微生物标本接种详解演示文稿
微生物接种方法详解
微生物接种方法详解一、平板划线分离法平板划线分离法:是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面，通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。
有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。
其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
为方便划线，一般培养基不宜太薄，每皿约倾倒20ml培养基，培养基应厚薄均匀，平板表面光滑。
划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种分区划线法是将平板分四区，故又称四分区划线法。
划线时每次将平板转动60~70°划线，每换一次角度，应将接种环上的菌烧死后，再通过上次划线处划线；另一种连续划线法是从平板边缘一点开始，连续作波浪式划线直到平板的另一端为止，当中不需灼烧接种环上的菌。
1）连续划线法将琼脂平皿半开盖倒置于培养箱内至无冷凝水，接种环于酒精灯外焰烧至红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环至红。
轻轻摇匀待接种试管，左手手心托待接种试管底侧部，右手执接种环，右手小指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，再插入待接接种液中，蘸一下，取满一环，抽出、烧塞、盖盖、放回试管架。
或将接种环通过稍打开皿盖的缝隙伸入平板，在平板边缘空白处接触一下使接种环冷却，然后以无菌操作接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。
于靠近酒精灯处打开平皿盖约30°，右手将环伸进平皿，将菌种点种在平板边缘一处，轻轻涂布于琼脂培养基边缘，抽出接种环，盖上平皿盖，然后将接种环上多余的培养液在火焰中灼烧，打开平皿盖约30°伸入接种环，待接种环冷却后，再与接种液处轻轻接触，开始在平板表面轻巧滑动划线，接种环不要嵌入培养基内划破培养基，线条要平行密集，充分利用平板表面积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上皿盖。
灼烧接种环，待冷却后放置接种架上。
微生物检验基本操作技能—接种技术(食品微生物检验技术课件)
的环境中进行，必须严格遵守无菌操作规范。
1.接种针；2-接种环；3-接种钩；4-涂布棒；6-接种圈；7-接种锄；8-小解剖刀
高压蒸汽灭菌锅，接种环，牛肉膏蛋白胨培养基，培 养皿，试管，三角瓶，酒精灯，移液管，无菌水，灭 菌保藏菌种的试管 （三）灼烧接种环 （四）接种环接种 （五）恒温培养
1、接种环（针、铲）一定要保证其冷却后方可进行转接，以免 烫死微生物。
2、取试管棉塞时要轻缓，不宜用力过猛。棉塞一定要夹在手上 ，不能放在桌子上。
3、斜面接种时，所划直线尽可能直，不要划破培养基，也不要 使接种环触碰管壁或管口。
4、牢固树立无菌操作概念，细心体会无菌操作要领。
为什么在接种前一定要将接种环冷却？如 何灼烧过的接种环是否已经冷却？
微生物接种技术-PPT
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
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（1）斜面接平板 a.划线法：见平板划线分离法。 b.点种法：一般用于观察霉菌和酵母细 胞，轻轻点在平板的表面即可。
（2）平板接斜面：一般是将经 平板分散培养得到的单菌落接 种到斜面，以便作鉴定或扩大 培养、保存之用。
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（3）平板涂布法
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1.斜面接种：
从已长好微生物移接到另一斜面管的 方法。此法用于好气性微生物的接种。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上， 并尽量放平。用右手先将塞拧转松动， 再拿接种环，用右手的小指、无名指和 手掌拨下塞并夹紧，同时将管口在火焰 上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管 内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部， 沿斜面划曲线或直线。
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试管斜面接种
1.两支试管呈“V”字形 3.火焰上微烧一周 5.接种、划线
2.拔下试管塞 4.接种环灼烧、冷却 6.塞上塞子，灼烧接种环 6
2.液体接种：
将菌接种到液体培养基（试管、三角瓶等）中的 方法。
操作与上法基本一致，只是在将接种 环送入液体培养基中时使环在液体与 管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分 散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀， 即可培养。 如果菌种是培养在液体培 养基中时，一般用移液管或接种环接 种。
• 倒培养基，制成平板。 • 凝固后，另取一支吸管吸取相应的菌液0.2mL放
至平板上。 •用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂 抹均匀。倒置于37℃条件下培养1～2d， 观察菌落形态及计数菌落。
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凝 固 后
37℃ 培养
涂布法流程图
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思考题 （1）用接种环接种时有哪些注意事项 （2）涂布棒消毒方法有哪些？各应注意什 么？
微生物临床送检标本的接种知识讲解
处理。
一机医院 . 检验科
科内学习讲座
二、微生物检验的相关用品
留取标本：
尿液、
1.
痰等。
取
无菌痰杯
样 容 器
留取标本： 血液、 胸水、
腹水、
穿刺液等
血培养瓶
一机医院 . 检验科
无菌拭子
留取标本： 脓汁、 分泌物、 咽拭子等
留取标本： 皮屑、 甲屑等。 真菌培养管
标本的初步判断
（1）
A、外 观 B、标 示 C、容器的选择 D、留取的标本量
一机医院 . 检验科
标本的接种
（2）
A、正确的接种时间 B、选择正确的培养基 C、选择正确的接种方法 D、选择正确的培养环境 E、正确的放置培养基
科内学习讲座
标示
科别 姓名 床号 采样时间
8/4 16:20
一机医院 . 检验科
微生物临床送检标本的接种
一、微生物检验的质量控制
分析前
定
义：分析前阶段按时间顺序，该阶段始于来自临床医师的申请，
包括检验要求、患者准备、原始样本采集、运送到实验室并
在实验室内部的传递，至检验分析过程开始时结束。
主要内容：保证检验项目申请的科学、合理性；根据临床医师的检验要求，
患者的病情正确准备；原始样本的正确采集及运送。
SS琼脂平板：有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。因选 择性过强，可影响检出率，所以，使用时最好加一种 弱选择平板以配对互补。
血液培养瓶：用于血液、骨髓中分离常见病原菌。
一机医院 . 检验科
科内学习讲座
接种方法
平板划线分离法
连续划线分离法 本法主要用于杂菌不多多的标本。 用接种环取标本少许，于平板平板1/5处密集涂布，然后来回做曲 线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。
细菌的接种与培养—细菌的接种类型(微生物检验课件)
分区划线法：适用于含菌量较多的标本 连续划线法：适用于含菌量较少的标本 液体培养基接种法 穿刺接种法：用于观察细菌动力 斜面接种法 倾注培养法：用于细菌计数
简述细菌接种的基本方法。 简述细菌各种接种方法的意义。 如何做到无菌操作？
细菌接种技术
知道平板划线法、斜面、液体和半固体培养基等各种接种 方法
知道接种细菌用具、接种细菌的环境要求 学会正确选择并使用接种细菌用具的方法 明确各种培养基的用途
细菌的人工培养
无菌技术：是防止微生物进入物品或机体，同时防止被检 物中可能存在病原微生物污染周围环境及工作人员的规范：无菌室、无菌试管、接种 环（针）、微生物实验室的管理、个人防护。
细菌的接种工具
接种与分离技术
平板划线分离法：1.分区划线 2.连续划线 斜面接种法 穿刺接种法 液体培养基接种法 倾注平板法 涂布接种法
细菌接种目的及方法
平板划线接种法： ➢ 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以获得纯
(完整版)微生物的接种技术
微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 实验说明将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。
接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。
无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。
接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。
3 实验器材3.1 器械和用品酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。
3.2 菌种和培养基菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。
培养基：普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。
4 实验流程斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。
5 操作步骤5.1 斜面接种法斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。
将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。
右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。
用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
微生物接种技术PPT
药物分析微生物接种技术一、接种工具二、接种方法目录接种是指将微生物移接到另一个灭菌的新鲜培养基中，使其生长繁殖的过程。
微生物接种技术是进行微生物相关实验所必需的基本操作技能，为了确保接种过程中不受杂菌的污染，接种必需采用严格的无菌操作。
1．接种针2．接种环3 . 接种钩4 . 涂布器一、接种工具1 2 3 4用于固体、液体培养基的接种环或针金属柄绝缘柄用于半固体培养基的接种二、接种方法1．斜面接种斜面接种是将微生物从一个斜面培养基接种至另一个斜面培养基上的方法，在斜面接种法中最常用的是划线接种，即用接种环挑取少量菌种后，在斜面培养基上做来回直线的移动，以达到接种目的。
2．穿刺接种穿刺接种是用接种针挑取少量菌种后，沿半固体培养基中心向管底做直线穿刺后，接种针按原路返回的接种方法，根据穿刺时试管的方向又分为垂直法和水平法，垂直法时要注意试管口朝下，该方法主要用于保藏厌氧菌种和研究微生物的运动性。
3．平板接种平板接种是将微生物菌体接种到平板培养基上的方法。
在平板接种法中比较常用的方法有两种，一种是划线接种，即用接种环挑取少量菌种后，在平板培养基上做来回直线的移动，以达到分离纯化培养的目的；另一种是涂布接种，即将菌液注入平板培养基表面，用涂布器将菌液涂布均匀，使菌体在培养后长出单个菌落。
三段分区法四段分区法五段分区法4．液体接种液体接种是指将菌体接种到液体培养基培养的一种接种方法。
根据接种对象的不同，可分为两种，一种是由斜面培养基接入液体培养基；另一种是由液体培养基接入液体培养基。
微生物接种技术THANKS 谢谢观看。
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综合病症
•尿道炎或急性尿路综合征 •膀胱炎-膀胱的炎症 •肾盂肾炎-肾脏的炎症
有症状的 无症状的
Age年龄 5
Studies from Baylor, Nashville, & France
பைடு நூலகம்
血培养
一旦提示阳性结果，涂片行革兰染色，根据镜检结 果决定转种羊血平皿及巧克力平皿上，并分别放置 普通培养箱及CO2烛缸内35 ℃ ～37℃孵育培养需 氧和兼性厌氧菌；转种布氏血琼脂，厌氧环境培养 厌氧菌；转种沙保罗培养基，培养真菌。
尿道感染
•每年850万例尿路感染, 90%为女 性
•1/2.5个妇女在一生中会得UTI
•下行性感染：血流肾脏膀胱（金 黄色葡萄球菌，酵母菌，结核分枝杆菌 ）
•上行性感染：尿道膀胱肾 盂 血流
Anatomy of Urinary Tract 尿路的解剖图
侧面图
膀胱 耻骨
子宫颈 尿道
输卵管 卵巢
子宫 阴道 直肠 肛门
将革兰染色结果立即向临床电话初级报告。 待细菌鉴定及药敏结果出来后再向临床发出最终报
告。
血液培养
【特别提醒】 厌氧菌 从血液中培养出厌氧菌的比率相对比较少，不推
荐每个病人常规增加一个厌氧血培养，但如果必要，选用 其配套的厌氧培养基来培养厌氧菌。 营养苛刻的细菌（Fastidious Bacteria） 布鲁氏菌属可以在常规血液培养基中生长，并且尽管可以 在三天内分离到，但是推荐培养21天，且有必要进行末次 接种。 HACEK群细菌—嗜泡沫嗜血杆菌（Haemphilus aphrophilus）、放线共生放线杆菌（Actinobacillus actinomycemcomitans）、人心杆菌(Cardiobacterium hominis)、侵袭埃肯菌(Eikenellus corrodens)和金氏杆菌 （Kingella kingae）与细菌性心内膜炎有关，常规血培养 基中可以分离，但培养14天和进行肉汤末次接种会更有效。
•如果皮肤定植的细菌没有被杀死，这
些细菌将通过针头被吸入血培养瓶并在 瓶中生长
•这些细菌(主要为凝固酶阴性葡萄球菌)
引起导管相关性败血症 (住院患者血培 养第一位)
•医生不能将真的凝固酶葡萄球菌感染
和皮肤定植菌“污染”相区分，因此他 们用万古霉素治疗患者
皮肤凝固酶阴性葡萄球菌定植于输液管
皮肤不是无菌的;
体积
% 阳性血培养结果 vs. 采集的套数
80%
100
%
90
80
真阳性 70
60
50
40
30
20
10
0
1st
Mayo Clinic Study
89% 2nd
99%
20 ml/套
3rd
用于培养的血液体积
体重
磅 千克
体积 总量/ 1% 全血体 % 总血
(ml)/ 2次穿
积
液体积
穿刺 刺
<19 <9 1 2 2 ml 1%
19- 9-14 3 6 6-10 ml 1-3% 30
31- 15- 5 10 10-20 1-2%
60 27
ml
61- 28- 10 20 20-30 1-2%
采集血培养时间的重要性
166 病人
9% +
105 病人
14% +
发热高峰前12-2.5小时
发热高峰前2.5-0.5小时
199 病人
9% +
258 病人
11% +
发热高峰期间
发热高峰后1-12小时
Thomson et al. 1991. ASCP. Mayo Clinic Study
立即获得足够血液并且开始抗生素 治疗
• 从不同部位获得2-3套血培养(40-60ml血 液)
• 最好在5分钟内采集
#1
#2
阳性报警时间
确定检测阳性的培养时间
•保留导管
➢管腔刷 ➢定量培养 (CVC & 外周血) ➢达到阳性的时间 (CVC & 外周血)
哪部分用于培养
Maki 滚动法
导管尖阳性培养结果
苛养菌
不要放置常规血培养>5天 •由如下微生物引起的可疑的败血症或心内膜炎:
霉菌(组织胞浆菌 , 镰刀菌, 等等
秕糠马拉癣菌 军团菌属 巴尔通体
3 分离管
新型隐球菌
Q-热 惠普尔病 支原体属 其他病原菌
血清Ag凝集 + 分离培养
咨询ID医生
干预措施可以减少导管相关性感染
• 手消毒
soap
• 用洗必泰进行皮肤消毒
• 在穿刺过程中完全无菌操作
• 锁骨下静脉穿刺
• 移去不必要的中央静脉插管
血管内导管相关性感染预防指南. MMWR Recom Rep 2002:51(RR10)1-29
导管相关感染的诊断
关键点: 患者必须有菌血症
•敏感性和特异性 •检测管腔内的 & 外周细菌 •不需要移走导管 •可靠性和可重复性 •易操作 •快速回报 •感染的微生物可以分离 •对患者安全
检测导管相关感染
•移走导管
➢ Maki Roll (半定量) ➢超声波降解和稀释 (定量) ➢通过管腔抽吸 (定量)
微生物标本接种详解演示文稿
优选微生物标本接种
血培养
增菌培养
商品血培养瓶 成人瓶、儿童瓶、中和抗生素瓶 无菌操作采集血标本接种到培养瓶后，轻轻混匀以
防血液凝固。立即送检，切勿冷藏。 采血量成人采血量是10～20ml，儿童1～5ml。血液
和肉汤之比为1:5～1:10。 35℃ 培养5-7天
血培养
常规血液培养基不能分离钩端螺旋体。 分枝杆菌（Mycobacteria） 使用常规血培养
基不能分离。 导管头 培养导管头是为了明确细菌来源。
最常用的方法是半定量的方法，方法是用 5cm长的导管末端部分在血液琼脂平板上滚 动4次。培养物出现15个以上的菌落，提示有 潜在的导管相关性感染。
定植细菌“污染”血培养
葡萄球菌在塑料CVC表面生长形成生物膜
污染细菌
血培养污染定义为在几次血培养中单个血培 养下列细菌阳性:
•凝固酶阴性葡萄球菌 •棒状杆菌 •微球菌 •丙酸杆菌 • 芽孢杆菌
血培养污染 vs. 皮肤消毒
5 4.5
4
% 污染3.5
3 2.5
2 1.5
1 0.5
0
酒精
碘酊
聚维酮碘
随着时间推移败血症病原菌的变迁
%住 院患 者血 培养 阳性 结果
18
#1
16 14
pathogen
12
10
8
6
4
2
0
萄球菌 金黄色葡
厌氧菌
肠球菌 酵母性菌葡萄球菌 凝固酶阴
1970's Today
From UW, Madison and G.Washington Univ., St. Louis
血培养存在的主要问题