尿液微量蛋白检测临床意义
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30~300mg/24h或排出率20~200μg/min时，称为微量白蛋
白尿。如排出mAlb>95%可信限，即为早期肾小球损伤。 这类患者处于疾病早期，及时检出进行治疗，可阻断病情 向不可逆蛋白阶段发展，对提高病人今后的生存质量和减 轻社会医疗经济负担具有重大意义。
微量白蛋白检测临床意义
进十年来，mAlb检测方法经过放射 免疫法，酶免疫法和免疫浊度法3个阶 段，已逐渐成熟起来。目前，免疫浊度 测定技术已得到推广。速率散射浊度法 灵敏度，准确度，精密度均较好，但需 用高质量的特种蛋白分析仪。而透射比 浊法则可用于各种自动化分析仪，具有 速度快、省试剂、适于批量检测的优点。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 增浊剂：非离子型亲水剂如聚乙二 醇（PEG）、吐温-20等，以PEG6000 最好，浓度一般为3%~4%。浓度过高 可致非特异沉淀。
免疫透射比浊法
免疫比浊法测定的注意事项：
1.标本
3.定标
2.试剂
4.线性
尿微量白蛋白检测方法
检测方法： 免疫透射比浊法
四、标本保存与运送：
• （1）标本由临床运送至实验室要尽可能 快，必须分离出血清（浆）后运送；
• （2）标本运送要注意防止标本外溢、蒸 发和污染（标本管要盖盖子）；
• （3）足量。
每一个标本都是唯一的，不可替代的！ 每一个标本都是危险的，具有潜在传染 性！
肾 小 球 滤 过 膜 示 意 图
微量白蛋白检测临床意义
微量清蛋白尿对早期肾损害诊断具有重要意义。实践证 明,单一指标有其局限性。因为早期肾损害不仅是肾小球损 害,有的可以是肾小管功能的受损,也可以是两者同时受损。 正常尿中蛋白质以白蛋白为主，而分子量低于50 000的蛋 白质大部分被肾小管重吸收，而尿中含量极微。健康人尿 中mAlb95%可信限<30mg/24h。当尿中mAlb排出量在
四、尿β2微球蛋白
理化性质：
分子量：11800 分子直径：3.4-3.8nm PI:4.9 肾小球滤过膜：自由滤过 肾小管重吸收：几乎全部
五、尿α1微球蛋白
理化性质：
分子量：26000-33000 分子直径：3.6nm PI:3.6-4.4 肾小球滤过膜：自由滤过 肾小管重吸收：99.9％
六、尿视黄醇结合蛋白
原理：
利用抗原（白蛋白）和特异性抗体（羊 抗人白蛋白抗血清）相结合，形成不溶 性免疫复合物，使反应液产生混浊，其 浊度高低即透光度减少、吸光度增加反 映血清样本中白蛋白的浓度，可由校准 品所作的剂量－相应曲线算出。
微量蛋白检测临床意义
正常肾小球基底膜具有3~4nm的微孔,并带 有一层负电荷,即具有孔径屏障和电荷屏障,使血浆 中带负电荷的中等分子及大分子蛋白质不易通过。 在正常情况下,肾小球滤液中的小分子蛋白质 95%~99%可通过肾小管重吸收,因而尿液中蛋 白质含量很少。正常生理情况下,尿中这些蛋白质 含量仅为微克或毫微克水平,在各种致病因子作用 下,肾小球滤过膜和肾小管发生结构和功能损伤,使 尿液中蛋白质过高,超过了肾小管的重吸收功能而 出现蛋白尿。
一、尿微量白蛋白
理化性质：
分子量：69000 分子直径：3.6nm PI:4.9 肾小球滤过膜：不滤过 肾小管重吸收：少量
二、尿转铁蛋白
理化性质：
分子量：77000 分子直径：3.8nm PI:5.2 肾小球滤过膜：不滤过 肾小管重吸收：少量
三、尿免疫球蛋白IgG
理化性质：
分子量：150000 分子直径：10-50nm PI:5.8-7.2 肾小球滤过膜：不滤过 肾小管重吸收：少量
H型抗体以马免疫血清为代表，其 抗原与抗体的合适比例范围较窄，抗原 或抗体过量，均可形成可溶性免疫复合 物。人和许多大动物的抗血清皆属H。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 反应溶液：pH6.5~8.5，适当浓度 电解质（中和抗原抗体复合物表面电荷， 促进凝聚）、离子强度（大，IC形成 快）；一般常用磷酸盐缓冲液。
免疫透射比浊法
原理：
利用抗原（白蛋白）和特异性抗体 （羊抗人白蛋白抗血清）相结合，形成 不溶性免疫复合物，使反应液产生混浊， 其浊度高低即透光度减少、吸光度增加 反映血清样本中白蛋白的浓度，可由校 准品所作的浓度－吸光度相应曲线算出。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 抗原、抗体比例与浊度关系：抗原 过量，出现“带现象”，IC分子小，且 可发生再解离，浊度下降，光散射减少。 抗体过量，IC形成随抗原量增加到抗原 抗体最适比例时达高峰。抗体须过量但 又必须适量，抗体浓度是测定关键。
免Leabharlann Baidu透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 抗体质量：特异性、效价、亲和力、 R型抗体
高亲和性抗体的抗原结合点与抗原表 位的空间构型上非常适合，两者结合牢 固，不容易解离。反之，低亲和性抗体 与抗原形成的复合物较易解离。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 R型抗体以家兔免疫血清为代表，
具有较宽的抗原抗体合适比例范围，只 在抗原过量时，才易出现溶性免疫复合 物，大多数动物的免疫血均属此型。
尿液微量蛋白检测和临床意义
艾迪康医学检验中心 蔡晓平
4 项目清楚：
“定性”还是“定 量”
“五项”还是“六 项”
过敏原
最好能写出单个项目名称！
5 标本少送：
HPV检测 ： HPV6-11、HPV16-18需要取2管分 泌物标本
C肽/胰岛素释放试验 ： 需要抽5管血
主要内容
尿微量白蛋白 尿转铁蛋白 尿IgG 尿β2－微球蛋白 尿α1－微球蛋白 尿视黄醇结合蛋白
理化性质：
分子量：21000 分子直径：3.8nm PI:4.4-4.8 肾小球滤过膜：自由滤过 肾小管重吸收：95-99％
尿微量蛋白的检测方法
传统测定微量蛋白的方法有酶联免疫吸附试 验(ELISA)和放射免疫分析法(RIA)等,其检测精度 较差,操作繁杂。免疫散射比浊法操作简便,测量精 度较高,结果更准确,但是必须使用特定蛋白分析仪, 仪器和试剂昂贵，给使用带来一定的影响，而透 射比浊法则可用于各种自动化分析仪，具有速度 快、省试剂、适于批量检测的优点为临床上高血 压和糖尿病肾损害的早期诊断提供了一个更为快 速、简便的方法。
白尿。如排出mAlb>95%可信限，即为早期肾小球损伤。 这类患者处于疾病早期，及时检出进行治疗，可阻断病情 向不可逆蛋白阶段发展，对提高病人今后的生存质量和减 轻社会医疗经济负担具有重大意义。
微量白蛋白检测临床意义
进十年来，mAlb检测方法经过放射 免疫法，酶免疫法和免疫浊度法3个阶 段，已逐渐成熟起来。目前，免疫浊度 测定技术已得到推广。速率散射浊度法 灵敏度，准确度，精密度均较好，但需 用高质量的特种蛋白分析仪。而透射比 浊法则可用于各种自动化分析仪，具有 速度快、省试剂、适于批量检测的优点。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 增浊剂：非离子型亲水剂如聚乙二 醇（PEG）、吐温-20等，以PEG6000 最好，浓度一般为3%~4%。浓度过高 可致非特异沉淀。
免疫透射比浊法
免疫比浊法测定的注意事项：
1.标本
3.定标
2.试剂
4.线性
尿微量白蛋白检测方法
检测方法： 免疫透射比浊法
四、标本保存与运送：
• （1）标本由临床运送至实验室要尽可能 快，必须分离出血清（浆）后运送；
• （2）标本运送要注意防止标本外溢、蒸 发和污染（标本管要盖盖子）；
• （3）足量。
每一个标本都是唯一的，不可替代的！ 每一个标本都是危险的，具有潜在传染 性！
肾 小 球 滤 过 膜 示 意 图
微量白蛋白检测临床意义
微量清蛋白尿对早期肾损害诊断具有重要意义。实践证 明,单一指标有其局限性。因为早期肾损害不仅是肾小球损 害,有的可以是肾小管功能的受损,也可以是两者同时受损。 正常尿中蛋白质以白蛋白为主，而分子量低于50 000的蛋 白质大部分被肾小管重吸收，而尿中含量极微。健康人尿 中mAlb95%可信限<30mg/24h。当尿中mAlb排出量在
四、尿β2微球蛋白
理化性质：
分子量：11800 分子直径：3.4-3.8nm PI:4.9 肾小球滤过膜：自由滤过 肾小管重吸收：几乎全部
五、尿α1微球蛋白
理化性质：
分子量：26000-33000 分子直径：3.6nm PI:3.6-4.4 肾小球滤过膜：自由滤过 肾小管重吸收：99.9％
六、尿视黄醇结合蛋白
原理：
利用抗原（白蛋白）和特异性抗体（羊 抗人白蛋白抗血清）相结合，形成不溶 性免疫复合物，使反应液产生混浊，其 浊度高低即透光度减少、吸光度增加反 映血清样本中白蛋白的浓度，可由校准 品所作的剂量－相应曲线算出。
微量蛋白检测临床意义
正常肾小球基底膜具有3~4nm的微孔,并带 有一层负电荷,即具有孔径屏障和电荷屏障,使血浆 中带负电荷的中等分子及大分子蛋白质不易通过。 在正常情况下,肾小球滤液中的小分子蛋白质 95%~99%可通过肾小管重吸收,因而尿液中蛋 白质含量很少。正常生理情况下,尿中这些蛋白质 含量仅为微克或毫微克水平,在各种致病因子作用 下,肾小球滤过膜和肾小管发生结构和功能损伤,使 尿液中蛋白质过高,超过了肾小管的重吸收功能而 出现蛋白尿。
一、尿微量白蛋白
理化性质：
分子量：69000 分子直径：3.6nm PI:4.9 肾小球滤过膜：不滤过 肾小管重吸收：少量
二、尿转铁蛋白
理化性质：
分子量：77000 分子直径：3.8nm PI:5.2 肾小球滤过膜：不滤过 肾小管重吸收：少量
三、尿免疫球蛋白IgG
理化性质：
分子量：150000 分子直径：10-50nm PI:5.8-7.2 肾小球滤过膜：不滤过 肾小管重吸收：少量
H型抗体以马免疫血清为代表，其 抗原与抗体的合适比例范围较窄，抗原 或抗体过量，均可形成可溶性免疫复合 物。人和许多大动物的抗血清皆属H。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 反应溶液：pH6.5~8.5，适当浓度 电解质（中和抗原抗体复合物表面电荷， 促进凝聚）、离子强度（大，IC形成 快）；一般常用磷酸盐缓冲液。
免疫透射比浊法
原理：
利用抗原（白蛋白）和特异性抗体 （羊抗人白蛋白抗血清）相结合，形成 不溶性免疫复合物，使反应液产生混浊， 其浊度高低即透光度减少、吸光度增加 反映血清样本中白蛋白的浓度，可由校 准品所作的浓度－吸光度相应曲线算出。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 抗原、抗体比例与浊度关系：抗原 过量，出现“带现象”，IC分子小，且 可发生再解离，浊度下降，光散射减少。 抗体过量，IC形成随抗原量增加到抗原 抗体最适比例时达高峰。抗体须过量但 又必须适量，抗体浓度是测定关键。
免Leabharlann Baidu透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 抗体质量：特异性、效价、亲和力、 R型抗体
高亲和性抗体的抗原结合点与抗原表 位的空间构型上非常适合，两者结合牢 固，不容易解离。反之，低亲和性抗体 与抗原形成的复合物较易解离。
免疫透射比浊法
影响免疫比浊测定的主要因素 R型抗体以家兔免疫血清为代表，
具有较宽的抗原抗体合适比例范围，只 在抗原过量时，才易出现溶性免疫复合 物，大多数动物的免疫血均属此型。
尿液微量蛋白检测和临床意义
艾迪康医学检验中心 蔡晓平
4 项目清楚：
“定性”还是“定 量”
“五项”还是“六 项”
过敏原
最好能写出单个项目名称！
5 标本少送：
HPV检测 ： HPV6-11、HPV16-18需要取2管分 泌物标本
C肽/胰岛素释放试验 ： 需要抽5管血
主要内容
尿微量白蛋白 尿转铁蛋白 尿IgG 尿β2－微球蛋白 尿α1－微球蛋白 尿视黄醇结合蛋白
理化性质：
分子量：21000 分子直径：3.8nm PI:4.4-4.8 肾小球滤过膜：自由滤过 肾小管重吸收：95-99％
尿微量蛋白的检测方法
传统测定微量蛋白的方法有酶联免疫吸附试 验(ELISA)和放射免疫分析法(RIA)等,其检测精度 较差,操作繁杂。免疫散射比浊法操作简便,测量精 度较高,结果更准确,但是必须使用特定蛋白分析仪, 仪器和试剂昂贵，给使用带来一定的影响，而透 射比浊法则可用于各种自动化分析仪，具有速度 快、省试剂、适于批量检测的优点为临床上高血 压和糖尿病肾损害的早期诊断提供了一个更为快 速、简便的方法。