沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程沉降菌检测操作规程一、实验材料和仪器设备准备1. 培养基：选择适合于沉降菌生长的培养基，如营养琼脂、脑心提取物琼脂等。
2. 试管：清洁且干燥的试管，用于制备培养基和盖儿。
3. 平板培养皿：密封性好、无明显污损的平板培养皿。
4. 无菌纱布：用于对培养皿进行覆膜。
5. 显微镜：高倍显微镜，用于观察沉降菌。
6. 其他常规的无菌操作用具和试剂。
二、实验操作步骤1. 准备培养基：根据所选的培养基配方，按照要求将培养基配制成液体状态，并进行无菌过滤。
将液体培养基倒入试管中，每个试管约倒满的1/3，悬挂液体培养基放置在试管架上，待培养基凝固后，封闭试管盖儿。
2. 取样：将待检测的样品进行无菌采样，如空气、水、土壤、食品等，确保取样时避免污染和杂菌的进入。
3. 塑料膜覆盖：将待检测的培养基倒入平板培养皿中，约倒满1/2，然后用无菌纱布覆盖培养皿口，并用橡皮筋固定好。
确保培养基表面整齐平坦，无明显凸起或凹陷。
4. 样品接种：将取样时采集的样品（空气、水、土壤等）用滴管或铁丝等工具，均匀地接种到培养基的表面上，每个培养皿大约接种2～3滴，然后迅速盖上试管上的盖子。
5. 培养条件：将培养皿置于恒温箱中，一般温度设定为30-35°C，培养时间为24小时至72小时不等，具体视沉降菌生长速度而定。
三、结果判读1. 观察培养皿：取出培养皿，观察上面是否出现菌落。
正常情况下，如果检测的样品中存在沉降菌，培养皿上会出现可见的菌落。
2. 菌落形态观察：使用高倍显微镜观察菌落的形态特征，确定是否为沉降菌。
3. 菌种的鉴定：对形态特征与已知的沉降菌标准比对，进行菌种鉴定。
四、注意事项1. 所有操作必须在无菌条件下进行，避免外界杂菌的污染。
2. 严格控制培养基、试管和平板培养皿等材料的无菌。
3. 样品采集要避免手部接触，使用无菌工具进行采样。
4. 培养条件要保持稳定，避免温度、湿度等因素对实验结果的影响。
5. 观察菌落时要细心，准确判断是否为沉降菌。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程1. 引言沉降菌是指在液体中沉淀并附着在容器底部的微生物。
在许多行业中，沉降菌的检测是非常重要的，例如制药、食品加工、饮水安全等领域。
本文档旨在介绍沉降菌检测的操作规程，以确保检测结果准确可靠。
2. 检测设备和试剂准备在进行沉降菌检测之前，需要准备以下设备和试剂：•沉降菌检测容器：一般选择具有透明底部和标有刻度的容器，容量不小于100 mL。
•色谱纸：用于制作沉降菌检测培养基。
•高温灭菌器：用于灭菌沉降菌检测容器和试剂。
•干燥烘箱：用于干燥沉降菌检测容器和试剂。
•取样器：用于抽取待检测样品。
•生物安全柜：用于操作中的生物安全。
试剂准备：•培养基：可根据需要选择适当的培养基，例如Luria-Bertani（LB）培养基。
•蒸馏水：用于制备培养基和洗涤操作。
•山梨醇盐溶液：用于沉降菌悬浮液的稀释。
3. 检测操作步骤步骤1：沉降菌检测容器准备1.将需要检测的沉降菌检测容器放入高温灭菌器中，设定适当的温度和时间进行灭菌。
2.灭菌后，将沉降菌检测容器取出，放入干燥烘箱中进行干燥，确保容器完全干燥。
步骤2：制备培养基1.准备适量的色谱纸，切成小块。
2.在高温灭菌器中加热蒸馏水至沸腾，将色谱纸块放入烧杯中，倒入足够的蒸馏水。
3.候色谱纸块充分吸水后，取出备用。
步骤3：取样1.在生物安全柜内，使用取样器抽取待检测样品，确保样品干净无杂质。
2.将样品转移到沉降菌检测容器中，注意不要沾到容器外表面。
步骤4：制备沉降菌悬浮液1.取一定量的山梨醇盐溶液，进行稀释，制备合适的浓度。
2.将制备好的山梨醇盐溶液加入沉降菌检测容器中，使样品充分悬浮。
步骤5：培养和观察1.将沉降菌检测容器放入培养箱中，设定适当的温度和时间进行培养。
2.观察培养后的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
4. 结果记录和分析根据观察到的沉降菌情况，记录菌落数量和特征。
根据结果进行分析和判断，判断样品是否符合标准要求。
5. 安全注意事项•操作过程中要戴好实验手套和口罩，避免直接接触待检测样品。
沉降菌检测操作规程
1.目的：建立沉降菌监测标准操作程序，以确保洁净室（区）洁净度满足生产/检验需要。
2.范围:适用于洁净区沉降菌指标监测。
3. 职责:洁净区沉降菌监测人员对本规程实施负责，质量部负责人对本规程的有效执行承担监督检查责任。
4. 内容4.1 检测依据:4.1.1 GB/T 16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》4.1.2 YY0033-2000《无菌医疗器具生产管理规范》4.2 仪器设备：培养皿、培养基、恒温恒湿培养箱、高压蒸汽灭菌器4.2.1 培养皿：一般采用Ф90mm×15mm规格的培养皿；121℃高压蒸汽灭菌30min 后使用。
4.2.2 培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基，其配置方法见《培养基配制操作规程》。
4.2.3 恒温恒湿培养箱：按《恒温恒湿培养箱操作及维护保养操作规程》进行操作。
4.2.4 高压蒸汽灭菌器：按《高压灭菌器操作及维护保养操作规程》进行操作。
4.3 检测周期：日常环境监测应每周一次，如长时间未生产，恢复生产前需检测沉降菌。
4.4采样点：采样点的布置力求均应，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最小采样点数目，在满足最少测定数的同时，还宜满足最少培养皿数。
4.4.2 最少培养皿数：在满足最少采样点数目的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表。
4.4.3采样点的位置4.4.3.1 洁净室（区）采样点的布置力求均应，避免采样点在某局部区域过于稀疏。
可参考下图。
平面采样点布置图4.4.3.2 100级单向流区域，洁净工作台或局部空气净化设施的采样点宜布置在正对气流方向的工作面上，气流形式参考下图。
水平单向流气流形式垂直单向流气流形式4.4.3.3 工作区采样点的位置离地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。
并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.4.4 采样次数：每个采样点一般采样一次。
洁净区(沉降菌)检测标准操作规程
1 目的建立洁净度（沉降菌）的检验标准操作规程,为沉降菌检查人员提供正确的标准操作方法。
2 范围适用于本公司洁净度（沉降菌）检查的全过程。
3 责任QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，QC对本规程的实施负责。
4 程序4。
1 概述:本标准对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能.4。
2 测试方法4.2。
1 方法提要：本标准按国家技术监督局发布的《医药工业洁净室(区）沉降菌的测试方法》,采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数,并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
4.2。
2 仪器仪器包括：培养皿、培养基、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。
4.2。
2。
1 培养皿一般采用 90mm×15mm规格的培养皿。
4.2。
2。
2 培养基大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基(SDA）或用户认可并经验证了的培养基.4.3 测试前的规则：4。
3。
1 测试状态;4。
3.1。
1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求,静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
洁净室(区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时,温度在18℃～26℃，相对湿度在45％～65％之间为宜）,同时应满足测试仪器的使用范围。
4.3。
1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室(区）已经过消毒。
4。
3。
1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
4。
3。
1。
4 静态测试时,培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。
4。
3.2 测试人员：4.3。
2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服.4。
3。
2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于2人.4。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程受控状态文件编号 ZHSS03—09—01版环境监测沉降菌检测操作规程(试行本)编制:审核:批准:发布日期: 实施日期:北京京中宏塞思生物技术有限公司北京中宏赛思生物技术有限公司受控状态沉降菌检测操作规程文件编号 ZHSS03—09—01版1. 目的规范检测人员对有洁净要求的洁净区域的沉降菌指标进行检测的操作方法的行为。
2. 范围适用于本工厂内洁净生产车间、微生物实验室和百级工作台等洁净区域。
3. 职责质量控制负责人、微生物检验员对本标准的实施负责。
4. 检测方法4.1 检测依据引用标准《医药工业洁净厂房设计规范》标准号 GB50457—2008执行标准《医药工业洁净室(区)沉降菌的检测方法》标准号 GB/T1629—20104.2 仪器设备立式压力蒸汽灭菌器、恒温培养箱、百级工作台4.3 玻璃仪器Φ90mm培养皿、三角烧杯4.3 检测药品大豆酪蛋白琼脂、纯化水4.4 培养基制备4.4.1 将大豆酪蛋白琼脂按照比例加水配置，并加热溶解。
4.4.2 将溶解后的培养基置于立式蒸汽压力灭菌器中，121?灭菌20min。
4.4.3 将灭菌合格的培养基，冷却至60?左右，移入百级工作台，以每皿约20ml 的量分装在平皿中，待凝固备用。
4.5 采样4.5.1 测试前培养皿表面严格消毒。
4.5.2 将制备好的培养皿按照采样布点图的位置放好，然后由里到外逐个打开，使培养基表面完全暴露在空气中。
4.5.3 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上;动态监测时，培养皿暴露时间不大于4h。
4.5.4 全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中进行培养。
4.6 培养:采用大豆酪蛋白琼脂培养基采样结束后，在30?~35?培养箱中培养不少于2d。
4.7 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否有污染。
每批做3个对照培养。
4.8 菌落计数4.8.1 用肉眼对培养皿上所有的菌落计数，然后用5~10倍放大镜检查，是否有遗漏。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程
《沉降菌检测操作规程》
一、目的
为了保障食品安全，防止沉降菌污染食品，特制定本操作规程。
二、适用范围
本规程适用于对食品中沉降菌的检测工作。
三、检测仪器和试剂
1. 采用适用于沉降菌检测的培养基和培养皿。
2. 采用适用于沉降菌检测的显微镜和显微镜镜片。
四、检测操作步骤
1. 取一定量的食品样品，按照相应比例加入适量的生理盐水中，并进行均匀搅拌。
2. 取适量预处理后的样品液，分别加入培养基中的培养皿，并进行培养。
3. 观察培养皿，记录沉降菌的形态特征和数量。
4. 如果需要进一步分析，使用显微镜观察沉降菌的细胞形态和结构。
五、结果判定
根据检测结果，判断食品样品是否含有沉降菌，并确定其数量和种类。
六、记录和报告
1. 对检测操作进行详细记录，包括样品处理、培养条件、观察结果等。
2. 根据检测结果，制作检测报告，并按照规定提交相关部门。
七、注意事项
1. 操作人员应按照操作规程进行操作，严格遵守操作规范和安全操作规定。
2. 显微镜等实验仪器要定期检查和维护，以确保检测的准确性和可靠性。
3. 培养基的制备和保存要符合相关要求，避免影响检测结果。
通过严格按照《沉降菌检测操作规程》进行操作，可以保障沉降菌检测的准确性和可靠性，为保障食品安全提供了重要的技术支持。
静脉用药调配中心沉降菌监测项目操作规程
静脉用药调配中心沉降菌监测项目操作规程Ⅰ目的规范沉降菌检测，保障检测结果正确性及有效性。
Ⅱ范围适用于静脉用药调配中心沉降菌监测操作。
Ⅲ规程一、十万级洁净区清洁消毒后进行沉降菌测试。
二、每次测试前按照相关标准操作规程提前30min打开净化空调系统，使温度、湿度及压差达到规定要求，并进行记录。
三、如进行生物安全柜或水平层流洁净台沉降菌检测应提前30min打开紫外线灯、风机。
四、由专人从医学检验科微生物室取回制备好的培养皿。
五、制备好的培养皿由药品物品传递窗送至洁净区内，测试人员按照更衣标准操作规程穿戴进入洁净区。
六、按事先制定的采样布点图放置，逐个放置，逐个打开培养皿上盖，使培养基暴露在环境空气中。
打开时，用一手的大拇指和食指轻轻移开上盖，人体任何部位应尽量远离培养皿上部，防止产生假阳性。
七、检测生物安全柜或水平层流洁净台时，按最少培养皿数要求，把14个培养皿均匀放在工作台上，然后从里往外逐个打开，使其培养基暴露在空气中。
八、培养基在空气中暴露30分钟后，从外往里逐个盖好上盖并反扣培养基。
收集完毕，从成品输液传递窗出口送出。
测试人员按照更衣标准操作要求离开洁净区。
九、送医学检验科微生物室。
十、待医学检验科出具沉降菌检测报告，查看结果是否符合规定要求，如符合存档。
如不符合重新进行消毒后，再进行两次沉降菌检测，结果必须合格。
如不合格，对问题进行排除，如更换高效过滤器等。
十一、注意事项（一）采样前培养皿表面必须严格消毒；（二）静态测试时，室内测试人员不得多于2人；（三）采样前仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染应剔除；（四）采样点尽量离地面0.8-1.5米，尽量避开尘粒较集中的回风口；（五）沉降菌检测定义：通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净区环境内的活生物数，以此来评定洁净区的洁净度。
（六）每月需要进行沉降菌检测的环境：十万级洁净区、万级洁净区、百级生物安全柜、百级水平层流洁净台。
沉降菌检测标准操作规程ok
沉降菌检测标准操作规程o kThe document was finally revised on 2021沉降菌检验标准操作规程1.目的本文件规定了洁净室（区）中沉降菌检验的操作方法，保证检验人员操作规范化、标准化，确保洁净室洁净度。
2.范围标准规定了医药工业洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室（区），无菌室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌测定。
本公司规定对万级净化实验室沉降菌检测项目进行一星期/次的检验。
3．职责QC操作人员、QC管理人员严格按照此规程执行；相关使用人员做好洁净室清洁维护工作。
4.内容. 定义洁净室（区）对尘埃及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使用均具有减少对区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
洁净工作台一种工作台或者与之类似的一个封闭围档工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。
洁净度洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
菌落细菌培养后，由一个或几个细菌系列而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
沉降菌用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见菌落数。
静态测试洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。
动态测试洁净室（区）已处于正常状态下进行的测试。
. 测试方法方法概述采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
测试仪器和设备高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、培养皿。
培养基营养琼脂培养基：培养基的准备及灭菌依照培养基配制及灵敏度测试标准操作规程准备。
沉降菌检测操作规程
●1、目的规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。
●2、适用范围适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。
●3、引用文件⏹化妆品卫生规范-2007⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法●4、定义⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖的可见菌落数。
⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示●5、仪器和设备⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm⏹ 5.2 培养基。
⏹ 5.3 恒温培养箱。
⏹ 5.4 高压灭菌器。
⏹ 5.5 放大镜●6、培养基和试剂⏹ 6.1 生理盐水：成份﹕氯化钠 8.5g蒸馏水加至 1000ml制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。
⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基6.2.1 成分：蛋白胨20g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。
●7、操作步骤⏹7.1 取样：7.1.1 取样点的设置：A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处可增加取样点；C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；D) 布置采样点时，应避免回风口；7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员不得多于2人；7.1.3 取样A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；●8、菌落计数方法：⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；●9、结果评定：⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判定符合；。
沉降菌监测规程
沉降菌监测规程一、目的建立沉降菌监测方法，规范沉降菌监测操作。
二、范围适用于西厂区车间洁净室、无菌检查室、阳性室、洗衣房、取样间、微生物室的沉降菌监测。
三、职责检验中心人员负责车间洁净室、洗衣房、取样间的采样工作；负责各部分所需的材料准备、培养、菌落计数，以及无菌检查室、阳性室、微生物室监测的采样内容的执行。
质量中心负责人负责本规程执行情况的监督检查。
四、内容：1.仪器与用具1.1 培养皿（φ90mm）1.2 恒温培养箱1.3 高压蒸汽灭菌锅2.监测程序2.1 将已准备好的合格的空白培养皿放入物料缓冲间。
2.2 检测人员按人员进入洁净区的要求穿好洁净服，戴好口罩进入洁净室。
2.3 按此《沉降菌监测规程（西厂区）》对环境进行监测。
3.测试规则3.1测试条件3.1.1温度和相对湿度沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温度和相对湿度应与生产工艺等要求相适应（温度控制在18～26℃，相对湿度控制在45%～65%之间）。
3.1.2压差沉降菌测试前，洁净区与非洁净区之间、不同级别洁净室（区）之间的压差应当不低于10帕斯卡，空气洁净度级别要求高的洁净室（区）对相邻的空气洁净级别低的洁净室（区）一般要求相对正压。
3.1.3换气次数、空气流速3.2测试状态静态测试：静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
动态测试：洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。
测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。
（在正常的生产操作监测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。
）3.3测试时间3.3.1对单向流，如C级背景下的局部A级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。
3.3.2 对非单向流，如C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
3.4测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
沉降菌检测标准操作规程ok
沉降菌检测标准操作规程o kThe document was finally revised on 2021沉降菌检验标准操作规程1.目的本文件规定了洁净室（区）中沉降菌检验的操作方法，保证检验人员操作规范化、标准化，确保洁净室洁净度。
2.范围标准规定了医药工业洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室（区），无菌室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌测定。
本公司规定对万级净化实验室沉降菌检测项目进行一星期/次的检验。
3．职责QC操作人员、QC管理人员严格按照此规程执行；相关使用人员做好洁净室清洁维护工作。
4.内容. 定义洁净室（区）对尘埃及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使用均具有减少对区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
洁净工作台一种工作台或者与之类似的一个封闭围档工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。
洁净度洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
菌落细菌培养后，由一个或几个细菌系列而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
沉降菌用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见菌落数。
静态测试洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。
动态测试洁净室（区）已处于正常状态下进行的测试。
. 测试方法方法概述采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
测试仪器和设备高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、培养皿。
培养基营养琼脂培养基：培养基的准备及灭菌依照培养基配制及灵敏度测试标准操作规程准备。
无菌室沉降菌测试标准操作规程
无菌室沉降菌测试标准操作规程一、目的：建立无菌室中沉降菌的测试标准操作规程，保证微生物检验在规定洁净级别内进行。
二、范围：无菌室的沉降菌的监测。
三、依据：国家标准GB/T 16294-1996。
四、职责：微生物检验人员对本制度的实施负责。
五、内容1、菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
2、测试方法：沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经48小时以上培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。
3、所用的仪器和设备1）高压灭菌锅锅2）恒温培养箱：必须定期对培养箱进行检定。
3）培养皿：一般采用中90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。
使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟。
4、培养基：普通营养琼脂培养基。
将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15m1。
待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养数小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。
5、测试步骤1）采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定的取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上盖后倒置。
2）培养，时间不少于48小时。
每批培养基应有对照试验，检查培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。
3）菌落计数：用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。
6、注意事项1）测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。
2）采取一切措施防止人为对样本的污染。
3）对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4）由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
沉降菌检测规程
1目的通过对环境进行沉降菌检测，作为确认环境是否符合规定要求及改善环境的依据。
2范围沉降菌检测3职责检验人员按本规程操作，实验主管监督本规程的实施。
4程序4.1洁净（区）clean room(area)对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。
其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。
4.2洁净工作台cleaning work station一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区。
其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流置、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。
4.3洁净度cleanliness洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。
4.4菌落colony forming units细菌培养后，有一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
4.5沉降菌settling microbe用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。
4.6单向流unidirectional air flow(曾称为层流laminar flow)沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。
4.7非单向流nonumidirectional air flow(曾称为乱流turbulent flow)具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。
4.8静态测试at-rest test洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。
4.9动态测试operational test洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。
4.10洁净室环境要求、测试项目和频次。
见表1表1洁净室环境要求、测试项目和频次4.11检测流程4.11.1检测条件4.11.2检测仪器、设备、培养基恒温培养箱、蒸汽高压消毒锅、电热恒温干燥箱、百级超净工作台、Φ90mm×15mm培养皿、胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）。
沉降菌测试方法..
沉降菌测试方法1、把ф90m m×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热至180℃后，干烤2小时。
2、取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
3、待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。
制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时，一般在100级层流罩中放置3个培养皿，在100000级，10000级按面积大小一般放2个培养皿。
打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5小时，再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃—1.5m左右。
5、将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏，若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，分辨时仍以2个或2个以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前，被测洁净室已消毒。
被测洁净室温湿度须达到规定要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。
7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始，对非单向流，100000级以上净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
8、平均菌落数计算：M 1+M 2+M 3平均菌落数=.........21nMn M M ++ n —培养皿总数M 1—1号培养皿菌落数M 2—2号培养皿菌落数M n —n 号培养皿菌落数用平均菌落数判断洁净空气中微生物。
洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准，（100级≤1个；10000级≤3个；100000级≤10个）。
若某洁净室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
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●1、目的
规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。
●2、适用范围
适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。
●3、引用文件
⏹化妆品卫生规范-2007
⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法
●4、定义
⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件
下繁殖的可见菌落数。
⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示
●5、仪器和设备
⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm
⏹ 5.2 培养基。
⏹ 5.3 恒温培养箱。
⏹ 5.4 高压灭菌器。
⏹ 5.5 放大镜
●6、培养基和试剂
⏹ 6.1 生理盐水：
成份﹕氯化钠 8.5g
蒸馏水加至 1000ml
制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。
⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基
6.2.1 成分：蛋白胨20g
牛肉膏3g
氯化钠5g
琼脂15g
卵磷脂1g
吐温80 7g
蒸馏水1000mL
6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到
其余的蒸馏水中，溶解。
加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加
入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。
●7、操作步骤
⏹7.1 取样：
7.1.1 取样点的设置：
A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；
B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处
可增加取样点；
C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；
D) 布置采样点时，应避免回风口；
7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：
A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；
B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员
不得多于2人；
7.1.3 取样
A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；
B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时
⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；
●8、菌落计数方法：
⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；
⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；
●9、结果评定：
⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；
⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判
定符合；。
●10、日常监控
当出现以下情况时，应额外增加检测频次：
⏹长时间停工区域，预期开始使用时；
⏹净化区域内发现有污染存在时；
⏹在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修时；
⏹当洁净室（区）结构或区域分布有重大变动时；
⏹当生产设备有重大维修或增加设备时；
⏹日常操作记录反映出倾向性数据时。
●附表。