分子荧光法测定药片中B2的含量
分子荧光光度法测定维B药片中维生素B2的含量
分子荧光光度法测定维B药片中维生素B2的含量1实验目的1.1了解荧光光度法的基本原理；1.2 掌握荧光光度仪的使用方法并熟悉其构造；2实验原理维生素B2又称核黄素，溶于水，在偏酸性缓冲溶液中是一种强荧光物质，在碱性溶液中较易被破坏。
维B2在缓冲溶液中具有很强的荧光效应，其激发波长和发射波长分别为445nm和525nm。
根据维B2的荧光强度与其浓度成正比，可以测定药品中维B2的含量。
3 仪器与试剂LS-55型荧光光度仪4实验步骤4.1标准溶液的配置：标准系列溶液用的是前一组同学刚做好的一组标准4.2缓冲溶液的配置：量取12.5ml冰醋酸放入500ml容量瓶中，称取24.4g 醋酸钠溶解，转移到装有冰醋酸的500ml的容量瓶中，用蒸馏水定容，得到500mlpH约为4.6的缓冲溶液，待用4.3样品处理：去10片左右复合维生素B片，用研钵研成粉末，准确称取粉末约两份，分别放入两个干净的并编号的小烧杯中，用已经配好的缓冲溶液进行溶解，再分别转移到50ml的容量瓶中，做好标记，用缓冲溶液进行定容。
同时做好样品空白，标记好。
样品溶液的稀释：将两个样品和一个样品空白进行稀释，将每个都稀释500倍，待用。
4.4标准曲线的绘制：分别用标准溶液润洗比色皿，再将标准系列溶液分别进行测定，得出标准工作曲线，记录数据，并处理。
4.5样品的测定：分别用稀释后的样品溶液润洗比色皿，再分别进行测定，进行数据记录，并处理。
4.6数据记录：激发波长为445nm ，发射波长为525nm标准系列核黄素浓度/(μgml-1)0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 信号值1.138 70.401 137.754 198.289 268.744 360.905样品测定数据记录样品1 质量为0.400g 样品2 质量为 0.230g由此计算出样品1中维B2含量6.06mg 百分含量=1.52%样品2中维B2含量2.67mg 百分含量=1.16%计算示例样品1 含量={ [170+（3.358+2.595+2.483）/3-5.213]+2.442}/701.2·500·50ug =6.06mg总结分析本次试验同样药品测出的结果，可以发现样品1 、2的含量并不相同。
维生素B2含量的测定(荧光)
维生素B2含量的测定一、实验目的：学习分子荧光产生的原理；利用荧光分光光度计绘制荧光激发与发射光谱图；学会判断谱图中各种峰的类型的方法。
二、实验原理：分子吸收短波长（高能量）的光后，能量释放以光的形式出现，而发射较激发光波长更长的荧光。
三、实验内容：1.维生素B2荧光激发光谱与发射光谱的绘制；打开软件并打开Edit窗口，根据实验目的设置测定参数。
例如：绘制发射光谱，设定激发波长为377nm（或者454nm），发射波长范围400～700nm。
绘制激发光谱可设定发射波长为527nm，激发波长范围为200～500nm。
根据图形，确定激发光谱和发射光谱荧光峰的位置。
2.维生素B2系列标准溶液的配制；分别取0.1000g/L标准溶液0.2 、0.4 、0.6 、0.8 、1.0ml定量转移至25ml 容量瓶中，用去离子水稀释至25ml。
3.在选定激发波长（λ1）下测量系列标准溶液的荧光发射光谱，测定在选定波长（λ2）下的荧光强度并绘制标准工作曲线；4.维生素B2片的处理：取维生素B2片（约0.065g）一片，用玻璃棒捣碎后定量转移至250ml容量瓶中，然后取5.00ml溶液稀释至25.00ml，在选定激发波长（λ1）下测量待测溶液的荧光发射光谱，测定在选定波长下（λ2）的荧光强度并计算维生素B2的浓度（g/L）；5.根据以上数据，求出维生素B2的含量（以百分比浓度表示x％）。
四、注意事项：1.绘制标准工作曲线与待测溶液所选定的波长λ1/λ2应一致；2.能正确识别荧光光谱中的干扰峰（拉曼光等）五、思考题1. 为何荧光分析的灵敏度通常比紫外可见吸收光谱的灵敏度高2～4个数量级？2. 具有哪些结构的分子通常具有较高的荧光量子产率？。
维生素B2的含量测定
2.样品溶液制备 2.样品溶液制备 称取50g新鲜蔬菜， 40mL水压汁， 称取50g新鲜蔬菜，加40mL水压汁，将菜 50g新鲜蔬菜 水压汁 汁加入20mL1mol.L HCl和10mL水煮沸1h， 水煮沸1h 汁加入20mL1mol.L-1HCl和10mL水煮沸1h， 冷却，不断搅拌滴加2mol.L NaOH， 冷却，不断搅拌滴加2mol.L-1NaOH，调节 pH为 再用稀HCl调节pH 4.5，过滤， HCl调节pH至 pH为6，再用稀HCl调节pH至4.5，过滤，用 水洗涤样品， 水洗涤样品，洗涤液和过滤液合并定量转移 至100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。 100mL容量瓶中，加水稀释至刻度 容量瓶中
维生素B 维生素B2的分子荧光测定 一、目的要求
１、了解分子荧光分析法的原理。 了解分子荧光分析法的原理。 掌握用荧光法测定维生素的分析方法。 ２、掌握用荧光法测定维生素的分析方法。 掌握荧光光度计的基本操作方法。 ３、掌握荧光光度计,在W为0.05的乙酸溶 0.05的乙酸溶 维生素B 又称核黄素,溶于水, 液中是一个强荧光物质，在中性和酸性溶液中， 液中是一个强荧光物质，在中性和酸性溶液中，对热稳 在碱性溶液中较易被破坏。 定，在碱性溶液中较易被破坏。通过实验确定它的最佳 激发波长（370nm和440nm）和发射波长（560nm）， 激发波长（370nm和440nm）和发射波长（560nm）， 在所确定的波长条件下，测定维生素B2 B2标准系列溶液 在所确定的波长条件下，测定维生素B2标准系列溶液 的荧光强度和浓度的工作曲线。 的荧光强度和浓度的工作曲线。用标准曲线法测定生物 样品（蔬菜）中的维生素B 含量。 样品（蔬菜）中的维生素B2含量。
3.工作曲线绘制 3.工作曲线绘制 取标准系列溶液之一，试验实验条件， 取标准系列溶液之一，试验实验条件，找 出最佳荧光发射波长。在所确定的波长条件 出最佳荧光发射波长。 下测定标准系列溶液的荧光强度， 下测定标准系列溶液的荧光强度，绘制荧光 强度与浓度的工作曲线。 强度与浓度的工作曲线。 4.测定 4.测定 分别吸取10.00mL样品溶液三份， 10.00mL样品溶液三份 分别吸取10.00mL样品溶液三份，依次置 于三只25.00mL容量瓶中，加入1.25mL冰醋 于三只25.00mL容量瓶中，加入1.25mL冰醋 25.00mL容量瓶中 1.25mL 再加入KMnO 溶液(3%)0.5mL (3%)0.5mL， 酸，再加入KMnO4溶液(3%)0.5mL，放置 2min，边摇边滴H (30%)， 2min，边摇边滴H2O2(30%)，使KMnO4刚 好褪色，用纯水稀释至刻度， 好褪色，用纯水稀释至刻度，在荧光光度计 上分别测定其荧光强
荧光分光光度法测定维生素B2含量
一、实验目的1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2、了解荧光分光光度计基本原理、结构及性能，掌握基本操作。
二、实验原理维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。
其分子式为：C17H20N4O6，分子量：376.4。
VB2分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。
VB2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
VB2溶液在430～440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。
VB2在pH＝6～7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与VB2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测VB2的含量。
VB2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比VB2的荧光强得多，故测VB2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，当实验条件一定时，荧光强度F与荧光物质浓度c 呈线性关系：F=Kc，这是荧光光谱法定量分析的依据。
注意：高浓度时，荧光物质发生熄灭和自吸收现象，使F与c不呈线性关系。
三、主要仪器与试剂主要仪器：荧光分光光度计；1cm石英皿；25mL比色管；1mL、5mL移液管试剂：VB2标准溶液5.0μg/mL；待测样品溶液四、实验步骤1、系列标准溶液的制备取VB2标准溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL 分别置于25mL比色管中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
得浓度依次为0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.30μg/mL、0.40μg/mL、0.50μg/mL 的一系列VB2标准溶液。
待测。
2、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置λem＝540nm为发射波长，在250～500nm范围内扫描，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。
从激发光谱图上可找出其最大激发波长λex。
从得到的激发光谱中找出最大激发波长，在此激发波长下，在450～700nm范围内扫描，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。
荧光分光光度法测定维生素B2
S1
S2 T1
S0 吸光1 吸光2 荧光3
荧光、磷光 能级图
固定第二片滤光片λ（nm）： 第一片滤光片 （兰字）λ（nm） Fs F0 Fs-F0
第二片滤光片λ 420 （nm） Fs F0 Fs-F0
360
400
480
530
固定第一片滤光片λ（nm）： 450 470 510 550 600
实验内容
• 1. 标准曲线的制作 • 维生素B2系列标准液的配制：操作规范 • 灵敏度选择：（旧仪器统一选10，新仪器 选4） • 滤光片的选择：Fs-F0最大 • 标准曲线的绘制： c 对 Fs- F0作图，线性 • 2. 样品含量的测定 • 样品溶液的制备（称量，定容，样品处理， 最后定容） • 管的全称是“分度吸量管”，它 是带有分度的量出式量器（带刻度的 移液管。
• 吸量管的使用方法与移液管大致相同。
实验注意事项
基本操作要规范： 吸量管的使用，溶液转移，定容 试剂取后，得放回原处 保持试验台整洁
实验报告格式
1、实验目的（简单） 2、实验原理（详细） 3、试剂仪器（简单） 4、实验步骤（简单） 5、数据处理（详细，表格，图） 6、结果讨论（重点） ①、回答思考题的问题 ②、讨论引入误差的原因 ③、实验操作中的注意事项及减小误差的方法
标准曲线法
荧光强度 vs.浓度标准曲线
荧光强度
样本
核黄素浓度
Fs- F0最大
最大的激发波长 最大的发射波长
激发 滤光片 发射滤光片
荧光发射 处于第一激发单重态 中的电子跃回至基态各振动 能级时，将得到最大波长为 λ 3的荧光。很明显，λ 3的 波长较激发波长λ 1或λ 2都 长，而且不论电子开始被激 发至什么高能级，最终将只 发射出波长λ 3为的荧光。 荧光的产生在10-7-10-9s内 完成。
荧光法测定维生素B2的含量
荧光法测定维生素B2的含量一、实验目的1．掌握荧光法测定维生素B 2 的方法。
2．学习荧光分析法的基本原理和实验操作技术。
二、实验原理多数分子在常温下处在基态最低振动能级，产生荧光的原因是荧光物质的分子吸收了特征频率的光能后，由基态跃迁至较高能级的第一电子激发态或第二电子激发态，处于激发态的分子，通过无辐射去活，将多余的能量转移给其他分子或激发态分子内振动或转动能级后，回至第一激发态的最低振动能级，然后再以发射辐射的形式去活，跃迁回至基态各振动能级，发射出荧光。
荧光是物质吸收光的能量后产生的，因此任何荧光物质都具有两种光谱：激发光谱和发射光谱。
维生素B 2，也称核黄素，溶于水，为维生素类药物。
参与体内生物氧化作用。
其分子结构式如下：37.376462017 N O H C M维生素B 2 本身为黄色，由于分子结构上具有异咯嗪结构，在430~440nm 蓝光或紫外光照射下会产生黄绿色的荧光。
荧光峰在535nm, 在pH6~7的溶液中荧光强度最大，在pH11的碱性溶液中荧光消失。
其它如维生素C 在水溶液中不发荧光，维生素B 1本身无荧光，维生素D 用二氯乙酸处理后才有荧光，因而它们都不干扰维生素B 2的测定。
维生素B 2在一定波长光照射下产生荧光，在稀溶液中，其荧光强度与浓度成正比，因而可采用标准曲线法测定维生素B 2的含量。
三、仪器与试剂930型荧光光度计。
维生素B 2标准溶液(10mg ／L)：准确称取10rng 维生素B2溶于热蒸馏水中, 冷却, 转移至1000mL 容量瓶中, 加蒸馏水定容, 摇匀, 置暗处保存。
冰醋酸 (A.R);维生素B 2片。
四、实验步骤1．维生素B 2标准溶液的配制移取维生素B 2标准溶液 (10mg/L) 0.00、1.00、2.00、3.00、4.00及5.00mL 分别置于50mL 容量瓶中，加入冰醋酸2mL, 加水至刻度，摇匀，待测。
2．样品溶液的制备取维生素B 210片，研细。
荧光分光光度法测定维生素 B2的含量
荧光分光光度法测定维生素 B2的含量维生素B2（核黄素）是一种黄色的水溶性维生素，参与人体多种代谢过程，如能量代谢、蛋白质合成及细胞呼吸等。
因此，对维生素B2的含量进行精确测量至关重要。
本文将介绍一种常用的荧光分光光度法测定维生素B2含量的方法。
一、测定原理荧光分光光度法是一种基于物质吸收光谱和荧光光谱的仪器分析法，它利用物质在受激光或外界光源激发下，发生荧光的特性来测定物质的含量。
维生素B2在紫外光530.0nm 处吸收，同时能在pH8.0的碳酸氢钠缓冲溶液中产生荧光。
因此，荧光分光光度法可以通过测定维生素B2产生的荧光强度来计算其含量。
二、测定步骤1.准备样品将要测定的维生素B2溶于50mL的碳酸氢钠缓冲液中，并将其均匀混合。
用已知浓度的维生素B2标准品分别配制成不同浓度的标准溶液，用于绘制标准曲线。
2.测定荧光光谱取适量的样品及标准溶液分别装入荧光分光光度计的比色皿中，然后在含有Excitation (Ex)波长为450.0nm、Emission (Em)波长为530.0nm的荧光滤光片下进行测量。
将标样及待测样荧光强度值分别记录下来。
3.制定标准曲线将已知浓度的维生素B2标准溶液按照步骤2测定，绘制标准曲线，根据数据进行回归分析，得出求出待测样品浓度的公式。
4.检测待测样品按照步骤2进行待测样品的测定，利用标准曲线计算出待测样品中维生素B2的含量。
三、测定注意点1.样品配制时要保持一定浓度，过高或过低都会影响分析结果；2.样品制备、实验条件及荧光光度计的使用必须保证一致性；3.测量结果可受色、浑浊等因素影响，需要有一定的操作经验、严守操作规程。
四、结论本文介绍了荧光分光光度法测定维生素B2含量的方法，并简要说明了测定原理及详细的操作步骤。
此种方法具有测量简便、操作方便、灵敏度高等优点，被广泛应用于维生素B2含量的测量。
荧光分光光度法测定维生素B2的含量
华南师范大学实验报告课程名称：仪器分析实验实验项目：荧光分光光度法测定维生素B2的含量荧光分光光度法测定维生素B2的含量一、实验目的1．掌握荧光物质的标准曲线法定量测量含量的操作方法和原理；2．了解分子荧光光谱定量分析与定性分析的特点及区别；3．熟悉荧光光度计定量法测量软件的数据处理。
二、实验原理含有荧光基团的化学物质，其分子吸收了辐射能成为激发态分子，再从激发态返回基态时发射光的波长比吸收的入射光波长更长，分子荧光就是发光方式中较常见的光致发光。
在一定频率和一定强度的激发光照射下，当溶液的浓度很小同时光被吸收的分数也不太大时，稀溶液体系将符合朗伯-比尔定律，该溶液所产生的荧光强度与溶液中这种荧光物质的浓度呈线性关系，可用公式表示：I F=2.3K'kbcI0当入射光强度I0一定时 I F=Kc以上两式中 K'为荧光量子效率； K为荧光分子的摩尔吸光系数；b为液槽厚度；c以为荧光物质的浓度。
分子荧光标准曲线法是取一定已知量的标准物质与待分析试样溶液经过相同的处理后，配制成一系列的标准溶液，测定其荧光强度，并以荧光强度为纵坐标，以标准溶液浓度为横坐标绘制其工作曲线，再由所测获的试样溶液的荧光强度对工作曲线作图从而求出试样溶液中该被分析检测物质的实际浓度含量。
此法适用于痕量分析，并且标准溶液和试样溶液的荧光强度必须是在荧光仪已扣除空白溶液的荧光强度的读数。
维生素B2，又称核黄素。
分子式C17H20N4O6。
它是人体必需的13种维生素之一，作为维生素B族的成员之一，微溶于水，可溶于氯化钠溶液，易溶于稀的氢氧化钠溶液。
可以用荧光光度法测维生素B2的含量的原因:维生素B2溶液在430～440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535 nm。
维生素B2在pH=6～7的溶液中荧光强度最大，在pH=11的碱性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素B2的含量。
该实验的控制条件:维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
荧光光度法—核黄素药片含量测定
荧光分析法测定维生素B2药片含量目的与要求1.掌握荧光分析法测定维生素B2含量的原理及方法。
2.熟悉荧光分光光度计的结构和使用方法。
原理维生素B2（即核黄素）的溶液在430~440nm蓝光照射下，会发黄绿色荧光，荧光峰值波长为535nm。
在pH6~7的溶液中荧光最强，在pH>11时荧光消失。
醋酸溶液中荧光强度将会增强。
其它条件一定时，维生素B2的稀溶液（0.5~5μg/ml）的荧光强度与荧光物质的浓度成正比。
本实验采用标准曲线法。
利用维生素B2可被还原剂（连二亚硫酸钠）还原为非荧光性物质，通过测定加还原剂前后样品液的荧光强度，来消除可能的样品基体干扰，基于上述原理来测定药片的维生素B2含量。
仪器与试剂1.仪器荧光分光光度计，样品池（石英），10ml刻度吸管，10ml具塞比色管2.试剂维生素B2贮备液（100μg/ml）避光操作，精确称取100mg维生素B2(生物试剂，避光干燥保存)置于250ml烧杯中加冰醋酸10ml及蒸馏水90ml在水浴上加热溶解后，放冷，转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中放暗处保存。
维生素B2标准应用液（1.0μg/ml）实验当天用移液管准确吸取标准贮备液5.0ml于500ml棕色容量瓶中，用1%醋酸溶液稀释至刻度，摇匀。
1%醋酸溶液取1ml冰醋酸用去离子水稀释至100ml。
连二亚硫酸钠（AR，保险粉）操作步骤1.样品药液制备1）取核黄素药片10片，研细，称出适量（约相当于维生素B210mg）置于250ml烧瓶中加冰醋酸10ml，加蒸馏水90ml，置水浴上加热约1小时，并时时振摇使其溶解澄清后放冷，转入1000ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，移入棕色瓶中避光保存。
该样品药液含维生素B2 10μg/ml。
2）用移液管准确吸取维生素B2药液10ml于100ml容量瓶中，用1%醋酸液稀释至刻度，摇匀，取此溶液10ml于比色管中，按与标准系列同样步骤测定此溶液的荧光强度。
实验二 荧光法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量
Cx ( ug/ml) 25 ( ml ) 500( ml ) V ( ml )
六、注意事项
操作应该在避光的条件下进行。
样品池轻拿轻放，垂直放入，小心使用。
不要关闭电脑上的荧光仪联机软件。
七、结果记录
根据测定的样品相对荧光强度ΔF＝F－F0，从标准曲线上 查出样品溶液对应的维生素B2的浓度Cx，并计算维生素B2 片中B2的含量，计算公式如下：
维生素 B 2的 含 量 ( ug )
注：F0为空白溶液的荧光强度。
三、仪器及试剂
棱光F96荧光分光光度计，石英样品池（四面透 光），25 ml比色管，一次性吸管，500 ml容量瓶， 漏斗，滤纸等。
维生素B2标准溶液：10 ug/ml，贮存于棕色试剂 瓶中；1% 醋酸溶液；样品维生素B2片。
四、实验条件
固定激发= KC
采用标准曲线法进行定量：
配制一系列浓度不同的标准溶液，分别测出它们 的荧光强度，以横坐标表示浓度C，纵坐标为相 对荧光强度ΔF（ΔF=F-F0），绘制出标准曲线。 若要测定未知溶液的浓度，则在相同条件下测出 未知溶液的相对荧光强度ΔF，在标准曲线上就可 以直接查出对应的未知液浓度Cx。
实验二 荧光法测定医用维生素B2 片剂中维生素B2的含量
中山大学公共卫生学院 肖琴
一、实验目的
了解荧光分析法的基本原理； 了解荧光分光光度计的使用。
二、实验原理
维生素B2又称核黄素。
在紫外光照射下，维生素B2就会发出绿色的荧光。 当荧光物质溶液的浓度较低时( abc≤0.05 )，若入 射光的强度不变，则物质发出的荧光强度F与其 浓度C成正比：
荧光法测定维生素b2片剂中核黄素含量实验报告结果分析（共7篇）
荧光法测定维生素b2片剂中核黄素含量实验报告结果分析(共7篇)实验报告2荧光分光光度法测定维生素B2的含量实验项目：荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验题目】荧光分光光度法测定维生素B2的含量【实验目的】1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。
【实验原理】维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。
其结构式为：由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。
维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。
维生素B2在pH＝6~7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系：F＝2.303ФI0εbc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc这是荧光光语法定量分析的依据。
【主要仪器与试剂】主要仪器：F-2500 HiTachi荧光分光光度计；1cm石英皿；50mL 容量瓶；5mL移液管；烧杯；胶头滴管试剂：维生素B2标准溶液：未知液4【实验内容及步骤】1、系列标准溶液的制备取维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL分别置于50mL的容量瓶中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
标记为①②③④⑤的一系列维生素B2标准溶液。
待测。
2、待测液制备取5.00mL未知液4置于50mL容量瓶中，加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
荧光法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量
荧光法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量
张福娣;蔡碧琼;杨远才
【期刊名称】《福建分析测试》
【年(卷),期】2004(013)003
【摘要】研究了荧光分光光度计测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量.其荧光的激发波长为Ex;457 nm,发射波长为Em:528 nm.回收率为96.8%～100.0%,变易系数为2.03%.
【总页数】3页(P2027-2029)
【作者】张福娣;蔡碧琼;杨远才
【作者单位】福建农林大学生命科学学院,福建,福州,350002;福建农林大学生命科学学院,福建,福州,350002;福建农林大学生命科学学院,福建,福州,350002
【正文语种】中文
【中图分类】R9
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荧光分光光度法测定维生素B 含量
一、实验目的1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2、了解荧光分光光度计基本原理、结构及性能，掌握基本操作。
二、实验原理维生素B2(又叫核黄素，VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。
其分子式为：C17H20N4O6，分子量：376.4。
VB2分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。
VB2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
VB2溶液在430～440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm附近。
VB2在pH＝6～7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与VB2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测VB2的含量。
VB2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比VB2的荧光强得多，故测VB2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，当实验条件一定时，荧光强度F与荧光物质浓度c 呈线性关系：F=Kc，这是荧光光谱法定量分析的依据。
注意：高浓度时，荧光物质发生熄灭和自吸收现象，使F与c不呈线性关系。
三、主要仪器与试剂主要仪器：荧光分光光度计；1cm石英皿；25mL比色管；1mL、5mL移液管试剂：VB2标准溶液5.0μg/mL；待测样品溶液四、实验步骤1、系列标准溶液的制备取VB2标准溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL 分别置于25mL比色管中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。
得浓度依次为0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.30μg/mL、0.40μg/mL、0.50μg/mL 的一系列VB2标准溶液。
待测。
2、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置λem＝540nm为发射波长，在250～500nm范围内扫描，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。
从激发光谱图上可找出其最大激发波长λex。
从得到的激发光谱中找出最大激发波长，在此激发波长下，在450～700nm范围内扫描，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。
【仪器分析实验】分子荧光法定量测定维生素B2的含量
分子荧光法定量测定维生素B2的含量【实验目的】①掌握标准曲线法定量测定分析维生素B2的基本原理；②了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。
【实验原理】1 激发光谱和荧光光谱任何荧光化合物都具有两种特征光谱：荧光激发光谱（吸收光谱）—固定某一发射波长，测定该波长下的荧光发射强度随激发波长变化所得的光谱。
荧光发射光谱（荧光光谱）——固定某一激发波长，测定荧光发射强度随发射波长变化得到的光谱。
2 荧光光谱的特点：①斯托克斯位移（Stokes shift)。
与激发光谱相比，荧光光谱的波长总是出现在更长的波长处；②荧光光谱与激发波长无关。
无论用λ=250和350nm作激发光源，所得荧光光谱形状和峰的位置都是相同；③吸收光谱与发射光谱大致成镜像对称。
维生素B2分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能发射荧光。
它溶于水而不溶于乙醚等有机试剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
在430-440nm 蓝光照射下发出绿色荧光，荧光峰在530nm附近。
它在pH约为6-7的溶液中荧光强度最大，而且荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测定它的含量。
在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系：F=2.303ΦIεbc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc这就是荧光光谱定量分析的依据。
【实验仪器与试剂】荧光光度计；石英皿：1cm；容量瓶：50mL；维生素B2标准溶液[准确称取10.0000mg维生素B2（10.0μg/mL）置于100mL烧杯中，加1%乙酸溶液使其溶解，定量转移入100mL容量瓶中，并用1%乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，将溶液保存在冷暗处]；1%乙酸溶液。
【实验内容与步骤】1、系列标准溶液的制备取维生素B2标准（10.0μg/mL）2.00mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL分别置于50mL的容量瓶中，各加入1%乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，待测。
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实验七分子荧光光度法测定药片中维生素B2的含量
一、实验目的
1.学习荧光光度法测定维生素B2的分析原理。
2.掌握荧光光度计的操作技术和测定药片中维生素B2的方法。
二、实验原理
1. 荧光分析法：
常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。
在稀溶液中，荧光强度I F与物质的浓度c有以下的关系：
I F = 2.303φI0εbc
当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系： I F = Kc，这是荧光光谱法定量分析的理论依据。
2. 荧光分析仪器：
常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器和显示记录器五部分构成：
3. 本实验原理：
维生素B2（又叫核黄素）是橘黄色无臭的针状结晶，易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430～440 nm蓝光的
照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535 nm。
维生素B2在pH=6～7的溶液中荧光强度最大，在pH=11的碱性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素B2的含量。
多种维生素药片中含有维生素B1、B2、C、D2等，其中维生素C在水溶液中不发荧光，维生素B1本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后才产生荧光，维生素D2用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素B2的测定。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
三、实验步骤
1. 打开光源，再打开主机，预热30min；
2. 仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数：
发射波长为520 nm，灵敏度等参数设置。
3. 样品测定
（1）标准系列溶液的配制及标准溶液荧光强度的测定：
在5个干净的50 ml容量瓶中，分别吸取0.40、0.60、1.50，2.00和2.50维生素B2标准溶液，各加入2.00 ml冰乙酸，稀释至刻度，摇匀。
得到不同浓度的溶液分别是：0.1，0.2，0.3，0.4，0.5ug/ml的维生素B2溶液，在960荧光光度计上用1.0cm的荧光比色皿于发射波长520nm处，从稀到浓测量系列标准溶液的荧光强度。
（2）多维葡萄糖中维生素B2的测定：
准确称取0.1-0.2g多维片，用少量的水溶解后转入50ml的容量瓶中，加入2.0ml冰乙酸，摇匀。
与测定的标准溶液相同的条件下，测定荧光强度，平行测定三次。
4. 退出主程序，关闭计算机，先关主机，最后关光源。
四、实验应注意事项
1.为了测量的准确性，在进行标准溶液荧光强度的测定时一定要从稀到浓测定；
2 每次测量前应用待测溶液润洗比色皿3次再装入待测溶液，拿比色皿应拿棱面；
3.在测量时最好用同一个比色皿，以避免由于荧光皿之间的差异而引起的误差。