榄香烯对人卵巢癌SKOV3细胞株生物学作用机制

卵巢 癌细胞 株 （ＳＫＯＶ３）购 于 中 国科 学 院 上 海 细 胞生物研 究所 ；榄香 烯 注 射 液 由大 连金 港 制 药 有 限公司生产 ，细 胞培 养 板 ，ＲＰＭＩ１６４０培 养基 ，四 甲 基 偶氮唑 蓝 （ＭＴＴ）试 剂 购于美 国 ｓｉｇｍａ公 司 ，胎 牛 血 清购 于长春生 物制 品研 究所 ） １．２ 方 法 １．２．１ 细胞培 养 、分组 与 给 药 人 卵 巢 癌 ｓＫＯＶ３ 细胞株 经复苏后 置 于含 有 １０％胎 牛 血 清 的 １６４０培 养基 内于 ３７。Ｃ ５ 二 氧化 碳 培 养箱 内静 止 培养 ，取 对 数 生 长 期 的 ＳＫＯＶ３细 胞 进 行 下 一 步 实 验 。 ０．２５ 胰蛋 白酶消化 ，调整 细 胞数 为 ５×１０ ／ｍｌ，加 入 ９６孔塑料 培养板 内每孔 １００ ｕｌ／￥Ｌ分为 空 白对 照 组 、实验组 （榄 香烯 浓度 为 １００，２００，４００ ｕｇ／ｍ１） １．２．２ 细 胞增 殖 抑制 率 检 测 （ＭＴＴ 试 验 ） 取 ９６
的增 殖 抑 制 作 用 ，流 式 细 胞 仪 检 测 不 同 浓度 的榄 香 烯 注 射 液 对 ＳＫＯＶ３细 胞 增 殖 周 期 各 时 相 变 化 及 凋 亡 率 。透 射 电
子 显 微 镜 观 察 ＳＫＯＶ３亚 细 胞 结 构 变 化 。 结 果 不 同浓 度 的 榄 香 烯 注 射 液 对 ＳＫＯＶ３细 胞 增 殖 均 有 抑 制 作 用 。呈 明
＊通 讯作 者
孔 培养 板 内生 长 良好 ＳＫＯＶ３细胞 分 组 ，空 白对 照 组 ，只 加 入 １００ ｕｌ细 胞 维 持 液 ，共 １Ｏ复 孔 ，实 验 组 分 别加 入 由细胞 维持液 配制 的不 同浓 度 的榄香 烯溶 液 ，每个 浓度 １０复孔 ，于 ５ 二 氧 化 碳 培 养 箱 内静 止 培养 ，结束 前 ４小 时 每 孔 内分 别 加 入 ＭＴＴ 试 剂 ２Ｏ ｌ，继续 培养 ４ ｈ后 ，弃 去上 清 液 ，每 孔 内分别 加 入二 甲基 亚砜 （ＤＭＳＯ）２００ ｕｌ震 荡 １０ ｍｉｎ，应 用 酶 标仪 于 ５７０ ｎｍ 处 测 定 吸 光度 Ａ 值 ，计 算 各 组 细胞 增殖 抑制 率 ，细 胞 增 殖抑 制 率 一 ［１一 （实 验 组 Ａ 值 一 空 白组 Ａ 值 ）／（对 照 组 Ａ 值 一空 白组 Ａ值 ）］× １００ ，结果 见 表 １。
表 １ 不 同浓 度榄 香 烯 制 剂 对 ＳＫＯＶ３细胞 增 殖抑 制 率 （ 士ｓ％ ／２４ ｈ）
１．２．３ ＳＫＯＶ３细胞 周期 进 程及 凋 亡 率 检 测 细 胞培养 及分 组 同 １．２．２，不 同之 处 是将Байду номын сангаас９６孑Ｌ培养 板 改为 ２５ ｍｌ培 养 瓶 进 行 。每 个 浓 度 ５瓶 培 养 结 束 后 ，收集 细胞 ，ＰＢＳ（磷 酸盐 缓 冲液 ）洗 ３次 。７Ｏ 乙 醇 固定 ，置 ４℃ 冰 箱 内 ４８ ｈ后 取 出离 心 １ ０００ ｒ／ ５ ｍｉｎ，碘化丙 啶漂 色 ，避 光 孵 育 ３０ ｍｉｎ，然 后 通 过 流 式细 胞 仪 检测 ，采 用 ＣＥＬＬ ＱＵＥＳＴ 软 件 分 析各 组 细胞 周期各 时相 变化及 凋 亡率 ，结果 见表 ２。 １．２．４ 透射 电子 显微 镜 观 察 细 胞 培养 及 分 组 同 １．２．３实验结 束后 分别 收集 经不 同浓度 榄 香烯 制 剂
显 的剂 量 依 赖 性 ，流 式 细 胞 仪 结 果 显 示 ，Ｇ。／Ｇ 期 细 胞 增 多 ，ｓ期 细 胞 减 少 。Ｇ ／Ｍ 期 细 胞 相 对 增 多 ，细 胞 凋 亡 率 升
高 。结 论 榄香 烯 注 射 液 对 ＳＫＯＶ３细胞 有较 强 的敏 感 性 和 药 物 浓 度 依 赖 性 ，其 机 制 可 能 与 榄 香 烯 注 射 液 影 响 ＳＫ—
中 国实 验 诊 断学 ２０１８年 ８月 第 ２２卷 第 ８期 文章 编 号 ：１００７— ４２８７（２０１８）０８－ １４５３—０３
１４５３ 一
榄香 烯对 人 卵 巢 癌 ＳＫＯＶ３细胞 株 生 物 学 作 用 机 制
关永 红 ，唐 艳 ，董全 宇 ，刘 贤英
（吉林 大 学 第 二 医 院 ，吉林 长 春 １３００４１）
ＯＶ３细 胞 周期 进 程 并 调 节 凋 亡 相 关 蛋 白基 因 表 达 有关
关 键 词 ：ＳＫＯＶ３细胞 株 ；细胞 增殖 ；细 胞 周 期 ；榄 香 烯 ；凋 亡
中 图分 类 号 ：Ｒ７３７．３１
文 献 标 识 码 ：Ａ
卵巢 癌为三 大妇科恶 性肿 瘤之 一 。具 有发 病隐 匿 ，发 展 迅 速 ，转 移 及 侵 袭 能 力 强 ，恶 性 度 高 的 特 点 ［】］。早期诊 断率低 ，大部 分患者 确诊 时 已是 晚期 。 失 去 了手 术治疗 的 可行 性 ，只 能通 过 辅 助 治疗 延 长 其 生存期 。近年 来随着肿 瘤 细胞学 的发展 和大 量靶 向药物 的临床应 用 。从 细胞 学水平 预测 治疗方 式 的 有效性 和药物敏 感 性不 仅 成 为 可能 ，而 且 成 为必 然 趋势【２ 因此本 研 究 依 ＳＫＯＶ３细 胞 为 靶 点 ，探 讨 其 对榄香 烯制剂 的生 物 学机 制 ，为 卵 巢癌 的治 疗 提 供 理论依 据 。 １ 材 料 与 方 法 １．１ 材料 、细胞 。药 物及试 剂
摘 要 ：目的 观 察外 源性 榄 香 烯 注 射 液 对 人 卵 巢 癌 ＳＫＯＶ３细 胞 株 生 物 学 行 为 影 响 。 旨 在 为 寻 找 卵 巢 癌 治 疗 的
特 效 药 物 提 供 理论 依 据 。方 法 应 用 ＭＴＴ（四 甲基 偶 氮 唑 蓝 ）比 色 法 观 察 不 同 浓 度 的 榄 香 烯 注 射 液 对 ＳＫＯＶ３细 胞