skov3细胞培养技巧
卵巢癌细胞株SKOV3在人脐带间充质干细胞培养液中的增殖、凋亡和迁移情况观察
Байду номын сангаас
培卵养巢液癌中细的胞增株殖ＳＫ、Ｏ凋Ｖ亡３ 在和人迁脐移带情间况充观质察干细胞
袁晓凤１，袁修凯２，周芳１ （１ 中国人民解放军第９７ 医院，江苏徐州２２１０００；２ 睢宁中医院）
摘要：目的 探讨卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３ 细胞在人脐带间充质干细胞（ｈＵＣＭＳＣｓ）培养液中的增殖、凋亡和迁
的增殖、凋亡和迁移情况。现报告如下。
化后收集细胞备用。将ｈＵＣＭＳＣｓ 细胞以５ × １０５
１ 材料与方法
个细胞密度，接种于培养瓶中，待细胞融合度达到
材料低糖 和高糖 购自 １． １
ＤＭＥＭ
ＤＭＥＭ
Ｇｉｂｃｏ
８０％ 时，更换无血清的ＬＤＭＥＭ 培养液，２４ ｈ 后提
公司；血清购自Ｅｘｃｅｌｌ 公司；小鼠抗大鼠ＧＡＰＤＨ 单 克隆抗体（ｍＡｂ）、小鼠抗大鼠Ｂｃｌ２ ｍＡｂ 和小鼠抗
察２ 组和对照组。观察１、２ 组分别用１０％ 、２０％ 的 ｈＵＣＭＳＣ 培养，对照组用正常培养基培养。 １． ４ 各组ＳＫＯＶ３ 细胞增殖情况观察 ①ＭＴＴ 法。 取对数期生长的ＳＫＯＶ３ 接种于９６ 孔板，每孔２ ０００ 个细胞，然后每孔加入２００ μＬ ＨＤＭＥＭ 营养液，
通信作者：周芳（ ： ） Ｅｍａｉｌ ｚｈｏｕｆａｎｇ９７＠ １６３． ｃｏｍ
溶液，避光振荡 ，酶标仪检测 用 法。用 、 的 μＬ ＤＭＳＯ
１５ ｍｉｎ
４９０
Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ
１０％ ２０％ ｈＵＣＭＳＣｓ
ｎｍ 处的吸光度值。每个观察组设４ 个复孔。以未 培养液预处理ＳＫＯＶ３ 细胞２４ ｈ，分别计为观察１
经ｈＵＣＭＳＣｓ 培养液处理的ＳＫＯＶ３ 细胞作为对照 组、观察２ 组。以未经ｈＵＣＭＳＣｓ 培养液处理的ＳＫ
skov3细胞培养技巧
skov3细胞培养技巧介绍Skov3细胞是一种人类癌细胞系，常用于研究肿瘤生物学、治疗和预防。
为了能够有效地培养Skov3细胞，需要掌握一些基本的培养技巧。
本文将详细介绍Skov3细胞培养的方法和技巧。
培养基的准备选择合适的培养基Skov3细胞通常可以在DMEM（Dulbecco’s modified Eagle’s medium）培养基中较好地生长。
DMEM培养基含有必需的氨基酸、维生素、糖和盐，在细胞培养中具有广泛的适应性。
培养基的补充物为了促进Skov3细胞的生长和增殖，可以向DMEM培养基中添加适当的补充物，如胰岛素、转铁蛋白、胱氨酸和谷胱甘肽。
这些补充物能够提供细胞所需的营养物质，有助于维持细胞的正常生长。
培养皿的处理无菌操作的重要性在进行Skov3细胞培养之前，必须非常重视无菌操作。
所有使用的工具、培养皿和培养基都必须经过严格的消毒和无菌处理，以免细菌或真菌的污染对细胞生长产生不良影响。
培养皿的涂层处理Skov3细胞通常需要在有涂层的培养皿上进行培养，以提供细胞生长所需的支持。
常用的涂层物质包括凝血酶、明胶和胶原蛋白。
涂层物质应事先加热处理，并在培养皿内均匀涂敷，以确保细胞能够附着并正常生长。
细胞传代的技巧细胞的定期观察在培养Skov3细胞的过程中，需要定期观察细胞的形态和生长状态。
通过观察细胞的形态变化和增殖情况，可以及时发现问题并采取相应的措施，例如改变培养条件或进行细胞的传代。
细胞的传代比例Skov3细胞一般在80-90%的密度下进行传代。
过高的细胞密度可能会导致细胞死亡和凋亡，而过低的细胞密度则会影响细胞的增殖和形态。
因此，在细胞达到适当密度时进行传代，可以有效地维持细胞的正常生长。
细胞的解离在进行细胞传代之前，需要将细胞从培养皿上解离下来。
常用的细胞解离方法包括使用胰酶或胰酶和EDTA的混合物。
解离后的细胞应该用培养基进行稀释，并按照适当的密度重新接种到新的培养皿中。
细胞培养的注意事项1.细胞培养室应保持干净整洁，定期进行消毒和清洁工作。
雌二醇其受体抑制剂对人卵巢癌SKOV3细胞体外生长影响
雌二醇及其受体抑制剂对人卵巢癌SKOV3细胞体外生长的影响【摘要】目的：观察不同浓度雌二醇及其受体抑制剂ici 182 780对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌skov3细胞体外增殖及凋亡的影响，探讨雌激素及其受体抑制剂在卵巢癌生长中作用及临床意义。
方法：体外培养skov3细胞，加入不同浓度e2及（e2+ici 182 780）：（1）计数1-6天的细胞数量，并描绘细胞增殖曲线；（2）mtt法检测细胞增殖抑制率；（3）流式细胞术测定skov3细胞凋亡率。
观察不同浓度雌二醇及其受体抑制剂ici 182 780对skov3细胞系体外增殖的作用。
结果：（1）细胞培养4天时，与对照组（单纯培养）相比，高浓度e2组（10-7mol/l）的skov3细胞增殖明显受抑制，低浓度e2组（10-11mol/l）细胞则增殖较明显（p0.05），低浓度e2组（10-13-10-11 mol/l）则具有促细胞增殖作用（p0.05）；当（e2+ ici 182 780）浓度为10-9 mol/l时，表现为对skov3细胞增殖的抑制作用，24h及48h抑制率分别达11.7%、7.9%，明显高于同浓度e2组（p0.05）；加入相同浓度ici 182 780后，24h、48h 的凋亡率（11.79%～14.79%，10.90%～13.15%）均明显高于对照组（p2. 药物雌二醇（e2）及其受体抑制剂氟维司群（ici 182 780）：美国sigma公司，分子量分别为272.39、606.77，无水乙醇配成0.001 mol/l原液，e2在4℃保存，ici 182 780常温保存备用。
（三）实验用细胞系卵巢癌细胞株skov3来自人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞，购于南京凯基公司，大连医科大学附属第一医院中心实验室传代培养。
（四）实验用液的制备：pbs液：（0.1m，ph7.2-7.4）：pbs粉置于大烧杯，加三蒸水，玻璃棒搅拌均匀，定容至1000ml。
RRM2基因过表达卵巢癌细胞株SKOV3的构建及对顺铂敏感性观察
RRM2基因过表达卵巢癌细胞株SKOV3的构建及对顺铂敏感性观察王中山;张梦;张冬梅;杨新慧【摘要】目的构建核糖核苷酸还原酶亚基M2(RRM2)基因过表达的卵巢癌细胞株SKOV3,并观察RRM2基因过表达的SKOV3细胞对顺铂的敏感性.方法提取SKOV3细胞总RNA,反转录得到cDNA,以其为模版进行PCR反应,获得RRM2基因.通过酶切(XhoⅠ、BamHⅠ)连接的方法,将RRM2基因插入慢病毒表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1中,得到重组质粒pLVX-IRES-RRM2.利用脂质体将重组质粒转染293FT细胞,包埋病毒.将SKOV3细胞分为实验组和对照组,实验组转染pLVX-IRES-RRM2慢病毒,96 h后测算慢病毒感染效率.对照组不进行转染.采用Western blotting法检测两组细胞中的RRM2蛋白;流式细胞仪检测两组凋亡细胞与死亡细胞,反映细胞对顺铂的敏感性.结果重组质粒pLVX-IRES-RRM2经限制性内切酶XhoⅠ和BamHⅠ双酶切验证,各片段大小符合预期,测序结果显示RRM2基因序列正确.实验组、对照组细胞中RRM2 mRNA相对表达量分别为0.280±0.055、0.102±0.022,RRM2蛋白相对表达量分别为0.582±0.049、0.228±0.032,实验组高于对照组,说明RRM2基因过表达的SKOV3细胞构建成功.实验组、对照组凋亡细胞比例分别为0.39%±0.08%、9.60%±1.20%,死亡细胞比例分别为26.65%±2.20%、44.96%±2.80%,实验组凋亡细胞比例和死亡细胞比例均低于对照组(P均<0.01).结论成功构建了RRM2基因过表达的SKOV3细胞,RRM2基因过表达的SKOV3细胞对顺铂的敏感性降低.【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)039【总页数】4页(P30-33)【关键词】卵巢癌;卵巢癌细胞株;核糖核苷酸还原酶家族成员2;顺铂;药物耐受性;药物敏感性【作者】王中山;张梦;张冬梅;杨新慧【作者单位】徐州医科大学,江苏徐州221004;徐州市中心医院;徐州市中心医院;徐州市中心医院【正文语种】中文【中图分类】R737.31卵巢癌是常见的妇科肿瘤，病死率位居妇科恶性肿瘤之首[1]，多数(85%)为上皮性卵巢癌(EOC)[2]。
紫杉醇耐药细胞株SKOV3TS的建立及多药耐药性比较
紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TS 的建立及多药耐药性比较尹茳平1，2，王琪2，张玮2，黎丹戎2，李力"［摘 要］ 目的 通过两种不同的方法构建紫杉醇(TAX )耐药卵巢癌细胞株SKOV3/TS ,并研究其耐药性和耐药机制。
方法 分别采用二维培养系统和浓度梯度递增法建立SKOV3/TS-1耐药细胞株，采用三维培养系统建立SKOV3/TS-2耐药细胞株。
采用 MTT 法检测SKOV3/TS-1和SKOV3/TS-2细胞对 TAX 、奥沙利铂(L-OHP )、吉西他滨(GCB )、米托蔥醌(MIT )、环磷酰胺(CTX )的耐药性，并计算半数抑制浓度(IC 50 ) o 另外，采用实时荧光定量PCR 检测多药耐药相关基因-多药耐药基因1( MDR1 )、B -微管蛋白皿型(TUBB3 )基因表达变化。
结果 SKOV3 细月包、SKOV3/TS-1 细月包、SKOV3/TS-2 细 胞 对 TAX 的 IC 50 分别为(0. 240 土 0. 078 ) ^g/ml 、(4. 285 土0.538) ^g/ml 、(3.540 土 0.356) ^g/ml ( P <0. 05) , SKOV3/TS-1 细胞和 SKOV3/TS-2 细胞的 RI 分别为17. 85和14. 75 o 同时，SKOV3/TS-1细胞和SKOV3/TS-2细胞对 CTX 、L-OHP 、GCB 、MIT 均有一定的耐药性，且SKOV3/TS-2细胞的耐药性高于SKOV3/TS-1细胞(P <0.05)。
此夕卜,SKOV3/TS-1细胞和SKOV3/TS-2细胞 TUBB3 mRNA 和 MDR1 mRNA 表达量高于SKOV3细胞(P <0. 05)o 结论 三维培养系统构建的SKOV3/TS-2细胞模型较二维培养的SKOV3/TS-1细胞，形态结构和生物学特性都发生了较大差异，更易对多种化疗药物产生交叉耐药性o［关键词］卵巢癌细胞SKOV3 ；三维细胞培养系统；紫杉醇；耐药性；多药耐药Establishment of Taxol-resistant cell line SKOV3/TS and comparison of multidrugresistance YIN Wei-ping 1，2 ,WANG Qi 2, ZHANG Wei 2,LI Dan-rong 2,LI Li 2** (1. Department of Gynecology, Affiliated Hospital of Guilin Medical College , Guilin 541001, China ； 2. Department of Obstetrics and Gynecology , Affi liated Tumor Hospital of Guangxi Medical University and the Key Laboratory of Regional High Incidence Tumor EarlyPrevention Research of Ministry of Education , Nanning 530021, China )收稿日期：2020 -07 -09作者单位：1.桂林医学院附属医院妇科，广西桂林541001；2. 广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科暨区域性高发肿瘤早期防治研 究教育部重点实验室，广西南宁530021基金项目：广西科学研究与技术开发计划课题（桂科攻14124004）* 通信作者DOI ：10. 14053/j. cnki. ppcr. 202011008［Abstract ］ Objective To establish Taxol ( TAX) -resistant ovarian cancer cell line SKOV3/TS by two me thods and to study its drug resistance and the mechanism of it. Methods SKOV3 / TS-1 drug-resistant cell line was es tablished by two-dimensional culture system and concentration gradient increasing method , and SKOV3/TS-2 cell linewas established by three-dimensional culture system. The drug resistance of these two cell models to TAX , Oxaliplatin(L-OHP ) , Gemcitabine ( GCB ) ,Mitoxantrone ( MIT) and Cyclophosphamide ( CTX) was detected by MTT assay , and IC50 was calculated. In addition , real-time quantitative PCR was used to detect the expression of multidrug resist ance-related genes including multidrug resistance 1 ( MDR1 ) and p-tubulin-III ( TUBB3 ) mRNA. Results IC 50 of SKOV3 cell , SKOV3/TS-1 cells , and SKOV3/TS-2 cells to TAX was respectively (0. 240 ±0. 078) ^g/ml, (4. 285 土 0. 538 ) ^g/ml ,(3. 540 土 0. 356) ^g/ml ( P <0.05), while resistance index ( RI) of SKOV3/TS-1 cells and SKOV3/ TS-2 cells was 17. 85 and 14. 75. SKOV3/TS-1 cells and SKOV3/TS-2 cells had some resistance to CTX, L-OHP , GCB and MIT , and the resistance of SKOV3/TS-2 cells was higher than that of SKOV3/TS-1 cells ( P <0.05). Be sides ,the expressions of TUBB3 mRNA and MDR1 mRNA in SKOV3/TS-1 cells and SKOV3/TS-2 cells were both higher than those in SKOV3 cells ( P <0.05). Conclusion SKOV3/TS-2 cell model constructed by three-dimensionalcell culture system is different from SKOV3 / TS-1 by two-dimensional culture system in morphology and biological characteristics ,and it is more likely to develop cross-resistance to multiple drugs.Key words : Ovarian cancer cell SKOV3 ； Three-dimensional cell culture system ； Taxol ； Drug resistance ； Multidrugresistance0 引言卵巢癌是我国致死率最高的妇科恶性肿瘤,初始治疗以手术联合化疗为主，其中紫杉醇联合 铂类是最常用的一线化疗方案之一［1］。
没食子酸对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用及机制
增加顺铂 对卵巢癌 Ｓ Ｏ ３细胞 的抑制作用 ， 与丁酸钠联合用药仅为单纯相加 作用。随着没食子 酸剂量增加 ， ＫＶ 而 凋
亡细胞数 目增 多。结论 没食子 酸可抑制 Ｓ Ｏ ３细胞 生长 ， Ｋ 其机制为诱导细胞凋亡 ； 没食子 酸与顺铂联用有 协同
作用 。
关键 词 ： 食 子 酸 ； 没 丁酸 钠 ； 铂 ； 巢 癌 细 胞 ； 同作 用 顺 卵 协
观察 了没食 子 酸对 卵巢癌 细胞 的抑 制作用 。现 报告
如下 。
１ 材料 与方 法
０５ ．％胰酶酶解后种植于 ９ Ｌ ６孑 板中， 每孔种植 １ 万 个细胞 ， 分为观察组和对照组 ， 每组 ３个复孑 。２ Ｌ ４ｈ 细胞 贴壁后 观察 组加 入 新 配 制 的没 食 子 酸 溶 液 ， 给 药质 量浓 度 分别 为 ２ ４ ６ ８ １ 、２ ｇｍ ， 细胞 、 、 、 、６ ３ ／ ｌ置 培养箱孵 育 ４ ， ８ｈ 换液后加入 Ｍ Ｔ 终质量浓度 为 Ｔ（
山东医药 ２ １ 年第 ５ ００ ０卷第 １ 期 ５
・
基础 研 究 ・
没食 子 酸对 卵 巢 癌 Ｓ Ｏ ３细 胞 的 ＫＶ 生 长抑 制 作 用 及 机 制
李 文 ， 华新 ， 华慧 ， 侯 吴 秦春 明
（ 广西医科大学药学院， 南宁５０２ ） ３０ １
摘要 ： 目的 探讨没食子 酸对卵巢癌细胞株 Ｓ Ｏ ３的生长抑制作用及 机制 ， ＫＶ 为其 临床应用提供 依据 。方法 采用 ＭＴ 法测定没食子酸单独作用及没食 子酸与顺铂 、 ｒ 丁酸钠联合用药 后卵巢癌 细胞 株 Ｓ Ｏ ３的生 长抑 制率。 ＫＶ
Ａ ｎ￣ｎＶ ＦＴ ｎｅ ．ＩＣ凋 亡试剂盒 于荧光倒置显 微镜 下观察没 食子酸诱 导 Ｓ Ｏ － Ｋ Ｖ３细胞凋 亡情况 。结果 没食子 酸对 ＳＯ － Ｋ Ｖ３细胞株生长有 明显抑制作用 ， 且呈 一定 的浓度依赖性 ； ∞为 ２ ． ｇ ｍ 。没食子 酸与顺铂合 用可 以明显 Ｉ Ｃ ３ ４ｗ ／ ｌ
p53对核仁应激诱导卵巢癌细胞凋亡的影响
p53对核仁应激诱导卵巢癌细胞凋亡的影响*陈松斌1，3， 徐可欣1， 潘炫豪3， 胡锴克3， 高维浩3， 李松岩1， 徐冶1，2△（1吉林医药学院肿瘤靶向治疗与转化医学实验室，吉林 吉林 132013；2吉林医药学院生殖功能损伤中药干预技术重点研究室，吉林 吉林 132013；3吉林医药学院临床医学院，吉林 吉林 132013）［摘要］ 目的：探究p53对核仁应激诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响。
方法：体外培养SKOV3细胞，根据实验药物不同分成4个实验组：control 组、BMH -21（核仁应激诱导剂）组、pifithrin -α（PFT -α；p53抑制剂）+BMH -21组和RG7112（抑制p53降解并激活p53通路）+BMH -21组。
MTT 法检测细胞活力；免疫荧光染色检测细胞中p53蛋白定位和表达水平，以及BMH -21诱导的核仁应激的发生；Western blot 法检测蛋白表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡率。
结果：MTT 结果显示，BMH -21组细胞活力比control 组显著下降（P <0.01），PFT -α+BMH -21组细胞活力与BMH -21组相比无显著变化（P >0.05），而RG7112+BMH -21组比BMH -21组显著下降（P <0.01）；荧光显微镜观察发现，BMH -21组p53蛋白表达水平比control 组显著升高，PFT -α+BMH -21组p53蛋白表达水平比BMH -21组显著降低，而RG7112+BMH -21组比BMH -21组显著升高，且大部分入核堆积；Western blot 结果显示，BMH -21组p53蛋白及线粒体途径凋亡相关蛋白表达水平比control 组显著升高（P <0.01），PFT -α+BMH -21组p53蛋白表及线粒体途径凋亡相关蛋白表达水平比BMH -21组显著降低（P <0.05），而RG7112+BMH -21组比BMH -21组显著升高（P <0.01）；流式细胞术结果显示，BMH -21组细胞凋亡率比control 组显著升高（P <0.01），PFT -α+BMH -21组细胞凋亡率与BMH -21组相比无显著变化（P >0.05），而RG7112+BMH -21组比BMH -21组显著升高（P <0.01）。
卵巢癌SKOV3细胞系培养上清液处理巨噬细胞不同时间后对巨噬细胞分化的影响
卵巢癌SKOV3细胞系培养上清液处理巨噬细胞不同时间后对巨噬细胞分化的影响宋玉霞;赵涛;张玮璨;郭清;王宏卫;孟桐羽【摘要】目的探讨卵巢癌SKOV3细胞系培养上清液处理巨噬细胞不同时间后,巨噬细胞分化亚型的改变.方法 Ficoll密度梯度法分离健康成人外周血单个核细胞,GM-CSF诱导为巨噬细胞(M0)后,用对数生长期的SKOV3细胞培养上清液处理为实验组,用1640培养基处理为对照组,分别于培养第7天和第14天光学显微镜下观察巨噬细胞形态变化;流式细胞术检测实验组和对照组在不同时间后巨噬细胞表面细胞因子(CD64、CD163)表达情况.结果培养第7天时,实验组巨噬细胞形态改变明显,细胞突起增加,细胞变细长,对照组细胞形态无明显变化,实验组CD64-M1型巨噬细胞所占比例高于对照组,CD163-M2型巨噬细胞所占比例低于对照组(P＜0.05);培养第14天时,实验组巨噬细胞形态逐渐恢复,对照组细胞形态仍无明显变化,实验组CD64-M1型巨噬细胞所占比例低于对照组,CD163-M2型巨噬细胞所占比例高于对照组(P＜0.05).实验组CD64-M1型巨噬细胞在第7天时M1/M0水平高于第14天,CD163-M2型巨噬细胞在第7天时M2/M0低于在第14天,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 SKOV3细胞培养上清液可改变巨噬细胞形态,激活巨噬细胞免疫反应,随着时间的推移,细胞形态恢复,发生免疫抑制;同时,也可促进巨噬细胞分化,随着时间的推移,亚型也有不同,主要由CD64-M1型巨噬细胞向CD163-M2型巨噬细胞转变.【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2016(038)010【总页数】5页(P1498-1501,1504)【关键词】卵巢肿瘤;SKOV3;巨噬细胞;细胞分化【作者】宋玉霞;赵涛;张玮璨;郭清;王宏卫;孟桐羽【作者单位】050011 河北省石家庄市第一医院妇产科;050011 河北省石家庄市第一医院妇产科;河北医科大学;050011 河北省石家庄市第一医院妇产科;050011 河北省石家庄市第一医院妇产科;050011 河北省石家庄市第一医院妇产科【正文语种】中文【中图分类】R737.31上皮性卵巢癌(简称卵巢癌)是女性生殖系统常见的恶性肿瘤。
乳胞素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用和促凋亡作用
乳胞素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用和促凋亡作用王雪;秦瑞;王皓莹;高守阳;兰彦方;田秀娟【摘要】目的:探讨蛋白酶体抑制剂乳胞素(LAC)对体外卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其作用机制.方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,采用0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol·L-1 LAC干预SKOV3细胞48 h,5μmol·L-1 LAC干预SKOV3细胞0、24、48和72 h;将细胞分为对照组(细胞不经药物干预)、LAC组(加入5μmol·L-1 LAC)、卡铂组(加入10、20、40及80μmol·L-1卡铂)和LAC联合卡铂组(加入5μmol·L-1 LAC和10、20、40、80μmol·L-1卡铂).采用MTT法和流式细胞术(FCM)检测各组卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制率和凋亡率.结果:MTT检测,随着LAC作用时间的延长和浓度的升高,SKOV3细胞的增殖受到明显抑制,48 h时LAC的半数抑制浓度(IC50)为5.36μmol·L-1;LAC联合卡铂组细胞的增殖抑制率较相同浓度卡铂组明显升高(P<0.05),卡铂的IC50由58.08μmol·L-1下降至18.37μmol·L-1.FCM检测,随着LAC作用时间的延长,SKOV3细胞凋亡率呈升高趋势;与卡铂组和LAC组比较,LAC联合卡铂组SKOV3细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论:LAC可有效抑制卵巢癌SKOV3细胞的体外增殖且能诱导其凋亡,并可以明显增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞株的增殖抑制作用.%Objective:To study the influence of proteasome inhibitor lactacystin (LAC) and carboplatin in proliferation and apoptosis of the human ovarian cancer SKOV3 cells in vitro ,and to clarify the mechanisms. Methods:The SKOV3 ovarian cancer cells were cultured in vitro ;0,2.5,5.0,10.0 and 20.0 μmol· L-1 LAC were used to intervent the SKOV3 cells for 48 h;5 μmol·L-1 LAC was used to intervent the SKOV3 cells for 0, 24,48,and 72 h;the SKOV3 cells were divided intocontrol group (treated without medical intervention),LAC group (treated with 5 μmol · L-1 LAC), carboplatin group (treated with 10, 20, 40 and 80 μmol · L-1 carboplatin),LAC and carboplatin group (treated with 5 μmol· L-1 LAC and 10,20,40,and 80 μmol· L-1 carboplatin,respectively).MTT method and FCM were used to detect the inhibitory rates of proliferation and apoptotic rates of the SKOV3 cells in various groups.Results:The MTT test results showed that the proliferation of the SKOV3 cells were inhibited with the prolongation of time and increasing of LAC concentration;the half inhibitory concentration (IC50 )of LAC at 48 h was 5.36 μmol · L-1 ;compared with carboplatin group,the inhibitory rates of proliferation of SKOV3 cells in LAC and carboplatin groups were significantly increased (P <0.05).The IC50 of carboplatin was dropped from 58.08 μmol·L-1 to 18.37 μmol·L-1 .The FCM results showed that with the prolongation of treated time of LAC,the apoptotic rates of SKOV3 cells were increased;compared with carboplatin group and LAC group,the apoptotic rate of cells in LAC and carboplatin group was increased (P <0.05).Conclusion:LAC can inhibit the proliferation of the ovarian cancer SKOV3 cells and induce the apoptosis, and LAC can enhance the inhibitory effect of proliferation of carboplatin on the ovarian cancer SKOV3 cells.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(043)006【总页数】5页(P1098-1102)【关键词】卵巢肿瘤;SKOV3细胞;蛋白酶体抑制剂;乳胞素;卡铂【作者】王雪;秦瑞;王皓莹;高守阳;兰彦方;田秀娟【作者单位】吉林大学中日联谊医院妇产科,吉林长春 130033;吉林大学中日联谊医院妇产科,吉林长春 130033;吉林大学中日联谊医院妇产科,吉林长春 130033;吉林大学中日联谊医院妇产科,吉林长春 130033;吉林大学中日联谊医院妇产科,吉林长春 130033;吉林大学中日联谊医院妇产科,吉林长春 130033【正文语种】中文【中图分类】R737.31卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一，死亡率高，近年来发病率呈明显升高趋势,严重威胁女性的健康。
芹菜素抑制卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用研究
ｔｏ ｔ ｉｈｔｍｉｒ ｓ ｏ ｅ ａ ｄ Ｍ Ｔ ｃｌｒｍｅｒｃ￣ ｅ ｈ ｄ．Ｔｈ ｎ ｕ ｎ ｅｏ ｐ ｇ ｎｎ ｏ ｉｎ ｗｉ ｌ ｃ ｏ ｃ ｐ ｎ Ｔ ｏｏ ｉ ｔｉ ｎ ｔ ｏ ｈ ｇ ｅ ｉ ｆ ｅ ｃ ｆａ ｉ ｅ ｉ ｎ ＳＫＯＶ３ ｃ ｌｓｐ ｏｉｅ ａｉｎ ｃ ｃｅ ｗａ ｎ — ｌ ｅｌ ｒ ｌ ｒ ｔ ｙ ｌ ｓａ ａ ｆ ｏ
Ｉ ｉ ｔ ｒ ｆｅ ｔ ｆ ａ ｇ ｎｉ ｎｈ ｂｉｏ ｙ ｅ ｆ ｃ ｓ ｏ ｐｉ ｅ ｎ ｏｎ ｈｕｍ ａｎ ｏ ａｒ ａ ｃ ｎｃ ｒ ｃ ｌ ｔ ａ ｎ ｖ ｉ ｎ ａ ｅ ｅ ｌｓ ｒ ｉ ＳＫ Ｏ Ｖ３ ｇ ｏ ｔ ｒ ｗ ｈ Ｒｅ ｕｃ ｎｇ，Ｚｈ ｎｇ Ｈｏ ｇ ｕ， Ｌ ｎ ｎ ｎ Ｘｉ ｏ ａ ｎｙ ｉ Ｙａ ｍｉ
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４３ ５ ２・
现 代 中西 医 结 合杂 志 ＭｏｅｎＪｕｎｌ ｆｎｅｒｔ ｒｄｔｎｌ ｈｎｓ ｎ ｓ ｒ ｄｃ ｅ２ １ ｅ ，１ （５ ｄｒ ｏｒａ ｏ ｔ ａ ｄＴａｉｏａ Ｃ ｉｅｅａｄＷｅｔ ｎＭｅｉ ｎ ００ Ｄ ｃ ９ ３ ） Ｉ ｇ ｅ ｉ ｅ ｉ
芹 菜素 抑 制 卵巢 癌 细胞 株 Ｓ ＫＯＶ ３生 长 的作 用研 究
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细胞培养实验
HeLa细胞
1.细胞种类：人HeLa细胞传代培养；
2.培养的天数：7d；
3.放大倍速：倒置显微镜 X200；
4.培养基种类：DMEM+10%小牛血清；
5.细胞状态与特征简述：细胞呈多角形，贴壁生长。
57
K562细胞
上皮型细胞
50
SKOv3 （卵巢癌细胞）
1.细胞种类：SKOv3（卵巢癌细胞） 2.培养的天数：传代后3d； 3.放大倍速：倒置显微镜 X10； 4.培养基种类：DMEM+5%胎牛血清； 5.细胞状态与特征简述：细胞贴壁生
长，生长速度较快。
CCL-149
1.细胞种类：大鼠肺泡上皮细胞； 2.培养的天数：1d（种在48孔板中）； 3.放大倍速：倒置显微镜 X20； 4.培养基种类：F12K+10%胎牛血清； 5.细胞状态与特征简述：细胞呈梭形，透 亮贴壁生长，3－4天传代一次，Giemsa 染色。
大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依 赖性细胞，大致分成以下四型：
成纤维细胞 上皮型细胞 游走细胞型 多型细胞型
45
1、成纤维细胞型
名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的 来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：
真正的成纤维细胞，心肌，平滑肌，成骨细胞， 血管内皮 形态：胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等 的突起，中有卵圆形核 生长特点：排列成放射状，漩涡状 细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独的成纤维 样细胞，常有几个伸长的细胞突起
元素
30
细胞培养液
水 平衡盐溶液 pH调节液 消化液 抗生素溶液 培养基
31
平衡盐溶液
主要由无机盐和葡萄糖配制而成 作用：维持渗透压、缓冲和调节酸碱度 常用的缓冲液：
纳米雄黄混悬液对卵巢癌SKOV3细胞抑制增殖及诱导凋亡机制探讨
ｌ ａ ｂ ｅ ｌ ｉ ｎ ｇ（ Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ ） ，ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ ｃ ｅ ｌ ｌ ｃ ｙ ｃ ｌ ｅ ｓ ｗ ａ ｓ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｄ ． Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｎ ｒ ｂ ｌ ｏ ｔ ｗ ａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｔ ｅ ｓ ｔ Ｃ ａ ｓ ｐ ａ ｓ ｅ 一３ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ Ｓ Ｋ Ｏ Ｖ ３
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［ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ Ｏｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｍ ｅ ｃ ｈ ａ ｎ ｉ ｓ ｍ ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ａ ｐ ｏ ｐ ｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｒ ｅ ａ ｌ ｇ ａ ｒ ｎ ａ ｎ ｏ ｍｅ ｔ ｅ ｒ Ｓ Ｕ Ｓ －
【 关键词 】卵巢癌 ；纳米雄黄混悬 液 ；细胞凋亡
Ｐｒ ｏ ｌ ｉ ｆ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎｈ ｉ ｂｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ａ ｐｏ ｐｔ ｏ ｓ ｉ ｓ ｉ ｎｄ ｕｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｅ ｆｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｒ ｅ ａ ｌ ｇ ａ ｒ ｎ ａ ｎｏ ｍｅ ｔ ｅ ｒ ｓ ｕｓ ｐｅ ｎｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ ｏ ｖ ａ ｒ ｉ ａ ｎ ｃ ａ ｎｃ ｅ ｒ ＳＫ ＯＶ３ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ：ａ ｍｅ ｃ ｈ ａ ｎｉ ｓ ｍ ｓ ｔ ｕｄ ｙ
免疫调节肽对卵巢癌skov3细胞凋亡及相关基因表达的影响
研究免疫调节肽 （ Ｇ ＩＮ） Ｐ ＰＰ 对人卵巢癌细胞 株 体外培养 卵巢癌
ｓｏ３凋亡及相关基 因表达 的影 响。方法 ｋｖ
１ 材 料与 方法
ｓｏ３细胞 ， 别使 用 １ 一、Ｏ １ 一、１ ～、１ ｇ Ｌ的 ｋｖ 分 ０ １ ～、０ Ｏ Ｏ ／
Ｐ ＰＰ Ｇ ＩＮ孵育 ｓｏ３细胞 ４ ， ｋｖ ８ｈ 观察 量效关 系 ； 通过 ｃ Ｎ Ｄ Ａ芯 片技术筛选 凋亡相关基 因 ； 实时荧光定量 Ｐ Ｒ法检 测 Ｂ ｘ Ｃ ａ、 Ｂ ｌ ｌＣ ｓａｅ３ｍ Ｎ ｃ— 、 ａｐ ｓ一 Ｒ Ａ水平 的表 达量 ； ｓ ｒ ｌ 法检 测 ｘ Ｗｅｔ ｎｂ ｔ ｅ ｏ Ｂ ｘ Ｂ ｌ ｌＣ ｓａｅ３蛋 白表达 量。结 果 与 对 照组 相 比， ａ 、 ｃ— 、 ａｐｓ一 ｘ
乳 源 免 疫 调 节 肽 （ ｒ－ ｌ—ｒ—ｅＰｏＡ ｎ Ｇ ＰｏＧｙＰｏＩ ．ｒ— ｓ ，Ｐ ． ｌ
ＰＰ 是 一组 ３—９个 氨基 酸残 基 短 肽 。从 牛 酪 蛋 ＩＮ） 白酶解 产物 中分 离 出的六 肽 位 于 Ｂ酪 蛋 白的 ６ －８ 一 ３６ 残 基上 ， 是最 为典 型 的免 疫调 节 肽 －］ ｃ－ 族 ３。Ｂ ｌ ２家
Ｓｓ ｍ（ 国 Ｐｏ ｇ ｙｔ 美 ｅ ｒｍｅａ公 司 ） Ｓ Ｂ ｒｅ ｒｍｘ ；Ｙ Ｒ ＧｅｎＩＰｅ ｉ Ｅ ａ （ 连 宝 生 物 公 司 ） 八 联 管 （ 国 Ａ Ｉ ｘＴ ｑ 大 ； 美 Ｂ 公 司） 。一 抗 ： —ｃｎ鼠单 抗 （ ａｔ ｒｚ 司 ） Ｂ ｘ Ｂａｔ ｉ ＳｎａＣｕ 公 ， ａ 鼠单 抗 （ 京 中杉金桥 生 物公 司 ）Ｂ １ ｌ 多抗 （ 北 ， ｃ ｘ兔 ． 武 汉博 士德 生物 公 司） Ｃ ｓａｅ３兔 多抗 （ ，ａｐｓ． 武汉 Ｐｏ ｉ ｒｔｎ ｅ ｔ ｈ公 司 ） ｅ ｃ 。二 抗 ： 根 过 氧 化 物 酶 标 记 的 山羊 抗 辣 鼠、 山羊抗 兔 的 Ｉ ｇ Ｇ购 自 Ｂｏｈｒ 司 ；Ｃ ｉ ａｐ公 ｓ Ｅ Ｌ显 色试 剂 盒购 于美 国 Ｐｅｃ 司 ； Ｃ 定量 试 剂盒 购 自上 ｉ ｅ公 ｒ ＢＡ
白屈菜红碱对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响
第 50 卷第 1 期2024年 1 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.50 No.1Jan.2024DOI：10.13481/j.1671‑587X.20240104白屈菜红碱对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响周佳1, 邱智东1, 林喆1, 律广富2, 许佳明1, 林贺1, 王可欣1, 王雨辰1, 黄晓巍1,3（1. 长春中医药大学药学院临床药学与中药药理教研室，吉林长春130117；2. 长春中医药大学吉林省人参科学研究院中药药理组，吉林长春130117；3. 长春中医药大学东北亚中医药研究院基础研究所，吉林长春130117）［摘要］目的：探讨白屈菜红碱（CHE）对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）的抑制作用，阐明其相关作用机制。
方法方法：体外培养SKOV3细胞，分为对照组和2.5、5.0、10.0、20.0及40.0 μmol·L－1 CHE组，采用噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖抑制率。
体外培养SKOV3细胞，分为对照组、转移生长因子β1（TGF-β1）组、TGF-β1+5 μmol·L－1 CHE组和TGF-β1+10 μmol·L－1 CHE组，采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移率，Transwell小室实验检测各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数，Westren blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）蛋白表达水平，免疫荧光染色法检测各组细胞中E-cadherin和N-cadherin荧光强度。
结果结果：MTT法，与对照组比较，5.0、10.0、20.0和40.0 μmol·L－1 CHE组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05或P<0.01）。
siRNA抑制卵巢癌SKOV3细胞EPAS1表达及细胞增殖的体外研究
～
实验组相对值 ／ 白 照组相对值） ０￣。 空 对 Ｘ１０ ￣
１２ ４ｗ ｓ ｒ ｌ ｔ ｇ ． ． ｅｔ ｎｂｏ ｉ 检测 Ｅ Ａ １ 白表达 细 胞冰上充分 裂解 ， ｅ ｔｎ ＰＳ细胞 中的表达 ， 探讨 其抑 制卵巢 癌细 胞增殖 的 作 １２ ３Ｒ ． ． Ｔ—Ｐ Ｒ检 测 Ｅ Ａ １ｍ Ｎ 表达 ： ｒ ｏ 一步法 抽提 细胞 总 Ｃ Ｐ Ｓ Ｒ Ａ Ｔｉｌ ｚ 用， 为卵巢癌基 因治疗 提供新 的靶点， 为下一 步体 内实验打下基础 。 Ｒ Ａ，逆 转 录 成 ｃ Ｎ 并 Ｎ Ｄ Ａ。 引 物： Ｅ Ａ １ ５ 一 Ａ Ｃ Ｔ Ｇ Ｐ Ｓ ＧＣ Ｔ －
论 著
Ｃｎｅ中ｏ儿Ｗｍ ａ ｈｓｎ 妇ｎｏ ｎ ｌ ｉ ｄｒ 健 Ｈ ｔ ｅＡ ｅ ｅ ｅｈ 外ｉ康 Ｆｇ
２１Ｎ １第 ０ ５第卷５ １ ９ 期 年
ｓＲ ｉ ＮＡ 制 卵 巢 癌 Ｓ 抑 ＫＯＶ３细 胞 Ｅ ＡＳ Ｐ １表 达 及 细 胞 增 殖 的体 外 研 究
傅 晓 红
干扰 ＲＮＡ（ｉ ｓ ＲＮＡ） 并进行转染。实验分为实验组、 阳性 对照组 、 阴性对 照组及 空白对照组 。采用 ＲＴ－Ｐ Ｒ 和 ｗｅｔｒ ｌｔｉｇ检 测各组细胞 Ｃ ｓｅｎｂｏｔ ｎ
Ｅ Ａ １ Ｒ Ａ 和蛋白表 达水平， Ｐ Ｓ Ｎ ｍ 通过 Ｍ Ｔ法检测各组细胞 增殖情 况。结果： Ｔ 应用 Ｅ Ａ １ ｉＮ Ｐ Ｓ 一ｓ Ａ转染卵巢癌 Ｓ Ｏ ３ Ｒ Ｋ Ｖ 细胞后 ， 实验组 的 Ｅ — Ｐ Ａ １ｍ Ｎ Ｓ Ｒ Ａ和蛋 白表达水平 明显降低 ， 细胞增殖明显受限， 与其他 三组相 比较 ， 差异有统计 学意义（ ＜Ｏ０） Ｐ ．５ 。实验组基 因沉默效率为 ６． ， ３９
新城疫病毒(NDV)对卵巢癌细胞株(SKOV-3)的杀伤作用 卵巢癌细胞株
新城疫病毒(NDV)对卵巢癌细胞株(SKOV-3)的杀伤作用卵巢癌细胞株[摘要] 目的研究新城疫病毒（NDV）对卵巢癌细胞株（SKOV-3）的杀伤作用。
方法用不同浓度新城疫病毒（NDV-D90）与卵巢癌细胞株（SKOV-3）共培养；在不同时间（6、12、24、48h）观察SKOV-3细胞形态的改变。
结果NDV 病毒作用的SKOV-3细胞表现为细胞膜皱缩、细胞核染色质浓缩、细胞溶解和细胞凋亡；NDV可对SKOV-3胞产生抑制作用，抑制效果与浓度及共同孵育时间有关，差异有统计学意义（P＜0.01）。
结论NDV对体外培养SKOV-3细胞增殖有明显抑制作用，并可诱导该细胞凋亡。
[关键词] 卵巢癌；NDV；细胞培养[中图分类号] R735.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2011）23-25-02The Effect of Newcastle Disease Virus-infected（NDV）on the SKOV-3SU LirongObstetrics and Gynecology Department，Beijing Municipal Shunyi District Women and Children Health Care Hospital ，Beijing 101300，China[Abstract] Objective To investigate the effect of newcastle disease virus-infected（NDV）on the SKOV-3. Methods NDV-D90 in different concentration was cultured with SKOV-3；The SKOV-3 cells were monitored for cell morphological changes under micro scope within 6hours，12hours，24hours and 48hours respectively. Results The SKOV3 cells infected by NDV become shrinked，dissolved. Cell concentration and apoptotic bodies were observed as well. NDV could effectively inhibit SKOV-3 cell growth，which depends on virus concentration and inoculation time of NDV and the difference of cell growth inhibitory rate among cells was significant（P＜0.01）. Conclusion NDV can inhibit proliferation and induces cell apoptosis in SKOV-3 cells in vitro.[Key words] Ovarian cancer；NDV；Cell culture卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，且手术和放化疗疗效不佳，5年生存率较低，成为严重威胁妇科肿瘤患者生命的疾病。
舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞作用的初步研究
舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞作用的初步研究苏丽;孙晓雷;王春;贲志云;苏敏【期刊名称】《南通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2008(028)005【摘要】目的:研究舒林酸对卵巢癌SKOV3细胞的生长和细胞运动的影响以及对基质金属蛋白酶2(MMP2)、环氧合酶-2(COX-2)表达的影响:方法:将不同浓度的舒林酸加入培养液中观察其对SKOV3细胞形态的影响.采用MTT法观察舒林酸对SKOV3细胞生长的影响,通过划痕试验观察舒林酸对SKOV3细胞运动的影响.利用免疫细胞化学方法研究舒林酸对SKOV3细胞MMP2、COX-2表达的影响.结果:舒林酸与SKOV3细胞体外培养可使肿瘤细胞伪足回缩、细胞变圆,MTT试验提示舒林酸可抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长.划痕试验提示舒林酸可抑制SKOV3细胞的运动,免疫细胞化学实验提示舒林酸显著抑制SKOV3细胞MMP2、COX-2的表达,有时间和剂量依赖效应.结论:舒林酸可能通过抑制MMP2、COX-2的表达而抑制卵巢癌SKOV3细胞的生长和运动.【总页数】3页(P329-331)【作者】苏丽;孙晓雷;王春;贲志云;苏敏【作者单位】南通大学医学院形态学实研室,南通 226001;南通大学医学院微生物与免疫学教研室,南通 226001;南通大学医学院公共卫生学院,南通 226001;南通大学医学院微生物与免疫学教研室,南通 226001;南通大学医学院妇产科学教研室,南通 226001【正文语种】中文【中图分类】R737.32【相关文献】1.卵巢癌抗原冲击DC在体外对SKOV3细胞作用的研究 [J], 盛敏佳;薛丽娟;王立岩;郝筱诗;刘玉萍2.S1P/S1PR对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的研究 [J], 刘艺璇;戴岚;谢蕾;高华;狄文3.齐墩果酸对人卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭、转移的影响及其作用机制研究Δ [J], 杜贵强; 张永莉; 胡孝辉ctacystin对卵巢癌SKOV3细胞作用及机制的研究 [J], 秦瑞;田秀娟;曹璐5.miR-101对上皮性卵巢癌SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用研究 [J], 王秀娟;韩萍;曹燕花;代娟;杨莉;肖远革;于笑涵因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
过表达和敲除SLUG基因卵巢癌SKOV3细胞稳定株的建立
过表达和敲除SLUG基因卵巢癌SKOV3细胞稳定株的建立雷静;赵然;高茹;辛灵彪;刘欣【期刊名称】《山东医药》【年(卷),期】2017(057)042【摘要】Objective To establish the ovarian cancer stable SKOV3 cell lines with overexpression and knockout of SLUG protein by lentiviral vector and modified CRISPR/Cas9 gene editing system,respectively. Methods ①The HA-SLUG gene cloned from plasmid pCMV-Myc-SLUG was inserted into lentiviral vector pLVX-IRES-Hyg. The recombinant plasmid pLVX-HA-SLUG was used to infect SKOV3 cells (experimental group). The lentivirus of pLVX-IRES-Hyg empty vector was prepared as the negative control group under the same conditions. The expression of SLUG protein was detected by Western blotting. ② A pair of sgRNAs specifically binding to SLUG gene was inserted into the vector PX462. The pair of recombinant plasmids was transfected into SKOV3 cells by Lipofectamine method. We screened the stable cells,and se-lected monoclonal cells as the experimental group. The expression of SLUG protein was detected by Western blotting. Meanwhile,and the blank control group without any treatment was set up. Results ①PCR was performed on the extracted monoclonal bacteria,and the positive ones were extracted and identified by PCR and double digestion. The results showed that the recombinant plasmid was successfully constructed. The expression levels of SLUG protein in thenegative control group and the experimental group were 0. 92 ± 0. 02 and 3. 14 ± 0. 04,respectively. The expression of SLUG protein in the experimental group was higher than that in the negative control group (P<0. 01). ②The four positive monoclonal cells were measured. The relative expression levels of SLUG protein were 0. 07 ± 0. 01,0. 06 ± 0. 01,0. 21 ± 0.02 and 0. 20 ±0. 01,respectively,and that in the blank control group was 0.56 ± 0. 03. The relative expression of SLUG protein in the experimental group was lower than that in the blank control group(allP<0.01).Conclusion Two stable SKOV3 cell lines with SLUG protein overexpression and knockout were constructed successfully,which provided the essential cell mod-els for further study about the role of SLUG protein in human ovarian cancer.%目的利用慢病毒载体和改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统分别构建过表达和敲除SLUG基因的卵巢癌SKOV3细胞稳定株.方法①以质粒pCMV-Myc-SLUG为模板扩增出HA-SLUG基因,将其连接到慢病毒表达质粒pLVX-IRES-Hyg中.将此重组表达载体pLVX-HA-SLUG通过病毒感染法感染SKOV3细胞(实验组),以相同条件制备pLVX-IRES-Hyg空载体的慢病毒作为阴性对照,Western blotting法检测两组SLUG蛋白表达.②将一对能特异结合SLUG基因的sgRNA分别连接到载体PX462中,获得的一对重组质粒通过脂质体法共转染SKOV3细胞,筛选稳定株,挑取单克隆细胞(实验组),用Western blotting法检测SLUG蛋白表达,另设空白对照组,不加任何处理.结果①对挑取的单克隆菌液进行PCR扩增,阳性者提取质粒进行PCR和双酶切,两者验证正确后进行DNA测序鉴定,结果证实重组质粒构建成功.阴性对照组与实验组SLUG蛋白相对表达量分别为0.92±0.02和3.14±0.04,实验组SLUG蛋白表达高于阴性对照组(P<0.01).②挑取4个单克隆细胞进行测定,SLUG蛋白的相对表达量分别为0.07±0.01、0.06±0.01、0.21±0.02、0.20±0.01,空白对照组为0.56±0.03.实验组SLUG蛋白相对表达量低于空白对照组(P均<0.01).结论过表达和稳定敲除SLUG基因的SKOV3细胞株构建成功,为进一步探讨SLUG在卵巢癌中的作用提供了细胞模型.【总页数】4页(P1-4)【作者】雷静;赵然;高茹;辛灵彪;刘欣【作者单位】天津医科大学,天津300070;天津医科大学,天津300070;天津医科大学,天津300070;天津医科大学,天津300070;天津医科大学,天津300070【正文语种】中文【中图分类】R737.31【相关文献】1.THY1基因影响上皮性卵巢癌SKOV3细胞株生长的体内和体外实验研究 [J], 曾俐琴;彭芝兰;罗喜平2.人 SND1基因慢病毒载体构建及稳定表达SND1蛋白的人卵巢癌 SKOV3细胞株筛选 [J], 任媛媛;雷静;赵然;辛灵彪;苏超;高星杰;杨洁3.Vasorin基因稳定敲除HepG2细胞株的建立及其生物学功能研究 [J], 耿介;张坦;董洁;邵宁生;王超男;李少华;丁红梅;李慧;黄皑雪;李洁;李达;白琛俊4.Ku70基因稳定敲除HeLa细胞株的建立及其生物学功能研究 [J], 李达;张坦;董洁;邵宁生;沈雪莲;李少华;丁红梅;李慧;黄皑雪;耿介;王超男;白琛俊5.利用Tet-on诱导基因表达系统构建EID3基因真核表达载体及稳定转染细胞株的建立 [J], 王燕;王宇暄;刘亚敏;张桂强;苏文洲;郭奇峰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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skov3细胞培养技巧
Skov3细胞是一种人类卵巢癌细胞系，具有高度的恶性程度。
在研究卵巢癌的发病机制和治疗方案中，Skov3细胞被广泛应用。
本文将介绍Skov3细胞的培养技巧，包括培养基配制、传代方法、冻存和解冻技巧等方面。
一、培养基配制
1.1 基础培养基
Skov3细胞最常用的培养基为DMEM/F12（1:1）+10% FBS（fetal bovine serum），其中DMEM/F12为无血清培养基，适合于无血清培养实验。
FBS含有丰富的生长因子和营养成分，可以促进Skov3细胞的生长和增殖。
1.2 基础培养基添加物
除了FBS外，还可以向基础培养基中添加其他生长因子和营养成分，如EGF（表皮生长因子）、bFGF（碱性成纤维细胞生长因子）、L-谷氨酰胺、钠丙酸等。
这些添加物可以提高Skov3细胞的增殖速度和细胞活性。
1.3 基础培养基调节pH值
Skov3细胞的最适生长pH值为7.4，因此在培养过程中需要注意调节培养基的pH值。
如果pH值偏高或偏低，会影响细胞的生长和增殖。
二、传代方法
2.1 细胞收获
当Skov3细胞生长到80%~90%的密度时，可以进行传代。
首先将培养基倒掉，用PBS（磷酸盐缓冲液）洗涤细胞2~3次，使细胞表面没有残留培养基。
2.2 细胞消化
接下来使用0.25% Trypsin/EDTA溶液将细胞消化下来。
加入足够的溶液覆盖细胞表面，放置5~10分钟左右，观察细胞是否开始分离。
如果分离不完全，可以轻轻拍打培养瓶或离心加速分离。
2.3 细胞计数
将消化后的细胞转移到新的15ml离心管中，并用PBS洗涤1~2次。
使用显微镜和计数板对细胞数进行计数，并计算出相应的传代倍数。
2.4 细胞接种
将细胞重新接种到新的培养瓶中，加入适量的新鲜培养基。
注意不要让细胞密度过高，否则会影响细胞的生长和增殖。
三、冻存技巧
3.1 冻存液配制
Skov3细胞冻存液配制方法为DMEM/F12+10% DMSO（二甲基亚砜）+10% FBS。
DMSO可以保护细胞膜完整性，防止细胞在低温下受到冷冻伤害。
FBS可以提供足够的营养成分和生长因子，保证细胞在冷冻过程中仍然能够生存。
3.2 细胞收获
将Skov3细胞用PBS洗涤1~2次，使细胞表面没有残留培养基。
使用0.25% Trypsin/EDTA溶液将细胞消化下来，并用PBS洗涤1~2次。
3.3 冷冻管装填
将洗涤后的Skov3细胞转移到新的离心管中，并加入足够的冻存液。
注意不要让细胞密度过高，否则会影响细胞的冷冻和解冻。
3.4 冷冻过程
将装有Skov3细胞和冻存液的离心管放入-80℃的冰箱中，等待至少2小时以上。
之后可以将离心管转移到液氮罐中进行长期保存。
四、解冻技巧
4.1 解冻液配制
Skov3细胞解冻液配制方法为DMEM/F12+10% FBS。
FBS可以提供足够的营养成分和生长因子，保证细胞在解冻过程中能够快速恢复生长状态。
4.2 解冻过程
将装有Skov3细胞的离心管从液氮罐中取出，迅速放入37℃的水浴中解冻。
当离心管中没有任何结晶时，立即取出离心管，并加入足够的解冻液。
4.3 细胞接种
将解冻后的Skov3细胞转移到新的培养瓶中，并加入适量的新鲜培养基。
注意不要让细胞密度过高，否则会影响细胞的生长和增殖。
总结：
通过本文介绍，我们了解到了Skov3细胞培养的基本技巧，包括培养
基配制、传代方法、冻存和解冻技巧等方面。
这些技巧不仅适用于Skov3细胞，也可以应用于其他细胞系的培养和处理。
在进行实验前，我们必须了解细胞的特性和生长条件，并严格按照操作规程进行操作，以保证实验结果的准确性和可靠性。