实验六地锦草黄酮的提取及其药敏实验
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地锦草黄酮的提取及其药敏实验
地锦草 (Humifuse Euphorbaia Herb )
别名血见悉、红丝草、奶疳草、奶 浆 草。
来源 为大戟科植物地棉Euphorbia humifusa Willd.的地上部分。
植物形态 一年生葡萄草本，有白色乳汁。 茎纤细，近基部分枝，带紫红色，无 毛。叶对生，长圆形，长4～10mm，宽 4～6mm，先端钝圆，基部偏斜，边缘 有细齿，绿色或带红色，两面无毛或 疏生柔毛。种子卵形，黑褐色，外被 白色蜡粉。花期7～10月，果实7月后 渐次成熟。 生于平原荒地、路边、田 间。除广东、广西外，全国各地均产。
感
，
8mm＜D≤13mm为低度敏感，13mm＜D≤19mm为中
度敏感，D＞19mm为高度敏感。
五、实验结果记录
表（一）黄酮定性检测结果
实验项目 盐酸-镁粉反应 铅盐沉淀反应 三氯化铝反应 与碱反应 氨熏试验
反应
结果
实验结果记录：抑菌直径（mm）
药物 细菌
青霉素 （1.6万 u/ml）
链霉素 （1.0万 u/ml）
四、实验方法
（四）抑菌效果的测定
采用纸片法。将直径为6mm的灭菌滤纸片浸泡
2h。干燥后用紫外线照射灭菌10-15min。用灭
Fra Baidu bibliotek
菌镊子将纸片放在含菌平板上，把每个处理过
的培养皿放到37℃培养箱中培养。24h后用游标
卡尺测定抑菌圈直径的大小，并以此判断地锦
草黄酮溶液对供试菌的抑制效果。
抑菌效果判断标准为：D＜8mm为不敏
磺氨嘧啶钠 地锦草黄
(10% )
酮
金葡菌
沙门氏杆菌
大肠杆菌
上一张 下一张 主 页 退 出
六、思考题
黄酮的主要药理作用是什么？有何临床应 黄酮的提取过程中应注意什么？
用？
感谢下 载
四、实验方法
（一）地锦草黄酮的提取 1.1粗提物的提取 准确称取地锦草干燥粉末20g，80%的乙醇200ml超声25min，转
移至500ml的圆底烧瓶，60℃加热回流2h，共回流2次，过滤，合并滤液，减 压浓缩滤液，浓缩后加少量纯净水，于烧杯中静置过夜，离心除杂，取上清 液。
四、实验方法
1.2 粗提物的纯化 将预处理的D-101大孔吸附树脂湿法装柱，先用95%的乙醇洗 脱，再用蒸馏水洗脱，直至洗脱液无乙醇气味。取20ml粗提液，以2BV/h流速 上柱，上柱完毕后静置吸附30min，吸附后先用蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，然 后用75%的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩，得地锦草总黄酮浸膏， 浸膏冷冻干燥，称重。
采制 夏、秋季采收，除去杂质，晒干。
图 1 地锦草植株形态
一、实验原理
（一）地锦草黄酮的提取 黄酮是地锦草的主要有效成分之一，具有三环苯基苯并吡喃结 构的呈色化合物。黄酮类化合物均可溶于乙醇，而超声波的超 声空化作用对细胞膜的破坏有助于黄酮类化合物的释放与溶 出，超声波使提取液不断振荡，有助于溶质的扩散，提高了有 效成份的提取率以及原料的利用率。本实验将传统的回流提取 法结合超声波法提取地锦草黄酮。 （二）地锦草黄酮的纯化 利用D-101大孔树脂的吸附与筛选原理，经一定的溶剂洗脱不 同分子量的化合物，从而得到分离纯化，得到总黄酮。
二、实验目的
（一）掌握提取地锦草黄酮的方法； （二）掌握药敏实验的基本步骤。
三、实验用仪器及材料
实验仪器及设备 旋转蒸发仪、电子天平、恒温水浴锅、恒温培 养箱、超净工作台、超声波细胞粉碎仪、冷冻 干燥机、圆底烧瓶、平皿、漏斗、烧杯等。 实验对象及材料 地锦草干燥粉末、80%乙醇、D-101大孔吸附树 脂、牛肉浸膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠等。
四、实验方法
（二）地锦草黄酮的定性鉴定
反应类型 盐酸-镁粉反应 铅盐沉淀反应 三氯化铝反应 与碱反应 氨熏试验
现象 溶液变桃红色
红色沉淀 黄色斑点 溶液变黄 黄色斑点
结果
可能存在黄酮类化合物 可能存在黄酮类化合物 可能存在黄酮类化合物 可能存在黄酮类化合物 可能存在黄酮类化合物
四、实验方法
（三）供试菌液的制备 所用菌株使用前将保存菌种先接种平板，于 37℃培养24h后，挑选典型菌落接种于肉汤培养 基中，再经37℃肉汤培养基培养18h后，以平板 计数法测定其生长浊度，然后将菌液稀释至105 —106个菌/ml备用。
地锦草 (Humifuse Euphorbaia Herb )
别名血见悉、红丝草、奶疳草、奶 浆 草。
来源 为大戟科植物地棉Euphorbia humifusa Willd.的地上部分。
植物形态 一年生葡萄草本，有白色乳汁。 茎纤细，近基部分枝，带紫红色，无 毛。叶对生，长圆形，长4～10mm，宽 4～6mm，先端钝圆，基部偏斜，边缘 有细齿，绿色或带红色，两面无毛或 疏生柔毛。种子卵形，黑褐色，外被 白色蜡粉。花期7～10月，果实7月后 渐次成熟。 生于平原荒地、路边、田 间。除广东、广西外，全国各地均产。
感
，
8mm＜D≤13mm为低度敏感，13mm＜D≤19mm为中
度敏感，D＞19mm为高度敏感。
五、实验结果记录
表（一）黄酮定性检测结果
实验项目 盐酸-镁粉反应 铅盐沉淀反应 三氯化铝反应 与碱反应 氨熏试验
反应
结果
实验结果记录：抑菌直径（mm）
药物 细菌
青霉素 （1.6万 u/ml）
链霉素 （1.0万 u/ml）
四、实验方法
（四）抑菌效果的测定
采用纸片法。将直径为6mm的灭菌滤纸片浸泡
2h。干燥后用紫外线照射灭菌10-15min。用灭
Fra Baidu bibliotek
菌镊子将纸片放在含菌平板上，把每个处理过
的培养皿放到37℃培养箱中培养。24h后用游标
卡尺测定抑菌圈直径的大小，并以此判断地锦
草黄酮溶液对供试菌的抑制效果。
抑菌效果判断标准为：D＜8mm为不敏
磺氨嘧啶钠 地锦草黄
(10% )
酮
金葡菌
沙门氏杆菌
大肠杆菌
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六、思考题
黄酮的主要药理作用是什么？有何临床应 黄酮的提取过程中应注意什么？
用？
感谢下 载
四、实验方法
（一）地锦草黄酮的提取 1.1粗提物的提取 准确称取地锦草干燥粉末20g，80%的乙醇200ml超声25min，转
移至500ml的圆底烧瓶，60℃加热回流2h，共回流2次，过滤，合并滤液，减 压浓缩滤液，浓缩后加少量纯净水，于烧杯中静置过夜，离心除杂，取上清 液。
四、实验方法
1.2 粗提物的纯化 将预处理的D-101大孔吸附树脂湿法装柱，先用95%的乙醇洗 脱，再用蒸馏水洗脱，直至洗脱液无乙醇气味。取20ml粗提液，以2BV/h流速 上柱，上柱完毕后静置吸附30min，吸附后先用蒸馏水洗脱，洗脱液弃去，然 后用75%的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩，得地锦草总黄酮浸膏， 浸膏冷冻干燥，称重。
采制 夏、秋季采收，除去杂质，晒干。
图 1 地锦草植株形态
一、实验原理
（一）地锦草黄酮的提取 黄酮是地锦草的主要有效成分之一，具有三环苯基苯并吡喃结 构的呈色化合物。黄酮类化合物均可溶于乙醇，而超声波的超 声空化作用对细胞膜的破坏有助于黄酮类化合物的释放与溶 出，超声波使提取液不断振荡，有助于溶质的扩散，提高了有 效成份的提取率以及原料的利用率。本实验将传统的回流提取 法结合超声波法提取地锦草黄酮。 （二）地锦草黄酮的纯化 利用D-101大孔树脂的吸附与筛选原理，经一定的溶剂洗脱不 同分子量的化合物，从而得到分离纯化，得到总黄酮。
二、实验目的
（一）掌握提取地锦草黄酮的方法； （二）掌握药敏实验的基本步骤。
三、实验用仪器及材料
实验仪器及设备 旋转蒸发仪、电子天平、恒温水浴锅、恒温培 养箱、超净工作台、超声波细胞粉碎仪、冷冻 干燥机、圆底烧瓶、平皿、漏斗、烧杯等。 实验对象及材料 地锦草干燥粉末、80%乙醇、D-101大孔吸附树 脂、牛肉浸膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠等。
四、实验方法
（二）地锦草黄酮的定性鉴定
反应类型 盐酸-镁粉反应 铅盐沉淀反应 三氯化铝反应 与碱反应 氨熏试验
现象 溶液变桃红色
红色沉淀 黄色斑点 溶液变黄 黄色斑点
结果
可能存在黄酮类化合物 可能存在黄酮类化合物 可能存在黄酮类化合物 可能存在黄酮类化合物 可能存在黄酮类化合物
四、实验方法
（三）供试菌液的制备 所用菌株使用前将保存菌种先接种平板，于 37℃培养24h后，挑选典型菌落接种于肉汤培养 基中，再经37℃肉汤培养基培养18h后，以平板 计数法测定其生长浊度，然后将菌液稀释至105 —106个菌/ml备用。