卵巢肿瘤原位移植动物模型的建立

卵巢肿瘤原位移植动物模型的建立

刘艺杰;段刚;段萍;卢晓声;梅洁;华莹;吕杰强

【摘要】目的:建立能够模拟临床肿瘤发展过程的卵巢癌动物模型.方法:将处于对数生长期的人卵巢癌细胞株SKOV3 (2× 106个/只)、A2780多水平细胞数

(2×106个/只、5×106个/只、1×107个/只、1.5×107个/只和2×107个/只)裸鼠皮下注射,A2780(1.5×107个/只)腹腔注射.取SKOV3第3代连续传代皮下瘤组织进行裸鼠右侧卵巢包膜下移植.结果:卵巢癌细胞株SKOV3皮下注射、组织块原位移植成瘤率均100％.原位移植卵巢癌裸鼠6～8周时剖腹探查见局部形成较大包块,与周围组织发生粘连,腹腔暗红色血性积液伴脏器广泛性转移,淋巴结转移.卵巢癌A2780细胞株多水平细胞数皮下注射均未成瘤;腹腔注射8周时剖腹探查见腹腔内生成2～3 mL无色澄清腹水,双侧卵巢增大,脾脏明显增大,未能发现任何腹腔瘤块.结论:成功建立了临床转移模式的SKOV3卵巢癌肿瘤细胞原位移植动物模型；卵巢癌A2780细胞接种未能成瘤,可能是因其对宿主体内非特异性免疫反应较敏感.%Objective:To establish an animal model with ovarian carcinoma to simulate the clinical tumor development. Methods: Human ovarian carcinoma cell lines SKOV3 and multi-level A2780 in exponential phase of growth were inoculated subcutaneously in nude mice,A2780 cells were also inoculated intraperitoneally. The third generation of SK0V3 subcutaneous tumor was transplantated below the capsule of the right ovary. Results:Subcutaneous inoculations of human ovarian carcinoma SKOV3 cells and orthotopic transplantations of SKOV3 subcutaneous tumor both succeeded in all mice. Six to eight weeks after orthotopic transplantations,tumors invasion into surrounding tissues were

observed,as well as dull red effusion with peritoneal metastasis and lymph node metastasis. The subcutaneous inoculation of multi-level cell lines

A2780 all failed in tumor formation. Eight weeks after A2780 cells were injected in intraperitoneal cavity,2-3 mL colorless ascites appeared,o-varian and spleen grew obviously,but tumor was not detected. Conclusions: The SKOV3 orthotopically transplantated animal model was successfully established. The inoculation of A2780 cell lines failed in tumor formation,possibly due to their sensitivities to non-specific immunity in the host.

【期刊名称】《国际妇产科学杂志》

【年(卷),期】2012(039)004

【总页数】4页(P373-375,封3)

【关键词】卵巢肿瘤;癌;模型,动物;原位移植;淋巴转移

【作者】刘艺杰;段刚;段萍;卢晓声;梅洁;华莹;吕杰强

【作者单位】325000 温州医学院附属第二医院妇科;南方医科大学南方医院影像中心;325000 温州医学院附属第二医院妇科;325000 温州医学院附属第二医院妇科;325000 温州医学院附属第二医院妇科;325000 温州医学院附属第二医院妇科;325000 温州医学院附属第二医院妇科

【正文语种】中文

卵巢癌为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，起病隐匿，但缺少能早期发现的敏感而特异的诊断方法；转移复发率高，且在治疗过程中易对化疗药物产生耐药性，死亡

率极高，已跃居妇科恶性肿瘤的首位［1］。建立能够模拟临床肿瘤发生发展过程的动物模型是研究肿瘤的有力手段，将本实验所进行的卵巢癌动物模型的建立及其建立过程中发现的相关问题报道如下。

1.1 材料卵巢癌细胞株SKOV3、A2780（南方医科大学肖云彬博士、陈如大硕士惠赠）；RPMI 1640培养基、高糖型DMEM培养基（吉诺生物制剂）；胎牛血清（杭州四季青）；健康、无特定病原体（specific pathogen-free，SPF）级、雌性裸小鼠，3～4 周龄，体质量 15～20 g；6～8 周龄，体质量 20～25 g，购自南方医科大学实验动物中心。

1.2 方法

1.2.1 SKOV3、A2780卵巢癌细胞准备卵巢癌细胞株，5%CO2、37℃饱和湿度下，SKOV3、A2780分别培养于 10%FBS-RPMI 1640、高糖型DMEM培养基中，待无污染、生长状态良好的细胞处于对数生长期时将其消化、离心收集、计数后重悬于无血清培养基，配置成细胞浓度为1×107个/mL的单细胞悬液，置于冰上待用。

1.2.2 卵巢癌细胞皮下瘤的形成选3～4周龄雌性裸鼠18只随机分为两组，A组（n=3）：颈部皮下注射SKOV3细胞悬液（2×106个/只），B 组（n=15）再随机分为 5 组（n=3）后多水平细胞数（2×106/只、5×106/只、1×107/只、

1.5×107/只、2×107/只）颈部皮下注射A2780细胞悬液，送回SPF级环境下饲养，观察裸鼠皮下瘤生长情况。为提高肿瘤细胞在裸小鼠体内的适应生存能力，待A组SKOV3细胞皮下注射成瘤后，将瘤组织连续皮下传代3次。

1.2.3 卵巢癌A2780细胞株腹腔种植选3～4周龄雌性裸鼠 3 只，卵巢癌细胞株A2780（1.5×107个/只）腹腔注射，送回SPF级环境下饲养，密切观察小鼠生长状态，接种8周时剖腹探查。

1.2.4 卵巢癌原位移植转移动物模型的建立用1%戊巴比妥钠20 mg/kg对A组第