pBMTB-3广宿主载体使用说明
毕赤酵母表达载体及宿主菌介绍
由于甲醇营养型酵母菌体内无天然质粒，所以携带外源基因的重组体必须整合于染色体中才能实现外源基因的表达。
整合表达的优点在于保持外源基因稳定性并可产生多拷贝基因。
典型的毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列，主要的结构包括：5’AOX1启动子片段、多克隆位点(MCS)、转录终止和polyA形成基因序列(TT)、筛选标记(His4或Zeocin)、3’AOX1基因片段，作为一个能在大肠杆菌中繁殖扩增的穿梭质粒，它还有部分pBR322质粒或COLE1序列。
如果是分泌型表达载体，在多克隆位点的前面，外源基因的5’端和启动子的3’端之间插人了分泌作用的信号肽序列。
在这个分泌信号的引导下，外源蛋白在内质网和高尔基体中经修饰和加工后能够由胞内转移至胞外，将成熟的蛋白质分泌到细胞外。
为方便于操作，通常表达载体都是穿梭质粒。
表达载体与酵母染色体有单交换和双交换整合2种方式，单交换整合时，或插入A0X1位点，或插入his位点。
有文献报道，以his4作为整合位点时，染色体突变株与表达盒间存在基因转换，偶而可使Laz表达盒丢失，故AOX1位点更好。
一般认为，单交换转化效率比双交换效率高，且易得到多拷贝整合，其发生机制可能是重复单交换引起的。
携带外源基因的表达载体可通过电穿孔、原生质体生成法或全细胞法转化酵母细胞。
甲醇酵母转化和大肠埃希氏菌转化不同之处是前者较为复杂。
对于大肠埃希氏菌而言，只要把重组表达载体导入细胞体内即可。
因其载体上携带有自身复制原点，可随染色体复制而复制，重组表达载体能够稳定存在。
在甲醇酵母系统中，所有的表达载体均不含酵母复制原点。
这就是说，导入酵母体内的重组表达载体只有和酵母染色体上的同源区发生重组，整合到染色体上，外源基因才能够稳定存在，外源蛋白才能得到稳定表达，这种整合的转化子一旦形成就非常稳定。
如果转化后的重组表达载体未能整合到染色体上，而是以游离的附加体形式存在，这种转化子就不稳定，重组表达载体极易丢失。
pET-39b(+)大肠杆菌表达载体说明
pET-39b(+)编号 载体名称北京华越洋生物VECT5020 pET-‐39b(+)pET39b载体基本信息别名: pET39b, p et 39b质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达表达水平: 高克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 6106 b p5' 测序引物: T75' 测序引物序列: T7: 5'-‐TAATACGACTCACTATAGGG-‐3'载体标签: His (中间和C端), N-‐DsbA, N-‐S, N-‐EK, N-‐Thrombin载体抗性: Kanamycin备注: Encodes D sb t ag f or e xport a nd p eriplasmic f olding o f t arget p roteins. 稳定性: 瞬时表达 Transient组成型: 组成型 Constitutive病毒/非病毒: 非病毒pET39b载体质粒图谱和多克隆位点信息Feature N ame Start EndT7_terminator 120 1T7_Terminal_primer 69 87EK 266 252S15 326 2826xHIS 386 369T7_transl_en_RBS 1056 1040lacO 1101 1074T7_promoter 1119 1101tet (300 -‐ 563) 1155 1418pBRrevBam_primer 1226 1207lacI 1501 2592tet (576 -‐ 851) 2651 2926ROP 3401 3592pGEX_3_primer 3608 3586pBR322_origin 4626 4007KanR2 4732 5547ORF Start EndORF f rame 3 1031 147ORF Start EndORF f rame 3 1032 1760ORF f rame 1 1633 2592ORF f rame 1 4732 5547Enzyme N ame CutXhoI 174NotI 182EagI 182HindIII 189SalI 195SacI 206EcoRI 208BamHI 214NcoI 227KpnI 271BstBI 301SacII 365SpeI 396AflII 418PstI 552AscI 917AgeI 928NdeI 1030XbaI 1068BclI 1874ApaI 2071FspI 2942NruI 4820pET39b载体简介The pET-‐39b(+) vector (Cat. No. 70090-‐3) is designed for expression of DsbA fusion proteins. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by t he p BR322 c onvention, s o t he T7 e xpression r egion i s r eversed o n t he c ircle m ap. T he cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single s tranded s equencing s hould b e p erformed u sing t he T7 t erminator p rimer (Cat. N o. 69337-‐3).pET39b载体序列ORIGIN1 ATCCGGATAT AGTTCCTCCT TTCAGCAAAA AACCCCTCAA GACCCGTTTA GAGGCCCCAA 61 GGGGTTATGC TAGTTATTGC TCAGCGGTGG CAGCAGCCAA CTCAGCTTCC TTTCGGGCTT 121 TGTTTAGCAG CCTAGGTATT AATCAATTAG TGGTGGTGGT GGTGGTGGTG GTGCTCGAGT181 GCGGCCGCAA GCTTGTCGAC GGAGCTCGAA TTCGGATCCG ATATCGCCAT GGTTGAGGAG 241 AAGCCCGGGC TCTTGTCGTC GTCATCGGTA CCCAGATCTG GGCTGTCCAT GTGCTGGCGT 301 TCGAATTTAG CAGCAGCGGT TTCTTTCATA CCAATTGCAG TACTACCGCG TGGCACCAGA 361 CCCGCGGAGT GATGGTGATG GTGATGACCA GAACCACTAG TTGATCCTTT TTTCTCGCTT 421 AAGTATTTCA CTGTATCAGC ATACTGCTGA ACAAAAACAT CCATATTGCT GGTATCCATA 481 CCCTGCGGAT TCAGCTGATA TTTACCGTTA ACAAACATCG CCGGAACGCC ACGCAATTGC 541 ACGTCAGCTG CAGCTTTTTC CTGCTGAGCG ACCAGAGATT TCACCACGAA GCTGTTCCAC 601 GCCGCGTCGT ACTCTTCACC TTTAATACCT GCGTTGATAA ATACATCGCG GATATCAGAA 661 GCAGAACGAA TGGTCTGGGT TTTCTGTACG CCTTCAAACA GCGGAACAGT CACTTTGTCT 721 TCCACGCCCA GCGCCATCGC CACAGCCCAT GCCTGAGTCA GATCTTTGCC CAGGTCACCA 781 CCCATGAAGT TGACGTGGTA TTTAGTCATC TTCACGCCTT CCGGCAGTTT TTTCTTCACA 841 TTATCAGAAA TATGCAGAAC TTCTTCAAAC TGATAGCAGT GCGGGCAGAA GAAAGAGAAA 901 AACTCCAGCA CTTGCGGCGC GCCAGCTACC GGTTTTTCCA GGGTAGTGTA CTGTTTACCA 961 TCTTCATACT GCGCCGCCGA TGCGCTAAAC GCTAAAACTA AACCAGCCAG CGCCAGCCAA 1021 ATCTTTTTCA TATGTATATC TCCTTCTTAA AGTTAAACAA AATTATTTCT AGAGGGGAAT 1081 TGTTATCCGC TCACAATTCC CCTATAGTGA GTCGTATTAA TTTCGCGGGA TCGAGATCGA 1141 TCTCGATCCT CTACGCCGGA CGCATCGTGG CCGGCATCAC CGGCGCCACA GGTGCGGTTG 1201 CTGGCGCCTA TATCGCCGAC ATCACCGATG GGGAAGATCG GGCTCGCCAC TTCGGGCTCA 1261 TGAGCGCTTG TTTCGGCGTG GGTATGGTGG CAGGCCCCGT GGCCGGGGGA CTGTTGGGCG 1321 CCATCTCCTT GCATGCACCA TTCCTTGCGG CGGCGGTGCT CAACGGCCTC AACCTACTAC 1381 TGGGCTGCTT CCTAATGCAG GAGTCGCATA AGGGAGAGCG TCGAGATCCC GGACACCATC 1441 GAATGGCGCA AAACCTTTCG CGGTATGGCA TGATAGCGCC CGGAAGAGAG TCAATTCAGG 1501 GTGGTGAATG TGAAACCAGT AACGTTATAC GATGTCGCAG AGTATGCCGG TGTCTCTTAT 1561 CAGACCGTTT CCCGCGTGGT GAACCAGGCC AGCCACGTTT CTGCGAAAAC GCGGGAAAAA 1621 GTGGAAGCGG CGATGGCGGA GCTGAATTAC ATTCCCAACC GCGTGGCACA ACAACTGGCG 1681 GGCAAACAGT CGTTGCTGAT TGGCGTTGCC ACCTCCAGTC TGGCCCTGCA CGCGCCGTCG 1741 CAAATTGTCG CGGCGATTAA ATCTCGCGCC GATCAACTGG GTGCCAGCGT GGTGGTGTCG 1801 ATGGTAGAAC GAAGCGGCGT CGAAGCCTGT AAAGCGGCGG TGCACAATCT TCTCGCGCAA 1861 CGCGTCAGTG GGCTGATCAT TAACTATCCG CTGGATGACC AGGATGCCAT TGCTGTGGAA 1921 GCTGCCTGCA CTAATGTTCC GGCGTTATTT CTTGATGTCT CTGACCAGAC ACCCATCAAC 1981 AGTATTATTT TCTCCCATGA AGACGGTACG CGACTGGGCG TGGAGCATCT GGTCGCATTG 2041 GGTCACCAGC AAATCGCGCT GTTAGCGGGC CCATTAAGTT CTGTCTCGGC GCGTCTGCGT 2101 CTGGCTGGCT GGCATAAATA TCTCACTCGC AATCAAATTC AGCCGATAGC GGAACGGGAA 2161 GGCGACTGGA GTGCCATGTC CGGTTTTCAA CAAACCATGC AAATGCTGAA TGAGGGCATC 2221 GTTCCCACTG CGATGCTGGT TGCCAACGAT CAGATGGCGC TGGGCGCAAT GCGCGCCATT 2281 ACCGAGTCCG GGCTGCGCGT TGGTGCGGAC ATCTCGGTAG TGGGATACGA CGATACCGAA 2341 GACAGCTCAT GTTATATCCC GCCGTTAACC ACCATCAAAC AGGATTTTCG CCTGCTGGGG 2401 CAAACCAGCG TGGACCGCTT GCTGCAACTC TCTCAGGGCC AGGCGGTGAA GGGCAATCAG 2461 CTGTTGCCCG TCTCACTGGT GAAAAGAAAA ACCACCCTGG CGCCCAATAC GCAAACCGCC 2521 TCTCCCCGCG CGTTGGCCGA TTCATTAATG CAGCTGGCAC GACAGGTTTC CCGACTGGAA 2581 AGCGGGCAGT GAGCGCAACG CAATTAATGT AAGTTAGCTC ACTCATTAGG CACCGGGATC 2641 TCGACCGATG CCCTTGAGAG CCTTCAACCC AGTCAGCTCC TTCCGGTGGG CGCGGGGCAT 2701 GACTATCGTC GCCGCACTTA TGACTGTCTT CTTTATCATG CAACTCGTAG GACAGGTGCC 2761 GGCAGCGCTC TGGGTCATTT TCGGCGAGGA CCGCTTTCGC TGGAGCGCGA CGATGATCGG2821 CCTGTCGCTT GCGGTATTCG GAATCTTGCA CGCCCTCGCT CAAGCCTTCG TCACTGGTCC 2881 CGCCACCAAA CGTTTCGGCG AGAAGCAGGC CATTATCGCC GGCATGGCGG CCCCACGGGT 2941 GCGCATGATC GTGCTCCTGT CGTTGAGGAC CCGGCTAGGC TGGCGGGGTT GCCTTACTGG 3001 TTAGCAGAAT GAATCACCGA TACGCGAGCG AACGTGAAGC GACTGCTGCT GCAAAACGTC 3061 TGCGACCTGA GCAACAACAT GAATGGTCTT CGGTTTCCGT GTTTCGTAAA GTCTGGAAAC 3121 GCGGAAGTCA GCGCCCTGCA CCATTATGTT CCGGATCTGC ATCGCAGGAT GCTGCTGGCT 3181 ACCCTGTGGA ACACCTACAT CTGTATTAAC GAAGCGCTGG CATTGACCCT GAGTGATTTT 3241 TCTCTGGTCC CGCCGCATCC ATACCGCCAG TTGTTTACCC TCACAACGTT CCAGTAACCG 3301 GGCATGTTCA TCATCAGTAA CCCGTATCGT GAGCATCCTC TCTCGTTTCA TCGGTATCAT 3361 TACCCCCATG AACAGAAATC CCCCTTACAC GGAGGCATCA GTGACCAAAC AGGAAAAAAC 3421 CGCCCTTAAC ATGGCCCGCT TTATCAGAAG CCAGACATTA ACGCTTCTGG AGAAACTCAA 3481 CGAGCTGGAC GCGGATGAAC AGGCAGACAT CTGTGAATCG CTTCACGACC ACGCTGATGA 3541 GCTTTACCGC AGCTGCCTCG CGCGTTTCGG TGATGACGGT GAAAACCTCT GACACATGCA 3601 GCTCCCGGAG ACGGTCACAG CTTGTCTGTA AGCGGATGCC GGGAGCAGAC AAGCCCGTCA 3661 GGGCGCGTCA GCGGGTGTTG GCGGGTGTCG GGGCGCAGCC ATGACCCAGT CACGTAGCGA 3721 TAGCGGAGTG TATACTGGCT TAACTATGCG GCATCAGAGC AGATTGTACT GAGAGTGCAC 3781 CATATATGCG GTGTGAAATA CCGCACAGAT GCGTAAGGAG AAAATACCGC ATCAGGCGCT 3841 CTTCCGCTTC CTCGCTCACT GACTCGCTGC GCTCGGTCGT TCGGCTGCGG CGAGCGGTAT 3901 CAGCTCACTC AAAGGCGGTA ATACGGTTAT CCACAGAATC AGGGGATAAC GCAGGAAAGA 3961 ACATGTGAGC AAAAGGCCAG CAAAAGGCCA GGAACCGTAA AAAGGCCGCG TTGCTGGCGT 4021 TTTTCCATAG GCTCCGCCCC CCTGACGAGC ATCACAAAAA TCGACGCTCA AGTCAGAGGT 4081 GGCGAAACCC GACAGGACTA TAAAGATACC AGGCGTTTCC CCCTGGAAGC TCCCTCGTGC 4141 GCTCTCCTGT TCCGACCCTG CCGCTTACCG GATACCTGTC CGCCTTTCTC CCTTCGGGAA 4201 GCGTGGCGCT TTCTCATAGC TCACGCTGTA GGTATCTCAG TTCGGTGTAG GTCGTTCGCT 4261 CCAAGCTGGG CTGTGTGCAC GAACCCCCCG TTCAGCCCGA CCGCTGCGCC TTATCCGGTA 4321 ACTATCGTCT TGAGTCCAAC CCGGTAAGAC ACGACTTATC GCCACTGGCA GCAGCCACTG 4381 GTAACAGGAT TAGCAGAGCG AGGTATGTAG GCGGTGCTAC AGAGTTCTTG AAGTGGTGGC 4441 CTAACTACGG CTACACTAGA AGGACAGTAT TTGGTATCTG CGCTCTGCTG AAGCCAGTTA 4501 CCTTCGGAAA AAGAGTTGGT AGCTCTTGAT CCGGCAAACA AACCACCGCT GGTAGCGGTG 4561 GTTTTTTTGT TTGCAAGCAG CAGATTACGC GCAGAAAAAA AGGATCTCAA GAAGATCCTT 4621 TGATCTTTTC TACGGGGTCT GACGCTCAGT GGAACGAAAA CTCACGTTAA GGGATTTTGG 4681 TCATGAACAA TAAAACTGTC TGCTTACATA AACAGTAATA CAAGGGGTGT TATGAGCCAT 4741 ATTCAACGGG AAACGTCTTG CTCTAGGCCG CGATTAAATT CCAACATGGA TGCTGATTTA 4801 TATGGGTATA AATGGGCTCG CGATAATGTC GGGCAATCAG GTGCGACAAT CTATCGATTG 4861 TATGGGAAGC CCGATGCGCC AGAGTTGTTT CTGAAACATG GCAAAGGTAG CGTTGCCAAT 4921 GATGTTACAG ATGAGATGGT CAGACTAAAC TGGCTGACGG AATTTATGCC TCTTCCGACC 4981 ATCAAGCATT TTATCCGTAC TCCTGATGAT GCATGGTTAC TCACCACTGC GATCCCCGGG 5041 AAAACAGCAT TCCAGGTATT AGAAGAATAT CCTGATTCAG GTGAAAATAT TGTTGATGCG 5101 CTGGCAGTGT TCCTGCGCCG GTTGCATTCG ATTCCTGTTT GTAATTGTCC TTTTAACAGC 5161 GATCGCGTAT TTCGTCTCGC TCAGGCGCAA TCACGAATGA ATAACGGTTT GGTTGATGCG 5221 AGTGATTTTG ATGACGAGCG TAATGGCTGG CCTGTTGAAC AAGTCTGGAA AGAAATGCAT 5281 AAACTTTTGC CATTCTCACC GGATTCAGTC GTCACTCATG GTGATTTCTC ACTTGATAAC 5341 CTTATTTTTG ACGAGGGGAA ATTAATAGGT TGTATTGATG TTGGACGAGT CGGAATCGCA 5401 GACCGATACC AGGATCTTGC CATCCTATGG AACTGCCTCG GTGAGTTTTC TCCTTCATTA5461 CAGAAACGGC TTTTTCAAAA ATATGGTATT GATAATCCTG ATATGAATAA ATTGCAGTTT 5521 CATTTGATGC TCGATGAGTT TTTCTAAGAA TTAATTCATG AGCGGATACA TATTTGAATG 5581 TATTTAGAAA AATAAACAAA TAGGGGTTCC GCGCACATTT CCCCGAAAAG TGCCACCTGA 5641 AATTGTAAAC GTTAATATTT TGTTAAAATT CGCGTTAAAT TTTTGTTAAA TCAGCTCATT 5701 TTTTAACCAA TAGGCCGAAA TCGGCAAAAT CCCTTATAAA TCAAAAGAAT AGACCGAGAT 5761 AGGGTTGAGT GTTGTTCCAG TTTGGAACAA GAGTCCACTA TTAAAGAACG TGGACTCCAA 5821 CGTCAAAGGG CGAAAAACCG TCTATCAGGG CGATGGCCCA CTACGTGAAC CATCACCCTA 5881 ATCAAGTTTT TTGGGGTCGA GGTGCCGTAA AGCACTAAAT CGGAACCCTA AAGGGAGCCC 5941 CCGATTTAGA GCTTGACGGG GAAAGCCGGC GAACGTGGCG AGAAAGGAAG GGAAGAAAGC 6001 GAAAGGAGCG GGCGCTAGGG CGCTGGCAAG TGTAGCGGTC ACGCTGCGCG TAACCACCAC 6061 ACCCGCCGCG CTTAATGCGC CGCTACAGGG CGCGTCCCAT TCGCCA//其他大肠杆菌表达载体：pBV221 ptdTomato pET-52b(+) pAmCyanpDsRed-Express2 pBV220 pCold-GST pColdS-SUMOpCold TF pCold IV pCold III pCold IIpCold I pE-SUMO pCold-ProS2 pBAD102/D-TOPOpBAD202/D-TOPO pACYC184 pBAD/Thio-TOPO pBad/Myc-His CpBad/Myc-His B pBad/Myc-His A pBad/His C pBad/His BpBad/His A pBAD-TOPO pET-23b(+) pET-23a(+)pET-23c(+) pET-23(+) pET-12b(+) pET-12c(+)pET-12a(+) pET-11b(+) pET-11a(+) pET-11c(+)pBad24 pQE-82L pQE-81L pQE-80LpQE-32 pQE-9 pQE-16 pQE-31pQE-60 pQE-70 pQE-40 pET-51b(+)pET-50b(+) pET-49b(+) pET-48b(+) pET-47b(+)pET-26b(+) pET-32a(+) pET-21b(+) pET-22b(+)pET-14b pET-16b pET-15b pET-19bpET-20b(+) pET-21d(+) pET-21c(+) pET-21b(+)pET-21a(+) pET-24a(+) pET-24d(+) pET-25b(+)pET-27b(+) pET-28a(+) pET-30a(+) pET-42a(+)pET-43.1c(+) pET-43.1b(+) pET-43.1a(+) pET-44a(+)pET-44c(+) pET-46 EK/LIC pET-37b(+) pTrcHis2 CpTrcHis2 B pTrcHis2 A pET303/CT-His pET302/NT-His pRSET-CFP pRSET-EmGFP pRSET-BFP pGFPuvpET300/NT-DEST pET301/CT-DEST pGEM-T pBad43pGEX-4T-3 pGEX-5X-2 pBlueScript SK(+) pG-Tf2pG-KJE8 pGro7 pET-SUMO pSE380pET-17b pET102/D-TOPO pCDFDuet-1 pMAL-p5xpTf16 pET-28c(+) pBluescript II SK(+) pET-30b(+)pSUMO pProEX HTc pProEX HTb pProEX HTapKD3 pKD13 pKD46 pTYB1pTYB2 pTWIN2 pBluescript II KS(-) pTYB12pMAL-p5e pACYCDuet-1 pEGM-11ZF(+) pEGM-7ZF(+) PinPoint Xa-3 PinPoint Xa-2 PinPoint Xa-1 pSP73pSP64 pTWIN1 pTYB11 pTXB1pET-5b(+) pBad/gIII C pBad/gIII B pBad/gIII A pET-5a(+) pMal-p4X pMal-p2G pkk223-3pkk232-8 pCYB1 pEZZ18 pBAD18pMAL-c5x pMal-p2E pMal-p2X pET-44 EK/LIC pET-43.1 EK/LIC pET-41 EK/LIC pMal-c4X pTrcHis BpET-31b(+) pET-3b(+) pET-41a(+) pGEX-3XpGEX-4T-2 pETDuet-1 pGEX-4T-1 pTrc99apET-28b(+) pET-His pALEX a,b,c pACYC177pBR322 pKD4 pKD20 pMXB10pEcoli-6xHN-GFPuv pKJE7 pRSET B pGEX-KGpGEX-2T pRSFDuet-1 pCOLADuet-1 pTrcHis C pTrcHis A pET-41b(+) pET-42b(+) pET-3a(+) pGEX-6P-3 pGEX-6P-2 pGEX-6P-1 pGEX-5X-3 pGEX-5X-1 pGEX-2TK pRSET A pMal-c2GpMal-c2E pMal-c2X pRSET C pQE-30pET-45b(+) pET-44b(+) pET-42c(+) pET-41c(+) pET-40b(+) pET-33b(+) pET-39b(+) pET-32 EK/LIC pET-32 Xa/LIC pET-32c(+) pET-32b(+) pET-30 Xa/LIC pET-30 EK/LIC pET-30c(+) pET-29c(+) pET-29b(+) pET-29a(+) pET-24c(+) pET-24b(+) pET-24(+)pET-23d(+) pET-11d(+) pBad33。
pBV220大肠杆菌表达载体说明
pBV220⼤肠杆菌表达载体说明pBV220编号名称北京华越洋VECT--‐110 pBV220pBV220载体基本信息载体名称: pBV220质粒类型: 原核表达载体，温控型表达载体，热诱导表达载体⾼拷贝/低拷贝: ⾼拷贝启动⼦: pR/pL克隆⽅法: 多克隆位点，限制性内切酶载体⼤⼩: 3666 b p5' 测序引物及序列: pBV220--‐F: 5?′--‐AAGAAGGGCAGCATTCAAAG--‐3‘3' 测序引物及序列: pBV220--‐R: 5?′--‐CTGCGTTCTGATTTAATCTG--‐3‘载体标签: --‐--‐载体抗性: 氨苄筛选标记: --‐--‐备注: pBV220质粒的SD sequence（⽤于结合原核⽣物核糖体的序列）后紧跟多克隆酶切位点，便于插⼊带起始ATG的外源基因，可表达⾮融合蛋⽩。
载体含有强的转录终⽌⼦可防⽌出现"通读"现象，有利于质粒--‐宿主系统的稳定。
载体pBV220为3.7Kb，有利于增加其拷贝数及容量。
pBV220含有PL启动⼦和编码对该启动⼦具有抑制作⽤⽽⼜对温度敏感的cI蛋⽩基因cIts857调控基因cI，因此可⽤温度对插⼊其中的外源基因的转录进⾏调控。
温控型原核表达载体，⾼拷贝数，⼤容量，强启动⼦，强转录终⽌⼦，可在任何受体菌中诱导表达。
pBV220载体是λPL/PR--‐cI857温度敏感系统表达载体，能够在42 表达⾮融合的⽬的蛋⽩。
在利⽤pBV220载体进⾏质粒构建的时候，需要加⼊ATG起始密码⼦。
PBV220质粒属于温度诱导表达型，培养温度为30 ，诱导温度为42 。
稳定性: 诱导表达组成型: ⾮组成型病毒/⾮病毒: ⾮病毒pBV220载体质粒图谱和多克隆位点信息Ampr, 氨苄抗性基因;ori, 质粒复制起点;cIts857, lambda 噬菌体表达抑制基因，但是在热诱导条件下能够表达⽬的基因; PRPL, 来⾃于lambda 噬菌体的串联的PR和PL启动⼦，保证基因的⾼⽔平表达; SD, Shine-Dalgarno序列;rrnB, 核糖体rrnB基因，是基因转录终⽌信号;pBV220载体简介pBV220载体是我国预防医学科学院病毒研究所⾃⾏构建的⼤肠杆菌温控表达载体,⽬前仍在⼴泛使⽤.pBV220载体序列ORIGIN1 GAATTCCCGG GGATCCGTCG ACCTGCAGCC AAGCTTCTGT TTTGGCTTAT GAGAGAAGAT 61 TTTCAGCCTG ATACAGATTA AATCAGAACG CAGAAGCGGT CTGATAAAAC AGAATTTGCC 121 TCCCGGCAGT AGCGCGGTGG TCCCACCTGA CCCCATGCCG AACTCAGAAG TGAAACGCCG 181 TAGCGCCGAT GGTAGTGTGG GGTCTCCCCA TGCGAGAGTA GCCAACTGCC AGGCATCAAA 241 TAAAACGAAA GGCTCAGTCG AAAGACTGGG CCTTTCGTTT TATCTGTTGT TTGTCGGTGA 301 ACGCTCTCCT GAGTAGGACA AATCCGCCGG GAGCGGATTT GAACGTTGCG AAGCAACGGC 361 CCGGAGGGTG GCGGGCAGGA CGCCCGCCAT AAACTGCCAG GCATCAAAGG AATCAGAAGG 421 CCATCCTGAC GGATGGCCTT TTTGCGTTTC TACAAACTCT TTGTTTATTT TTCTAAATAC 481 ATTCAAATAT GTATCCGCTC ATGAGACAAT AACCCTGATA AATGCTTCAA TAATATTGAA 541 AAAGGAAGAG TATGAGTATT CAACATTTCC GTGTCGCCCT TATTCCCTTT TTTGCGGCAT 601 TTTGCCTTCC TGTTTTTGCT CACCCAGAAA CGCTGGTGAA AGTAAAAGAT GCTGAAGATC 661 AGTTGGGTGC ACGAGTGGGT TACATCGAAC TGGATCTCAA CAGCGGTAAG ATCCTTGAGA 721 GTTTTCGCCC CGAAGAACGT TTTCCAATGA TGAGCACTTT TAAAGTTCTG CTATGTGGCG 781 CGGTATTATC CCGTGTTGAC GCCGGGCAAG AGCAACTCGG TCGCCGCATA CACTATTCTC 841 AGAATGACTT GGTTGAGTAC TCACCAGTCA CAGAAAAGCA TCTTACGGAT GGCATGACAG 901 TAAGAGAATT ATGCAGTGCT GCCATAACCA TGAGTGATAA CACTGCGGCC AACTTACTTC 961 TGACAACGAT CGGGAGGACCGAAGGAGCTA ACCGCTTTTT TGCACAACAT GGGGGATCAT 1021 GTAACTCGCC TTGATCGTTG GGAACCGGAT CTGAATGAAG CCATACCAAA CGACGAGCGT 1081 GACACCACGA TGCCTGTAGC AATGGCAACA ACGTTGCGCA AACTATTAAC TGGCGAACTA 1141 CTTACTCTAG CTTCCCGGCA ACAATTAATA GACTGGATGG AGGCGGATAA AGTTGCAGGA 1201 CCACTTCTGC GCTCGGCCCT TCCGGCTGGC TGGTTTATTG CTGATAAATC TGGAGCCGGT 1261 GAGCGTGGGT CTCGCGGTAT CATTGCAGCA CTGGGGCCAG ATGGTAAGCC CTCCCGTATC 1321 GTAGTTATCT ACACGACGGG GAGTCAGGCA ACTATGGATG AACGAAATAG ACAGATCGCT 1381 GAGATAGGTG CCTCACTGAT TAAGCATTGG TAACTGTCAG ACCAAGTTTA CTCATATATA 1441 CTTTAGATTG ATTTAAAACT TCATTTTTAA TTTAAAAGGA TCTAGGTGAA GATCCTTTTT 1501 GATAATCTCA TGACCAAAAT CCCTTAACGT GAGTTTTCGT TCCACTGAGC GTCAGACCCC 1561 GTAGAAAAGA TCAAAGGATC TTCTTGAGAT CCTTTTTTTC TGCGCGTAAT CTGCTGCTTG 1621 CAAACAAAAA AACCACCGCT ACCAGCGGTG GTTTGTTTGC CGGATCAAGA GCTACCAACT 1681 CTTTTTCCGA AGGTAACTGG CTTCAGCAGA GCGCAGATAC CAAATACTGT CCTTCTAGTG 1741 TAGCCGTAGT TAGGCCACCA CTTCAAGAAC TCTGTAGCAC CGCCTACATA CCTCGCTCTG 1801 CTAATCCTGT TACCAGTGGC TGCTGCCAGT GGCGATAAGT CGTGTCTTAC CGGGTTGGAC 1861 TCAAGACGAT AGTTACCGGA TAAGGCGCAG CGGTCGGGCT GAACGGGGGG TTCGTGCACA 1921 CAGCCCAGCT TGGAGCGAAC GACCTACACC GAACTGAGAT ACCTACAGCG TGAGCATTGA 1981 GAAAGCGCCA CGCTTCCCGA AGGGAGAAAG GCGGACAGGT ATCCGGTAAG CGGCAGGGTC 2041 GGAACAGGAG AGCGCACGAG GGAGCTTCCA GGGGGAAACG CCTGGTATCT TTATAGTCCT 2101 GTCGGGTTTC GCCAACCTCT GACTTGAGCG TCGATTTTGT GATGCTCGTC AGGGGGGCGG 2161 AGCCTATGGA AAAACGCCAG CAACGCGGCC TTTTTACGGT TCCTGGCCTT TTGCTGGCCT 2221 TTTGCTCACA TGTTCTTTCC TGCGTTATCC CCTGATTCTG TGGATAACCG TATTACCGCC 2281 TTTGAGTGAG CTGATACCGC TCGCCGCAGC CGAACGACCG AGCGCAGCGA GTCAGTGAGC 2341 GAGGAAGCGG AAGAGCGCCC TTATCTTTCC CTTTATTTTT GCTGCGGTAA GTCGCATAAA 2401 AACCATTCTT其他⼤肠杆菌表达载体：pBV221 ptdTomato pET--‐52b(+) pAmCyan pDsRed--‐Express2 pBV220 pCold--‐GST pColdS--‐SUMO pCold T F pCold I V pCold I II pCold I IpCold I pE--‐SUMO pCold--‐ProS2 pBAD102/D--‐TOPO pBAD202/D--‐TOPO pACYC184 pBAD/Thio--‐TOPO pBad/Myc--‐His C pBad/Myc--‐His B pBad/Myc--‐His A pBad/His C pBad/His B pBad/His A pBAD--‐TOPO pET--‐23b(+) pET--‐23a(+) pET--‐23c(+) pET--‐23(+) pET--‐12b(+) pET--‐12c(+)pET--‐12a(+) pET--‐11b(+) pET--‐11a(+) pET--‐11c(+) pBad24 pQE--‐82L pQE--‐81L pQE--‐80LpQE--‐32 pQE--‐9 pQE--‐16 pQE--‐31pQE--‐60 pQE--‐70 pQE--‐40 pET--‐51b(+)pET--‐50b(+) pET--‐49b(+) pET--‐48b(+) pET--‐47b(+)pET--‐26b(+) pET--‐32a(+) pET--‐21b(+) pET--‐22b(+)pET--‐14b pET--‐16b pET--‐15b pET--‐19bpET--‐20b(+) pET--‐21d(+) pET--‐21c(+) pET--‐21b(+)pET--‐21a(+) pET--‐24a(+) pET--‐24d(+) pET--‐25b(+)pET--‐27b(+) pET--‐28a(+) pET--‐30a(+) pET--‐42a(+)pET--‐43.1c(+) pET--‐43.1b(+) pET--‐43.1a(+) pET--‐44a(+)pET--‐44c(+) pET--‐46 E K/LIC pET--‐37b(+) pTrcHis2 C pTrcHis2 B pTrcHis2 A pET303/CT--‐His pET302/NT--‐His pRSET--‐CFP pRSET--‐EmGFP pRSET--‐BFP pGFPuvpET300/NT--‐DEST pET301/CT--‐DEST pGEM--‐T pBad43pGEX--‐4T--‐3 pGEX--‐5X--‐2 pBlueScript S K(+) pG--‐Tf2pG--‐KJE8 pGro7 pET--‐SUMO pSE380pET--‐17b pET102/D--‐TOPO pCDFDuet--‐1 pMAL--‐p5xpTf16 pET--‐28c(+) pBluescript I I S K(+) pET--‐30b(+) pSUMO pProEX H Tc pProEX H Tb pProEX H Ta pKD3 pKD13 pKD46 pTYB1pTYB2 pTWIN2 pBluescript I I K S(--‐) pTYB12pMAL--‐p5e pACYCDuet--‐1 pEGM--‐11ZF(+) pEGM--‐7ZF(+) PinPoint X a--‐3 PinPoint X a--‐2 PinPoint X a--‐1 pSP73 pSP64 pTWIN1 pTYB11 pTXB1pET--‐5b(+) pBad/gIII C pBad/gIII B pBad/gIII ApET--‐5a(+) pMal--‐p4X pMal--‐p2G pkk223--‐3pkk232--‐8 pCYB1 pEZZ18 pBAD18pMAL--‐c5x pMal--‐p2E pMal--‐p2X pET--‐44 E K/LIC pET--‐43.1 E K/LIC pET--‐41 E K/LIC pMal--‐c4X pTrcHis BpET--‐31b(+) pET--‐3b(+) pET--‐41a(+) pGEX--‐3XpGEX--‐4T--‐2 pETDuet--‐1 pGEX--‐4T--‐1 pTrc99apET--‐28b(+) pET--‐His pALEX a,b,c pACYC177pBR322 pKD4 pKD20 pMXB10pEcoli--‐6xHN--‐GFPuv pKJE7 pRSET B pGEX--‐KGpGEX--‐2T pRSFDuet--‐1 pCOLADuet--‐1 pTrcHis C pTrcHis A pET--‐41b(+) pET--‐42b(+) pET--‐3a(+) pGEX--‐6P--‐3 pGEX--‐6P--‐2 pGEX--‐6P--‐1 pGEX--‐5X--‐3 pGEX--‐5X--‐1 pGEX--‐2TK pRSET A pMal--‐c2G pMal--‐c2E pMal--‐c2X pRSET C pQE--‐30pET--‐45b(+) pET--‐44b(+) pET--‐42c(+) pET--‐41c(+) pET--‐40b(+) pET--‐33b(+) pET--‐39b(+) pET--‐32 E K/LIC pET--‐32 X a/LIC pET--‐32c(+) pET--‐32b(+) pET--‐30 X a/LIC pET--‐30 E K/LIC pET--‐30c(+) pET--‐29c(+) pET--‐29b(+) pET--‐29a(+) pET--‐24c(+) pET--‐24b(+) pET--‐24(+) pET--‐23d(+) pET--‐11d(+) pBad33。
pBR322 产品说明书
HonorGene---专业的基因研究资源提供商（基因/载体/细胞/启动子/腺病毒/慢病毒/AA V/siRNA /miRNA）
pBR322产品说明书
产品信息
产品货号载体名称出品公司质粒用途原核抗性HG-VKY0280 pBR322 HonorGene 克隆载体Amp+、Tet+
质粒图谱
质粒简介
（1）pBR322是研究得最多，使用最早且应用最广泛的大肠杆菌质粒载体之一。
质粒名称pBR322中的“p”代表质粒，“BR”代表两位两位研究者Bolivar和Rogigerus姓氏的字首，“322”是实验编号。
（2）pBR322是一个人工构建的重要质粒，有万能质粒之称。
它是由pSF2124、pMB1及pSC101三个亲本质粒经复杂的重组过程构建而成的。
（3）pBR322具有很多优点，如相对分子质量较小、拷贝数较高等，是最常用的克隆载体之一。
Propagation in E.coli
（1）克隆菌株：DH5α、TOP10、XL1-Blue等均可。
（2）原核抗性：Amp+（工作浓度建议为100ug/ml）、Tet+（工作浓度建议为10ug/ml）。
（3）培养温度：37℃。
HonorGene（奥诺基因）---长沙艾碧维生物科技有限公司
地址：湖南省长沙市岳麓区桐梓坡西路229号麓谷国际工业园C栋12楼电话：155****6881
网址： E-mail：***************。
碧云天MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒说明书.pdf_1694034687.4777226
MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒产品编号 产品名称包装 C0009S MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 500次 C0009MMTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒2500次产品简介：MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)是一种非常经典的细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒，被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。
MTT 可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan (图1A)。
在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解(图1B)。
然后通过酶标仪可以测定570nm 波长附近的吸光度(图2)。
细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
图1. MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒实测效果图。
A. HeLa 细胞加入使用本试剂盒配制的MTT 溶液，在细胞培养箱内孵育4小时，显微镜下可见大量结晶状的深紫色产物formazan 生成。
B. 不同数量HeLa 细胞在MTT溶液(MTT solution)加入后4小时的效果图(上图)及深紫色产物formazan 生成后加入Formazan 溶解液(Formazan solvent)，充分溶解后的效果图(下图)。
图2. 本试剂盒检测不同数量HeLa 细胞的效果图。
不同的检测条件下，实际读数会因标准品的配制、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
本试剂盒采用了独特的Formazan 溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan 溶解液溶解formazan 。
从而避免了由于去除培养液时formazan 被部分去除而引起的误差。
本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。
碧云天各种细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择，请参考/support/cell-proliferation.htm 。
本试剂盒C0009S 包装可以测定500个样品，C0009M 包装可以测定2500个样品。
Rosetta(DE3)大肠杆菌表达菌株使用说明
GGA 稀有密码子的 tRNA，该质粒具有氯霉素抗性。Rosetta(DE3)通过提供
稀 有 密 码 子 ， 使 得 该 宿 主 菌 相 对 于 其 他 大 肠 杆 菌 ， 能 够 提 供 更 加 “通 用 ”的
蛋白质表达，从而提升目的蛋白表达水平。DE3 是溶源性的 λDE3, 所以带
名称：Rosetta(DE3)大肠杆菌表达菌株
规格：300ul 甘油菌
储存温度：-‐80℃
基 因 组 ：
F– ompThsdSB(rB-‐ mB-‐) gal dcm (DE3)pRARE2(CamR)
简 介 ：
Rosetta 系列菌株来源于 BL21 系列宿主菌，该系列菌株含有原本在大
肠杆菌中稀少的真核细胞密码子，增加了真核细胞的蛋白表达水平。
Rosetta(DE3)菌株含有 pRARE 质粒，能够提供 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和
有 T7 RNA 聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于 pET 系列载体，及其他 T7
启 动 子 系 列 载 体 。
操作说明：
1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表
面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数
的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆
菌落进行后续操作。
冷 冻 管 开 封 ：
用浸过 75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌 株 复 溶 ：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取 1ml 左右复溶液，加入到冷冻
rosetta系列菌株来源于bl21系列宿主菌该系列菌株含有原本在大肠杆菌中稀少的真核细胞密码子增加了真核细胞的蛋白表达水平
所有质粒载体汇总
酿酒酵母表达载体pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP,酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF，pY15TEF，pY16TEF,酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47,酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424, 酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109；质粒pGADT7,pGBKT7；对照质粒pGBKT7-53，pGBKT7-lam，pGADT7-T，PCL1，酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,Y187,Y190,毕赤酵母表达载体pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZαA,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPink hc，配套毕赤酵母Pichiapink,毕赤酵母宿主X33，KM71，KM71H，GS115，原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括pET系列，pET-GST，pGEX系列（含GST标签），pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis系列，pQE系列,pTrc99a,pTrcHis系列，pBV220,221,222,pTXB系列，pLLP-ompA,pIN-III-ompA （分泌型表达系列）,pQBI63（原核表达带荧光）pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49b pET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9 pQE30,31,32, pQE 40 pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-C pGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPinPoint-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1, pGEM7ZF（+）, pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk233-3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK （+）,pBlueScript SK（-）pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质粒： pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒：..pACYCduet-1,pETduet-1,pCDFduet-1，pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣： pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞： DH5a JM101 JM103 JM105 JM107 JM109 JM110 Top10 Top10F BL21（DE3）HB101 ER2529 E2566 C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21（AI）BL21（DE3）plysS TG1 TB1 DH5a（pir）Tuner（DE3）Bl21 codonplusRIPL Novablue （DE3）Rosetta Rosetta（DE3）Rosetta（DE3）plys Rosetta-gami（DE3）Rosetta-gamiB（DE3）, Rosetta-gamiB（DE3）plysS Orgami（DE3）OrgamiB（DE3）HMS174（DE3）植物表达/RNAi载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301,pUN1301,pRTL2 , pRTL2-GFP , pRTL2-CFP, pRTL2-RFP , pRTL2-YFP,pCAMBIA 1300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z,1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIA super1300,pCAMBIAsuper1300-GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RNAi载体pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2,T-DNA插入载体（随机突变体库）pSKI015,pSKI074,真菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1枯草芽孢杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43,pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5, pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK,pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641,pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01，配套菌株BS 168,WB600,WB800,WB700,WB800N,1012,FZB42,1A747,广宿主质粒pVLT33RNAi基因沉默干扰敲除载体pSilencer1.0，pSilencer 2.1-U6 hygro， pSilencer 3.1-H1 hygro，pSilencer 3.1-H1 neo， pSilencer 4.1-CMV neo， pSilencer 4.1-CMV puro pMIR-REPORT Luciferase RNAi载体（oligoengine）pSuper-puro RNAi逆转录病毒载体（clontech）: RNAi-Ready pSIREN-Retro Q， RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-ZsGreen（Luciferase shRNA Annealed Oligonucleotide）RNAi慢病毒载体（addgene）: pLKO.1..哺乳动物表达载体pcDNA3.1+/-,pcDNA4/HisMax B，pSecTag2 A，pVAX1，pBudCE4.1,pTracer CMV2，pcDNA3.1（-）/myc-His A ，pcDNA6-Myc/His B，pCEP4， pIRES，pIRESneo，pIRES hyg3，pCMV-myc，pCMV-HA，pIRES-puro3，pIRES-neo3,pCAGGS哺乳动物双杂交系统pACT，pBIND，pACT-MyoD，pBIND-Id，pG5luc,pCMV-BD, pCMV-AD, pBD-p53, pFR-luc,Cytotrap Two-Hybrid System:pSos, pSos MAFB, pMyr蜕皮激素诱导系统pIND, pVgRxR,LacSwith II哺乳动物诱导表达系统:pOPRSVI ，pOPI3CAT，pCMVLacI,GeneSwitch System:pSwitch哺乳动物表面展示系统:pDisplay, 四环素调控系统（Invitrogen）：pcDNA4/TO/Myc-His A，pcDNA4/TO/Myc-His B，pcDNA4/TO/Myc-His C，pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ，pcDNA6/TR四环素调控系统（Clontech）：pTet-On，pTet-Off，pTRE2,pRevTRE，pRevTet-On，pRevTet-off信号通路报告载体:pGAS-TA-Luc，pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc，pIκB-EGFP，pNFAT-TA-Luc，pCaspase3-sensor，pAP1（PMA）-Luc;pGL4.26[luc2P/minP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.30[luc2P/NFA T-RE/Hygro]，pGL4.75;p53-Luc，pAP-1-Luc， pNF-κB-Luc，pSRE-Luc，pFA2-Elk1，pFC-MEKK，pFR-luc,Gateway系统（invitrogen）pcDNA6.2-GWEmGFP-miR negative, pLenti 6/TR,pcDNA 6.2-GW EmGFP-miR，乳酸菌表达载体及各种乳酸菌乳酸杆菌菌株，pNZ8148,pLEISS,pMG36e,pBBR1MCS-5,pBBR1MCS-6,pRV610,pLEM415,pHY3 00PLK,分泌型乳酸菌表达载体pVE5523，pPG611.1,pPG612.1等和乳酸杆菌菌株宿主菌NZ9000,MG1363,Lactobacillus casei 1.539,Lactobacillus casei,acidophilus NCFM,1.2,Lactobacillus sakei 23K,L.plantarum,L.rhamnosusGG,B.coagulans,Bifidobacterium bifidum,Bifidobacterium infantis,Lactococcus lactis M17,1663,Lactobacillus reuterii广宿主表达载体链球菌表达敲除载体假单胞菌表达载体pVLT33,pBBR1MCS-2,3,4,5,6, pJRD215,pJN105,pME6032,Cos载体pLAFR3,pMP2444（GFP）, pHY300PLK,pRT102,pRL1063a, 转座子载体pUT-miniTn5,pMGS100, pWHM10,pKC1139,pSET152,pOJ260,pPG611.1,pPG612.1，..腺病毒载体/慢病毒，逆转录病毒表达载体及包装包膜质粒，腺病毒系统（Stratagene）: pAdEasy-1,pShuttle-CMV,pShuttle,pAdTrack, pAdTrack-CMV, pShuttle-IRES-hrGFP-1、pShuttle-IRES-hrGFP-2、pShuttle-CMV-lacZ,pShuttle-CMV-EGFP-C,pXC1, pBHGE3, 配套大肠杆菌BJ5183,293,293T cellline 腺相关病毒系统（Stratagene）： pAAV-MCS，pAAV-RC，pHelper，pAAV-LacZ，pAAV-IRES-hrGFP，pCMV-MCS，慢病毒载体:pLVX-DsRed-Monomer-N1,pLVX-IRES-ZsGreen1,pLVX-AcGFP1-N1,Lenti6/v 5-EDST-EGFP,pWPXL, FUGW,pLentilox 3.7,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q-ZsGreen,pSUPER.Retro-GFP/Neo,pSUPER-Retro-Neo, pSUPER.Retro-puro,PLNCX PLNCX2 pMSCV-HYG pMSCV-neo pMSCV-puro pLEGFP-C1 pLOX-CW-CRE pLOX-GFP-IRES-TK pRetroX-IRES-DsRedExpress, pLVX-IRES-mCherry质粒载体。
真核细胞常见表达载体
真核细胞常见表达载体真核细胞, 表达载体1、pCMVp-NEO-BAN载体特点:该真核细胞表达载体分子量为6600碱基对，主要由CMVp启动子、兔β-球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗neo基因以及pBR322骨架构成，在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。
更重要的是，由于该真核细胞表达载体中抗neo基因存在，转染细胞后，用G418筛选，可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。
插入外源基因的克隆位点包括Sal1、BamH1和EcoR1位点。
注意在此载体中有二个EcoR1位点存在。
2、pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector)特点:pEGFP表达载体中含有绿色荧光蛋白，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40or igin使该载体在任何表达SV40T抗原的真核细胞内进行复制。
Neo抗性盒由SV40早期启动子、Tn5的neomycin/kanamycin抗性基因以及HSV-TK 基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。
此外，载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。
用途:该表达载体EGFP上游有Nde1、Eco47111和Age1克隆位点，将外源基因扦入这些位点，将合成外源基因和EGFP 的融合基因。
借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。
亦可用于检测克隆的启动子活性(取代CMV启动子,Acet1-Nhe1)。
3、pEGFT-Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体特点:pEGFP-Actin表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆β-肌动蛋白基因，在PCMV启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。
载体骨架中的SV40origin使该载体在任何表达SV40T抗原的真核细胞内进行复制。
常用载体构建说明书
常用载体构建说明书步骤：一、基本耗材准备（抗生素、LB液体培养基、LB固体培养基、离心管、枪头、三角瓶）二、制备感受态大肠杆菌三、设计引物四、Pcr扩增五、Pcr产物检测六、Pcr产物回收七、双酶切pcr产物和质粒八、酶切产物回收九、目的基因与载体连接十、转化感受态大肠杆菌十一、单克隆检测十二、测序比对十三、提质粒十四、酶切验证十五、转化感受态农杆菌十六、单克隆检测十七、侵染液配制一、基本耗材准备1、抗生素的制备（抗生素为索来宝公司）常用抗生素Kan（卡那）Amp（氨苄）Rif（利福平）母液浓度：Kan 50mg/ml Amp 100 mg/ml Rif 100 mg/ml工作浓度：Kan 50ng/ul Amp 100 ng/ul Rif 100 ng/ul举例：称取kan固体1g 于注射器中，加入20ml ddH2O，溶解后用过滤器注入灭过菌的离心管中，-20度保存，使用比例1:1000注意：Rif溶解时加入DMSO2、培养基的配制LB液体培养基1000ml 200ml牛肉膏5g 1g蛋白胨10g 2g氯化钠10g 2gLB固体培养基1000ml 200ml牛肉膏蛋白胨氯化钠琼脂粉5g10g10g15g1g2g2g3g120℃高温高压灭菌15-20min，固体培养基冷却后加入相应抗性，加入比例1:1000，然后把培养基倒90cc的培养皿中，一般情况下一个培养皿可倒20ml培养基。
3、离心管、枪头、三角瓶0.2ml、1.5ml、2.0ml离心管各200-500个，50ml离心管2个10ul、200ul、1000ul 枪头各2盒50ml、100ml、250ml 、500ml三角瓶各2个去离子水或双蒸水500ml二、制备感受态大肠杆菌（所用超级感受态细胞制备试剂盒购于上海生工）BT Media 培养基制备：1支BT Media加50 ml蒸馏水配制，放入250ml三角瓶，高压灭菌即可准备工作：将BT Buffer A和BT Buffer B 放冰上遇冷，遇冷低温离心机至4℃1、用超低温冰箱中保存的菌种在LB平板上进行划线，置37℃培养箱中静置培养12-16h待菌落生长到1-2mm大小。
E.coli Competent Cells stbl3感受态细胞使用说明书
GeneCopoeia TMExpressway to DiscoveryGeneCopoeia Inc.9620 Medical Center Drive, Suite 101Rockville, MD20850, USATel: +1(301)762-0888;To l l f r e e:+1(301)762-3888Fax:+1(301)762-3888Web: E.coli Competent Cells stbl3™产品套装编号：CC003产品内容产品编号包装规格Competent Cells stbl3 CC001-01 100 μl×10Control DNA（pUC19，10 pg/μl） CC003-02 50 μl×1储存条件：-80℃保存 保存时间： 12 个月■ 产品概述：常规质粒制备的宿主菌，可进行蓝白斑筛选；复制慢病毒载体系统推荐使用的菌株，对慢病毒载体等较大的质粒转 化的效果好，有效减低错误重组的可能性。
■ Genotype：F- mcrB mrr hsdS20 (rB-, mB- ) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (Strr ) xyl -5 - leu mtl-1.■ 细胞种类：大肠杆菌Stbl3™菌株能有效地抑制长片段末端重复区的重组，非常适合于含有同向重复序列的慢病毒和其他反转录 病毒载体的复制。
此外，细胞非常稳定，能提高慢病毒载体或其他不稳定载体的克隆效率。
■ 转化效率：我们提供的感受态的转化效率>1 X 108 transformants/1 μg PUC19 Plasmid也就是，当您以100 μl Competent Cells Stbl3/ 10 pg pUC19 Plasmid 进行转化,产生的菌落数＞1000 trans formants■ 使用步骤：1. 把感受态细胞置于冰中解冻；2. 把50-100 µl的感受态细胞移至灭菌处理的试管内；3. 加入用于转化的DNA或反应产物（10 ng以下）；4. 冰中放置30分钟；5. 42℃ 放置30～60秒；6. 冰中放置2～3分钟；7. 加入37℃预温好的SOC培养基，使终体积为1 ml；8. 37℃振荡培养1小时（160～225 rpm）；9. 取适量涂布琼脂平板培养基；10. 37℃过夜培养。
PPM植物组培抗菌保护剂使用说明中文版
PPM 说明书（中文版）PPM TM - Plant Preservative MixturePPM TM –植物组织培养抗菌保护剂FOR RESEARCH USE ONLYNot for use in diagnostic procedures产品名称：PPM TM- Plant Preservative Mixture（植物组织培养抗菌保护剂）货号：PPM保存条件：4º C运输条件：常温物理性质：溶液性状：无色至琥珀色透明液体pH值：3.8有效期：见瓶身标签说明产品描述：1.PPM TM 是一种热稳定的抗菌剂，用于植物组织培养中植物的微生物污染防治与清除；2.在合理的使用剂量下，PPM TM是一种非常有效的植物组培抗菌剂与保护剂，不会对植物的生长（如种子萌发，愈伤增殖、再生等）产生任何影响，可视为培养基标准配方成份；3.PPM TM主要用于预防和消除来自空气、水源或者人体接触等外界因素导致的植物组培过程中的微生物污染，同时，对于植物内生菌也同样具有非常好的抑制效果；4.PPM TM广泛适用于绝大多数被子植物和裸子植物，但是不推荐用于蕨类植物、藻类等水生植物；5.PPM TM具有热稳定性，能直接加入培养基高温灭菌而不会影响使用效果，使用更加方便；6.PPM TM 相对于常规抗生素而言，性价比更高。
作用机理：PPM TM的活性成分能渗透细菌或者真菌细胞壁，抑制呼吸作用中三羧酸循环和电子传递链过程中关键酶的活性，同时，也能阻断细菌和真菌吸收和利用培养基中单糖和氨基酸的过程，从而实现预防和清除植物组织培养过程中的微生物污染。
相对抗生素的优势：1.PPM TM能广泛抑制和清除细菌和真菌的污染，并防止真菌孢子的萌发；2.PPM TM是通过抑制多种酶的活性而达到抑菌效果，从而能避免耐药突变体的发生；3.PPM TM具有热稳定性，无需过滤灭菌，能直接加入培养基高温灭菌而不会影响使用效果，使用更加方便；4.PPM TM性价比更高，可更加广泛的应用于更多的科学研究、作物育种、组培苗工厂化生产中。
广宿主稳定表达载体pQMV和pGMP的构建
*基金项目：国家自然科学基金青年基金（No.39900004）和国家重点基础研究发展规化(973)项目（No.2001CB109005）资助。
胡玉琴:女，1962年生，博士研究生。
Email:<yuqinhu316a@>.**通讯作者。
Author for correspondence.E-mail:<dfh313@>.收稿日期：2003-05-13接受日期：2003-06-05农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2004,12(2):202~205·研究论文·广宿主稳定表达载体pQMV 和pGMP 的构建*胡玉琴1张杰1宋福平1束长龙1黄大昉2**（1.中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100094；2.中国农业科学院生物技术研究所，北京100081）摘要：以高效表达载体pET-29a 为基础，将广宿主载体pUCP19中稳定的假单胞菌（）质粒DNA 复制子和自行分离克隆的荧光假单胞菌()P303组成型表达启动子P P 303插入其中，分别获得了重组载体pQMV(4.6kb)和pGMP(5.6kb)。
它们均含有假单胞菌和大肠杆菌复制子、荧光假单胞菌内源强启动子，以及包含8~11个限制性内切酶多克隆酶切位点；此外，载体pGMP 还含有绿色荧光蛋白基因作为辅助检测标记。
连续培养和继代培养测定，这两种载体在荧光假单胞菌中的稳定性均为100%（120h ）。
关键词：绿色荧光蛋白基因；荧光假单胞菌；启动子；穿梭表达载体Construction of Stable Shuttle Expression Vectors pQMV and pGMPHU Yu-Qin 1ZHANG Jie 1SONG Fu-Ping 1SHU Chang-Long 1HUANG Da-Fang 2**(1.State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests,Institute of Plant Protection,Chinese Academyof Agricultural Sciences,Beijing 100094,China;2.Biotechnology Research Institute ,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081,China)The replicon ofplasmid DNA from pUCP19,and a new strong promoter P P 303,cloned fromP303strain,were inserted into plasmid pET-29a,a high level expression vector of.The recombinantshuttle expression plasmid pQMV(4.6kb)and pGMP(5.6kb)were obtained respectively.The vector pGMP containinggene wasespecially available for detection and monitoring.The stability of the two expression vectors were 100%(120h)in P303strain of.Both recombinant vectors will be powerful for research on gene expression,regulation and construction ofengineered strains of.green fluorescence protein gene ();;promoter;shuttle expression vector假单胞菌()是微生物的重要类群，具有很大的开发应用潜力。
天根质粒小提中量试剂盒说明书
天根质粒⼩提中量试剂盒说明书Order: 010-********Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号: DP140918产品内容产品组成 DP106-02 (50 preps)平衡液BL (Buffer BL) 30 ml溶液P1 (Buffer P1) 30 ml溶液P2 (Buffer P2) 30 ml溶液P3 (Buffer P3) 40 ml去蛋⽩液PD (Buffer PD) 30 ml漂洗液PW (Buffer PW) 15 ml洗脱缓冲液EB (Buffer EB) 15 mlRNase A (10 mg/ml) 300 µl吸附柱CP4 (Spin Columns CP4) 50个收集管(2 ml) (Collection Tubes 2 ml) 50个储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)⼲燥条件下，可保存12个⽉，更长时间的保存可置于2-8℃。
2-8℃保存条件下，若溶液产⽣沉淀，使⽤前应将试剂盒内的溶液在室温放置⼀段时间，必要时可在37℃⽔浴中预热10 min ，以溶解沉淀。
第⼀次使⽤前将RNase A 加⼊溶液P1中，混匀后置于2-8℃保存，可稳定保存12个⽉以上。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个⽉以上。
TIANprep Mini Plasmid Kit II质粒⼩提中量试剂盒（离⼼柱型）⽬录号：DP106本试剂盒采⽤碱裂解法裂解细胞，通过离⼼吸附柱在⾼盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。
离⼼吸附柱中采⽤的硅基质材料为本公司特有新型材料，⾼效、专⼀吸附DNA，可最⼤限度去除杂质蛋⽩及细胞中其他有机化合物。
以下操作步骤适⽤于提取5-15 ml过夜培养的⼤肠杆菌，质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗⽣素等因素有关。
BD载体连接说明书
BD载体连接说明书
1、克隆PCR产物。
2、通过多克隆区域两侧的T7和SP6 RNA聚合酶启动子进行体外转录。
3、产生ssDNA。
4、通过蓝、白菌落筛选重组体。
5、多克隆区域提供选择克隆的酶切位点。
A.连接：
在0.2ml或0.5ml反应管中加入下列成分pGEM-T。
50ng纯化的PCR产物。
10-50ng T4连接酶。
2-3weiss units。
10x连接缓冲液。
1μl补超纯水至总体积为10ul，可以16℃或4℃过夜。
B.转化：
1、将50l感受态细胞JM109或DH5a于冰浴上解冻。
2、将5ul连接产物与感受态细胞混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热休克90秒，立即冰浴3～5分钟。
4、加入400l预冷的LB液体培养基，37℃轻摇培养45-60分钟。
5、取200l在LB固体培养基（+Amp/IPTG/X-Gal）上铺板，自然干燥5-10分钟，37℃倒置培养过夜。
C.鉴定：
经12-16小时培养后，培养皿上生长着许多白色和蓝色菌落，蓝色菌落只含有载体，而白色菌落为DNA重组子（载体+插入片段）。
可通过PCR、限制性酶切或测序进一步鉴定阳性克隆。
注：具有3'→5'外切核酸酶活性的高保真DNA聚合酶如Pfu，Vent 聚合酶不能用于T-A克隆。
整理慢病毒稳转细胞株步骤
整理慢病毒稳转细胞株步骤竹密岂妨流水过蛮鬼2021. 3山高哪碍野云飞稳转慢病毒一、所需试剂1、慢病毒载体（详细信息见附录及《质粒的扩增提取》）（大肠杆菌-80°C保存2-3 年，质粒-20°C保存2-3年，病毒液-80°C保存1年）（1）载体质粒：两端的LTR、剪切位点、包装信号屮以及抗性或荧光基因、gag基因5’端350bp的序列及位丁,nv序列中的RRE,含宿主RNA聚合酶识别部分（2）包装质粒（psPAX2）:包含了 pol、gag包装成分（3）包膜质粒（pMD2.G）：用其他病毒的包膜蛋白代替了 env基因.三种质粒共同转染产生不具有口我复制能力的病毒载体。
2、包装细胞：293T细胞3、菌株：大肠杆菌，用于提取质粒4、转染试剂：XTREME-GENE （-20°C保存，不可分装），一种脂质与其他组份构成的混合物5、浓缩试剂（配好后4°C保存，原材料室温保存）：5X PEG8000/NaCl溶液（聚乙二醇）：NaCl 8. 766 g; PEG8000 50g溶解在200ml Milli-Q纯水中，高圧蒸汽灭菌**也可直接从公司买來病毒液（-80°C封口膜封口冻存管保存，4°C保存3夭）：滴度一般为 108TU/ml6x 10mg/ml polybrene （-20°C分装保存）:漠化己二甲鞍。
是带正电的小分子,与细胞表面的阴离子结合，提高慢病毒对细胞的感染效率，通常加入polybrene能提高感染效率2〜10倍。
有一定细胞毒性，需要摸索浓度（l-10Ug/ml） 7、无血清培养基： optimen8、贴壁细胞（复苏后3代以上的细胞）9、puromycin：卩票吟霉索,用于筛选稳转细胞二、具体步骤病毒包装与收集（中皿，转染步骤类似于瞬转）第一天1、种板，10X105个293T细胞，加入全培养基双抗DMEM 4-5ml,过夜2、配制5XPEG8000/NaCl 溶液称取 NaCl 8. 766 g; PEG8000 50g 溶解在 200ml Milli-Q 纯水中；121 摄氏度 30min 湿热灭绝30min：保存在4°C第二夭1、配管 A 管试剂 PLKO. 1/pCDH psPAX2 pMD2. G Opti B 管 XTREME-GENE Opti 加样＞/ul 推荐量/ul、Pg合计3 1 2 200 6 200 206 206 A+B混合室温静置20min 2、加入2ml全培养基DMEM3、将1加入2,孵育10h,换成5ml全培养基1/5 （稳转）竹密岂妨流水过蛮鬼2021. 3山高哪碍野云飞第四天第五夭：1、9:00和17:00各收取一次5ml培养液，共20ml （-80°C保存）2、过滤：用孔径为0. 45mm的过滤器除去上清中的293T细胞3、加入5ml 5XPEG8000/NaCl溶液,每 30min-lh上下摇匀一次4、4°C过夜第六夭1、4°C, 3500rpm» 20min2、弃上清，倒扣纸上静置l-2min,吸干残余液体3、加入120-150 P 1 PBS,缓慢吹打，以防形成气溶胶4、50U1分装，-80°C保存。
载体构建步骤
一．载体酶切线性化（TOYOBO EcoR I）1.载体pCDNA浓度0.8 ug/ul2.酶切体系（总50ul体系）pCDNA 3ul10*H Buffer 5ulddH2O 41ulEcoR I 1ul（8U/ul）3.反应条件37°C 1h 至多2h*已经试过37°C过夜，本以为会酶切充分，但是不想把条带全切成小片段了，而且电泳后是一条宽宽的泳谱*另外，多次酶切证实，所加的酶量过多在酶切一小时的情况下仍然会出现酶切过度的情况，尽可能按照说明书上的量和时间做二．取2ul稀释成5ul于1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定有无条带及大小用大凝胶回收pcDNA（按2.5：1加入SYBR Green）电泳30min准备两支EPPendorf管，调60°C水浴锅切胶称重（1.5ml EPPendorf管重约0.82g）三．OMEGA gel purification kit回收pcDNA1.平衡柱子加200ulBuffer GPS到DNA收集柱中，静置4min，12000xg*2min，加700ulDEPC处理H2O，12000xg*2min2.溶胶按1ml/kg的比例加Binding Buffer到凝胶中3.60°C水浴7mins，迅速转移至DNA收集柱中（至多700ul，超过的再转移一次），10000xg*1min，弃收集管中的液体4.加300ulBinding Buffer，10000xg*1min，弃收集管中的液体5.加700ulwash Buffer，10000xg*1min，弃收集管中的液体6.加350ulwash Buffer，10000xg*1min，弃收集管中的液体7.最大转速（>13000rpm）空转2min，弃收集管8.转移收集柱至1.5mlEPPendorf管，打开盖子静置2min9.加30ulElution Buffer静置2min，最大转速1.5min，弃收集柱10.取2ul稀释成5ul点胶*所加Elution Buffer的量是根据所纯化的产物的量来判断的，如果回收产物较多可以增加其量至50ul*纯化的理论效率为70%，如果先加一次Elution Buffer 20ul，静置2min，1000xg*1min,然后再加一次Elution Buffer20ul，静置离心。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
pBMTB-3编号载体名称北京华越洋VECT75144pBMTB-3pBMTB-3载体基本信息：载体名称:pBMTB-3质粒类型:广宿主载体；克隆载体；原核表达载体高拷贝/低拷贝:--克隆方法:限制性内切酶，多克隆位点启动子:araBAD载体大小:4831bp5'测序引物及序列:--3'测序引物及序列:--载体标签:--载体抗性:氯霉素克隆菌株:DH5α等宿主细胞（系）:多个菌属备注:--组成型/诱导型:诱导型pBMTB-3载体质粒图谱和多克隆位点信息：pBMTB-3载体序列：ORIGIN1aacgaattca agcttgatat cattcaggac gagcctcaga ctccagcgta actggactga 61aaacaaacta aagcgccctt gtggcgcttt agttttgttc cgctcatgat aataatggtt 121tcttagacgt caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg cccgcgttcc tgctggcgct 181gggcctgttt ctggcgctgg acttcccgct gttccgtcag cagcttttcg cccacggcct 241tgatgatcgc ggcggccttg gcctgcatat cccgattcaa cggccccagg gcgtccagaa 301cgggcttcag gcgctcccga aggtctcggg ccgtctcttg ggcttgatcg gccttcttgc 361gcatctcacg cgctcctgcg gcggcctgta gggcaggctc atacccctgc cgaaccgctt 421ttgtcagccg gtcggccacg gcttccggcg tctcaacgcg ctttgagatt cccagctttt 481cggccaatcc ctgcggtgca taggcgcgtg gctcgaccgc ttgcgggctg atggtgacgt 541ggcccactgg tggccgctcc agggcctcgt agaacgcctg aatgcgcgtg tgacgtgcct 601tgctgccctc gatgccccgt tgcagcccta gatcggccac agcggccgca aacgtggtct 661ggtcgcgggt catctgcgct ttgttgccga tgaactcctt ggccgacagc ctgccgtcct 721gcgtcagcgg caccacgaac gcggtcatgt gcgggctggt ttcgtcacgg tggatgctgg 781ccgtcacgat gcgatccgcc ccgtacttgt ccgccagcca cttgtgcgcc ttctcgaaga 841acgccgcctg ctgttcttgg ctggccgact tccaccattc cgggctggcc gtcatgacgt 901actcgaccgc caacacagcg tccttgcgcc gcttctctgg cagcaactcg cgcagtcggc 961ccatcgcttc atcggtgctg ctggccgccc agtgctcgtt ctctggcgtc ctgctggcgt 1021cagcgttggg cgtctcgcgc tcgcggtagg cgtgcttgag actggccgcc acgttgccca1081ttttcgccag cttcttgcat cgcatgatcg cgtatgccgc catgcctgcc cctccctttt 1141ggtgtccaac cggctcgacg ggggcagcgc aaggcggtgc ctccggcggg ccactcaatg 1201cttgagtata ctcactagac tttgcttcgc aaagtcgtga ccgcctacgg cggctgcggc 1261gccctacggg cttgctctcc gggcttcgcc ctgcgcggtc gctgcgctcc cttgccagcc 1321cgtggatatg tggacgatgg ccgcgagcgg ccaccggctg gctcgcttcg ctcggcccgt 1381ggacaaccct gctggacaag ctgatggaca ggctgcgcct gcccacgagc ttgaccacag 1441ggattgccca ccggctaccc agccttcgac cacataccca ccggctccaa ctgcgcggcc 1501tgcggccttg ccccatcaat ttttttaatt ttctctgggg aaaagcctcc ggcctgcggc 1561ctgcgcgctt cgcttgccgg ttggacacca agtggaaggc gggtcaaggc tcgcgcagcg 1621accgcgcagc ggcttggcct tgacgcgcct ggaacgaccc aagcctatgc gagtgggggc 1681agtcgaaggc gaagcccgcc cgcctgcccc ccgagcctca cggcggcgag tgcgggggtt 1741ccaagggggc agcgccacct tgggcaaggc cgaaggccgc gcagtcgatc aacaagcccc 1801ggaggggcca ctttttgccg gagggggagc cgcgccgaag gcgtggggga accccgcagg 1861ggtgcccttc tttgggcacc aaagaactag atatagggcg aaatgcgaaa gacttaaaaa 1921tcaacaactt aaaaaagggg ggtacgcaac agctcattgc ggcacccccc gcaatagctc 1981attgcgtagg ttaaagaaaa tctgtaattg actgccactt ttacgcaacg cataattgtt 2041gtcgcgctgc cgaaaagttg cagctgattg cgcatggtgc cgcaaccgtg cggcacccta 2101ccgcatggag ataagcatgg ccacgcagtc cagagaaatc ggcattcaag ccaagaacaa 2161gcccggtcac tgggtgcaaa cggaacgcaa agcgcatgag gcgtgggccg ggcttattgc 2221gaggaaaccc acggcggcaa tgctgctgca tcacctcgtg gcgcagatgg gccaccagaa 2281cgccgtggtg gtcagccaga agacactttc caagctcatc ggacgttctt tgcggacggt 2341ccaatacgca gtcaaggact tggtggccga gcgctggatc tccgtcgtga agctcaacgg 2401ccccggcacc gtgtcggcct acgtggtcaa tgaccgcgtg gcgtggggcc agccccgcga 2461ccagttgcgc ctgtcggtgt tcagtgccgc cgtggtggtt gatcacgacg accaggacga 2521atcgctgttg gggcatggcg acctgcgccg catcccgacc ctgtatccgg gcgagcagca 2581actaccgacc ggccccggcg aggagccgcc cagccagccc ggcattccgg gcatggaacc 2641agacctgcca gccttgaccg aaacggagga atgggaacgg cgcgggcagc agcgcctgcc 2701gatgcccgat gagccgtgtt ttctggacga tggcgagccg ttggagccgc cgacacgggt 2761cacgctgccg cgccggtagt acgtaagagg ttccaacttt caccataatg aaataagatc 2821actaccgggc gtattttttg agttatcgag attttcagga gctaaggaag ctaaaatgga 2881gaaaaaaatc actggatata ccaccgttga tatatcccaa tggcatcgta aagaacattt 2941tgaggcattt cagtcagttg ctcaatgtac ctataaccag accgttcagc tggatattac 3001ggccttttta aagaccgtaa agaaaaataa gcacaagttt tatccggcct ttattcacat 3061tcttgcccgc ctgatgaatg ctcatccgga attccgtatg gcaatgaaag acggtgagct 3121ggtgatatgg gatagtgttc acccttgtta caccgttttc catgagcaaa ctgaaacgtt 3181ttcatcgctc tggagtgaat accacgacga tttccggcag tttctacaca tatattcgca 3241agatgtggcg tgttacggtg aaaacctggc ctatttccct aaagggttta ttgagaatat 3301gtttttcgtc tcagccaatc cctgggtgag tttcaccagt tttgatttaa acgtggccaa 3361tatggacaac ttcttcgccc ccgttttcac catgggcaaa tattatacgc aaggcgacaa 3421ggtgctgatg ccgctggcga ttcaggttca tcatgccgtt tgtgatggct tccatgtcgg 3481cagaatgctt aatgaattac aacagtactg cgatgagtgg cagggcgggg cgtaaacgcg 3541tggatccccc tcaagtcaaa agcctccggt cggaggcttt tgactttctg ctatggaggt 3601caggtatgat ttttatgaca acttgacggc tacatcattc actttttctt cacaaccggc 3661acggaactcg ctcgggctgg ccccggtgca ttttttaaat acccgcgaga aatagagttg3721atcgtcaaaa ccaacattgc gaccgacggt ggcgataggc atccgggtgg tgctcaaaag 3781cagcttcgcc tggctgatac gttggtcctc gcgccagctt aagacgctaa tccctaactg 3841ctggcggaaa agatgtgaca gacgcgacgg cgacaagcaa acatgctgtg cgacgctggc 3901gatatcaaaa ttgctgtctg ccaggtgatc gctgatgtac tgacaagcct cgcgtacccg 3961attatccatc ggtggatgga gcgactcgtt aatcgcttcc atgcgccgca gtaacaattg 4021ctcaagcaga tttatcgcca gcagctccga atagcgccct tccccttgcc cggcgttaat 4081gatttgccca aacaggtcgc tgaaatgcgg ctggtgcgct tcatccgggc gaaagaaccc 4141cgtattggca aatattgacg gccagttaag ccattcatgc cagtaggcgc gcggacgaaa 4201gtaaacccac tggtgatacc attcgcgagc ctccggatga cgaccgtagt gatgaatctc 4261tcctggcggg aacagcaaaa tatcacccgg tcggcaaaca aattctcgtc cctgattttt 4321caccaccccc tgaccgcgaa tggtgagatt gagaatataa cctttcattc ccagcggtcg 4381gtcgataaaa aaatcgagat aaccgttggc ctcaatcggc gttaaacccg ccaccagatg 4441ggcattaaac gagtatcccg gcagcagggg atcattttgc gcttcagcca tacttttcat 4501actcccgcca ttcagagaag aaaccaattg tccatattgc atcagacatt gccgtcactg 4561cgtcttttac tggctcttct cgctaaccaa accggtaacc ccgcttatta aaagcattct 4621gtaacaaagc gggaccaaag ccatgacaaa aacgcgtaac aaaagtgtct ataatcacgg 4681cagaaaagtc cacattgatt atttgcacgg cgtcacactt tgctatgcca tagcattttt 4741atccataaga ttagcggatc ctacctgacg ctttttatcg caactctcta ctgtttctcc 4801atacccgttt ttttgggcta gagaattcgt c//pBMTB-3其他相关广宿主载体：pMHE3Tc pCS2+8pCSDest pSPORT2pMHE5Tc pMHE7Tc pMHE7pMHE6pMHE5pMHE3pMHE2pBBR1MCS-6pBBR1-GFP pBMTB-5pBMTB-4pBMTB-3pBMTB-2pBMTB-1pBTL-5pBTL-4pBTL-3pBTL-2pBTL-1pBTB-5pBTB-4pBTB-3pBTB-2pBTB-1pBT-5pBMT-5pBMT-4pBMT-3pBMT-2pBMT-1pBT-4pBT-2pBT-3pBT-1pCS2+MT pCS2+8CmCherrypCS2+8CeGFP pMMB207pCS22+pCS2+pCS2-pCS111pCS108pCS107pBBR1MCS pBBR1MCS-5pBBR1MCS-4pBBR1MCS-3pBBR1MCS-2。