第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测
免疫论文之抗ENA抗体检测
用条带印记法对抗ENA抗体的检测（潘跃承09检验本科临床生化班）摘要本次实验是利用条带印记法对抗可提取行抗原(ENA)抗体中各组分的检测。
实验操作主要是将具有多种抗原性的细胞核盐水可提取性抗原(ENA)经凝胶电泳分离后，转印于硝酸纤维素膜上，加入待测血清反应后，再加入酶标的二抗，最后加底物显色，观察结果。
实验最后检测到70KD（抗U1RNP）,53KD(抗DM),32KD （抗U1RNP）,29KD28KD(抗SM抗U1RNP),22KD（抗U1RNP）显色区带的抗体。
利用条带印记法简单，检出率高，可以较顺利的检测出抗ENA抗体中的各组分。
关键词条带免疫印迹法抗ENA抗体标准谱带图前言条带印记法是通过将生化特性明确的纯化抗原或基因重组抗原平行印制在硝酸纤维膜上，加入待测血清反应后，再加入酶标二抗，最后加入底物显色，最后观察各条带区域的抗体。
其中的一些抗体对一些相关的疾病的阳性诊断率有重要的临床意义。
如抗Sm 三条区带同时出现时，诊断系统性红斑狼疮的阳性率为30%，抗U1RNP 其中70KD，32KD应出现任意一条区带时，诊断为MCTD 的概率为95%，SLE的概率为32%。
1材料与方法⏹ 1.1试剂盒组成⏹浓缩洗涤液：25ml×2⏹酶标抗体：6ml×2⏹显色液A：25ml×1⏹显色液B：25ml×1⏹终止液：25ml×1⏹膜条：8条×51.2仪器：加样枪（移液器）：上海荣泰生化工程有限公司；恒温箱：上海-恒科学仪器有限公司试剂：可提取抗原（ENA）自身抗体谱检测试剂盒（免疫印迹法），上海求精生化试剂仪器有限公司，标本：血清；规格：40人份/盒；2~8摄氏度避光保存，酶标抗体-20摄氏度保存，开封后4摄氏度保存，有效期一个月；产品批号：40E1120201；生产日期2012.02.13；有效期至2013.02.12。
1.3操作方法⏹ 1.31将浓缩洗涤液用蒸馏水作1∶10稀释。
免疫印迹法检测抗ENA抗体在自身免疫性疾病中的诊断价值分析
免疫印迹法检测抗ENA抗体在自身免疫性疾病中的诊断价值分析发表时间：2019-05-24T10:56:12.627Z 来源：《医药前沿》2019年8期作者：肖荣[导读] 目的：探究免疫印迹法检测抗ENA抗体在自身免疫性疾病中的诊断价值。
（红河州第四人民医院云南开远 661699）【摘要】目的：探究免疫印迹法检测抗ENA抗体在自身免疫性疾病中的诊断价值。
方法：选取在我院于2017年6月-2018年6月进行诊断自身免疫性疾病患者72例，分别是13例 PM/DM、14 例 RA、22 例 SLE、7例 MCTD、16例SS。
入院后采集患者3mL不抗凝血送检。
测定是分别选择免疫斑点及免疫印迹法，分析检测技术对上述六种疾病中抗ENA抗体检出率。
结果：72例患者中有59例（81.94%）为1种以上ENA 抗体阳性；针对抗 ENA 抗体的检出率，两组检测技术检出率对比差异显著（P＜0.05），且相较于免疫斑点技术，免疫印迹法的检出率显著较高（P＜0.05）。
结论：针对自身免疫性疾病患者，采用免疫印迹法检测ENA抗体，对其筛查有关键作用，具有临床应用价值。
【关键词】自身免疫性疾病；诊断价值；免疫印迹法；ENA【中图分类号】R593 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）08-0140-02自身免疫性疾病有临床诊断困难特征，是一种风湿类结缔组织病，以多脏器系统损害为主要特点，严重的影响到患者的生活质量[1]。
为了实现对自身抗体在患者血清中表达及分布情况的充分了解，此次研究通过对身免疫性疾病患者，采用免疫印迹法检测ENA抗体，结果如下：1.资料与方法1.1 一般资料选取自身免疫性疾病患者72例，在我院于2017年6月-2018年6月进行诊断，分别是13例PM/DM、14例RA、22例 SLE、7例MCTD、16例SS。
入院后采集患者3ml不抗凝血送检，以3000r/min的转速进行离心处理，分离获取血清作为待检样本。
免疫印迹法
原理
经过PAGE分离的蛋白质样品， 转移到固相载体（例如硝酸纤 维素薄膜）上，固相载体以非 共价键形式吸附蛋白质，且能 保持电泳分离的多肽类型及其 生物学活性不变。以固相载体 上的蛋白质或多肽作为抗原， 与对应的抗体起免疫反应，再 与酶或同位素标记的第二抗体 起反应，经过底物显色或放射 自显影以检测电泳分离的特异 性目的基因表达的蛋白成分。
免疫印迹法
商宇伟
定义
免疫印迹法（immunobiotting test，IBT） 也被称作酶联免疫电转移印斑法（enzyme linked immunoeletrotransfer blot，EITB），是 20世纪70年代末，发展起来的一门蛋白质多参 数检测技术。由于其与早先建立的核酸印迹法 southern blot相类似，所以习惯上又叫westernblot。
电泳2小时
转印结果的检查：电泳结束后，用丽春红对NC膜预染下，观察转移 效果。随后用水冲洗掉丽春红的颜色，进行封闭。
3、酶免疫定位
封闭：将上述得到的NC膜，用封闭液在摇床上过夜封闭。为了防止免
疫试剂的非特异性吸附。
清洗：封闭时间达到后用PBST清洗NC膜3次左右，每次约15分钟。 一抗孵育：清洗好后，加入一抗标记2小时左右。一抗一般选择源于兔
特点：HRP能激发化学发光显色底物发光，通过对X线胶片的曝 光，显影定影从而达到显色的目的。灵敏性很高且比较安全。
发光底物的配制： 2ml的A液+2ml的B液+6ml的SW。 摇床上与NC膜避光孵育5分钟。
总结
SDS-PAGE电泳分离蛋白 转膜
过夜封闭 PBST洗3次，每次15分钟 一抗孵育2小时 PBST洗3次，每次15分钟 酶标二抗孵育1小时 PBST洗3次，每次15分钟 DAB显色底物显色法显色 ECL显色法
免疫印迹分析原理
免疫印迹分析原理
免疫印迹分析是一种常用的生物化学实验技术，用于检测特定蛋白在混合样品中的存在与定量。
其原理基于免疫学，包括抗原-抗体特异性结合和酶标记技术。
首先，将待检测的样品蛋白通过电泳技术在聚丙烯酰胺凝胶上进行分离。
分离完毕后，将凝胶中的蛋白转移到具有亲水性的膜上，如聚偏氟乙烯膜或硝酸纤维素膜。
接下来，将膜放入一种称为“阻断剂”的溶液中，将未被分离的蛋白表面区域堵塞，防止非特异性的抗体结合。
然后，将膜孵育于含有特异性一抗（primary antibody）的溶液中。
一抗与目标蛋白发生特异性结合。
一抗通常通过小鼠、兔子或山羊等动物制备，可以识别和结合特定的抗原。
经过一抗的孵育后，膜需要进行洗涤，去除未结合的一抗分子，以减少后续步骤中的背景干扰。
随后，加入与一抗结合的辅助二抗（secondary antibody），通
常二抗是被标记上酶或荧光染料的抗体。
二抗与一抗发生特异性结合，形成复合物。
紧接着，利用一种称为“底物”的分子与酶标记的二抗发生反应。
底物通过酶的催化作用，产生可定量测量的信号，如发光或颜色的产生。
最后，在暗室或成像系统中，通过检测信号的强度和位置来分析目标蛋白的存在与定量。
在印迹图上，目标蛋白通常以条带（band）的形式显示出来，其强度与其在样品中的丰度成正比。
免疫印迹分析原理的关键在于特异性的抗原-抗体结合，通过
使用合适的一抗和二抗，可以高度选择性地检测目标蛋白。
此外，由于酶标记技术的应用，使得信号可以转化为可测量的结果。
因此，免疫印迹分析成为生物医学研究中常用的工具之一，用于研究蛋白表达、诊断疾病等方面。
ENA多肽抗体检测及其临床意义
ENA多肽抗体检测及其临床意义1 临床资料1.1 材料与方法:本文按《美国风湿性疾病概要》对各种风湿病的诊断标准[1],诊断为风湿病117例,其中系统性红斑狼疮(SLE) 32例, 混合性结缔组织病(MCTD) 15例,干燥综合征(SS) 10例,进行性系统性硬化症(PSS) 8 例,多发性肌炎(PM)、皮肤炎(DM) 7例,类风湿性关节炎(RA)和强直性脊柱炎(AS) 45 例, 3例RA合并AS, 1例SLE与SS、RA相重叠。
设正常献血员30例作为对照。
受试对象均于晨起空腹采血2ml,采用免疫印迹方法, 应用深圳爱利国公司生产的试剂盒(一种制备好的醋酸纤维薄膜,上有已按分子量排列好的ENA多肽抗原),用受试对象10μl血清,通过与抗体反应的多肽抗原(显色带)的数量与分子量,不仅可识别抗原的表位,并可检测7种自身抗体(抗Sm、抗SSA、抗SSB、抗U1RNP、抗SCL-70、抗JO-1、抗核糖体抗体),以阳、阴性报告结果。
1.2 结果:见附表。
附表风湿病ENA多肽抗体检测阳性例数ENA多肽抗体谱SLE (n=32)(%) MCTD (n=15)(%) SS (n=10)(%) PSS (n=8)(%) PM/DM (n=7)(%) RA+AS (n=45)(%) 正常对照(n=30)(%) 抗Sm 8(25.0) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 抗U1RNP 13(40.6) 15(100.0) 0(0) 3(37.5) 2(28.6) 0(0) 0(0) 抗SSA 8(25.0) 3(20.0) 7(70.0) 2(25.0) 1(14.3) 1(14.3) 0(0) 抗SSB 4(12.5) 1(6.7) 6(60.0) 1(12.5) 0(0) 1(2.2) 0(0) 抗SCL-70 0(0) 0(0) 0(0) 3(37.5) 0(0) 0(0) 0(0) 抗JO-1 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 1(14.3) 0(0) 0(0) 抗核糖体4(12.5) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0) 0(0)2 讨论所谓ENA是指盐水中溶解的一部分核抗原, ENA多肽抗体是风湿病患者血清中产生的针对核内可提取性核抗原的相应的自身抗体。
免疫印迹法
自身免疫性疾病检测的应用原则
免疫球蛋白、 补体等检测
+
ANA筛选
抗胞浆型抗体鉴定
ENA抗体谱
其它自身抗体
怀疑自身免疫性疾病
怀疑系统性自身免疫疾病
怀疑器官特异性自身免疫疾病
类风湿因子、抗中性粒细 胞胞浆抗体、抗磷脂抗体 及其它自身抗体检测
临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括： 抗U1-RNP 抗Sm 抗SSA 抗SSB 抗Scl-70 抗Jo-1 抗rib-P蛋白
抗可提取性核抗原（ ENA ）抗体 anti-extractable nuclear antigen antibodie
抗U1-RNP抗体：高滴度抗U1-RNP抗体是MCTD的特征性抗体， 抗体滴度与疾病的活动性相关
标本信息
标本号 3975 3979 3996 临床诊断 肝功异常，PBC？ SS 雷诺现象查因 ANA结果 1:1000胞浆型着丝点型 1:320颗粒型 1:10000颗粒型胞浆型
4111
4121 4131 4216 4224 4277
双手指麻木8月
干燥综合征？ 肾病综合征 UCTD MVR术后 SLE
HEp-2细胞为底物 的间接免疫荧光 法检测ANA谱
针对特异器官自身抗体检测
阳性
阴性
抗Sm、RNP、SSA、SSB、Scl-70、 Jo-1、rib-P、dsDNA、ssDNA、组蛋 白抗体确诊实验检测
抗体阳性确诊或辅助诊断
阴性可排除诊断或需进一步观察
思考
实验操作无误，保证带未出现，可能的原因？
条带RNP/Sm与Sm的关系? 阳性质控的意义?
自身免疫性疾 病的筛选试验 ANA检测
免疫印迹介绍及实验过程
免疫印迹介绍及实验过程免疫印迹免疫印迹免疫印迹（immunoblotting）⼜称蛋⽩质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋⽩的⽅法。
该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的⼀种新的免疫⽣化技术。
由于免疫印迹具有SDS-PAGE 的⾼分辨⼒和固相免疫测定的⾼特异性和敏感性，现已成为蛋⽩分析的⼀种常规技术。
免疫印迹常⽤于鉴定某种蛋⽩，并能对蛋⽩进⾏定性和半定量分析。
结合化学发光检测，可以同时⽐较多个样品同种蛋⽩的表达量差异。
免疫印迹法的基本原理将混合抗原样品在凝胶板上进⾏单向或双向电泳分离, 然后取固定化基质膜与凝胶相贴。
在印迹纸的⾃然吸附⼒、电场⼒或其它外⼒作⽤下, 使凝胶中的单⼀抗原组份转移到印迹纸上, 并且固相化。
最后应⽤免疫覆盖液技术如免疫同位素探针或免疫酶探针等, 对抗原固定化基质膜进⾏检测和分析。
免疫印迹法的基本步骤免疫印迹法（以抗原分析为例）基本上可分为抗原分离、抗原印迹和抗原检定三个步骤。
在每⼀步中因采⽤的具体实验⽅法不同, 可构成多种免疫印迹分析系统。
免疫印迹法的优点免疫印迹法是⼀项分析抗原、抗体的技术。
它具有下列优点：1、湿的固定化基质膜柔韧, 易于操作；2 、固定化的⽣物⼤分⼦可均⼀的与各种免疫探针接近, 不会象凝胶那样受孔径阻隔；3、免疫印迹分析只需少量试剂；4、孵育、洗涤的时间明显减短；5、可同时制作多个拷贝, ⽤于多种分析和鉴定；6、结果以图谱形式可长期保存；7、免疫探针可通过降低PH值等⽅法, 象抹去录⾳磁带⼀样将探针抹掉, 再换⽤第⼆探针进⾏分析检测。
免疫印迹法的应⽤范围及优点不仅局限于此, 它必将随着这⼀⽅法的深⼊研究⽽不断发展和完善。
免疫印迹免疫印迹⼜常称Western blot，是⼀综合性的免疫学检测技术。
它利⽤SDS-PAGE技术将⽣物样品中的蛋⽩质分⼦按分⼦量的⼤⼩在凝胶上分离开，然后⽤电转移的⽅法将蛋⽩转移到固相膜上（NC、尼龙或PVDF膜），最后进⾏免疫学检测。
临床免疫学：免疫印迹法检测ENA抗体 (2)
HRP的底物
HR DH2+H2O2P→ → → D+2H2O
H2O2为受氢体，HRP对受氢体的专一性很 高
供氢体DH2习惯上被称为底物，底物有多种
酶和酶作用底物
常用底物
四甲基联苯胺 TMB
邻苯二胺 OPD
HRP的常见底物
5-氨基水杨酸5-ASA
2,2′-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑 啉磺酸-6)铵盐 ABTS
双抗体夹心一步法的钩状效应（示意 图）:
固 相 载 体
固相Ab
酶标Ab Ag
ELISA检测抗原的方法
竞争法 方法：用已知抗体包被，加入待测血清，
再加酶标抗原，酶标抗原与待抗原竞争与 包被抗体结合。加底物显色。
应用：用于检测只有一个抗原决定簇的小 分子半抗原（药物、激素等）
显色深浅与待测抗原量呈负相关
经典的双抗体夹心法采用“两步法”进行
“一步法”模式：选择针对同一抗原两种不同表位的 两株单抗，分别作为固相抗体和酶标记抗体，测 定时，可将待测抗原和酶标抗体同时加入反应体 系中。
一步法简化流程，缩短反应时间。但当待测抗原浓 度过高时，过量抗原分别与酶标抗体和固相抗体 结合，不能形成夹心复合物，会出现钩状效应 （hookeffect)，导致假阴性结果。
TMB见光易分解，应避光保存
AP的 底物
酶和酶作用底物
常用底物
对-硝基苯磷酸酯 （ pNPP ）
经AP作用后的产物为黄色对 硝基酚，最大吸收峰波长为 405 nm。
β-Gal 的底物
4-甲基伞基β-D半 酶作用后，生成高强度 乳糖苷（ 4MUG ） 荧光物 ，用荧光计测量。
二、酶标记物
自身免疫性疾病的ENA多肽抗体检测
自身免疫性疾病的ENA多肽抗体检测马韬;马南平【期刊名称】《四川省卫生管理干部学院学报》【年(卷),期】2000(000)0S1【摘要】目的 :为了解ENA多肽抗体谱对各类自身免疫性疾病(autoimmunediseaseAID)的诊断结果。
方法 :应用免疫印迹技术(immunoblottingIBT)检测了正常人和临床诊断确诊的病人共 2 0 3份血清中的可提取核抗原 (ENA)的抗体。
结果 :在各类自身免疫性疾病中 ,抗Sm抗体和抗rRNP 抗体主要见于系统性红斑狼疮 (SLE) ,阳性率分别为30 8%、7 6 % ;抗U1RNP抗体和抗D’E抗体主要见于混合性结缔组织病 (MCTD) ,阳性率分别为 10 0 % ,33 3 % ;抗SSA抗体和抗SSB抗体主要见于干燥综合征 (SS) ,阳性率分别为 6 0 %、80 % ;抗SCL - 70抗体见于进行性系统性硬化症(PSS) ,阳性率为 5 0 % ;抗J0 -1抗体和抗D’E抗体特异性见于多发性肌炎 (PM)和皮肌炎 (DM ) ,阳性率分别为40 %、2 0 % ;而抗RA - 5 4抗体仅见于风湿性关节炎 ,阳性率为 9 1% ;正常人各种ENA抗体均为阴性 ;非自身免疫性疾病(non autoimmunediseaseNAID)患者只有 2例抗Sm抗体阳性 ,4例抗SSA抗体阳性。
结论 :测定血清中ENA多肽抗体谱对SLE、MCTD、SS、PSS、PM/DM等病具有辅助诊断和鉴别诊断的意义【总页数】1页(P25-25)【作者】马韬;马南平【作者单位】[1]成都中医药大学附属医院!四川成都610072;[2]广元四一零医院!四川广元628000【正文语种】中文【中图分类】R【相关文献】1.进行ENA多肽抗体检测在诊断自身免疫性疾病方面的临床价值分析 [J], 叶成群2.自身免疫性疾病患者169例ANA 与ENA 自身抗体检测分析 [J], 刘璟;游进3.自身免疫性疾病患者血清ANA、抗ds-DNA、ENA多肽抗体检测245例结果分析 [J], 黄华健4.抗ENA抗体检测对常见自身免疫性疾病临床诊断价值研究 [J], 宫志美5.ENA多肽抗体免疫功能检测在自身免疫性疾病诊断中的应用价值 [J], 裴洪利因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫印迹法检测在自身免疫性疾病 ENA 多肽抗体谱及 临床意义
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ENA 多肽抗体 抗 ENA 谱 抗 Sm 抗 U1 RNP 抗 SSA 抗 SSB 抗 Scl270 抗 J O21 抗 rRNP 抗 DM253 抗 RA254 抗 D′E
国际检验医学杂志 2006 年 7 月第 27 卷第 7 期 Int J Lab Med ,July 2006 ,Vol. 27 ,No. 7
参 考 文 献
1 刘敏 ,冯柏庄 ,俞纯山. 系统性红斑狼疮患者自身抗体检测方法的 应用与评价. 陕西医学检验 ,1997 ,12 (1) :324.
2 林宝顺 ,徐元斌 ,陈之航 ,等. ANA 、抗 ds2DNA 、抗 ENA 谱联合检测 在诊断 SL E 病人中的应用. 陕西医学检验 ,1999 ,14 (4) :627.
5. 本组 6 种自身免疫性疾病 ,因发病原因至今未明 ,临床 表现变化多端 ,不易被早期诊断 。而免疫印迹法检测 ENA 自
身抗体操作简便 、省时 、特异性好 、用血量少 、无需特殊设备 、重 复性好 (经多次反复冻融的标本检测结果完全一致) ,可同时完 成对 10 种自身抗体的识别和过筛 ,对提高自身免疫性疾病的 诊断水平有很大的帮助 。
资料与方法
1. 材料 : (1) 病例组 :来自门诊与住院 、经临床确诊的 140 例自身免疫病 (均符合国内或国际各类有关风湿病诊断标准) 患者 ,其中女 100 例 ,男 40 例 ,年龄 16～70 岁 。包括系统性红 斑狼疮 ( systemic lup us eryt hemato sus , SL E) 患者 45 例 ; 混合 型结缔组织病 (mixed co nnective tissue disease ,MCTD) 患者 20 例 ;干燥综合征 (Sfogren’s syndro me , SS) 患者 10 例 ;弥漫性硬 皮病 (penet rated sclero sis ,PSS) 患者 6 例 ;多发性肌炎/ 皮肌炎 (polymyo sitis/ dermatomyo sitis , PM/ DM) 患 者 19 例 ; 类 风 湿 关节炎 (rheumatoid art hritis , RA) 患者 40 例 。(2) 对照组 : 40 例健康体检者 ,其中女 28 例 ,男 12 例 ,年龄 14～68 岁 。
ENA多肽抗体谱试剂检测自身抗体
ENA多肽抗体谱试剂检测自身抗体
仇宁;张津平;等
【期刊名称】《岭南皮肤性病科杂志》
【年(卷),期】1998(005)002
【摘要】ENA多肽抗体谱所包括的七种自身抗体(Sm,RNP,SSA,SSB,Rib,Scl-70和Jo-1抗体)存在于不同的自身免疫疾病中。
有的抗体仅见于某一疾病,有的抗体虽可见于多种疾病,但在不同疾病中的阳性率有明显差异。
识别可提取核抗原(ENA)是近年来抗核抗体(ANA)研究的一项重大进展。
我们采用ENA多肽抗体谱试剂盒检测了不同自身免疫病患者血清中七种自身抗体,结果报告如下。
【总页数】2页(P8-9)
【作者】仇宁;张津平;等
【作者单位】中国医学科学院皮肤研究所210042;中国医学科学院皮肤研究所210042
【正文语种】中文
【中图分类】R446.62
【相关文献】
1.2种ENA多肽抗体谱检测方法的比较 [J], 梁新妹
2.4种检测试剂对350例临床标本ENA多肽抗体谱检测结果分析 [J], 刘春;马云;王彬
3.ENA多肽抗体谱检测结合抗ds-DNA及补体C3测定在SLE诊断上的应用 [J], 吕春兰;都青;杨荣生;曹宪华
4.ENA多肽抗体谱检测在自身免疫性疾病筛查中的应用 [J], 刘祥平;陈建萍;赵丹
5.SLE患者ENA自身抗体谱检测结果分析 [J], 赵亚军
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫印迹法检测可提取性核抗原多肽抗体谱的临床应用
免疫印迹法检测可提取性核抗原多肽抗体谱的临床应用刘靳波;梁军;陈红英;温向琼【期刊名称】《中华医学写作杂志》【年(卷),期】2004(011)015【摘要】目的：探讨ENA多肽抗体谱在自身免疫性疾病临床诊疗中的作用。
方法：应用免疫印迹技术(IBT)对临床常见的6种自身免疫性痰病132例进行了抗ENA抗体检查，同时观察了间接免疫荧光法检查抗核抗体(IFANA)的结果。
结果：132例送检标本抗ENA多肽抗体谱总阳性率64．4％，且检出一种或一种以上抗ENA 抗体，系统性红斑狼疮(SLE)35例(77．8％)，多发性皮肌炎／皮肌炎(PM／DM)8例(42．1％)。
系统性硬皮病(PSS)5例(50％)，干燥综合征(SS)14例(87．5％)，混合性结缔组织病(MCTD)19例(100％)，类风湿性关节炎(RA)5例(20．8％)。
IFANA总阳性率71％。
结论：ENA多肽抗体谱检测对多种自身免疫性疾病的诊断和鉴别诊断有重要意义，ANA检测仍可作为自身免疫性疾病筛查的常规指标。
【总页数】3页(P1272-1274)【作者】刘靳波;梁军;陈红英;温向琼【作者单位】泸州医学院附属医院儿科;泸州医学院附属医院检验科，泸州市646000;泸州医学院附属医院肾病内科，泸州市646000【正文语种】中文【中图分类】R446【相关文献】1.自动蛋白印迹仪在检测抗可提取核抗原多肽抗体谱中的应用 [J], 钟丽民;方忠俊;周丽萍;邹广珠2.免疫印迹法检测可提取核抗原多肽抗体谱的临床应用分析 [J], 陆瑜;叶萍;沈霞;陈顺乐3.免疫印迹法检测可提取核抗原多肽抗体的评价 [J], 朱钰钰;甘小丹4.149例系统性红斑狼疮患者核抗原多肽抗体谱的检测 [J], 李月文;金淑仙5.免疫印迹法检测系统性红斑狼疮患者血清中ENA多肽抗体谱的探讨 [J], 游正芸;洪华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫印迹法检测系统性红斑狼疮患者血清中ENA多肽抗体谱的探讨
免疫印迹法检测系统性红斑狼疮患者血清中ENA多肽抗体谱
的探讨
游正芸;洪华
【期刊名称】《陕西医学检验》
【年(卷),期】1997(012)002
【摘要】应用免疫印迹技术（IBT），检测了33例系统性红斑狼疮（SLE）患者血清中ENA多肽抗体谱．该病符合ARA的诊断标准[1]．同时检测了ANA和部分ds-DNA进行比较，结果它们的阳性率分别是；抗-sm为48．5％，抗U1-RNP为33．3％，抗-Rib为15．2％．抗-SSA为12.1％，抗-SSB为6．1％，抗-Scl-70为3．05％，抗-Jo-1为0％．ANA为63．6％，ds－DNA为25％．以上表明SLE患者血清中存在多种自身抗体，尤以抗-sm，抗U1-RNP，抗-Rib，ds－DNA为主．
【总页数】2页(P42-43)
【作者】游正芸;洪华
【作者单位】四川省人民医院检验科;四川省人民医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】R593.241
【相关文献】
1.免疫印迹法检测在自身免疫性疾病ENA多肽抗体谱及临床意义 [J], 刘军锋;贾克刚;刘运德
2.系统性红斑狼疮患者血清IL-6水平与抗 ENA 多肽抗体谱的关系 [J], 杨春兰;沈荣春;徐云;鞠少卿;王惠民
3.免疫印迹法检测ENA多肽抗体谱 [J], 石冬敏
4.系统性红斑狼疮患者抗ENA多肽抗体谱检测结果分析 [J], 李义德;施新忠;张玉蓉
5.系统性红斑狼疮(SLE)患者血清sFas/sFasL水平与抗ENA多肽抗体谱的关系 [J], 徐忠玉;张阳根;李燕斌
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
免疫印迹法检测结缔组织病患者血清ENA抗体的研究
免疫印迹法检测结缔组织病患者血清ENA抗体的研究
刘秀红;胡维
【期刊名称】《全科医学杂志》
【年(卷),期】2000(005)001
【摘要】目的检测系统性红斑八疮（ＳＬＥ）口才和其它结缔组织病患者血清ＩｇＧ类ＥＮＡ抗体。
方法用小牛胸腺提取核抗原（ＥＮＡ），用免疫印迹法（ＷＢ）与对流免疫电泳（ＣＩＥ）检测结缔组织病口才血清ＥＮＡ抗体。
结果Ｓｍ、ＲＮＰ、ＳＳＢ抗体检出率分别为６３．２％、４４．７％、３８．６％、４４．７％，另发现９０ｋｄ，８５ｋｄ，６６ｋｄ等抗体。
结论免疫印迹法可在分子水平检测抗体，特异性高，并可用于抗原表位和发病
【总页数】2页(P20-21)
【作者】刘秀红;胡维
【作者单位】首都医科大学附属北京十字朝阳医院;首都医科大学附属北京十字朝
阳医院
【正文语种】中文
【中图分类】R593.204
【相关文献】
1.结缔组织病患者的血清抗ENA抗体检测 [J], 周珏伟;钱伯源
2.蛋白芯片-酶联免疫吸附法检测148例弥漫性结缔组织病患者抗ENA抗体 [J], 张宁;李爽;李典;崔华东;付文轶
3.免疫印迹法检测系统性红斑狼疮患者血清中ENA多肽抗体谱的探讨 [J], 游正芸;洪华
4.结缔组织病患者抗ENA抗体的检测及其临床意义 [J], 柳永和;周韵九
5.免疫印迹法检测SLE患者血清ENA抗体与临床关系的研究 [J], 汪新义;程焕明;张发义;杜文莉
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第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点： 2、高灵敏度 免疫转印技术综合了免疫反应敏感 性高的特点，可检出最小蛋白质 1pg(10-12g)
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点： 3、高特异性 免疫转印技术综合了免疫反应特异 性，根据抗原抗体的特异反应，同一条 蛋白印迹上可做多项分析。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理： 免疫转印技术实际上是一项将凝胶电 泳技术、固定化技术及分子亲和技术三 者融为一体的免疫转印技术。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点：
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点： 1、高分辨率 免疫转印技术综合了电泳技术分辨 率强的特点。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 三、 免疫印迹 免疫印迹（Immunoblot IBT） 又称免疫转印技术。是一项新的生 化技术。它对研究工作的影响与内切酶 的发现和 PCR 的基因扩增技术是等量 齐观的。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理： 将凝胶电泳与固相免疫结合起来， 其主要的操作过程分三个步骤。 1、分离 盐水可提取抗原（ENA）中多 肽按分子量的大小，先用 SDS— 聚丙烯酰胺凝胶分离
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 二、多肽抗体谱 ENA抗体是指能与核中盐水可提取 抗原发生特异性结合抗体，既是抗核抗 体的一部分。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 ENA多肽抗体谱 是由许多小分子量的 RNA 和多肽 组成。 不同的uRNA各有其相应的抗体。 目前发现的相应的抗体已有十余种，其 中，国际上共认的对风湿有特异的诊断 价值的有七种。故将这七种抗体叫做多 肽抗体谱
第二节 检测对象 ENA多肽抗体谱 早期诊断SLE和多种风湿病， 有较高的特异性和敏感性， 有助于结缔组织病的诊断 和鉴别诊断
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 一、风湿病的定义 风湿病学是一门以内科学和临床免疫 学为基础的新兴学科 其研究的对象是风湿性疾病，包括所 有不同原因，以及不明原因引起的骨、关 节、肌疾病。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 第三节 临床意义
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测
临床意义
一．抗Sm抗体 1.Sm为病人Smith（发现抗体的第一位病人） 的名字缩写 2.抗Sm抗体是酸性糖蛋白 3.是目前公认的系统性红斑狼疮（SLE） 标记抗体，有利于SLE的早期诊断。、 注意：关键是13.5KD 一般是13.5KD和 29/28KD同时出现，若单独出现 29/28 KD、无13.5KD不能判断 抗Sm抗体阳性 4.阳性率30-50%，仅见于本病。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 ⑸、心包炎或胸膜炎。 ⑹、癫痫或精神、神经症状。 ⑺、习惯性流产。 ⑻、雷诺氏现象。 ⑼、肿胀手或手指、足趾皮肤变硬。
第三章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 ⑽、肌肉有压痛或抬臂、下蹲起立时困 难。 ⑾、下肢出现网状青紫。 ⑿、肺间质病变或肺动脉高压。 ⒀、经常口干、眼干、或反复腮腺炎。 ⒁、易口腔溃疡或大量脱发。
第六章 ENA多肽抗体谱 免疫印迹检测
黑龙江中医药大学 临床医学院
概述
一、 何为ENA? ENA(Extractable nuclear antige) 盐水可提取性核抗原的总称。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 核抗原： 组蛋白 ： 不溶于水 DNA ； 不溶于水 ENA： 可溶于生理盐水 是非组蛋白核蛋白，属酸性核蛋白抗原， 是许多小分子量的RNA和多肽组成。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测
广义：涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症 的疾病 感炎性： 莱姆（Lyme）氏病 代谢性： 痛风 内分泌性： 甲状旁腺功能亢进 遗传性； 粘液多糖病 退化性： 骨关节炎 生态环境性：大骨节病
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测
狭义：主要指自身免疫性结缔组织疾病 类风湿性疾病骨关节炎 (RA) 系统红斑狼疮 (SLE) 干燥综合症 (SS) 硬皮病 (PSS) 皮肌炎和多发行肌炎 (DM/PM) 混合性结缔组织病 (MCTD)
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理： 2 、转移 将分离的组份从凝胶上转移到固相 基质上，如硝酸纤维膜
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫印迹的基本原理： 3 、测定 对转移后的组份进行免疫法测定， 显示出蛋白带。 既通过抗体的反应，用酶联免疫吸 附法观察与抗体反应的多肽（呈显色带） 的数量与分子量
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 ⒂、吞咽困难，食道蠕动减弱。 ⒃、青年女性有偏头痛。 ⒄、荧光抗核抗体阳性。 ⒅、关节疼痛。 ⒆、长期反复性原因不明低热。
第三章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测
三 、送检标本 血清
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测
四 报告方式 反应抗体 分子量 1. 抗Sm抗体+/29/28KD、13.5KD 2. 抗u1RNP抗体+/73KD、32KD、17.5KD 3.抗Scl-70抗体+/86KD、70KD 4.抗SSA抗体+/52KD 5.抗SSB抗体+/48/47KD、45KD 6.抗JO-1抗体+/55KD 7.抗Rib抗体+/38KD\16KD\15KD + 表示有该种自身抗体 - 表示无该种自身抗体
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点： 4、高度稳定性 蛋白印迹膜便于保存，可存放6-12 个月。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 免疫转印技术优点： 5、设备简单，操作容易 免疫转印技术在临床检验中必有远 大前程，并可能代替许多现有的传统检 验方法。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测 二、 适应症 1、临床上怀疑有风湿性疾病（结缔 组织病或自身免疫性疾病），需进一步 确诊者。 2、 已诊断为某种风湿性疾病，但需 明确是否合并其它风湿性疾病，以指导 治疗者。
第六章 ENA多肽抗体谱免疫印迹检测
二、 适应症 3 、诊断未明，但有下列症状，需排除或 确诊何种风湿性疾病者： ⑴、原因不明发热伴有关节或肌肉疼痛。 ⑵、淋巴结肿大或白血球减少或血小板减 少或溶血性贫血。 ⑶、皮疹或不典型面部红斑，光敏感。 ⑷、蛋白尿。