杀虫剂触杀毒力测定(点滴法)

2、根据上一步预备试验结果，可用溴氰菊酯稀释如下浓度：
500、1000、2000、4000、8000、12000、和 16000ppm。可设7组，共选择4龄玉米螟幼虫210头，分 别放入垫有滤纸的培养皿中（滤纸预先加湿），每皿放10 头，每种浓度设3个重复。
3、用微量点滴器盛装药液，从低浓度到高浓度点滴，每头
虫点滴1μl (或通过标定容量的点滴器）于幼虫胸部背板处， 待药液挥发后，添加适量人工饲料于皿中。对照虫仅点滴 丙酮，其他处理与上相同。
4、试验观察及结果整理
试验期间记录温湿度，施药后24 小时检查每一处理的生或死虫数，统计各浓度幼虫的死亡 率和校正死亡率％。计算如下：
最后采用绘图法或直线回归方程求出 LD50 ，并用方差分 析法检定其可靠性程度 例如：供试药剂（溴氰菊酯）对玉米螟幼虫触杀 LD50 毒 力测定结果及检验。 1、溴氰菊酯对玉米螟幼虫触杀结果（见表1）
校正死 校正死 亡率机 亡率 率值（y） （％）
9.9 17.1 37.7 44.3 59.9 71.9 82 3.7 4.0 4.6 4.8 5.3 5.6 5.9
0.942 1.243 1.544 1.845 2.146 2.322 2.447 丙酮
124 124 124 124 124 123 124 124
+
— (m －x )2 — ∑nw (x － x )2
}
（∑nwx）2 － 2 ∑nw(x － x ) ＝ ∑nwx2 － ∑nwx = （837.35）2 1652.52 － 452.59 1652.52 －1549.21 103.31 1 ∑nw + ( m －－ x )2 － 2 ∑nw ( x － x ) ｝
此方法以剂量对数作横坐标，机率值作纵坐标，绘制直角坐标 系。在直角坐标系中找出该次试验的坐标点，并用一直线连接起 来，该直线称“剂量对数—死亡率机率直线”。从机率值“5”处 引一与横坐标平行的直线与“剂量对数—死亡率机率直线”相交， 以相交点引一线垂直于横轴，此垂线与横坐标的交点，即为溴氰 菊酯对玉米螟LD50的剂量对数值，再查反对数表，即为LD50值 （见下图） 因为 ㏒X＝1.86 所以 X＝72 因为 ㏒X×10 所以 X＝72／10＝7.2μg/头
b ▪ [ ∑xy －
∑x ▪ ∑y n
]
＝ 3.926
∴
Q（剩余平方和） ＝ Lyy －μ ＝3.977-3.926 =0.051
列方差分析表如下
变异来源 回归 剩余 平方和 3.926 0.051 自由度 1 5 均方 3.926 0.0102 F 值 384.90
F =384.90>F0.01(1.5)
图、溴氰菊酯对亚洲玉米螟四龄幼虫触杀毒力
机率值
7
6
Y=2.2938+1.429x
5
4 3 r=0.99935* *
1
1.5
2.0
2.5 剂量 10g
三、剂量对数机率值直线的验证及LD50的计算
1）求直线回归方程 y=a+bx
根据表2 ∑x =12.489 ∑x2=24.2051 — x= ∑x n ∑y =33.9 ∑xy=63.2301 33.9 ∑y — = = 4.843 y = n 7
12.489×33.9 63.2301－ 7
12.489 = = = 1.784 7 ∑x▪∑y n （∑x）2 n
∑xy －
b= ∑x2
－
=
（12.489）2 24.2051－ 7
= 1.4289
a＝ — y － bx = 4.843－1.4289×1.784＝2.2938
将a与b代入y=a＋b x 公式 即得该试验毒力回归直线方程y＝2.2938+1.4289x。
表1溴氰菊酯对玉米螟幼虫触杀毒力
处理剂 量* μg／头 ×10
8.75 17.5 33.5 70.0 140.0 210.0 280.0 对照
剂量对
数 ㏒x
参试虫 数（头）
处理24小时后死亡情况
死亡虫 数（头） 10 23 48 56 75 89 102 2 平均死 亡率 （％） 11.3 18.5 38.7 45.2 60.5 72.3 82.3 1.6
＊除理剂量单位，还可以用浓度（ppm）作单位，则所求出的单位是 LC50。

死 亡 百 分 率 剂量数值 非对称“S”型曲线
死 亡 率
剂量数值换算成对数值 对称型“S”曲线

换 成 机 率 值 (LD50)
数值转换的原因
剂量值对数值 直线
二、绘图法求LD50
33.23 90.23 171.74 267.62 343.19 373.05 373.46 1652.52
* w（权重系数）—查 w—表，即用机率（y）查之
如 y= 3.639
查w—表得0.302，其余类推。 Sm = — 标准误差： Vm 1 1 — = Vm { 2 ∑nw b 其中： Sm — LD50 标准误 — Vm — LD50 的变量 m — LD50 对数值 b — LD50 回归式中的坡度（或回归系数） — — 平均致死剂量，为对数值 x ∑mwx 837.35 — 1.8501 x ＝ ＝ ＝ ∑mw 452.59 注意：平均致死剂量（1.8501）不同于致死中量LD50＝m=1.8939 (为对数值)
此回归方程的回归效果达倒及显著的水平，符合实际情况， 所求LD50 =7.8μg/头可靠。 4、 LD50标准误差和置信区间（可靠范围） 上面所求出的LD50 是人工饲养的玉米螟幼虫LD50 ，其值往往 受到所取样本影响，与昆虫的群体有一定的差距，即所求的 LD50不一定代表群体的实际情况。因此，还需计算LD50的标 准误差以及置信区间（可能的实际所在的范围）。
xy
3.4854 4.9720 7.1024 8.856 11.3738 13.0032 14.4373 ∑x y=63.2301
2)求LD50 （用回归直线计算）
因为当机率y＝5时即为50％的死亡率，所以将y＝5代 入回归方程中，即可求出LD50
由y＝2.2938+1.4289x
X=
得5＝2. Vm = 1 b2 {
＝ 0.001 Sm = V ＝ m 0.001 ＝ 0.0328
2）置信区间 当机率P＝0.05，群体自由度df＝∞时，查t表： t0.05=1.96，因此，当LD505％最小显著性差异 （LSD）0.05＝t0.05（ df＝∞ ） ×Sm=1.96 ×0.0328=0.0064。但是，由于Sm是LD50标准误 差的对数值，要换算成本来数值时，不能直接由 对数表查回，因为我们前面用的㏒10，因此标准 误差（ Sm ）由对数查回的计算方法为：LD50 × ㏒10 ×Sm＝7.8 ×2.3 ×0.0064＝1.2。因此玉米 螟幼虫群体LD50的95％置信区间是7.8±1.2＝ 6.6 — 9.0μg/头 。
= 1.8939
查反对数表得：x=78.3
5－2.2938 1.4298
∵
㏒x ＝ 1.8939
X原剂量对数×10
∴
LD50＝
78.3 10
＝ 7.83μg/头
3）方差分析检验 ∵
2 2 Lyy = ( y －— y ) = ∑y — 总平方和
（ ∑ y） 2 n
= 3.977
μ(回归平方和) ＝
杀虫剂触杀毒力测定（点滴法）
目前使用的杀虫剂大多数都具有较强的触 杀作用，所以杀虫剂的触杀毒力测定显的特 别重要。触杀毒力测定有药膜法、点滴法、 喷雾法和浸液法。 室内比较精确的触杀毒力测定方法是点滴 法和药膜法。 点滴法（topical application）是将一定 量农药丙酮液点滴在虫体的一定部位上，药 剂可自体壁进入体内。
权重系数* w 0.302 0.471 0.581 0.634 0.601 0.558 0.530 ∑
nw
nwx
nwx2
37.45 58.40 72.04 78.62 74.52 69.19 62.37 452.59
35.28 72.59 111.23 145.04 159.93 160.66 152.62 837.35
表2溴氰菊酯对玉米螟幼虫触杀毒力剂量对数与机率值相关值
剂量对数 机 率 值 （ x） （y）
0.924 1.243 1.544 1.845 2.146 2.322 2.477 ∑=12.489 3.7 4.0 1.6 4.8 5.3 5.6 5.9 ∑=33.9
x2
0.8874 1.5450 2.3839 3.4040 4.6053 5.3917 5.9878 ∑x2 =24.2051
1） LD50标准误差
表6－3
剂量对数 X 0.942 1.243 1.544 1.845 2.146 2.322 2.477
试验虫数 n 124 124 124 124 124 124 124
机率值 Y 3.6398 4.0699 4.5000 4.9301 5.3602 5.6120 5.7903
试验用具
容量瓶（10、25、50及100ml）、 微量点滴器或毛细管微量点滴器、吸管、 培养皿、烧杯、试管、滤纸、平头镊子、 计算纸、白纸、毛笔等。
测定方法
一、实验过程 1、预备试验
（选用玉米螟为试验材料）
先用丙酮将供试药剂（溴氰菊酯）配制成若干个不同浓度， 选取4龄玉米螟幼虫若干，每个浓度用点滴器（或微量进样 器）点滴药液于幼虫的胸部背面，每头幼虫点滴1μl(或通过 标定容量的点滴器），每个浓度点滴虫数不少于30头，待 药液挥发后，把5－8头盛于一皿中，加入少量饲料，盖好 培养皿，写好标记，经24小时后检查试虫的生存及死亡头 数，计算其死亡率。从这些浓度中找出适合的浓度，即找出 其死亡率在20％—90％之间的5—7个不同剂量的等比浓度 共下一步试验用。