沉降菌检测操作规程

●1、目的

规范洁净区和洁净室沉降菌测试条件和测试方法。

●2、适用范围

适用于公司洁净区、洁净室或局部空气净化区域（如：洁净工作台）的沉降菌的测试和环境验证。

●3、引用文件

⏹化妆品卫生规范-2007

⏹GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法

●4、定义

⏹ 4.1 沉降菌：用本测试规定的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件

下繁殖的可见菌落数。

⏹ 4.2 沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以（个/皿）表示

●5、仪器和设备

⏹ 5.1 灭菌培养皿90mm *15mm

⏹ 5.2 培养基。

⏹ 5.3 恒温培养箱。

⏹ 5.4 高压灭菌器。

⏹ 5.5 放大镜

●6、培养基和试剂

⏹ 6.1 生理盐水：

成份﹕氯化钠 8.5g

蒸馏水加至 1000ml

制法﹕溶解后﹐分装到加玻璃珠的三角瓶内﹐每瓶90ml﹐121℃（15 1b）2 0 mi n，高压灭菌。

⏹ 6.2 卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基

6.2.1 成分：蛋白胨20g

牛肉膏3g

氯化钠5g

琼脂15g

卵磷脂1g

吐温80 7g

蒸馏水1000mL

6.2.2制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其他成分（除琼脂外）加到

其余的蒸馏水中，溶解。加入已溶解的卵磷脂、• 吐温80，混匀，调pH 值为7.1～7.4，加

入琼脂，103.43kPa（121℃15 lb）20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。

●7、操作步骤

⏹7.1 取样：

7.1.1 取样点的设置：

A) 最少取样点数：灌装间、制造间3个，其他洁净区2 个；

B) 取样点的位置：取样点应均匀分布在待测试区域内，一般离地高度为0.8m左右，关键设备处

可增加取样点；

C）每个取样点一般取样一次，每次一般为2个取样皿；

D) 布置采样点时，应避免回风口；

7.1.2 取样时间：可采用动态取样和静态取样：

A) 动态取样：正常生产，且空气净化系统正常运转30分钟后开始取样；

B）静态取样：员工己撤离生产区域，且空气净化系统正常运转至少20分钟后；静态取样时人员

不得多于2人；

7.1.3 取样

A）将制备好的培养皿逐个放置到采样点，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养皿暴露在空气中；

B）静态测试时，培养皿的暴露时间为30分钟以上；动态测试时，培养皿的暴露时间不得大于4个小时

⏹7.2 置于37±1℃恒温培养箱内培养至少48小时，记录每个平皿的菌落数；

●8、菌落计数方法：

⏹8.1先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5 倍～10 倍的放大镜检查，以防遗漏；

⏹每个测点的沉降菌总数为该测点所有培养皿菌落数的平均数；

●9、结果评定：

⏹9.1 每个测点的菌落数必需低于该洁净区的标准时判定符合要求；

⏹9.2 静态测试时，如某测点的的菌落平均数超过标准，应再重新取样两次，两次都低于标准时才能判

定符合；。

●10、日常监控

当出现以下情况时，应额外增加检测频次：

⏹长时间停工区域，预期开始使用时；

⏹净化区域内发现有污染存在时；

⏹在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修时；

⏹当洁净室（区）结构或区域分布有重大变动时；

⏹当生产设备有重大维修或增加设备时；

⏹日常操作记录反映出倾向性数据时。

●附表