个/孔,24h后用转染细胞,si R NA浓度为30nm ol/m l。
实验分6组,分别为空白对照组、脂质体组、N Con tro l si R NA组(阴性对照si R NA组)、si R NA/M DR1 1组(si R NA 1组)、si R NA/M DR1 2组(si R NA 2组)和si R NA/M DR1 3组(si R NA 3组),48h后行RT PCR 检测各组细胞MDR1mRNA水平,流式细胞仪检测蛋白的表达情况。
1 2 3 流式细胞技术检测各组P gp的表达 将SKOV3/AR细胞接种于6孔板,分为4组,分别为空白对照组、脂质体组、阴性对照si R NA组和si R NA 3组,转染后72h收集细胞,加入PBS液洗去残余胰酶及培养基,再分别加入P gp抗体及同型对照(浓度为1:50和1:30),37 孵箱中孵育30m i n,加入PBS洗去残余抗体及同型对照,最后用流式细胞仪进行检测。
1 2 4 转染前后SKOV3/AR细胞对阿霉素及紫杉醇的敏感性检测 将细胞接种于两块96孔板,板1待细胞贴壁后立即转染,24h后更换完全培养基,并与板2同时加入不同浓度梯度(分别为0 25、0 5、1、2、4倍PPC)的阿霉素和紫杉醇(泰素),每种药物浓度设3个复孔。